人角膜上皮细胞系的建立及其特性的研究(精)

人角膜上皮细胞系的建立及其特性的研究

全部作者：

王智崇刘敬波葛坚宋革黄冰高楠马萍

第1作者单位：

中山大学中山眼科中心眼科学国家重点实验室

论文摘要：

目的通过体外连续传代培养，建立具有正常生物学特性和功能的人角膜缘上皮细胞系，为组织工程化角膜的构建提供种子细胞。方法采用组织块法进行细胞纯化和扩增，建立角膜缘上皮细胞系。①观察细胞在建系过程中的特征性形态变化；②通过MTT法绘制细胞生长曲线，通过流式细胞技术进行细胞DNA倍体分析及周期检测，有限稀释法检测细胞的克隆形成能力；③通过免疫组织化学、Western blot等方法检测建系细胞蛋白表达：包括转录因子P63，角质蛋白CK3、CK19，CK14, 波形蛋白Vimentin, 微丝蛋白(F-actin)，微管蛋白(β-tubilin)，细胞增殖细胞核抗原（PCNA），β1-integrin；④对细胞进行染色体分析，观察细胞在传代过程中核型的变化；⑤通过皮下注射建系细胞到裸鼠颈背部皮下的方法，检测细胞的致瘤性；⑥将细胞接种在Transwell培养皿中进行气液界面培养，观察建系细胞体外复层形成能力。结果：SDHCEC1细胞系在体外已经传代超过50代，细胞保持圆形、椭圆形，表面有丰富的微绒毛。细胞倍增时间为19.6小时，第1、10、20、30、50代细胞的克隆形成率分别为6.87%、3.47%、6.33%、5.08%、6.52%，早代细胞(

关键词：

角膜、角膜缘，角膜上皮细胞、细胞系、组织工程远程下载论文(免费PDF论文全文)

发表日期：

2006年11月14日

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修改稿：