第十二章其他分子诊断检测技术
临床分子生物学检验技术知到章节答案智慧树2023年济宁医学院
临床分子生物学检验技术知到章节测试答案智慧树2023年最新济宁医学院第一章测试1.下列哪项检测需应用分子生物学检验技术（）参考答案:乙肝病毒DNA(HBV-DNA)检测2.1976年，简悅威应用DNA分子杂交技术成功进行了（）疾病的产前诊断。
参考答案:α-地中海贫血3.临床分子生物学检验最常用的分子标志物是（）参考答案:核酸4.下列核酸分子标志物中游离在体液细胞外的是（）。
参考答案:循环核酸5.下列关于循环核酸说法错误的是（）参考答案:利于肿瘤等疾病的早期检测，正常人体内不存在第二章测试1.下列关于分子生物标志物说法错误的是（）参考答案:分子生物标志物仅指能够反应机体病理状态的生物大分子2.下列叙述哪项是错误的（）参考答案:原核生物结构基因是断裂基因3.卫星DNA序列属于（）参考答案:串联重复序列4.以下哪项不是真核生物核基因组的特点（）参考答案:重复序列少见5.大肠杆菌类核结构的组成是（）参考答案:蛋白质+DNA1.下列关于DNA分离纯化说法错误的是（）参考答案:DNA提取过程要加入RNA酶抑制剂抑制RNA酶活性2.下列关于RNA分离纯化说法错误的是（）参考答案:RNA提取过程要加入DNA酶抑制剂抑制DNA酶活性3.常利用哪些性质进行分离纯化蛋白质（）参考答案:分子大小不同、溶解度不同、表面电荷不同、与配体的特异亲和力都是4.蛋白质分离纯化方法叙述错误的是（）参考答案:琼脂糖凝胶常用于蛋白质的分离5.纯DNA溶液的A260/ A280值为（）参考答案:1.81.以等位基因特异的寡核苷酸探针杂交法诊断某常染色体隐性遗传病时，若能与突变探针及正常探针结合，则该样本为（）。
参考答案:携带者2.下列探针标记方法中，（）法在标记之前探针的长度已经确定.。
参考答案:化学法全程标记3.Southern杂交通常是指（）。
参考答案:DNA和DNA杂交4.基因芯片技术的本质是（）。
参考答案:核酸分子杂交技术5.检测的靶序列是RNA的技术是（）。
分子诊断技术
分子诊断技术随着科技的不断发展，分子诊断技术逐渐成为医学界的一个热门话题。
分子诊断技术是指通过对人体细胞或体液中的分子进行分析和检测，以辅助实现疾病的早期诊断、治疗和预防，从而提高医学的精准性和个体化水平。
一、分子诊断技术的原理分子诊断技术主要通过检测和分析人体细胞或体液中的分子物质来判断人体是否存在病理性变化。
这些分子物质可以是DNA、RNA、蛋白质等。
分子诊断技术的基本原理是通过先对目标分子进行提取和扩增，再通过各种方法进行分析和检测，最后根据结果来判断病情或者进行预测。
二、分子诊断技术的应用领域分子诊断技术的应用领域非常广泛，涵盖了肿瘤学、微生物学、遗传学等多个学科。
在肿瘤学中，分子诊断技术可以通过检测肿瘤细胞中的某些特定分子，来判断患者肿瘤的类型和分级，以及选择最适合的治疗方案。
在微生物学中，分子诊断技术可以通过检测病原微生物的特定分子，来快速准确地诊断感染病原体，为患者提供合理的治疗方案。
在遗传学中，分子诊断技术可以通过检测患者DNA中的突变，来判断是否存在遗传性疾病的风险，为患者提供遗传咨询和预防措施。
三、分子诊断技术的优势与传统的诊断方法相比，分子诊断技术具有以下几个明显的优势。
首先，分子诊断技术具有高灵敏度和高特异性，可以在早期阶段就检测出微量的病理性变化，从而实现早期诊断和治疗。
其次，分子诊断技术可以进行个体化治疗，根据每个患者的个体差异来选择最适合的治疗方案，提高治疗效果。
再次，分子诊断技术具有快速和准确的特点，可以在短时间内给出检测结果，加快诊断速度和治疗进程。
此外，分子诊断技术还可以通过监测治疗过程中的分子变化，来评估治疗效果并进行个体化调整。
四、分子诊断技术的挑战和发展方向尽管分子诊断技术已经取得了很大的进展，但仍面临一些挑战。
首先，分子诊断技术在技术和设备上还存在一定的局限性，需要进一步提高检测的准确性和敏感性。
其次，分子诊断技术的应用范围和适用人群还需要进一步拓展和确定。
2021知到答案 临床分子生物学检验技术 最新智慧树满分章节测试答案
绪论单元测试1、判断题：临床分子生物学检验技术学科建立在分子生物学学科之前。
选项：A:错B:对答案: 【错】2、判断题：临床分子生物学检验技术是从分子水平研究解决临床诊断与治疗问题。
选项：A:对B:错答案: 【对】3、多选题：现代临床医学的发展方向：（）选项：A:个体化医学B:预测医学C:预防医学D:中西医结合答案: 【个体化医学;预测医学;预防医学】4、多选题：下列技术为临床分子生物学检验常用检测技术的是（）选项：A:Southern blotB:其余均不对C:基因测序D:分子杂交答案: 【Southern blot ;基因测序;分子杂交】5、判断题：临床分子生物学检验技术学科发展第一阶段的代表性技术为分子杂交技术。
选项：A:对B:错答案: 【对】第一章单元测试1、单选题：在人类基因组DNA序列中，DNA甲基化主要发生在（）选项：A:鸟嘌呤的N-7位B:胞嘧啶的N-4位C:胞嘧啶的C-5位D:腺嘌呤的N-6位E:鸟嘌呤的C-5位答案: 【胞嘧啶的C-5位】2、单选题：下列DNA序列中的胞嘧啶（）易发生甲基化修饰的是。
选项：A:5'-CGCGCG-3'B:5'-CTCTCCC-3'C:5'-GCACAC-3'D:5'-GGGGCC-3'E:5'-CCCCCT-3'答案: 【5'-CGCGCG-3'】3、单选题：某基因位点正常时表达为精氨酸，突变后为组氨酸，这种突变方式为（）选项：A:动态突变B:错义突变C:同义突变D:无义突变E:移码突变答案: 【错义突变】4、单选题：由于突变使编码密码子形成终止密码，此突变为（）选项：A:错义突变B:移码突变C:同义突变D:无义突变E:终止密码突变答案: 【无义突变】5、单选题：下列叙述哪项是错误的（）选项：A:原核生物基因组中含有插入序列B:原核生物结构基因的转录产物为多顺反子型mRNAC:原核生物基因组具有操纵子结构D:原核生物基因组中含有重复顺序E:原核生物结构基因是断裂基因答案: 【原核生物结构基因是断裂基因】第二章单元测试1、单选题：DNA链的Tm值主要取决于核酸分子的（）选项：A:A－T含量B:T－G含量C:G－C含量D:A－G含量E:A－C含量答案: 【G－C含量】2、单选题：Southern杂交通常是指（）选项：A:RNA和RNA杂交B:DNA和蛋白质杂交C:蛋白质和蛋白质杂交D:DNA和DNA杂交E:DNA和RNA杂交答案: 【DNA和DNA杂交】3、单选题：下列哪些不是影响DNA复性的因素（）选项：A:DNA的来源B:DNA的分子量C:温度D:碱基组成E:DNA浓度答案: 【DNA的来源】4、单选题：探针基因芯片技术的本质就是（）选项：A:核酸分子杂交技术B:蛋白质分子杂交技术C:基因重组技术D:酶切技术E:聚合酶链反应技术答案: 【核酸分子杂交技术】5、单选题：DNA探针的长度通常为（）选项：A:1000～2000个碱基B:100～400个碱基C:<100个碱基D:400～500个碱基E:500～1000个碱基答案: 【400～500个碱基】第三章单元测试1、单选题：以mRNA为模板合成cDNA的酶是( )选项：A:限制性内切酶B:RNA酶C:逆转录酶D:DNA酶E:TaqDNA聚合酶2、单选题：有关PCR的描述下列不正确的是（）选项：A:循环次数越多产物量就越大，可增加循环次数提高产物量B:扩增的对象是DNA序列C:由变性、退火、延伸组成一个循环D:是一种酶促反应E:引物决定了扩增的特异性3、单选题：下列关于Taq DNA聚合酶的描述，错误的是（）选项：A:使DNA链沿5´→3´方向延伸B:不具有3´ 5´外切酶活性C:扩增的DNA片段越长，碱基错配率越低D:以dNTPs为原料E:催化形成3´, 5´-磷4、单选题：PCR反应过程中，退火温度通常比引物的Tm值（）选项：A:相等B:高15℃C:低15℃D:高5℃E:低5℃5、单选题：PCR反应中延伸的时间取决于（）选项：A:Taq DNA聚合酶的量B:模板的含量C:待扩增片段的长度D:引物长度E:模板的纯度第四章单元测试1、单选题：关于TaqMan探针技术的描述，不正确的是（）选项：A:易受到Taq DNA聚合酶5′-3′核酸外切酶活性的影响B:解决了荧光染料技术非特异的缺点C:R基团与Q基团相距较远，淬灭不彻底，本底较高D:操作亦比较简单2、单选题：以下为比较Ct法的相对定量的描述，不正确的是（）。
分子诊断技术的临床应用ppt课件
二、PCR概述
PCR技术能在一个试管内将所要研究的 目的基因或某一DNA片段于数小时内扩增至 十万乃至百万倍，使肉眼能直接观察和判 断；可从一根毛发、一滴血、甚至一个细 胞中扩增出足量的DNA供分析研究和检测鉴 定。
PCR 发展简史
1983 Mullis于12月16日成功发明了PCR 1985 关于PCR 的文章首次由 Mullis及其同事等人 在
测 优生优育项目诊断：人巨细胞病毒（HCMV）、单纯疱
疹病毒（HSV）、弓形虫（TOX）、风疹病毒（RUB） 其它病原体检测：结核杆菌、肺炎支原体、EB病毒、
伤寒杆菌、幽门螺旋杆菌等
常规结核病实验室诊断方法及不足
1. 痰涂片作抗酸染色：阳性率低 、费时 2. 细胞培养“金标准”：周期太长(4-8W) 3. 血清学诊断：
的平衡点。
总结
分子诊断学的快速发展，得益与分子诊断技术 的日新月异。1990年启动的人类基因组计划的完 成经历了十三年的时间，而2007启动的1000人基 因组计划的完成却只用了3年，人类了解自然密 码的速度正在跨上快速列车。检验医学以提供精 密准确的数据服务于临床，而分子诊断技术正逐 渐成为临床实验室的常规应用技术，这将为检验 医学的发展提供巨大的机遇与挑战。
PCR技术
PCR核心技术是从水栖高温菌中
分离到能耐高温的Taq酶，使扩增反
应不需要每一个循环加一次DNA聚合
酶，从而实现了自动化，使应用领
域迅速扩大，PCR技术成为了分子生
物学中的一项突破性技术。
PCR概述——2000至2013年发表论文篇
30%
32%
PCR＋遗传分析
PCR＋临床诊断
PCR＋肿瘤研究
二 肿瘤相关基因表达的检测： 1、包括癌基因、抗癌基因 2、肿瘤转移基因 3、转移抑制基因
分子诊断技术
分子诊断技术
通过从分子水平上完成DNA、RNA或蛋白质检测，从而对疾病作出诊断的方法称为
分子诊断技术，常用的方法有基因诊断和肿瘤标志物检测。
1.基因诊断用分子生物学的理论和技术，通过直接探查基因的存在状态或缺陷，从基因结构、定位、复制、转录或翻译水平分析基因的功能，从而对人体状态与疾病作出诊断
的方法。
基因诊断不仅能对某些疾病作出确切的诊断，如确定某些遗传病，也能确定基因
与疾病有关联的状态，如对疾病的易感性、发病类型和阶段的确定等。
基因诊断的主要技
术有核酸分子杂交（原位杂交、southern杂交、Northern杂交、斑点杂交等）、PCR和
生物芯片技术。
2.肿瘤标志物检测是指肿瘤细胞和组织由于相关基因或异常结构的相关基因的表达所产生的蛋白质和生物活性物质，在正常组织中不产生或产量甚微，而在肿瘤病人组织、体
液和排泄物中可检测到。
此外，在病人机体中，由于肿瘤组织浸润正常组织，引起机体免
疫功能和代谢异常，产生一些生物活性物质和因子，虽然这些物质和因子特异性低，但与
肿瘤发生和发展有关，也可用于肿瘤辅助诊断。
肿瘤标志物分别有：原位性肿瘤相关物质、异位性肿瘤相关物质、胎盘和胎儿性肿瘤相关物质、病毒性肿瘤相关物质，癌基因、抑癌
基因及其产物等。
肿瘤标志物测定方法包括：生物化学法、免疫组化法、单克隆抗体法。
病理学中的分子诊断技术
病理学中的分子诊断技术随着科技的不断进步，病理学领域中的分子诊断技术也不断升级。
这些技术可以更快速、准确地分析人体疾病的发生和发展，为医生提供更科学、精准的诊断结果，为治疗疾病提供了更有效的指导，对提高临床效率、提高治疗成功率和降低医疗费用等方面都具有重要的意义。
分子诊断技术，是指通过对组织、细胞等样本中相关分子、细胞等方面的特定分析来确定疾病的诊断的一种技术。
分子诊断技术的原理是针对人体中某些分子的异常表达、突变等遗传变异状态进行诊断。
与传统的组织病理学诊断相比，分子诊断技术不但可以更准确的鉴定病灶位置、病理类型，也可以探测到一些传统组织学诊断不能确定的微小病灶或早期病灶。
同时，由于其分子水平的诊断原理，分子诊断技术还可以为各种其他疾病的早期预测和治疗提供重要参考。
近年来，病理学中的分子诊断技术不断向前发展，主要表现在以下几个方面：一、基于普通PCR技术的扩增技术PCR技术是最初被广泛应用的分子诊断技术，在病理学领域有着极为广泛的应用。
基于PCR技术的扩增技术可以针对某一位点进行扩增，指示目标染色体上是否出现对疾病有关的突变，以达到疾病的诊断和预测。
二、基于高通量测序技术（NGS）的分子诊断技术NGS 技术是一种非常先进的分子筛查技术。
现已广泛应用于诊断肿瘤和遗传疾病。
与传统PCR技术相比，NGS技术更为高效，可以在较短的时间内，同时对成百上千个位点进行检测，大大提高了分子诊断的准确性和速度。
三、基于免疫学特异性的分子检测技术基于免疫学的特异性分子检测技术，通过检测患者体液中对特定抗原的抗体水平，判断患者体内对特定疾病的免疫反应。
这种技术通常被用于血清学、免疫学等疾病的检测，如HIV、乙型肝炎、肝癌等的检测等等。
总之，随着分子生物学和基因组技术的不断发展，病理学中的分子诊断技术也不断升级。
这些技术的应用在肿瘤、代谢性疾病等方面已经被广泛应用。
随着技术的进一步优化和普及，病理学中的分子诊断技术对于更准确、更快速地诊断人体疾病、指导治疗等方面将会起到更为重要的作用。
分子诊断技术的研究与应用
分子诊断技术的研究与应用随着现代科技的发展和生物学、医学知识的深入研究，分子诊断技术逐渐成为医学领域的热门研究课题。
它是指利用分子生物学、生物化学、遗传学等技术与方法，对基因、DNA、RNA等生物分子进行检测和诊断的技术。
它具有快速、准确、低成本等优势，被广泛应用于疾病的早期诊断、疾病预测、评估疗效等方面，成为医学领域必不可少的一种技术手段。
一、分子诊断技术的研究分子诊断技术涉及的领域非常广泛，包括DNA字段、RNA领域和蛋白质领域，不同的领域涉及到不同的分子生物学方法。
其中最常用的分子诊断方式是PCR技术，它能够提供相应基因的大量复制物，加快检测的速度和提高检测的灵敏度。
此外，芯片技术、高通量测序、原位杂交等技术也逐渐应用于分子诊断技术研究中。
这些技术的应用使得分子诊断技术具有了更加可靠、灵敏、准确的检测结果，且检测时间更加缩短。
二、分子诊断技术的应用分子诊断技术的应用非常广泛，应用范围覆盖了基因疾病、传染病、肿瘤等不同领域。
其中基因疾病的诊断和预测是分子诊断技术优势的体现之一。
基于分子诊断技术，可以对人群中的基因序列进行检测和分析，通过检测基因突变等遗传变异，对相关疾病进行早期诊断和预判，为疾病的治疗提供重要依据。
在肿瘤领域中，分子诊断技术主要用于肿瘤标志物的检测。
通过检测肿瘤相关基因或蛋白质表达的变化，可以提高肿瘤的早期诊断的准确率和灵敏度，并且可以对肿瘤的治疗方案进行个体化调整。
此外，分子诊断技术在感染病诊断中也具有重要作用。
例如，在流感疫情爆发时，可以利用分子诊断技术对患者的样本进行快速检测，确定患者是否感染了病毒，明确诊断结果，加强疫情防控措施。
三、分子诊断技术的发展前景随着分子诊断技术的不断应用和研究，未来它在医学领域的应用前景非常广阔。
分子诊断技术可以将在疾病诊断、治疗、预测等方面发挥重要作用，成为卫生领域的发展热点。
在发展过程中，要加强分子诊断技术研究和临床应用的结合，探索更加有效的技术方法以及更加丰富的应用场景。
分子诊断学
研究对象
Artwork from /
Old Way
New Way
Patient’s tissue sample
Proteomics
Proteins
Pathology
Mass Spectrometry Proteomic image
Genomics Patient’s tissue sample or blood sample
DNA Gene chip Microarray image
Edited from the artwork by Jeanne kelly © 2002 Donna Kerrigan, M.S. Jeanne Kelly, Brian Hollen. Understanding Cancer and Related Topics Understanding Molecular
ISH（In-situ Hybridization，原位杂交） 3、测序技术 4、芯片技术
Microarrays（微阵列） Tissue Arrays（组织芯片） 5、质谱技术（Mass Spectroscopy）
核酸等温控制技术在呼吸道病 原菌检测中的应用
艾滋病的核酸检测与分析
动脉粥样硬化性重要疾病： 冠心病基因组研究进展
& The Association for Molecular Pathology
美国研究病理学会和分子病理学协会
中山大学
2002
Molecular diagnostics: a training and study guide Gregory J. Tsongalis William B. Coleman
第十五章 分子诊断的其它应用
第八章 蛋白质组学研究技术 第十六章 生物信息学在分子诊断中的应用
生物化学第12章-分子生物学常用技术
第十二章分子生物学常用技术及应用【授课时间】3学时【目的要求】1．掌握基因工程与重组DNA技术相关概念，核酸分子杂交、探针、PCR、DNA 芯片技术、基因诊断和基因治疗的概念。
2．熟悉重组DNA技术、PCR的基本原理及基本反应步骤。
3．了解基因工程在医学中的应用，PCR 的主要用途。
4．了解DNA芯片技术的原理与方法，基因诊断与基因治疗的应用。
【教学内容】1．一般介绍：基因工程2．一般介绍：核酸分子杂交技术3．一般介绍：聚合酶链反应4．一般介绍：DNA芯片技术5．一般介绍：基因诊断与基因治疗【授课学时】3学时第十二章分子生物学常用技术及应用第一节基因工程第二节核酸分子杂交技术第三节聚合酶链反应第四节 DNA芯片技术第五节基因诊断与基因治疗第一节基因工程噬菌体(bacteriophage，phage)是感染细菌的一类病毒，因其寄生在细菌中并能溶解细菌细胞，所以称为噬菌体。
用于感染大肠杆菌的λ噬菌体改造成的载体应用最为广泛。
（一）目的基因的制备目的基因是指所要研究或应用的基因，也就是需要克隆或．基因组DNA文库cDNA文库．聚合酶链式反应（polymerase chain reaction．化学合成（二）目的基因与载体的连接将目的基因或序列插入载体，主要通过DNA（二）Northern 印迹杂交Northern 印迹杂交是指将待测RNA 样品经电泳分离后转移到固相支持物上，然后与标记的核酸探针进行杂交，检测的方法。
其基本原理和基本过程与印迹杂交主要用于检测各种基因转录产物的大小、转录的量及其变化。
（三）斑点及狭缝印迹杂交分子杂交实验①②③目录三、探针的标记（一）探针的特征探针的特点：①要加以标记、带有示踪物，便于杂交后检测，②应是单链，若为双链用前需先行变性为单链；③具有高度特异性，只与靶核酸序列杂交；④标记的探针应具有高灵敏度、稳定、标记方法简便、安全。
（二）探针的种类及制备探针第四节 DNA芯片技术第五节基因诊断与基因治疗。
分子检验检测技术培训讲义
分子检验检测技术课程讲义一、分子诊断又称DNA诊断或基因诊断，是通过从生物体（比如疾病患者等）内提取样本用基因检测方法来判断该生物体是否有基因异常或携带有其它不应该属于该生物体的生物成份。
（检测物）病原1 DNA 加热退火（降温）是否杂交（待检物）病原2 DNA 加热退火（降温）注意：用于分子检测的器皿都需要消毒、灭菌所用水必须是双蒸水、去离子水二、分子检验检测的意义随着社会经济的发展，国际国内贸易的日趋频繁，有害生物的扩散加速，动植物检疫工作越来越受到重视，由于检疫性有害生物的扩散造成的各类问题备受关注。
实现对检疫性有害生物的快速检测是当前社会经济发展的迫切需求。
三、分子检验检测与传统检验检测方法的异同传统检验检疫方法：耗时，专业要求高等等，主要是症状上判断：同症状，多病原，疑难多，问题也多，耗时、耗材、耗力，对结果的准确性影响很大，且对专家的要求很高。
分子检验检测方法：快速，准确等等，直接从遗传物质入手，根据核酸序列来检测，既准确又快速。
DNA序列的独特性、专一性的检测标记进行鉴定。
四、分子探针，特异性其特点：①三个相连核苷酸组成一个密码子，编码一个氨基酸，共有64个密码子。
②密码子之间无核苷酸间隔。
③一种氨基酸可有多种密码子。
④所有生物使用同一套密码子。
分子生物学的基础一、几个简单的问题1.分子生物学主要研究什么？分子生物学是从分子水平研究生命本质的一门新兴边缘学科，它以核酸和蛋白质等生物大分子的结构、组成和功能，以及它们在遗传信息和细胞信息传递中的作用等为研究对象，是当前生命科学中发展最快并正在与其他学科广泛交叉和渗透的前沿领域；它包括：a、研究核酸结构及其功能的核酸分子生物学；b、研究蛋白质结构与功能的蛋白质分子生物学；c、研究细胞信息传递与细胞信号传导的细胞分子生物学等。
2.核酸包括什么？3.核苷酸是怎么连接的？4.什么是一级结构？5.二级结构是什么？6.三级结构呢？7.那么酶切是切什么？几级结构？8.RNA有几种？各有什么功能和特性？二、核酸的理化性质1．粘度2．紫外吸收3．沉降系数4．溶解性5．变性和复性三、思考题请简述生物体、细胞、染色体、蛋白质、核酸、基因等相互间的关系，并阐述分子检验检测的目标对象。
分子生物学检验技术-基因病的分子诊断
携带p53基因突变的人经常是李-佛美尼综合症的患者； APC基因是与大肠直肠癌发生有关的肿瘤抑制基因； BRCA1和BRCA2基因的突变则和乳癌相关；
42
Rb
正常细胞中具有活性的RB蛋白（pRB）在细胞中保持着低磷酸化或无磷 酸化的状态，它与细胞周期调节因子E2F结合，抑制E2F的活性从而抑 制G1期到S期的进行，也就抑制了转录活性。 RB蛋白的失活途径有以下几种：
RAS家族是信号传递通路G-protein的成份，藉由跨膜蛋白与Gprotein的结合将信号传至核内;
蛋白质-酪胺酸激酶( protein tyrosine kinase) ABL是细胞内信号传 递蛋白与信号传递至核内有关;
核内转录因子;
MYC是DNA结合蛋白，而JUN是转录因子；
细胞周期有关的蛋白;
3. 血清胆红素轻～中度增高，溶血危象时显着增高。本病的溶血虽以血管外溶血为主， 但也存在着血管内溶血；
4. 血浆结合珠蛋白降低，血浆游离血红蛋白可能增高； 5. 红细胞半衰期测定显示红细胞生存时间明显缩短至5～15 天[正常为(28±5)天]； 6. 血红蛋白电泳显示HbS占80%以上，HbF增多至2%～15%，HbA2正常，而HbA缺如；
32
癌症的特点
几乎癌组织都是克隆性增殖; 患者的所有癌细胞都起源于单一
的癌细胞; 大多数癌症不能用单基因遗传方
式解释; 某些类型的癌症，亲属发生同类
肿瘤的风险会增加，但不表现孟 德尔遗传; 许多癌症与环境的物理化学因子 或生物因子有关;
造成癌症的因素
遗传因素 一些特殊的基因突变会造成特定的癌症
斑点杂交结果
βΑ/βΑ
分子诊断技术的采集方法及流程
分子诊断技术的采集方法及流程作者：黄洋来源：《幸福家庭》2021年第04期分子诊断是一种利用分子生物学方式对患者体内的一些遗传物质结构或者表达水平的具体变化进行检测的技术。
这种技术可以及时为患者做出诊断，是一种可以预测诊断的方式。
它既可以诊断个体遗传病，也可以完成产前诊断。
合理进行标本采集可以使标本更加完整，同时也可以使检测更加稳定、准确。
标本需要根据比较恰当的生物指南来完成采集工作。
一些并不适合的标本很有可能会导致核酸降解，无法保证患者检测结果的准确性。
（一）标本识别在进行标本采集的过程当中，检测人员要明确患者的身份还有具体的标本，尊重患者个人隐私，多了解检测以及治疗有关信息，并在标本上粘上和标本有关的标签。
内容包括采集的时间以及采集者的姓名等。
（二）申请单信息申请单上至少需要包括以下几方面的信息，比如标本的类型、医生的姓名以及患者的姓名等。
（三）标本采集在进行人体组织或者是人体体液标本采集的过程当中，应该充分遵守有关安全防范的措施，比如采集者必须要佩戴手套，避免标本当中的血源性病原体的传播，同时也要尽量阻止标本被处理人员透露的细胞感染。
一些比较特定的检测方法有可能会需要比较额外的预防措施以及采集说明。
而实验室需要使用不一样的检测方法，同时也要考虑到这些检测方法潜在的干扰以及污染的来源。
临床试验室在收到标本后，要尽快把标本信息输入到新系统当中去，同时，也要尽快对所接触的标本进行处理，一旦标本产生了比如溶血等不当情况的时候，应该考虑拒收。
（四）抗凝剂血液以及骨髓穿刺的标本采集需要尽量使用较为合理的抗凝管或者是含有其他添加剂的试管，在选择试管添加剂时，应该按照分析物的具体类型以及分析物的实验还有标本量来决定。
亚铁血红素很有可能会抑制其中一些因素的反应，推荐使用抗凝剂来检测血浆或者是骨髓穿刺的标本。
如果被测量为细胞当中一些特定的物质，检测人员在采集血液或者骨髓时，其设备应该包括稳定剂，在采集后要立刻加入稳定的溶液。
分子诊断技术及其应用
分子诊断技术及其应用随着科学技术的不断发展，医疗领域也不断更新换代。
分子诊断技术是近年来医学领域的重要进展之一，它是一种通过分析分子水平的生物标志物来诊断疾病的技术。
本文将介绍分子诊断技术及其应用。
一、分子诊断技术的概述分子诊断技术是指利用分子生物学、生物化学、生物信息学等技术手段，对病原体、细胞、组织、体液等样本中的生物分子进行检测，以达到诊断疾病的目的。
分子诊断技术包括多种技术手段，如：PCR （聚合酶链式反应）、电泳、基因芯片、核酸杂交、荧光定量PCR等。
PCR是一种在体外扩增DNA分子的技术，其原理是利用DNA聚合酶在逐步升温和降温的反应条件下，以DNA序列为模板合成DNA。
PCR 技术是分子诊断技术中最常用的一种方法，它可以快速、准确地检测出微量的DNA分子。
电泳是一种将DNA分子按照大小和电荷分离的技术，其原理是利用电场作用使DNA分子在凝胶状物质中移动，从而实现DNA分子的分离。
电泳技术可以用于检测DNA序列的长度、浓度、纯度等信息。
基因芯片是一种将多个DNA序列固定在玻璃片或硅片上的技术，其原理是利用光学检测技术检测DNA序列的变化。
基因芯片技术可以同时检测多个DNA序列，具有高通量、高灵敏度、高特异性等优点。
核酸杂交是一种将标记有标记物的DNA或RNA与样品中的DNA或RNA杂交的技术，其原理是通过互补配对使DNA或RNA分子相互结合。
核酸杂交技术可以用于检测DNA或RNA的序列、表达水平、突变等信息。
荧光定量PCR是一种利用荧光探针检测PCR产物的技术，其原理是在PCR反应中添加荧光探针，当荧光探针与PCR产物结合时，会发生荧光信号，从而实现PCR产物的定量检测。
二、分子诊断技术的应用分子诊断技术在临床医学中有着广泛的应用，可以用于检测各种疾病的生物标志物，如：病原体、肿瘤标志物、遗传病等。
1. 病原体检测病原体检测是指通过检测体液、组织等样本中的病原体DNA或RNA来诊断疾病的技术。
病理学中的分子诊断技术研究
病理学中的分子诊断技术研究病理学是一门研究疾病发生、发展、转归和预后的学科，病理学家通过对病理学形态学和生物学特征进行分析，可以有效地诊断和治疗疾病。
众所周知，在病理学领域中，分子诊断技术已经成为一种非常重要的方法。
分子诊断技术是一种利用DNA、RNA或蛋白质等分子生物学手段对疾病进行诊断和预测的方法。
它具有以下三个特点：高灵敏度、高特异性和高精度。
可以说，分子诊断技术在病理学领域中的应用已经受到广泛关注。
在这篇文章中，我们将探讨病理学中的分子诊断技术研究的最新进展和未来发展方向。
一、基因检测技术基因检测技术是一种非常重要的分子诊断技术。
这种技术利用基因组学和生物信息学等方法，对基因突变进行检测和分析。
针对不同的疾病，例如肿瘤、遗传性疾病等，都可以使用基因检测技术进行诊断和预测。
目前，基因检测技术已经发展到了第三代测序技术，这种技术可以在更短的时间内对基因进行测序，同时，其灵敏度和特异性也有了大幅度提升。
未来，基因检测技术将会更加精准和快速，对疾病的诊断和预测也将会更为准确和详尽。
二、蛋白质组学技术蛋白质组学技术是一种利用高通量技术对不同蛋白质进行筛选和分析的方法，它是病理学分子诊断技术中一种非常重要的手段。
通过对蛋白质组学数据进行分析和挖掘，我们可以获得更为详尽的疾病信息，为疾病的治疗和预测提供更有力的支持。
在蛋白质组学技术中，质谱分析技术尤为重要。
随着质谱仪设备的不断改进和技术的不断成熟，质谱分析技术已经成为一种非常有效的蛋白质组学分析手段，其灵敏度和特异性也有了显著提高。
三、细胞自由DNA技术细胞自由DNA技术是一种利用血液、尿液等体液中的DNA进行疾病诊断的方法。
在肿瘤的分子诊断中，细胞自由DNA技术是一种非常有效的手段。
通过对肿瘤患者的体液中的细胞自由DNA进行筛选和分析，我们可以获取更为详尽的肿瘤信息，从而为肿瘤的治疗和预测提供更为精准的支持。
细胞自由DNA技术有两个重要的应用方向：一是肿瘤早期筛查，二是肿瘤治疗监测。
临床分子生物学检验技术(潍坊医学院)知到章节答案智慧树2023年
临床分子生物学检验技术（潍坊医学院）知到章节测试答案智慧树2023年最新第一章测试1.分子生物学检验技术检测的标本包括人体各种组织、细胞、体液、分泌物等多种样本。
参考答案:对2.1958年，克里克提出了著名的分子生物学中心法则。
参考答案:对3.DNA“STR”分型技术已经在全世界法医鉴定中普及应用。
参考答案:对4.个体化医学的内涵包括：基于个体化基因精准检测的疾病风险评估、个体化医学诊断和个体化医学治疗。
参考答案:对5.分子生物学检验技术所涉及到的原理和方法多种多样，常见的有参考答案:分子杂交技术;生物芯片技术;基因测序技术;聚合酶链式反应6.分子生物学检验技术检测的靶标主要包括参考答案:蛋白质;DNA;RNA7.临床分子生物学检验技术广泛应用于参考答案:遗传性疾病的诊断和预防;亲子鉴定;肿瘤的临床诊断和治疗监测;感染性疾病的诊断和监测8.“临床分子生物学检验技术”是以分子生物学的原理和技术为基础，通过检测生物样本中DNA、RNA、蛋白质等生物大分子的量变或质变，从而为疾病的预防、诊断、治疗、预后提供生物信息和诊疗依据的应用学科。
参考答案:对9.表观遗传学是指DNA序列在不发生改变的情况下，可以影响表型变化，并通过体细胞遗传的现象。
参考答案:对10.通过多种分子生物学技术建立起来的人类白细胞抗原基因分型技术，可以提高器官移植、受体之间的相容性匹配和移植物存活率。
参考答案:对第二章测试1.真核生物mRNA在成熟过程中切去的是参考答案:内含子2.构成核小体的组蛋白不包括参考答案:H53.与核DNA相比，mtDNA具有以下特点参考答案:母性遗传4.Alu家族属于参考答案:短散在核元件5.大肠杆菌类核结构的组成是参考答案:RNA+支架蛋白+双链DNA6.下述序列中，在双链状态下，属于完全回文结构的序列是参考答案:AGTCGACT7.下列哪种质粒带有抗性基因参考答案:R质粒8.病毒的遗传物质是参考答案:DNA或RNA9.下列哪一项不是蛋白质组的研究技术参考答案:RFLP10.下列关于双向凝胶电泳优点的说法，不正确的是参考答案:能够筛选出所有的蛋白第三章测试1.BLAST可以进行参考答案:序列比对分析2.仅仅进行核酸一核酸查询，一般使用的BLAST方式是参考答案:BLASTn3.在进行多序列对比的多序列联配比对时，常用的程序是参考答案:ClustalW4.HGP绘制的四项图谱包括参考答案:遗传图谱、物理图谱、序列图谱和基因图谱5.欧洲分子生物学网EMBnet的主要数据库检索工具是参考答案:SRS6.生物信息学的任务有哪些参考答案:数据库的建立、相关分析软件的开发和应用;蛋白质的序列、结构、功能、定位、分类;基因组及基因表达数据的分析和处理;新药研制;生物分子数据的获取、处理、贮存、传递、分析和解释7.PDB能够100%准确预测蛋白质空间立体结构参考答案:错8.蛋白质的基本性质分析包括参考答案:疏水性分析;分子量;氨基酸组成;跨膜区分析9.核酸序列的基本分析包括参考答案:分子量;限制性酶切分析;测序分析;碱基组成10.常见生物信息数据库的检索工具有参考答案:SRS;BDGET/LinkDB;Entrez第四章测试1.下列不属于分离纯化质粒 DNA 的方法参考答案:甲酰胺解聚法2.质粒DNA提取中，沉淀DNA的是参考答案:无水乙醇3.以下哪种方法不能抑制或灭活RNase活性参考答案:加入EDTA金属离子螯合剂4.波长260nm的紫外线下，A值等于1时的光密度大约相当于多少的双链DNA参考答案:50µg/ml5.下列关于紫外分光光度法用于核酸的纯度鉴定的说法正确的是参考答案:TE 缓冲液中，纯 DNA 的A260／A280比值为1.8，纯 RNA 的 A260／A280比值为 2.06.有关核酸的鉴定描述错误的是参考答案:纯 DNA 样品的 A260／A280为 2.07.以下属于DNA的保存的方法是参考答案:溶于 TE 缓冲液中在-70℃储存8.以下哪种方法不是DNA的适宜保存法参考答案:常温保存9.下列关于双向凝胶电泳技术的说法，正确的是参考答案:是蛋白质组学研究最重要的技术;包括等电聚焦电泳和SDS-PAGE;与质谱技术紧密结合使用10.用碱裂解法分离质粒DNA时，染色体DNA之所以可以被除去，是因为（）。
【企业诊断】第十三章分子诊断
前言
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灵敏度高
早期诊断性 已明确疾病表型与基因型的关系
适应性强
检测致病基因突变；分析与疾病连锁的遗传标志；建立 多基因疾病表型克隆；定量分析致病基因的表达水平
二、分子诊断策略
直接诊断——直接检测致病基因的突变
基因突变类型—缺失、点突变、重复、插入等
分子诊断技术的临床应用
分子诊断技术的临床应用分子诊断技术的临床应用范本：一：引言本章主要介绍分子诊断技术在临床应用领域的重要性和作用。
二：分子诊断技术概述1. 定义和原理1.1 分子诊断技术的定义1.2 分子诊断技术的基本原理2. 常用的分子诊断技术方法2.1 PCR（聚合酶链式反应）2.2 FISH（荧光原位杂交）2.3 NGS（新一代测序技术）2.4 Microarray（基因芯片技术）2.5 分子标记与探针三：分子诊断技术在疾病诊断中的应用1. 肿瘤疾病的分子诊断1.1 肿瘤标志物检测1.2 肤质oncogene检测1.3 遗传性肿瘤相关突变检测2. 传染性疾病的分子诊断2.1 病原体核酸检测2.2 药物耐药基因检测2.3 病原体分子分类与溯源3. 遗传性疾病的分子诊断3.1 单基因遗传性疾病检测3.2 多基因遗传疾病筛查3.3 遗传咨询与基因检测四：分子诊断技术在个性化医疗中的应用1. 基因组学与个性化医疗1.1 基因组学在个性化药物治疗中的作用1.2 个体化药物剂量与药物反应性的预测2. 基因测序技术在个性化医疗中的应用2.1 全基因组测序（WGS）与全外显子测序（WES）2.2 基因组医学的应用与展望五：分子诊断技术在疫情防控中的应用1. 新型检测技术在疫情监测中的作用1.1 RT-PCR（逆转录聚合酶链式反应）技术 1.2 CRISPR技术在病毒检测中的应用1.3 基于NGS的病毒溯源和演化分析2. 疫苗研发与评价中的分子诊断技术2.1 分子诊断技术在疫苗筛选中的应用2.2 分子免疫学在疫苗研发中的作用2.3 疫苗接种后的分子诊断与评价六：分子诊断技术的挑战与前景1. 技术挑战1.1 PCR技术的敏感性和特异性问题1.2 大规模数据分析和解读1.3 费用和设备限制2. 未来发展方向2.1 基于的分子诊断技术2.2 微流控技术在分子诊断中的应用2.3 可穿戴设备与分子诊断的结合附件：本文档涉及的相关附件，请参阅附件部分。
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温度梯度凝胶电泳
（Temperature gradient gel electrophoresis, TGGE）
利用不同的分子在不同的温度下，构象 改变的不同而进行分离的一种电泳技术。
－ 46℃ 50℃ 54℃
58℃
变性梯度凝胶电泳
＋ 62℃
(denaturing-gradient gel electrophoresis, DGGE)
OLA的基本原理
（一）基本原理
嗜温性或耐热的连接酶具有高特异性和高保真性，它 能连接与模板序列完全互补的两段核苷酸片段。
DNA 连接酶
5’ ATGGTTCCT G C TAAGGACTAG
3’
3’ TACCAAGGA C G AT TCCTGATC
5’
×
5’ ATGGTTCCT A C TAAGGACTAG
点突变
稳定遗传
正常等位基因
野生纯合子
方法一：
野生
纯合子
突变杂合子
杂合子
突t2 Ht1 Ht2 Hm1 Hm2
1: 正常基因的引 物扩增结果；
2：突变基因的引 物扩增结果
PCR-ARMS的应用
方法二：
496 bp
5’
3’ 野生型基因引物
突变点
3’
5’ 突变型基因引物
缺点
只能检测已知的基因突变及多态性
PCR-ARMS
二、寡核苷酸连接实验
(oligonucleotide ligation assay, OLA)
利用DNA连接酶，将2段寡核苷酸探针顺向 连接，从而检测靶基因型的一种方法。
该方法因为可靠、精确、重现性好，已成为临床遗 传病分子诊断的一种基本方法。
或等位基因特异性PCR (alleles-specific PCR, ASPCR)
（一）基本原理
PCR-ARMS
PCR的引物3’末端的核苷酸与模板之间存 在错配时，PCR扩增效果差，或者不能扩增。
模板 3’
ATGTTA
5’
引物 5’
T A C A A C 3’ ×
PCR-ARMS
PCR-ARMS基本原理
3’
3’ TACCAAGGA C G AT TCCTGATC
5’
双等位基因变异的检测
OLA的基本原理
探针1 5’ ATGGTTCCT G C TAAGGACTAG 等位基因A 3’ TACCAAGGA C G AT TCCTGATC
3’ 5’
通用探针
探针2 5’ ATGGTTCCT C C TAAGGACTAG
5’
ATGGTTCCTG
3’
等位基因 3’
TACCAAGGAC
5’
5’ ATCGTT 顺利延长 3’
正常
5’
ATGGTACCTG
3’
等位基因 3’
TACCATGGAC
5’
5’ ATCGTT ×
3’
不能延长
（二）应用
1. 检测单一点突变 2. 基因分型 3. 检测多位点突变
PCR-ARMS的应用
1. 检测单一点突变
3’
等位基因a 3’ TACCAAGGA G G AT TCCTGATC
5’
OLA的基本原理
OLA实验的操作
1. 反应体系： 2个探针、DNA连接酶、模板
2. 条件： 探针与靶序列的杂交区域足够长（>20bp）
温度：能使探针和靶序列杂交
3. 方法的发展：
耐热连接酶，可使变性和连接连续进行，产物 呈线性增长，大大增加了检测的灵敏度；
利用不同的分子在不同浓度的变性剂作用 下，失活而改变分子构象，进而进行分离的一 种电泳技术。
TGGE
（一）TGGE的基本原理
普通的非变性凝胶电泳不能分离具有相似长度的 DNA，所以也不能分离发生了单核苷酸突变的DNA序 列。
371 bp
野生
突变
纯合子 杂合子 纯合子
M Wt Ht Hm
3. 检测多位点突变
PCR-ARMS的应用
片段1
片段2
突变点1
突变点2
PCR-ARMS可同时检测多个点突变。
（三）方法学评价
优点
适用于较少点突变的检测； 具有低-中等批量处理能力； 可借助多重PCR检测多个点突变； 无需放射性标记； 无需昂贵的试剂； 无需复杂的检测系统
PCR-ARMS的应用
设计一对引物，可以扩增突变基因而对正常基因呈扩 增阻遏；
附加一对引物，可以扩增标志性基因作为阳性对照； PCR扩增完成，进行电泳，即可得知点突变是否发生。
M MG NG 异常 阳性对照
突变基因
PCR-ARMS的应用
2. 基因分型
可用于单个突变的基因分型（鉴别杂合子和纯合子） 或多态性分析
若PCR扩增引物的Tm值大于探针的Tm值，可 在同一管内先进行PCR，再进行OLA实验，大 大减少了污染，提高检测效率。
（二）临床应用
PCR-OLA的应用
1. 镰状细胞贫血症的分子诊断、产前检查 2. 多种遗传病及常见病的检测 (P168)； 3. 局部地区人群的遗传病分子检测
PCR-OLA的方法学评价
设计2对引物，一对引物（P1）与正常基因完全匹配， 一对引物(P2)与突变基因完全匹配。
用这两对引物分别扩增模板。 如果模板基因为正常基因，那么P1扩增可以得到大量
产物，而P2无产物。 如果模板已经突变，那么P2扩增可以获得大量产物，
而P1无产物。
PCR-ARMS
突变基因的引物P2的扩增
突变
（三）方法学评价
优点：
能可靠地鉴别基因型及纯、杂合子； 不容易产生假阴性和假阳性结果； 利用耐热连接酶循环进行连接，使信号放大，
更增强了该法的灵敏度
缺点：
需要多相参与，增加实验的复杂度； 需要PCR扩增与OLA相结合，PCR的非特异性扩增 导致了该方法的重现性不够
三、温度梯度凝胶电泳和变性梯度凝 胶电泳
一、PCR扩增阻碍突变系统
(PCR amplification regractory mytation system, PCR-ARMS)
以PCR方法为基础，检测已知点突变的一种方法。
又叫做PCR等位基因特异性扩增法（PCR amplification of specific alleles, PASA）
第十二章 其他分子诊断检测技术
目录
第一节 基因变异检测技术 第二节 脉冲电场凝胶电泳 第三节 分子影像
第一节 基因变异检测技术
分子诊断检测基因突变的目的：
1. 检测已知的基因突变 2. 检测未知的基因突变
几种常见的基因变异检测方法
一． PCR扩增阻碍突变系统 二． 寡核苷酸连接实验 三． 温度梯度凝胶电泳和变性梯度凝胶电泳 四． 变性高效液相色谱法 五． 错配接合蛋白质截短测试法