流式细胞术及其应用教程

流式细胞术及其应用教程

The course of flow cytometry and its application

课程简介

该课程包括理论和实习两部分，理论课程重点介绍与流式细胞术密切相关的基本原理、结构及其在临床和科研工作中的应用。内容包括流式细胞术的基本原理、流式细胞仪数据的采集和分析、血细胞分化发育过程、流式细胞术在免疫学、血液学、肿瘤学及科研工作中的应用。通过理论授课使研究生能够掌握上述领域的基本理论和最新研究进展，达到提高研究生流式细胞术应用水平、拓展研究生思路、开阔眼界，为培养复合型人才打下基础。实习内容包括标本制备、仪器的调节与质控、淋巴细胞亚群分析、HLA-B27检测、胞膜、内抗原检测、红细胞CD55、CD59检测、血小板膜糖蛋白分析、DNA倍体分析及细胞因子检测。通过实习使研究生进一步熟悉流式细胞仪的使用程序，操作规程，为今后的工作、学习提高帮助。

This course includes in lecture teaching and practice lesson. The lecture teaching will be focused on flow cytometric basic theory, structure, data collection and analysis, application in clinic and research. The practice lesson will be focused on sample preparation, instrument setting, analysis of lymphocytes, HLA-B27，extracellular antigen and intracellular antigen, analysis of CD55,CD59, DNA ploidy analysis and cytokine detection.

教学大纲

一、课程名称：流式细胞术及其应用教程

二、总学时数：38学时，2学分

理论课18学时

实验课20学时

三、授课对象：

博士生、硕士生，专业不限

四、教学目的与要求：

掌握流式细胞术基本原理、工作程序、临床及科研工作中的用途，了解相应领域的最新进展，为临床和科研工作奠定基础。

五、理论课内容：

第一章流式细胞术工作原理（3学时）

第一节流式细胞术发展简史

要求：了解流式细胞术的基本概念、发展简史、流式细胞仪的基本结构、工作原理。第二节流式细胞仪的基本结构、工作原理

要求：了解流式细胞仪的基本结构、工作原理

第三节流式细胞仪的数据分析

要求：了解并熟悉CellQuest分析软件主界面、流式细胞仪数据采集与储存，掌握流式细胞仪数据分析方法。

1．设门技术

2．散射光信号及荧光信号

3．直方图

4．双参数散点图

第二章淋巴细胞的分化发育过程（6学时）

第一节淋巴细胞的分化发育过程

要求：了解T/NK淋巴细胞、B淋巴细胞发育过程，熟悉各阶段淋巴细胞的抗原表达情况。

第二节髓细胞的分化发育过程及白细胞分化抗原

要求：了解髓细胞的分化发育过程，熟悉各阶段髓细胞的抗原表达情况，了解白细胞分化抗原的组成及应用。

第三章流式细胞术的临床应用（6学时）

第一节血液淋巴细胞免疫表型分析及其应用

要求：了解淋巴细胞亚群数量及免疫表型变化的意义，掌握CD4＋细胞计数在艾滋病诊断与治疗中的价值，HLA-B27与强直性脊椎炎的关系。

第二节干细胞工程与流式细胞术干细胞分析

要求：了解干细胞（包括胚胎干细胞、造血干细胞、间充质干细胞等）发育、抗原表达过程，掌握流式细胞术干细胞检测设门技术、注意事项、干细胞绝对数的计算方法。第三节白血病/淋巴瘤免疫分型及其应用

要求：了解急性白血病、淋巴瘤的WHO分类、熟悉几种特殊类型急性白血病和淋巴瘤的免疫分型特征。

第四节流式细胞术粒细胞、红细胞、血小板分析及其应用

要求：了解各类细胞CD55/CD59表达情况，了解血小板糖蛋白的种类、意义，了解流式细胞术分析红细胞、血小板的注意事项；掌握流式细胞术分析红细胞、血小板的设门技术及CD55/CD59在诊断PNH中的价值。

第四章流式细胞术在科研工作中的应用（3学时）

第一节细胞周期与DNA倍体分析

要求：了解流式细胞术分析DNA/RNA的常用染料、熟悉ModFit LT DNA分析软件使用方法，掌握细胞周期/DNA倍体分析方法。

第二节CBA分析系统

要求：了解CBA分析系统及其检测原理

六、实验课内容：20学时

1．流式细胞术的标本处理(3学时)

要求：掌握流式细胞术标本制备方法

2．仪器的调节与质控(3学时)

要求：熟悉仪器的操作规程及软件额使用方法，了解质控品的使用方法与操作规程3．淋巴细胞亚群分析；HLA-B27检测(3学时)

要求：掌握淋巴细胞亚群、HLA-B27自动分析软件操作规程

4．胞内抗原检测(3学时)

要求：熟悉胞内抗原标记方法

5．红细胞CD55、CD59检测（3学时）

要求：熟悉红细胞表面抗原的检测方法，掌握设门技术

6．血小板膜糖蛋白分析(2学时)

要求：熟悉血小板膜糖蛋白分析方法、注意事项

7．DNA倍体分析（3学时）

要求：熟悉DNA染色步骤，ModFit自动分析软件的使用方法

七、重点、难点：

八、授课方式：

理论授课与实验操作，多媒体教学

九、考试方式：

理论课笔试结合实验操作评分

十．教材及主要参考资料：

1．血液病学，张之南，杨天楹，郝玉书主编，2003年第一版，人民卫生出版社2．白血病，陆道培，卞寿庚主编，2003年第一版，中国医药科技出版社

3．临床流式细胞分析，王建中主编，2005年第一版，上海科学技术出版社

4．医学免疫学,毕爱华主编，2000年第二版，人民军医出版社

5．流式细胞术原理与应用教程，吴后男主编，2008年第一版，北京大学医学出版社6．流式细胞术基本原理与实用技术，梁智辉，朱慧芬，陈九武编著，2008年第一版，华中科技大学出版社

7．Maryalice Stetler-Stevenson, Ejaz Ahmad, David Barnett,et al. Clinical Flow Cytometric Analysis of Neoplastic Hematolymphoid Cells;Approved Guideline-Second

Edition.Clinical and Laboratory Standards Institute.

8．Brent. Wood, Maria Arroz, David Barnett, et al. 2006 Bethesda Internation Consensus Recommendation on the Immunophenotypic Analysis of Hematolymphoid Neoplasis by Flow Cytometry:Optimal Reagents and Reporting for the Floe Cytometric Diagnosis of Hematopoietic Neoplasia. Cytometry Part B,2007,,72B:s14-s22.

十一、开课单位及负责人：

首都医科大学第一临床医学院血液科教研室