脑缺血大鼠模型具体步骤及详细说明

脑缺血大鼠模型具体步骤及详细说明实验分组随机分组：对照组，模型组，阳性药物组，受试药物组(三个浓度梯度组)

实验周期24 hours, 3 days or 7 days

建模方法1.15%水合氯醛麻醉大鼠，颈部备皮，消毒，插入肛温探头，保持体温在37±0.5℃。

2.颈部正中切口，暴露右侧颈总动脉，颈内动脉和颈外动脉。使用6-0丝线在距离颈总动脉分叉4mm处结扎颈外动脉远心端，在颈外动脉穿入另一根6-0丝线，在靠近颈总动脉分叉处打一个活结。

3.使用动脉夹夹闭颈总动脉。在距离颈总动脉分叉处3mm处的颈外动脉上剪一个小口，将一根头端处理过的0.33mm直径的尼龙线从小口中插入，进入颈内动脉，并向内插入大脑中动脉，尼龙线的插入深度距离颈总动脉分叉处约16±1mm。

4.缺血后90min拔掉线栓，用6-0丝线结扎外动脉近心端，用3-0丝线缝合颈部伤口，活力碘消毒伤口，将大鼠放在加热垫上，待清醒后放入恒温抚养箱饲养。

5.术后24h，对小鼠进行神经功能评分，然后腹腔注射15%水合氯醛麻醉大鼠，取大脑进行TTC染色和病理染色

应用用于研究脑梗死的发病机制、病理生理过程和溶栓治疗

1.神经功能缺失体征评分

参考Longa及Bederson的5分制法在动物麻醉清醒后24h进行评分，分值越高,说明动物行为障碍越严重。

0分:无神经损伤症状

1分:不能完全伸展对侧前爪

2分:向对侧转圈

3分:向对侧倾倒

4分:不能自发行走,意识丧失

2.TTC染色

麻醉大鼠后，取大鼠脑组织，放入-20℃冰箱冷冻30min。用PBS配置1% TTC（W/V），37℃水浴至TTC溶解，将冻好的脑组织切片，置于10ml TTC 溶液中，37℃恒温孵育10min。不时翻动脑片，使组织均匀染色。正常脑组织染色后呈鲜红色，而梗死区呈苍白色。

取脑后用4%多聚甲醛溶液固定，蔗糖溶液脱水后，经OCT包埋做冰冻切片，切片10um，做尼氏染色，可做梗死面积的评价。