液相色谱仪基础知识

三、液相色谱基本构造
2.输液系统 流路—单泵、双泵、三元泵、四元泵、
多泵 压力—低压、中压、高压、超高压 控制方式—恒流、恒压 流动相—等度、梯度 混合方式—低压、高压 流量—分析泵、半制备泵、制备泵 材质—金属泵、非金属泵（peek)
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三、液相色谱基本构造
泵系统为输液系统中最为核心部分，也是 整个液相色谱系统中最为核心的部分。
关于泵系统中等度、梯度、高压、低压、 二元、四元将做主要介绍。
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三、液相色谱基本构造
等度分析：针对单一样品、或者简单 样品采用等度分析。示意图如下
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三、液相色谱基本构造
梯度分析：对于复杂样品，一般采用梯度分析，且 必须是二元以上的泵系统。示意图如下：
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一、色谱基础知识
按流动相的物态分: 气相色谱(Gas Chromatography, GC) 用气体作为流动相(又叫载气) 液相色谱(Liquid Chromatography, LC) 用液体作为流动相(又叫洗脱剂)
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二、液相色谱概述
液相色谱：以液体作为流动相的色谱分离方法。
1ppm=1000ppb;1ppb=1000ppt
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三、液相色谱基本构造
1、紫外-可见光检测器（UV）
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三、液相色谱基本构造
2、二极管阵列检测器（DAD）
用光电二极管取代了是传统 的光电倍增管，在一次色谱操作 中可同时获得多波长的吸光度， 并且可以采用现代微机技术将各 组份的保留时间、吸收波长和吸 光度汇合一起，绘制三维谱图， 提供既定量又定性的色谱信息。
三、液相色谱基本构造
高压梯度：用两台高压输液泵将两种溶剂输入。 低压梯度：在常压下将两种溶剂（或多元溶剂）混合，然后用
高压输液泵将流动相输入到色谱柱中。（混合前高压与混合 后高压）
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三、液相色谱基本构造
二元梯度---需2个泵-----高压梯度 四元梯度----需比例阀一个泵--低压梯度
D
光源
光电倍增管
蒸发光散射检测原理
三、液相色谱基本构造
ELSD的原理:
检测器的 响应值仅与光束 中溶质颗粒的大 小和数量有关。 而与溶质的化学 性质无关。
溶剂的蒸发
雾化
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检测
三、液相色谱基本构造
5、其他检测器
Refractive index detectors（RI，示差检测器） Mass spectrometric detectors（Ms，质谱检测器） CAD detectors（CAD，电喷雾检测器） Electrochemical detecrors（ECD，电化学检测器）
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三、液相色谱基本构造
主要组成部分如下： 1. 进样系统 2. 输液系统 3. 分离系统 4. 检测系统 5. 数据处理系统
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三、液相色谱基本构造
1.进样系统： 自动进样系统（是否带温控） 手动进样系统
核心部件： 六通阀
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三、液相色谱基本构造
分离手段: ������ 高性能色谱柱,高精度输液泵,高灵敏度检测
器… -广泛应用于各个领域: ������ 医药,环保,石化,生命科学,食品工业,农业… -无论在技术上,理论上,还是在应用上仍有较大的发展
空间
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二、液相色谱概述
超高效液相色谱 –UPLC (Ultra Performance Liquid Chromatography ) –是区别于HPLC的液相色谱新领域 –基于小颗粒填料和LC原理的一种创新技术 –实现超高分离度、灵敏度、分析速度
新员工培训（液相色谱基础知识）
上海仪先仪器有限公司 仪先国际贸易有限公司 上海力晶科学仪器有限公司
陆加金 2013年9月
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内容提要
一、色谱基础知识 二、液相色谱概述 三、液相色谱基本构造 四、液相色谱基本工作原理 五、液相色谱的用途及应用领域
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一、色谱基础知识
液相色谱常规分析的柱温在20-60度。 不同温度对样品的保留时间有很大的影响。 柱温箱的优点： 分析结果重现性好 提高柱效 降低柱压 保证检测稳定性
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三、液相色谱基本构造
4.检测系统 灵敏度分级 ppm级 per parts of million ppb级 per parts of billion ppt级 per parts of trillion 如：浓度及浓度换算单位 1ppm即：mg/L 1ppb即：ug/L 1ppt即：ng/L
六通阀原理示意图 取样时，流动相
直接进柱，进样口与定 量管连接，样品充满定 量管后，多余样品从6 流出。
进样时，泵将流动 相压入定量管，将样品 全部进入色谱柱分析。
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三、液相色谱基本构造
进样前，进样，进样后3个过程示意图
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三、液相色谱基本构造
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三、液相色谱基本构造
3.分离系统 3.1色谱柱 色谱柱是HPLC分离系统的关键！ 色谱柱分类：可根据柱管、类型、规格大小、填料、分离类型进行分类。 色谱柱标签的识别：
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三、液相色谱基本构造
3.2 柱温箱 柱温箱的作用：
控温系统大多数并不是HPLC的必须备件，凝胶系统一般是要求控温的， 采用示差检测最好配置控温箱，离子色谱也同样。有些仪器除了加热的 控温系统外，还自带低温冰箱。
三、液相色谱基本构造
4、蒸发光散射检测器（ELSD） 流动相
是利用样品组分雾化和蒸发形成 固体微粒后对光的散射现象来 检测色谱流出组分的方法（可 检测任何挥发性低于流动相的 样品。碳水化合物，类脂化合 物，表面活性剂，聚合物，药 物，氨基酸和天然产物。）
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雾化
载气 D0
蒸发
散射
合气相色谱的其它化合物。 食品安全：食品安全分析包括检测农产品和食品中的添加剂、残留物、
杂质和毒素。 法律医学：用于药物筛选和毒理学研究法医分析。 国土安全：检测、识别、确认生物和化学战争制剂及有毒的工业化合物
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两相中有一相是固定的,叫作固定相,有一 相是流动的,称为流动相流动相又叫洗脱剂， 溶剂。
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一、色谱基础知识
色谱法：利用组分在两相间分配系数不同而 进行分离的技术。
流动相：携带样品流过整个系统的流体。 固定相：静止不动的一相，色谱柱。 色谱是一种分离技术。 色谱的主要目的是对混合物中的目标物分离 和定量。
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三、液相色谱基本构造
3、荧光检测器（FLD）
高灵敏度：10-12～10-13g/mL; 高选择性：对多环芳烃，维 生素B、黄曲霉素、卟啉类化合 物、农药、药物、氨基酸、甾 类化合物等有响应对温度和流 动相的流速变化不敏感 所需试样少，适合恒量分析
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适用于高沸点、大分子、强极性和热稳
定性差的化合物的分析。������
流动相具有运载样品分子和选择性分离的双重 作用。
气相色谱：以气体作为流动相的色谱分离方法。
适用于沸点较低、热稳定性好的中小分子化合物 的分析。
Hale Waihona Puke Baidu
流动相只起运载样品分子的能力。
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二、液相色谱概述
高效液相色谱 -HPLC (High Performance Liquid Chromatography ) -是一种区别于经典液相色谱,基于仪器方法的高效能
色谱法最早是由俄国植物 学家茨维特在1906年研究用碳 酸钙分离植物色素时发现的， 色谱法(Chromatography)因之 得名。
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一、色谱基础知识
色谱法是利用混合物中各组份在不同的两 相中溶解,分配,吸附等化学作用性能的差异, 当两相作相对运动时,使各组分在两相中反复 多次受到上述各作用力而达到相互分离。
…………
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四、液相色谱工作原理
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五、液相色谱用途及应用领域
制药：从药物研制到开发、制造和QA/QC，为药物制造提供支持。 石油化工：液相色谱应用包括添加剂化验、精细和专用化学分析以及使
用带有有机溶剂或水性溶剂的大小排查色谱检定聚合物。 蛋白质：识别、隔离和净化细胞和体液中的蛋白质。 环境：分析包括非挥发性杀虫剂、除草剂、多核芳香碳氢化合物及不适