大鼠心肌缺血再灌注损伤模型的建立与评价
针灸预处理对大鼠心肌缺血再灌注损伤保护作用
针灸预处理对大鼠心肌缺血再灌注损伤保护作用【摘要】针灸预处理是一种通过刺激穴位来提前干预机体疾病的方法。
本文旨在探讨针灸预处理对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用。
首先介绍了针灸预处理的原理，大鼠心肌缺血再灌注损伤的机制以及针灸预处理对其保护的具体作用。
随后详细描述了针灸预处理的操作步骤，并通过实验结果分析验证了针灸预处理可以有效保护大鼠心肌缺血再灌注损伤。
实验结果表明，针灸预处理能够显著降低心肌梗死面积和心肌损伤程度。
结论是针灸预处理可以有效保护大鼠心肌缺血再灌注损伤，为临床心脏病治疗提供了新的思路和方法。
【关键词】针灸预处理，大鼠心肌，缺血再灌注损伤，保护作用，机制，操作，实验结果，分析，保护效果1. 引言1.1 研究背景背景提供了一个研究领域的历史背景和相关研究的现状，有助于读者对研究的重要性和必要性有一个清晰的认识。
在针灸预处理对大鼠心肌缺血再灌注损伤保护作用的研究中，研究背景通常包括心肌缺血再灌注损伤的严重性和流行病学调查数据。
心肌缺血再灌注损伤是一种临床常见的心血管疾病，是指心肌缺血引起的损伤，在再灌注时进一步加重。
这种损伤在临床上会导致严重的心脏功能紊乱，甚至引起心肌梗死。
大量的研究表明，针灸预处理可以通过一系列生物学机制发挥心肌保护作用，减轻心肌缺血再灌注损伤的程度。
目前关于针灸预处理对大鼠心肌缺血再灌注损伤保护作用的研究还比较有限，缺乏系统性的总结和分析。
深入探讨针灸预处理对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用及其机制，对于丰富心血管疾病预防和治疗的手段具有重要意义。
本研究旨在通过实验探讨针灸预处理对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用，并为临床应用提供科学依据。
1.2 研究目的研究目的：通过实验验证针灸预处理对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用，揭示其机制和具体操作方式，为临床应用提供科学依据。
通过研究，探讨针灸预处理在心肌缺血再灌注损伤中的作用机制，为进一步的临床应用提供理论基础。
希望通过本研究为心肌缺血再灌注损伤的防治提供新思路和新方法，促进心肌保护的研究和临床应用。
大鼠脑缺血再灌注损伤模型造模方法
大鼠脑缺血再灌注损伤模型造模方法
方法简述：
体重230-260g雄性SD大鼠，禁食，自由饮水，麻醉，颈部去皮，仰卧位固定，颈正中线切口，沿胸锁乳突肌内缘分离肌肉和筋膜，分离左侧颈总动脉(CCA)、颈外动脉(ECA) 和颈内动脉(ICA)，在CCA 远心端和近心端及ECA处挂线备用。
用微动脉夹暂时夹闭ICA，然后近心端结扎CCA、ECA。
然后在距CCA分叉部4mm处剪一小口，将栓线插入到ICA, CCA远心端的细线轻轻系牢栓线，用眼科镊轻推栓线，从血管分叉处开始算距离，当插入深度在18mm时，结扎固定好栓线及ECA血管，后拔除栓线至ECA，再次扎紧ECA，缝合，术后给予青霉素抗炎。
注意事项：
1. 保温:60W白炽灯高度为37cm，直接照射能使肛温保持在37℃。
2. 推栓线时，要将血管放松至原来状态,且保证标记点在分叉处。
3. 栓线事先剪好。
4. 栓线不能在血管里反复进退，否则极容易造成蛛网膜下腔出血。
5. 插入线栓要轻柔熟练，速度尽可能快，以避免时间长了血管内血栓形成。
心肌缺血再灌注损伤介绍和实验设计
心肌缺血再灌注损伤介绍和实验设计心肌缺血再灌注损伤介绍和实验设计Ⅰ.心肌缺血再灌注损伤：它是指缺血心肌组织恢复血流灌注时，导致再灌注区心肌细胞及局部血管网显著的病理生理变化，这些变化共同作用可促使进一步的组织损伤。
那这里的关键词就是缺血心肌组织。
那为什么会产生缺血的心肌组织呢？这就与临床上的疾病有关了。
一些心脏疾病，比如急性心肌梗死、冠心病等他们会使心脏发生缺血的症状，其基本的生理过程就是心肌缺血。
Ⅱ.心肌缺血的危害：心肌缺血：指单位时间内的冠脉血流量减少，供给组织的氧量也减少，缺血必定存在缺氧表明缺血缺氧。
心肌缺血比单纯性心肌缺氧无血流障碍要严重，因为前者除了缺氧的影响之外，缺血组织也不能获得足够的营养物质又不能及时清除各种代谢产物带来的有害影响。
一、心肌缺血的原因主要分为两种情况：1是冠脉血流量的绝对不足。
这种情况是由自身疾病产生的，主要包括冠状动脉阻塞，冠状动脉痉挛。
2是冠脉血流量的相对不足：包括供氧降低或耗氧增加，比如高原高空或通风不良的矿井吸入氧减少；肺通气或换气功能障碍，可致血氧含量降低红细胞数量和血红蛋白含量减少等。
二、缺血对心肌的危害主要包括以下几个方面：1是心肌收缩能力降低。
2是导致心肌舒张功能降低。
3是心肌组织的血流动力学发生改变，比如说血流的阻力增加等。
4是心肌电生理的变化，比如说静息点位降低，传导速度减慢；室颤阈降低等。
5是导致心肌形态学的改变。
当然还有其他的危害，在这里就不一一列举了。
由于心肌缺血存在这么多的危害，临床上针对这一疾病采取了再灌注治疗方法，但随之而来的又是另外一个临床问题：缺血再灌注损伤。
下面具体介绍一下心肌缺血再灌注损伤。
心肌缺血再灌注损伤英文缩写为MIRI，最早由詹宁斯等于1960年提出，发现其临床表现为再灌注心律失常、心肌顿抑、心肌能量代谢障碍等现象。
随后又有学者在临床手术中也证实了这一观点，发现在冠脉搭桥术完成后，心肌坏死进一步加重的现象。
接着布朗沃尔德教授在1985年提出了这样一个观点：心肌再灌注是一把双刃剑，既可以损伤心肌也能保护心肌。
大鼠心肌缺血_再灌注损伤模型的改进与评价
第6卷 第4期解剖科学进展V o l16 N o14 2000年PRO GR ESS O F ANA TOM I CAL SC IEN CES2000大鼠心肌缺血 再灌注损伤模型的改进与评价王淑侠 兰小莉1 王吉文2 裴著果(中国医科大学第二临床学院核医学科 沈阳110003) 摘要 大鼠心肌缺血 再灌注损伤是模拟人类心梗及溶栓再通治疗,研究缺血预适应机制,评价抗心律失常药物疗效常用的动物模型。
本文在传统造模方法的基础上进行了一定的改进,采用在压管下加一小垫片的方法,减少了传统推管法对心表面的机械损伤,方法简便,冠脉阻断确实。
结果:大鼠左冠状动脉主干缺血30′,再灌120′,危险区 左室重量比为55%±5%,坏死区 危险区为58%±6%(N=10)。
心肌酶谱结果:CK4301±251u l,CK2M B2288±328u l,LDH2329±216u l,A ST371±57u l(N=5)。
关键词 心肌再灌注损伤;大鼠;模型,T TC染色法 阻断冠状动脉造成急性心肌梗塞并在预定时间内恢复血供予以再灌注是模拟人类心梗及溶栓再通治疗常用的实验研究方法。
大鼠以其冠脉侧支循环缺乏、心肌坏死出现早、心律失常发生率高、重复性、稳定性好、费用低廉而成为制作该疾病模型[1],特别是硕、博士研究生进行课题实验首选的实验动物。
笔者在进行心肌缺血预适应机制的研究中,参照以往文献记载的方法[2～4],并根据本实验室条件,对该模型的制作方法进行了一定的改进,现报告如下:1 材料与方法111 材料健康雄性W istar大鼠,体重240～350g(由中国医科大学实验动物部提供);N i Hon Konden型心电图机(上海KOND EN医用电子仪器厂);小动物呼吸机(浙江医科大学医学仪器实验厂);自制简易血压计(由24号套管针、三通开关、U形管内装水银,管旁边附有直尺做刻度组成);红四氮唑(T TC)由上海第三试剂厂生产;批号970924用前以011M1PH714的磷酸缓冲液配成1%溶液;伊文斯兰(Evan s B lue)瑞士F luka公司出品。
天麻素抗大鼠离体心肌缺血_再灌注损伤的作用_周敏
180第11卷 第12期 2009 年 12 月辽宁中医药大学学报JOURNAL OF LIAONING UNIVERSITY OF TCMVol. 11 No. 12 Dec .，2009天麻是一种功效很多而效果显著的名贵中药，天麻素（化学名为对羟甲基苯-β-D-吡喃葡萄糖苷，又称天麻苷）是天麻的有效单体。
近年来研究发现，天麻素具有镇静、抗惊厥、抗癫痫、镇痛，增加脑血流量，改善椎基底动脉、小脑前下动脉、迷路动脉及内耳供血不足，保护神经细胞，促进心肌细胞能量代谢的功能。
心肌缺血再灌注 I/R 损伤是导致心肌损害的常见原因,深入研究心肌 I/R 损伤的发病机制、不断寻找有效的治疗药物一直是国内外医药界的重要研究领域之一[5]。
本实验采用 Langendorff 灌流的大鼠心脏，探讨天麻素的抗心肌 I/R 损伤作用及可能的作用机制。
1 材料和方法1.1 药品及试剂天麻素购于中国药品生物制品检定所；超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）检测试剂盒购于南京建成生物工程研究所；其它化学药品均为国产分析纯。
1.2 动物和实验分组健康wistar 大鼠雌雄各半 ,体重 180~260g ,由华中科技大学同济医学院实验动物学部提供。
大鼠被随机分成4组 ,每组10只，分别给予以下药物: ①正常灌流组; ②模型组; ③天麻素高剂量组0.1mmol/L;④天麻素低剂量组0.025mmol/L。
1.3 实验操作腹腔注射肝素750U/kg 麻醉后、制备Langendorff心脏[7],恒温（37.5℃）恒压（60 cmH 2O ）灌流。
灌流液成分为：118mmol/L NaCl，4.7mmol/L KCl，2.5mmol/LCaCl 2，1.2mmol/L MgSO 4，1.2mmol/L KH 2PO，11mmol/L Glucose，25mmol/L NaHCO 3, PH 7.35~7.45,持续通入混合气体（95%O 2和5%CO 2）[7]。
阿托伐他汀对大鼠心肌缺血再灌注的影响及作用机制
机 制 可能通 过抑 制 炎症 因子的合 成 ， 少 中性粒 细胞 的浸 润 ， 而 改善 心肌 缺血 再 灌注损 伤 的发 减 从
生。
主题词 心 肌缺 血／ 并发症 再灌 注损 伤 ＠ 阿托伐 他 汀 白细胞介 素 ６ 血液 ／
酶／ 液 血 动物 ， 实验 大 鼠
过 氧化 物
【 图分类 号】 Ｒ５ ３ ２ 【 中 ４． 文献 标识 码】 Ａ
【 文章编 号】 １ ０ —３ ７ ２ １ ） １１ ５ — ３ ０ ０７ ７ （０ ０ １ －４ ８ ０
Ｔｈ ｆ ｅ ｔ ａ ｅ ｈ ｎ ｓ ｓ ｏ ｔ ｒ ａ ｔ ｔｎ ｏ ｅ ｅ ｆ ｃ ｎｄ ｍ ｃ ａ ｉ ｍ ｆ ａ Ｏ ｖ ｓ ａ ｉ ｎ
方 法 ：２只 Ｗｉ ａ ４ ｓ ｒ大 鼠随机 分 为 ３组 ： 手 术 组 、 血 再 灌 注组 、 ｔ 假 缺 阿托 伐他 汀预 处 理组 ； 建立 大
鼠 心肌 缺血 再灌 注损 伤模 型 ， 定肌 酸激 酶 （ Ｋ） 平 ， ｖ ｎ ｌｅ ＴＴ 染 色后 ， 测 ｃ 水 Ｅ ａ ｓｂｕ 、 Ｃ 用计 算机 图像
分析软 件 计算梗 死 面积 ； 测定 心肌 髓 过氧化 物 酶 （ ｏ） 血 清 白介 素一 （Ｌ ６ 及 白介 素一 （ 一 ） ＭＰ 、 ６Ｉ 一） ８ Ｉ ８ Ｌ 含量。结果： 与缺 血 再 灌 注 组 比较 ， 阿托 伐 他 汀预 处 理 组 Ｃ 减 少 ， Ｋ 心肌 梗 死 面积 显 著 减 小 ；
ｍｙ ｃ ｒ ｉｍ ｓｈ ｍｉ ｅ ｅ ｆ ｓ ｎ ｉｊ ｒ ｎｒ ｔ ｏ ａ ｄｕ ｉｃ ｅ ａｒ ｐ ｒｕ ｉ ｎ ｙｉ ａｓ ｏ ｕ
大鼠活体心肌缺血再灌注损伤模型的建立与综合评估
大鼠活体心肌缺血再灌注损伤模型的建立与综合评估邓宇珺;杨敏;谭卫萍;苏健;符永恒;谭宁;曾红科;单志新;林秋雄;李晓红;董小莉;余细勇【摘要】AIM: To estahlish and evaluate a rat model of heart ischemia - reperfusion injury in vivo.METHODS : Seventy - two male Sprague - Dawley rats weighing( 250 ±50 )g were randomly divided into sham operation group( sham ), ischemia - reperfusion group( I/R ) and normal group.The animals were anesthetized and heparinized.Myocardial ischemia - reperfusion was induced by ligating the left anterior descending coronary artery with " U - shape tube" for 35 min followed hy 120 min or 240 min reperfusion in vivo.The heart infarct size was measured by triphenyltetrazolium chloride( TTC ) staining.The myocardial cell apoptotic index was determined by the method of terminal deoxynucleotidyl transferase - mediated dUTP - biotin nick - endlabeling( TUNEL ).Immunohistochemical method was used to detect the expression of Bcl - 2 and Bax in rat ischemia myocardium.The blood level of MB isoenzyme of creatine kinase ( CK - MB ), cardiac troponin Ⅰ( cT nI ), nitric oxide( NO ), malondialdehyde( MDA ), total superoxide dismutase( T SOD )and glutathione peroxidase( GSH - Px ) were detected after reperfusion for 2 h and 4 h.RESULTS : Compared with normal group and sham group, there were obvious changes of ST - T segment and Q wave in the electrocardiogram of I/R group.The blood level of CK - MB, cTnI, NO, MDA and GSH - Px in I/R group increased( P ＜0.05 ,P ＜0.01 ) after reperfusion for 2 h and 4 h, and the hlood level of T - SOD in I/R groupafter reperfusion for 2 h and 4 h also increased ( P ＜0.05 ).The heart infarct size in I/R group was the largest as compared to other groups.Among these groups, the apoptotic index of I/R group was the highest and the Bcl - 2/Bax ratio in I/R group decreased( P ＜ 0.01 ).CONCLUSION : The rat model of heart ischemia - reperfusion injury in vivo can be successfully established with the " U - shape tube" .There are obviously changes of heart infarct size. blood level of CK - MB, cTnI, NO, MDA, T - SOD and GSH - Px, myocardial apoptotic index and Bcl - 2/Bax ratio hetween I/R rats and control animals.%目的:构建并评估大鼠活体心肌缺血再灌注损伤(I/R)的实验动物模型. 方法:将清洁级成年SD雄性大鼠72只,随机分为正常组、假结扎组和I/R模型组, 手术的两组全麻下开胸暴露心脏,假结扎组只过线不结扎,模型组使用"U形金属管"进行冠状动脉左前降支结扎,持续心电图监测,并于再灌注2 h与4 h后进行血浆生化﹑心肌组织学的检测.结果:与正常组和假结扎组比较,I/R模型组心电图有明显ST-T改变和再灌注后病理性Q波,再灌注2 h和4 h时存在比较明显的ST-T改变;血标本检测示心肌型肌酸激酶同功酶(CK-MB)、心肌钙蛋白I(cTnI)、一氧化氮(NO)、丙二醛(MDA)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)水平显著升高(P＜0.05或P＜0.01),T-SOD水平在2 h和4 h也应激性升高(P＜0.05);心肌组织病理学检测显示模型组左心室心肌损伤疤痕明显,且2 h模型组左室心肌存在间隔性梗死区域,4 h模型组心肌组织区域性梗死和梗死面积明显增加;TUNEL法与Bcl-2﹑Bax蛋白实验显示2 h和4 h心肌细胞凋亡数量明显增加;Bcl-2/Bax蛋白表达阳性细胞比值下降显著(P＜0.01). 结论:成功建立大鼠活体心肌I/R模型,模型大鼠的心电图、血清学、心梗面积﹑心肌细胞凋亡和心肌组织病理学等发生显著改变.【期刊名称】《中国病理生理杂志》【年(卷),期】2011(027)002【总页数】5页(P412-416)【关键词】大鼠;再灌注损伤;细胞凋亡【作者】邓宇珺;杨敏;谭卫萍;苏健;符永恒;谭宁;曾红科;单志新;林秋雄;李晓红;董小莉;余细勇【作者单位】广东省人民医院,广东省医学科学院急危重症医学部,广东,广州,510080;广东省人民医院,广东省医学科学院医学研究中心,广东,广州,510080;广东省人民医院,广东省医学科学院图书馆,广东,广州,510080;广东省人民医院,广东省医学科学院医学研究中心,广东,广州,510080;广东省人民医院,广东省医学科学院医学研究中心,广东,广州,510080;广东省人民医院,广东省医学科学院广东省心血管病研究所心内科,广东,广州,510080;广东省人民医院,广东省医学科学院急危重症医学部,广东,广州,510080;广东省人民医院,广东省医学科学院医学研究中心,广东,广州,510080;广东省人民医院,广东省医学科学院医学研究中心,广东,广州,510080;广东省人民医院,广东省医学科学院医学研究中心,广东,广州,510080;广东省人民医院,广东省医学科学院广东省心血管病研究所心内科,广东,广州,510080;广东省人民医院,广东省医学科学院医学研究中心,广东,广州,510080【正文语种】中文【中图分类】R542.2随着老龄化人口的增多，临床上由于心肌缺血引起的一系列心血管病越来越常见，且治疗效果欠佳。
蒙药黄连—4汤对心肌缺血再灌注损伤SD大鼠cTn—I、CK、LDH的保护作用
蒙药黄连—4汤对心肌缺血再灌注损伤SD大鼠cTn—I、CK、LDH的保护作用目的探讨蒙药黄连-4汤对大鼠心肌缺血再灌注损伤中cTn-I、CK、LDH的影响。
方法取健康雄性SD大鼠共60只，分为六组：假手术组、心肌缺血再灌注损伤模型组、蒙药黄连-4汤低剂量组、蒙药黄连-4汤中剂量组、蒙药黄连-4汤高剂量组、丹参组，治疗组连续灌胃给药15天后，采用结扎大鼠左冠状动脉下降支的方法制备心肌缺血再灌注损伤的模型，心肌缺血30 min，再灌注90 min。
假手术组大鼠只穿线不结扎左冠状动脉下降支。
心肌缺血再灌注末立即行腹主动脉取血。
通过酶联免疫吸附法（ELISA）法检测血清中磷酸肌酸激酶（CK）、乳酸脱氢酶（LDH）、肌钙蛋白（cTn-I）水平。
结果蒙药黄连-4汤组血清CK、LDH、cTn-I水平显著性降低。
结论蒙药黄连-4味汤对心肌缺血再灌注损伤具有保护作用。
其作用机制与心肌酶CK、LDH、cTn-I含量有关。
标签：蒙药黄连-4汤；心肌缺血再灌注损伤；CK；LDH；cTn-I当前，随着社会不断发展，物质水平的高速提高，不健康的饮食习惯、大量的吸烟和饮酒、长期缺乏运动以及精神上的压力使我国心血管疾病的发病率不断攀升[1]。
研究发现，心肌缺血再灌注损伤（myocardial ischemia reperfusion injuty ，MIRI）是一种心肌缺血后加重原有的损伤，引起心肌细胞的结构及功能发生不可逆性改变，进而加重原有的心血管病，最终导致患者病情恶化甚至死亡的疾病[2]。
蒙药黄连-4汤是蒙医传统方剂之一，是由黄连、栀子、瞿麦、多叶棘豆组成，具有清热解毒、防止燥浊热、调理赫依齐素相搏之功效。
君药黄连的性质为苦、寒、无毒，具有清热燥湿，泻火解毒、调理体素、泻火除烦、改善心脏赫依、齐素循环，调节免疫功能、改善心血管功能、降血压、抗血小板等功效，在这一基础上加以辨证施治。
本实验通过研究蒙药黄连-4汤对大鼠心肌再灌注损伤后心肌酶及肌钙蛋白I的变化，进一步探讨蒙药黄连-4汤的应用对心肌再灌注损伤大鼠心脏的保护作用机制。
丹参酮ⅡA对大鼠心肌缺血再灌注损伤的影响
本文探讨 丹参 酮 ⅡＡ对心 肌缺 血再 灌注损伤 的保护作用 ，并初步探讨其作用 机 制 。
实验 材 料 与 方 法 实验 动物 分 组及 给药 ：６０只 Ｗｉｓｔａｒ
大鼠随机分为 ３组 ，每组 ２Ｏ只，分组及 给 药方 案如 下 ，术 前连续 灌 喂 ３天 ，每天 １ 次 。假 手术 组 （Ｓｈａｍ ｇｒｏｕＰ）：氯 化 钠 注 射液 连续灌 喂 ５ｍｌ／ｋｇ；再灌模 型组 （Ｍｏｄ— ｅｌ ｇｒｏｕＰ）：氯 化 钠 注射 液 连 续 灌 喂 ５ｍｌ／ ｋｇ；丹 参 酮 Ⅱ Ａ 组 （Ｔａｎｓｈｉｎｏｎｅ ＩＩ Ａ ｇｒｏｕＰ）：丹参 酮 ⅡＡ连续灌喂 １５ｒ ａｇ／ｋｇ。
参 考 文 献 １ 王海峰．丹参有效成 分及药理研 究概况．社
区 医学 杂 志 ，２００７，５（１）：４ｏ一４１． ２ 王黎 ，陈满秋 碟脉 灵注射液 对犬实 验性心
肌梗死 的保 护 作用 ［Ｊ］．中国 医院 药 学杂 志 ，２００２，２２． ３ 苏 静 怡 ，唐 朝 枢 ．心 血 管 系 统 的 细 胞 保 护 ［Ｊ］．基 础 医 学 与 临 床 ，１９９４，１２（４）：６．
心 肌 梗 死范 围 （ＭＩＳ）测 定 ：剖 取 大 鼠 心 脏 ，沿 冠 状 沟 切 除 心 房 ，平 行 于 房 室 沟 将 左 心 室 心 肌横 切 ４～５片 ，然 后 浸 入 氯 化硝基 四氮 唑蓝 （ＮＢ—Ｔ）磷 酸缓 冲液中 ， 置 ３７℃ 恒 温 水 浴 ，待 染 色 完 全 后 取 出 ，正 常 组 织 染 色 ，缺 血 组 织 不 染 色 。切 取 缺 血 心 肌 称 重 ，用 缺 血 心 肌 与 左 心 室 湿 重 的 百 分 比作 为 ＭＩＳ。
统计方 法 ：实 验 数 据 采用 ＳＰＳＳＩＯ．０ 统计 软 件处 理 ，结果 以均数 ±标 准差 表 示 ，多 组 问 比较 采 用 方 差 分 析 ，两 组 间 比 较 采 用 ｔ检 验 。
医学实验报告范文分享与指导
医学实验报告范文分享与指导实验名称: 大鼠心肌缺血/再灌注模型的建立及评价实验目的:本实验旨在建立一种可靠的大鼠心肌缺血/再灌注 (I/R) 模型，并评价该模型的可行性和角质酸蛋白 (KAP) 在心肌保护中的作用。
实验材料和方法:1.实验动物: 使用8-10周龄的健康雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠。
2.心肌缺血/再灌注模型建立: 在麻醉下，通过结扎左冠状动脉 (LAD) 在大鼠心肌上建立缺血模型，缺血30分钟后开放结扎使之再灌注。
3.实验组设定: 分为正常对照组、缺血组和角质酸蛋白处理组 (5只大鼠/组)。
4.观察指标: 测定心肌组织坏死面积 (MI)、血清肌酸激酶同工酶(CK-MB) 水平和心肌组织中超氧化物歧化酶 (SOD) 活性。
5.数据统计: 采用SPSS统计软件对数据进行单因素方差分析(ANOVA) 和Tukey's多重比较。
6.伦理考虑: 确保本研究符合动物实验道德规范和法规。
实验结果:1.心肌缺血/再灌注模型的建立: 缺血30分钟后再灌注2小时，观察到明显的心肌受损现象。
2.角质酸蛋白处理的效果评价:2.1 角质酸蛋白处理组的MI显著低于缺血组 (P<0.05)，显示其具有一定的心肌保护作用。
2.2 角质酸蛋白处理组的CK-MB水平显著低于缺血组 (P<0.05)，显示其在减少心肌损伤中的有效性。
2.3 角质酸蛋白处理组的SOD活性显著高于缺血组 (P<0.05)，显示其具有抗氧化作用。
3.统计结果表明，角质酸蛋白处理组的心肌保护效果明显优于缺血组。
讨论与结论:本实验成功建立了大鼠心肌缺血/再灌注模型，并验证了角质酸蛋白在心肌保护中的重要作用。
KAP处理可显著减轻缺血再灌注损伤，降低MI和CK-MB水平，提高SOD活性。
因此，我们推测角质酸蛋白可作为一种潜在的心肌保护剂。
然而，进一步的研究仍需开展，以探索其具体的作用机制和潜在的临床应用价值。
当归多糖改善大鼠心肌缺血再灌注损伤的体内外观察及其机制探讨
当归多糖改善大鼠心肌缺血再灌注损伤的体内外观察及其机制探讨叶建华1，沈盛晖1，张田杰1，冯频频21 浙江省立同德医院心血管科，杭州310012；2 浙江省立同德医院药剂科摘要：目的 建立大鼠心肌缺血再灌注损伤（MIRI ）的体内、体外模型，观察当归多糖（ASP ）对大鼠MIRI 的改善作用并探讨其机制。
方法 在体内研究，成年SD 大鼠随机分为假手术组、MIRI 组、ASP 低剂量组、ASP 高剂量组，除假手术组外，均采用冠状动脉左前降支结扎再灌注的方法建立MIRI 模型，ASP 低、高剂量组在建模后分别给予50、100 mg /kg 的ASP 灌胃，假手术组及MIRI 组给予等量生理盐水灌胃，持续4周；采用ELISA 法检测各组血清心肌损伤标志物肌酸激酶同工酶（CK -MB ）、乳酸脱氢酶（LDH ）及炎症因子肿瘤坏死因子α（TNF -α）、白细胞介素6（IL -6）、IL -1β；Western blotting 法检测各组心肌组织凋亡蛋白B 淋巴细胞瘤2（Bcl -2）、Bcl -2关联X 蛋白（Bax ）、裂解的半胱胺酸蛋白酶（cleaved Caspase -3）及toll 样受体4（TLR4）/核因子κB （NF -κB ）通路相关蛋白TLR4、磷酸化核蛋白（p -p65）、磷酸化NF -κB 抑制蛋白α（p -IκBα）表达。
在体外研究，将大鼠心肌细胞分为对照组、H /R 组、H /R+ASP 低剂量组、H /R+ASP 高剂量组，对照组正常培养不做处理，其他3组均建立体外心肌细胞缺氧复氧（H /R ）模型，建模后H /R+ASP 低、高剂量组分别加入浓度为5、10 µg /mL 的ASP ，H /R 组不做处理；采用MTT 比色法检测各组心肌细胞活性，ELI⁃SA 法检测各组心肌细胞炎症因子TNF -α、IL -6、IL -1β，Western blotting 法检测各组心肌细胞凋亡蛋白Bax 、Bcl -2、cleaved Caspase -3及TLR4/NF -κB 通路蛋白TLR4、p -p65、p -IκBα表达。
抗心肌缺血缺氧损伤药实验
抗心肌缺血缺氧损伤药实验通过对培养的心肌细胞停止／复原糖及氧供，建立模拟的心肌缺血／再灌注损伤模型，以观看药物对细胞形态、生理、生化功能的影响，从细胞水平评价药物对缺血及再灌注损难过肌的庇护作用并可深化举行相关机制讨论。
【材料】 1．新生SD大鼠。
2．试剂培养基（MEM,DMEM)，新生牛血清，0.08%胰酶，0.1％苯扎溴铵（或75％）,95% N2/5% C02混合气体，MTT, CK-MB,LDH测定试剂盒等。
3．仪器及器械净化工作台、C02孵箱、细胞培养用器皿，倒置显微镜、离心机、磁力搅拌器、手术器械、200目金属筛、恒温水浴等。
【办法】 1．原代乳鼠心肌细胞分别、培养无菌条件下取出新生1～3天乳鼠心脏，留取心室，充分剪碎，重复0.08％胰酶消化彻低后，差速贴壁法去除成纤维细胞，用含15％新生牛血清、100U/ml和l00 ug/ml的DMEM培养液将心肌细胞悬浮，细胞密度1x106/ml接种于培养板（同时加入0.1mmol/L 5-BrdU 以抑制成纤维细胞生长）,37℃,5% C02孵箱中培养，48～72小时达到单层同步搏动后即可举行试验。
2．缺氧／复氧损伤模型制备将上同步化细胞换用经95% N2-5% C02饱和（充气20分钟）的无糖MEM培养液，置于95% N2 -5% C02孵箱中培养（缺氧）,2小时后，再以含15％新生牛血清DMEM替换无糖MEM并置入常氧5% C02培养箱继续培养（复氧）4小时。
3．试验设计将细胞随机分为正常对比组（细胞不做任何处理，正常培养6小时）；损伤模型组；损伤模型+受试药物干预组（缺氧2小时，复氧同时分离加入不同浓度药物共培养4小时）；损伤模型+阳性对比药物干预组（缺氧2小时，复氧同时分离加入不同浓度药物共培养4小时）；按照需要设损伤模型+药物溶媒组（处理同药物干预组）。
用于细胞缺氧缺血及再灌注损伤指标众多，可按照讨论需要及试验室设备条件适当选取。
心肌缺血再灌注损伤模型建立方法的研究进展
心肌缺血再灌注损伤模型建立方法的研究进展白玉花;辛颖【摘要】目的：归纳总结心肌缺血再灌注损伤模型的建立方法。
方法：以“心肌缺血再灌注”等作为关键词，查阅1979年1月至2014年2月中国知网和PubMed数据库中关于心肌缺血再灌注损伤模型的相关文献，分别从体外细胞水平和体内动物水平对建立心肌缺血再灌注损伤模型的方法进行综述。
结果：建立体外心肌缺血再灌注损伤模型的方法主要是心肌细胞缺氧与缺糖的联合应用；建立体内动物心肌缺血再灌注损伤模型的方法包括在大鼠、小鼠、兔、猪等实验动物上通过心脏原位结扎法、提线法（推管法和压管法）和腔内堵塞法等建立心肌缺血再灌注损伤模型。
结论：选择适宜的建模方法并对其进行正确的评价，可为药物干预心肌缺血再灌注损伤疾病的基础研究提供科学的依据。
%Objective:To summarize an effective method on establishing the model of myocardial ischemia reperfu-sion injury. Methods:The Methods of establishing the model of myocardial ischemia reperfusion in vitro and in vivo were reviewed by literature retrieval. We used“myocardial ischemia reperfusion”as keywords and chose related lit-erature from January 1979 to February 2014 in CNKI and PubMed. Results:The reperfusion injury model for myo-cardial ischemia in vitro is mainly combined application of myocardial cells with hypoxia and glucose deprivation;an in vivo animal model of myocardial ischemia reperfusion injury in rats, mice, rabbits, pigs and other experimental an-imal was established by heart in situ ligation method, mention line method(push tube method and pressure tube method) and luminal occlusion method. Conclusion: Selecting appropriate modelingmethod and making correct evaluation can provide scientific basis on research of myocardial ischemia reperfusion injury.【期刊名称】《内蒙古民族大学学报（自然科学版）》【年(卷),期】2015(000)003【总页数】6页(P251-256)【关键词】心肌缺血再灌注;模型;建立方法;研究进展【作者】白玉花;辛颖【作者单位】内蒙古民族大学蒙医药学院，内蒙古通辽 028000;内蒙古民族大学蒙医药学院，内蒙古通辽 028000【正文语种】中文【中图分类】R542.2全世界对心肌梗死的临床研究到现在已有百余年的历程，在心肌梗死的预防与治疗方面已取得了迅猛的发展.但是对急性心肌梗死的临床治疗仍是心血管医生目前面临的最严峻的挑战，文献资料显示，2007年美国每天有2200人死于冠心病，平均25秒发生一次冠脉事件〔1〕.目前心肌梗死的三大临床热点集中在心肌再灌注损伤的预防、急性心梗后血栓抑制和细胞治疗.如何去减轻患者的缺血再灌注损伤，最大可能地挽救心肌、保护心肌细胞功能一直是广大医务科研工作者奋斗的目标.心肌缺血再灌注损伤是一种复杂的多因素病理生理过程,具体作用机制目前尚不完全明确,成功建立可靠的体内、外心肌缺血再灌注损伤的实验模型显得至关重要.心肌缺血再灌注损伤模型是模拟人心肌梗死及其再灌注治疗、评价抗心肌缺血药物疗效的常用模型.本文以“心肌缺血再灌注”等作为关键词，查阅1979年1月至2014年2月中国知网和PubMed数据库中关于心肌缺血再灌注损伤模型的相关文献，首次归纳总结了目前广泛采用的建立心肌缺血再灌注损伤模型的方法，通过不同动物种类、不同的手术操作方法去进行描述、总结.不仅为试验中适宜建模方法的选择和评价奠定了基础，还为药物干预心肌缺血再灌注损伤性疾病的基础研究提供科学的建模依据.1 建立体内心肌缺血再灌注损伤常见模型的方法1.1 大鼠心肌缺血再灌注损伤模型在动物体内阻断左冠状动脉前降支可以直接引起心脏急性的心肌缺血，随后在预定的时间内恢复冠状动脉的血液供应并给予再灌注，这是模拟人类恢复血液供应治疗缺血性心脏病的实验方法.和其他动物相比，大鼠在进化上与人类比较接近，因其冠状动脉的侧支循环较少，如心肌坏死的时间较早、心率也相对比较稳定，且制作大鼠模型的费用较低，所以大鼠就成为建立心肌缺血再灌注模型的首选动物.结扎大鼠的左冠状动脉前降支导致心肌缺血、坏死是目前国内外公认的模型制备方法〔2〕.1.1.1 经典的大鼠心肌缺血再灌注损伤模型：在使用大鼠建立心肌缺血再灌注损伤模型时,经常采用将其冠状动脉结扎一段时间后再松开实现再灌注的方法.将大鼠称重后麻醉，术前采用心电图检测，接呼吸机待平稳后，在大鼠的左胸从右下向左上做一斜行的切口，逐层去分离胸肌后，在第4肋间沿下位肋骨上缘切开肋间肌进入胸腔，用镊子将心包轻轻撕开，将心脏挤出后找到左心耳与肺动脉圆锥之间的冠状动脉前降支，在距主动脉根部3mm处用7-0无创缝合线结扎冠脉前降支，结扎30分钟后将线取出，立即关胸.抽出胸腔内的气体恢复胸腔内负压状态，将肌肉层和皮肤层分别缝合，拔除呼吸机后按压大鼠胸外数下帮助自主呼吸的恢复.术后连续3天肌肉注射青霉素用来预防感染〔3〕.1.1.2 改进的大鼠心肌缺血再灌注损伤模型：传统建立的动物心肌缺血再灌注损伤模型的方法是开胸后在直视下结扎冠状动脉，该方法手术及麻醉需要的时间较长、需要暴露胸腔、需要辅助呼吸的设备，这都会导致动物脏器、体表的降温及失水，因此该方法具有致死率高、成功率低的缺点.此外，传统方法建立的心肌缺血再灌注损伤动物模型与临床上患者的发病、患病过程并不完全相似，患者在发生心肌缺血再灌注时并不是处于麻醉的状态，也没有进行胸廓的切开术，以上这些条件都将成为建立模型的影响因素.所以目前有很多研究在采用改良的方法去建立心肌缺血再灌注损伤模型.有的研究在建立大鼠心肌缺血再灌注损伤模型时，采用面罩吸氧，用气体麻醉剂瞬时诱导麻醉的方法，并在开胸后用滑结结扎冠状动脉，最后迅速闭合胸腔，待动物苏醒后松开滑结引起再灌注〔4，5〕.有的研究采取的方法是在全麻下开胸暴露心脏，使用U形金属管对冠状动脉左前降支进行结扎，持续心电图监测后再灌注2h 和4h〔6〕.有的研究人员发明推管法对冠状动脉进行缺血再灌注，他将线穿过一根长1.5cm、直径1.5mm的硬塑管，将线穿出管后轻提两线头，向下去推动该硬塑管，用力压紧丝线去阻断冠状动脉的血流，一定时间后放松丝线引起再灌注〔7，8〕.在此基础上，有的科研人员自行改良推管法建立左冠状动脉的缺血再灌注，指向管里穿线前先将线的两端穿过一个厚1mm、直径约2mm的软垫（中央有圆孔），再将线和软垫穿过硬塑管，推动硬塑管时连同小软垫一块压向冠状动脉实现冠脉血流的阻断，放松丝线和软垫则造成再灌注〔9〕.这种将柔软的硅胶管和大鼠的左冠状动脉联系在一起结扎的方法代替了传统的缺血再灌注方法，不仅可以缩短手术时间，操作方法便利，还大大减少了手术对动物的损伤.硅胶管的存在可以在结扎冠状动脉时，保证用力时冠状动脉不被缝合线切断，并在再灌注时很容易将结扎的线剪断〔10〕.还有的研究使用的模型制作办法操作简单，不需要气管插管、给氧，结扎冠状动脉的操作在胸腔外进行，使动物的损伤小、失血少，使手术耗时短，模型制作成功率高.这不仅仅缩短了造模时间，还降低了实验成本〔11〕.此外，还有研究在大鼠开胸后左手轻轻提起心脏，右手拿动脉夹直接结扎主动脉的根部，造成完全性心肌缺血，当再灌注时只需松开动脉夹即可，这种方法更加简单且可操作性较强，整个实验过程一人即可完成，避免了以往的结扎冠状动脉的困难（在心脏跳动穿针）、心肌容易损伤、丝线有时会切断冠状动脉、再灌注时结扎的线不容易被剪断等情况的发生〔12〕.目前，还有的文献采用冠状动脉左前降支上垫充水球囊阻断血流的方法造成心肌缺血，通过塌陷气囊导致心肌再灌注去建立大鼠心肌缺血再灌注模型.该模型避免了再次开胸所致的损伤，操作也相对比较简单，球囊对心脏表面的机械损伤程度小，特别是在连接压力表后还可实现不同程度的缺血与再灌注处理〔13〕.有的作者还采用结扎时垫鱼线的方法去导致心肌缺血，30min后再拔出鱼线形成再灌注.这种方法也有其优点，比如可以保护动物的机能状态，减少胸腔的暴露时间，提高模型动物术后生存率，加快动物的苏醒以及动物身体状态的恢复等〔14〕.1.2 小鼠心肌缺血再灌注损伤模型目前建立小鼠模型最常用的方法是呼吸机辅助的改进心脏原位结扎法.小鼠在术前先给予阿托品、氯胺酮，同时合并使用肌松剂甲苯噻嗪等进行麻醉.连接呼吸机平稳后行开胸术，找到冠状动脉左前降支后，以7-0无损伤缝针距离左心耳下缘的2mm左右穿过心肌表层，并在肺动脉圆锥旁出针.待稳定15min后，在心脏表面结扎处放一长约2mm的聚乙烯管，作一活结进行结扎.30min后，将管移出，此时冠状动脉左前降支重新被开放，心肌组织恢复再灌注〔15,16〕.1.3 兔心肌缺血再灌注损伤模型钝性开胸，结扎冠状动脉，缺血45min后剪断手术线实现再灌注，在此期间观测并记录心电图改变〔17,18〕.结扎时线上放置一段硅胶管（长15mm，直径5mm），结扎硅胶管使心肌缺血40min，剪去结扎线恢复心肌灌注120min〔19〕.有的研究者采用二线二结法结扎心脏左前降支30min，然后恢复心肌灌注3h〔20〕.1.4 猪心肌缺血再灌注损伤模型选用中国小型猪，麻醉后给予气管插管，呼吸机辅助呼吸，备皮消毒，正中开胸，充分暴露心脏，结扎冠状动脉左前降支中远1/3处，90min后松开.在结扎前、后及松开时分别进行冠状动脉造影和描记心电图〔21〕.有的研究者在阻断位点处放置橡皮套管，收紧橡皮套管30min后，再开放30min〔22〕.有研究人员在X射线监控下将球囊导管送至冠状动脉左前降支第一对角支的远端，球囊充气堵闭冠状动脉左前降支60min后撤除球囊〔23,24〕.2 建立体外心肌缺血再灌注损伤模型的方法2.1 离体心脏的心肌缺血再灌注损伤模型在体模型存在很多不足：如神经-体液等因素的干扰，死亡率一般较高，不能精确的确定结扎部位，心率、应激程度与心脏的前后负荷等影响梗死面积的一些重要因素难以控制.而离体模型不受神经体液的调节，易操作和可重复性较好，故开展该类模型的研究非常必要.离体工作的心脏模式可以模拟正常的心脏泵血过程，其液体的循环路径与在体的生理状态是保持一致的.有的研究将乳胶水囊置于左心室内，采用朗道夫模式去进行缺血再灌注〔25,26〕.有的研究是将实验小鼠开胸后，取出离体心脏，接着迅速将主动脉弓连接到离体心脏灌注系统进行逆行灌流，稳定灌流10min，缺血30min，再灌注120 min，并同步记录全程心电图〔27〕.有的研究先对全心进行缺血30min，进而导致小鼠的离体心脏产生一定程度的心肌缺血性损伤，然后再借助于朗道夫模式对离体心脏进行灌注5min〔28〕.2.2 心肌细胞的心肌缺血再灌注损伤模型在细胞水平上进行心肌缺血、缺氧保护的研究是近年国内、外发展的新方向，其最大优点在于排除了在体心脏、离体心脏及离体心肌片段模型中全身神经-体液和局部不同类型细胞间的相互作用的影响.目前主要利用体外培养乳鼠心肌细胞，在心肌细胞上复制缺血再灌注损伤模型.有研究在弃掉培养液后换用混合氮气（CO2：N2=5:95体积比）饱和心肌细胞30min，再用无糖培养液2ml培养，充入混合氮气置换瓶中的空气，置于培养箱密闭培养3h，复制“缺血”模型；再灌注时换用混合空气（空气：CO2=95:5体积比）饱和的培养基2ml，向瓶中充入混合空气置换残余氮气，于二氧化碳孵育箱中继续培养lh〔29，30〕.有研究人员以盐缓冲液（无糖缺血）置换培养液，再给5%CO2和95%A r的混合气体以2L/min的流速通气置换空气.缺氧、缺血孵化后更换新鲜培养基，造成心肌细胞模拟缺血再灌注损伤模型〔31,32〕.3 影响模型建立的主要影响因素3.1 动物种类心肌缺血再灌注损伤模型建立的主要方法是通过结扎左冠状动脉而引起左心室缺血或者坏死（梗死）.冠状动脉血管结扎的主要对象是冠状动脉左前降支和左旋支，实验可根据实验用药物的作用特点和实验动物的种类去选择结扎冠状动脉血管的类型.一般来说，结扎冠状动脉的左前降支会引起左心室前壁、下侧壁、前间隔、心尖部和二尖瓣前乳头肌的缺血和坏死；结扎冠状动脉左回旋支会引起左心室高侧壁、左心房和膈面的缺血和坏死，有时还会累及到房室结〔33〕.由于大鼠、小鼠等动物的冠状动脉左前降支一直延伸到心尖部，而其左旋支不发达，所以选择结扎大鼠、小鼠等动物的冠状动脉左前降支建立的缺血再灌注模型成功率较高；家兔、猪等大中型动物的冠状动脉左前降支发育得比较短且小，甚至有些动物左前降支的血管长度不超过1cm，其左旋支覆盖心脏的面积大，使用家兔、猪等实验动物时结扎此血管较为理想.在评价不同实验药物的治疗效果时，一般要依据药物的作用机制去选择适宜的血管进行结扎.例如，在评价硝酸酯类药物时，由于该类药物的作用机制是通过减少冠状动脉左前降支闭塞而降低心肌前壁的坏死，因此造模方法应选择结扎冠状动脉的左前降支.3.2 冠状动脉的结扎部位决定模型制作是否成功的重要环节是选择所要结扎血管的合适结扎部位.结扎部位距离冠状动脉的根部越近，结扎的冠状动脉血管越粗，实验操作过程中实验人员容易用肉眼分辨、结扎时相对比较简单、容易，但是动物出现心律失常的发生率和死亡率偏高（有30%的实验动物会出现该种情况）〔34〕.相反，结扎部位离冠状动脉根部越远，结扎的冠状动脉血管越细，手术将不易操作，实验动物心脏的梗死范围也不一定能满足实验的要求，但可以降低动物心律失常的发生率和动物的死亡率. 在建立大鼠、小鼠等小动物实验模型时，一般会选择心脏的左冠状静脉主干为标志，找到心脏的左心耳，在其下缘2mm处进针，从动物肺动脉圆锥旁出针，完成结扎冠状动脉左前降支的操作.使用该种操作方法的优点在于：操作简便，成功率高，动物死亡率低（低于10%）〔35〕.建立猪、家兔等大中型动物模型时，则会选择在动物心脏的左心耳后下缘先找到冠状动脉的左旋支，然后在靠近左心耳5～10mm的左旋支处（约占整个心室的三分之一）进针为宜.3.3 进针的深浅程度在结扎过程中，进针穿线时的进针深度对实验动物模型的建立也有非常重要的影响，如果进针深则容易穿透心室壁，进而引发大量出血而使实验失败；进针太浅则会穿到血管内或者不能结扎血管，容易引起血管破裂.在建立大鼠缺血再灌注模型中采取的进针深度为1～1.5mm、宽度为2～3mm时，模型建立的成功率较高；而建立大中型动物缺血再灌注模型时采取的进针深度一般为2～3 mm、宽度为4～5mm〔36〕.3.4 结扎时的松紧度穿线结扎松紧度也决定着模型是否能建立成功，结扎得过松或者过紧都会直接影响建模的成功率.当结扎过紧时，血管容易断裂；当结扎过松时，心脏会出现不完全性缺血，进一步引发血管侧支循环的建立.现以冠状动脉的完全阻塞为最佳结扎方式.手术的操作人员在建模结扎的过程中也是非常重要的影响因素，最好由同一人完成整个手术的结扎过程.在结扎过程中结扎的松紧度一般需要注意观察心肌的颜色变化作为依据，当出现心肌发灰、发暗或者颜色变得较深时认为此结扎的松紧度合适〔37〕.3.5 结扎和再灌注的时间冠状动脉缺血与再灌注时间的长短也会对模型的建立产生影响.如果心脏缺血的时间小于5分钟时，心肌将会处于可逆性损伤状态，即恢复再灌注后缺血心肌的功能马上恢复正常；如果缺血时间延长（范围在5～20分钟），导致心脏心肌的功能与形态发生了改变，当再灌注后可能会出现一系列的心律失常、心肌功能迟缓等；如果更长时间的心肌缺血（时间大于或等于30分钟）则造成心肌细胞不可逆性损伤、坏死.所以在建立模型实验中，一般会选用缺血30～40分钟.再灌注时间一般多样化，选择灌注的时间包括1、2、3h到24 h不等，甚至有的实验采取的时间要更长，但在模型建立后动物心肌梗死面积均在20%～30%之间〔38〕.有时还需要依据治疗药物的种类、时效、机制等不同去选择缺血、再灌注的时间.对于治疗急性心肌缺血再灌注的药物，可以将时间确定为：缺血30 min，再灌注为2 h；在评价治疗慢性心肌缺血再灌注药物时，将再灌注的时间可以延长至24 h，或者更长.3.6 实验平衡时间为了提高缺血再灌注模型的成功率、减少死亡率，在动物开胸后与冠状动脉穿线前，最好要留下一段时间去平衡手术带来的一系列创伤，时间一般以5～15 min为宜；在冠状动脉穿线与结扎之间最好也保留5min左右的平衡时间〔39〕.3.7 其他方面的影响因素除了上述的常规影响因素外，实验动物的年龄、体重、健康状况以及实验环境等也对模型的稳定性有影响.由于成人发生心血管疾病的概率最大，所以一般会选择9-11周龄的实验动物，因为使用成年的动物造模比较接近人体的实际状况；避免因实验动物体重过重而会导致其身体机能下降，导致在造模过程中死亡率增加的现象；同时，要选择清洁级实验动物来造模，并保持实验环境的卫生和均一性，避免一系列实验误差影响模型的建立.4 结语根据目前国内、外的文献报道，笔者总结了建立心肌缺血再灌注损伤模型的方法，即体内动物的结扎冠状动脉血管导致的缺血再灌注；离体心脏实施缺血再灌流引起的缺血再灌注；心肌细胞的缺氧缺血导致的缺血再灌注等方法.上述建模方法都是国内、外研究者广泛认可的.研究表明，只有接近临床缺血再灌注损伤患者实际患病过程的模型，才具有更高的研究价值，在此基础上才能深入发现缺血再灌注的发生、发展机制，最终为减少和改善缺血再灌注及相关治疗药物的研发和应用奠定科学的理论基础.参考文献【相关文献】〔1〕Roger VL,GOAS,LIoyd-Jones DM,et al.Heart disease and stroke statistics-2011 update:a report from the American Heart Association〔J〕.Circulation，2011,123:18-209. 〔2〕张伟伟，郭永清.大鼠急性心肌缺血再灌注模型的改进〔J〕.山西医药杂志，2009,38（10）：902-903.〔3〕G rund F,Somm ersch ildH T,K irkeboenKA,et al.A new approach to norm alizemyocard ial tem peratu re in the open-chest pig model〔J〕.JApp lPhysiol,1998,84（6）:2190-2197.〔4〕刘海涛，李飞，王跃民，等.大鼠急性心肌缺血/再灌注模型改良方法与传统方法与比较〔J〕.心脏杂志，2010，22（4）：533-536.〔5〕Fu YH,Lin QX,Li XH,et al.A novel rat of chronic heart failure following myocardial 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大鼠心肌缺血再灌注早期心肌及血清中IL-6、TNF-α的表达
大鼠心肌缺血再灌注早期心肌及血清中IL-6、TNF-α的表达邹吉丽;尹照萍;张利群;王永权;齐国先【摘要】目的探讨大鼠心肌及血清中白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)在心肌缺血再灌注早期表达情况.方法将98只大鼠随机分为缺血再灌注组和对照组.缺血再灌注组:按照再灌注时间又分7个小组,每组8只大鼠,结扎冠状动脉左前降支(LAD)近端45 min,打开系袢,建立心肌缺血再灌注损伤模型,分别于再灌注15 min、30 min、1h、2h、4h、6h、24h各时间点采集右心房血及梗死心肌组织,检测该时间点心肌组织及血清中TNF-α、IL-6的表达；对照组:按照再灌注时间又分7个小组,每组6只大鼠.开胸在心脏同样部位(ALD近端)穿线但不结扎,分别在与实验组相同各时间点相同方法检测心肌组织及血清中TNF-α、IL-6的表达.结果缺血再灌注各组心肌、血清中TNF-α和IL-6均明显表达,与对照组比较具有统计学差异(P＜0.05).结论大鼠心肌缺血再灌注损伤早期心肌组织及血清中炎性细胞因子TNF-α、IL-6均明显表达,再灌注15 min至2h各指标逐渐升高,4h至6h逐渐下降,24 h又略有升高,峰值在再灌注2～4 h.【期刊名称】《中国医科大学学报》【年(卷),期】2013(042)009【总页数】4页(P830-833)【关键词】心肌缺血再灌注;肿瘤坏死因子α;白细胞介素6【作者】邹吉丽;尹照萍;张利群;王永权;齐国先【作者单位】中国医科大学附属第一医院心血管内科,沈阳110001;宽甸县中心医院心血管内科,辽宁宽甸118200;辽宁盘锦辽河油田妇婴医院心血管内科,辽宁盘锦124010;沈阳医学院人文教研室,沈阳110034;中国医科大学附属第一医院心血管内科,沈阳110001;中国医科大学附属第一医院心血管内科,沈阳110001【正文语种】中文【中图分类】R363近年来炎症学说备受重视，炎症在冠心病的发生、发展、治疗、预后中起重要的作用。
动物实验报告范文
实验名称：小鼠心肌缺血再灌注损伤模型的建立及干预研究实验目的：通过建立小鼠心肌缺血再灌注损伤模型，探讨心肌缺血再灌注损伤的机制，并研究干预措施对心肌保护作用的影响。
实验动物：SPF级雄性C57BL/6小鼠，体重18-22g，共30只。
实验分组：将30只小鼠随机分为三组，每组10只。
对照组、模型组和干预组。
实验材料：大鼠心肌缺血再灌注损伤试剂盒、乳酸脱氢酶（LDH）试剂盒、心肌酶谱试剂盒、苏木精-伊红（HE）染色试剂盒、Masson染色试剂盒、TUNEL试剂盒、流式细胞仪、显微镜等。
实验方法：1. 建立心肌缺血再灌注损伤模型（1）将小鼠置于恒温（37℃）环境中，采用左冠状动脉结扎法建立心肌缺血再灌注损伤模型。
具体操作如下：①小鼠麻醉后固定于手术台，剃除胸部毛发，消毒皮肤。
②在胸骨左侧找到左冠状动脉，用血管夹夹闭左冠状动脉，造成心肌缺血。
③保持冠状动脉夹闭5分钟，随后松开血管夹，恢复冠状动脉血流，造成再灌注。
（2）模型组：建立心肌缺血再灌注损伤模型后，继续观察2小时。
（3）干预组：在建立心肌缺血再灌注损伤模型的同时，给予干预药物（例如：硝酸甘油、腺苷等）进行干预。
2. 心肌酶谱检测采用心肌酶谱试剂盒检测小鼠心肌酶活性，包括LDH、肌酸激酶（CK）、天冬氨酸氨基转移酶（AST）等。
3. HE染色和Masson染色取心肌组织，进行HE染色和Masson染色，观察心肌组织形态学变化。
4. TUNEL检测采用TUNEL试剂盒检测心肌细胞凋亡情况。
5. 流式细胞仪检测采用流式细胞仪检测心肌细胞凋亡率。
实验结果：1. 心肌酶谱检测与对照组相比，模型组小鼠心肌酶活性明显升高，表明心肌细胞损伤严重；干预组小鼠心肌酶活性较模型组降低，说明干预药物对心肌细胞具有一定的保护作用。
2. HE染色和Masson染色HE染色结果显示，对照组心肌细胞结构完整，细胞核形态正常；模型组心肌细胞出现坏死、水肿、细胞核固缩等变化；干预组心肌细胞损伤程度较模型组减轻。
大鼠肝缺血再灌注损伤模型评价方法综述
大鼠肝缺血再灌注损伤模型评价方法综述摘要：基于肝缺血再灌注损伤相关研究，综述了成功制作大鼠肝缺血再灌注损伤模型后大鼠肝脏微循环、病理形态学等方面的变化。
探讨大鼠肝缺血再灌注损伤模型制作成功与否的评价方法，简要归纳分析了血清学评价、病理形态学观察等模型评价方法，提出了评价大鼠肝缺血再灌注损伤模型的适宜方法，为肝缺血再灌注损伤相关研究提供参考。
关键词：肝脏；缺血再灌注损伤；模型；评价肝脏缺血再灌注损伤（hepatic ischemia reperfusion injury,HIRI）是指肝脏缺血一段时间，重新灌注血液后，肝组织功能和结构损伤反而加重的一种临床综合征，是引起肝切除、肝移植、休克后相关并发症的主要原因之一。
由于肝缺血再灌注损伤发生机制复杂，至今尚未完全阐明[1]。
目前研究集中在大鼠实验，因此制作一种稳定可靠的HIRI动物模型以研究其发生发展、预防及治疗具有重要意义[2]。
实验模型的成功制作是实验研究的基础和关键，对动物模型制作的评价显得尤为重要。
本文就大鼠HIRI模型制作的评价方法做一综述。
1.血清学评价1.大鼠血清中丙氨酸转氨酶（ALT）、天冬氨酸转氨酶（AST）肝细胞中的酶在肝细胞损伤时可释放入血，测定其血清活性或含量可反映肝细胞损伤程度。
其中，ALT、AST为国外内学者采用最多的血清学指标[3-20]，分别存在于肝细胞质和线粒体中，肝细胞膜受损时ALT、AST释放入血，血清水平升高，以反映肝组织损伤。
班跃松等[5]在进行HIRI造模时于大鼠肝缺血30min再灌注6h后，右颈总动脉抽血测定ALT活性。
结果显示与假手术组相比，H/I组大鼠血清ALT活性显著升高，提示造模成功。
尚有学者[6]经腹主动脉取血，测定血清ALT、AST活性并评价模型制作成功。
同样以ALT、AST作为判断指标，也有学者经静脉取血[9、10]提示造模成功。
ALT、AST的活性间接反映肝脏病理状态，说明HIRI造模是否成功。
SDG膳食干预对去卵巢大鼠心肌缺血再灌注损伤的抑制作用及机制研究的开题报告
SDG膳食干预对去卵巢大鼠心肌缺血再灌注损伤的抑制作用及机制研究的开题报告题目：SDG膳食干预对去卵巢大鼠心肌缺血再灌注损伤的抑制作用及机制研究研究背景：心肌缺血再灌注损伤（I/R）是心血管疾病中常见的并发症，其发生机制复杂，包括氧化应激、炎症反应、细胞死亡等多个方面，其治疗难度较大。
从很多研究中发现，膳食中的饮食纤维和抗氧化物质能够对于心血管疾病产生协同作用，有望降低心肌损伤的发生率。
种子素葡聚糖(SDG)是亚麻籽中富含的天然组分，具有明显的抗氧化、抗炎症和免疫调节等功能，因此有望用于心血管疾病的预防和治疗。
本研究将探讨SDG膳食干预对去卵巢大鼠心肌缺血再灌注损伤的抑制作用及机制。
研究内容：1. 建立去卵巢大鼠模型，进行心肌缺血再灌注损伤模拟。
2. 将大鼠分为两组，其中一组为SDG膳食干预组，另一组为对照组。
3. 分别收集两组大鼠的心肌组织样本，进行光镜学分析和心肌细胞损伤指标的检测。
4. 进行心肌细胞凋亡、氧化应激和炎症反应等相关指标检测。
研究目的：1. 探讨SDG膳食对于心肌缺血再灌注损伤的抑制作用。
2. 确定SDG膳食对于心肌细胞凋亡、氧化应激和炎症反应的影响。
3. 探讨SDG膳食对于心血管疾病的预防和治疗的潜在机制。
预期结果：1. SDG膳食能够有效抑制心肌缺血再灌注损伤的发生和发展。
2. SDG膳食能够降低心肌细胞凋亡，减轻氧化应激和炎症反应。
3. 研究结果将为心血管疾病的预防和治疗提供新的理论和实践依据。
研究方法：1. 建立去卵巢大鼠模型，进行心肌缺血再灌注损伤模拟。
2. 将大鼠分为两组，其中一组为SDG膳食组，另一组为对照组。
根据饮食喂养10周。
3. 收集两组大鼠的心肌组织样本，进行光镜学分析。
4. 分离心肌细胞，对比两组细胞凋亡率、氧化应激和炎症反应等相关指标。
研究意义：1. 本研究探讨了一种全新的膳食干预方法，为心血管疾病的预防和治疗提供新的策略。
2. 研究将为SDG在心血管疾病的应用提供新的实验证据。
两种不同ttc染色方法对于大鼠心肌缺血再灌注损伤中国实验动物学报
(大鼠心肌缺血再灌注两种不同TTC染色方法的比较李粮辉1，陈文华1，郑宏2（1.福建医科大学附属协和医院麻醉科，福州，350001；2.南京军区福州总医院麻醉科，福州，350025）【摘要】目的：比较应用不同2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色方法对大鼠心肌缺血再灌注损伤后梗死面积的检测效果。
方法：将20只SD大鼠(雄性、8周龄，体重250～300g)按随机数字表法分为两组，每组10只，A组：传统TTC 染色法组，B组：改进后的TTC染色法组，分别进行大鼠心肌染色,随后计算心肌梗死面积及测定血清cTnI浓度水平。
结果：A组和B组均能较好地标记梗死心肌;A组和B组心肌梗死面积百分比无统计学差异（48.69±5.37 % VS 47.41±3.28%，P>0.05）；A组和B组血清cTnI浓度水平无统计学差异（4.51±0.88ng/ml VS 4.70±0.71ng/ml，P>0.05）；但B组心肌切片染色色泽对比度及心肌非梗死区与梗死区区分度均高于A组。
结论：改进后的心肌TTC 染色法采用在体染色，不仅操作简便，节省了实验时间和经费，而且提高了染色效果，能更准确地反映心肌缺血再灌注损伤的程度。
因此改进后的心肌TTC染色法是一种经济、简便、快捷、高效的染色方法。
【关键词】缺血再灌注;心肌梗死面积;2，3，5-氯化三苯基四氮唑;染色A Comparison of Two Different TTC Staining Methods for Ischemia- reperfusion Myocardium in RatsLI Liang-hui1，CHEN Wen-hua1， ZHENG Hong2(1. Department of Anesthesiology,Fujian medicine university affiliated xiehe hospital ,Fuzhou 350001, China;Department of Anesthesiology,Fuzhou general hospital of Nanjing military command,Fuzhou 350025,China)【Abstract】Objective To compare the different TTC staining methods of measuring myocardial infarct size after ischemia-reperfusion in rats. Methods 20 Rats were randomly divided into two groups including group A with traditional TTC dyeing method and group B with the modified TTC作者简介：李粮辉(1990-)，女，硕士，研究方向：心肌保护，E-mail:huixiaoyi68@163通讯陈文华，男，教授、研究生导师，E-mail:whc6202@163dyeing method for ischemia-reperfusion myocardium ,then infract size was caculated and the levels of their serum cTnI were determined. Results Both group A and group B detected the infarcted myocardium well;there were no significant difference in the myocardial infarct size between groupA and group B（48.69±5.37 % VS 47.41±3.28%，P>0.05）; there were no significant difference in the levels of serum cTnI between group A and group B（4.51±0.88ng/ml VS 4.70±0.71ng/ml，P>0.05）;but compare with A ,the colour contrast of dyed myocardial slice and the differentiation of infarction area and non-infarction area were much clearer in group B. Conclusions The modified TTC dyeing method using In vivo staining is a kind of economic, convenient, fast and efficient method with being easy to control ,saving experimental time and expense, improving the dyeing effects ,evaluating the size of myocardial ischemia/reperfusion injury more accurately.【Key words】 ischemia/reperfusion ； myocardial infarct size ；2,3,5 -triphenyltetrazolium chloride ；staining心肌缺血再灌注损伤是近十几年来医学界研究的热点之一,其重要的病理特征之一是出现心肌梗死区。
大鼠急性心肌缺血模型制备详细图解
模型的背景，心肌缺血模型分全心缺血和左心室缺血两种，全心缺血主要靠注射药物（如异丙肾上腺素等），左心室缺血主要靠手术对动物的冠状动脉左降支进行紧扎实现。
由于左心室缺血对临床的意义更大，所以研究心肌缺血药物时这个模型是必须的。
（1）术前12小时给动物禁食（2）将动物注射10%水合氯醛（0.4mL/100g）麻醉后固定在手术台上（3）用笔型静脉置留针进行气管插管，插好后可用手术刀柄靠近气管，如果见气雾，就证明成功，连接动物呼吸机，参数为：呼吸频率85；呼吸比1：1；潮气量为18ml（4）胸部被毛、酒精棉消毒，在胸部左侧3~4肋间剪开皮肤，如图1（5）分离肌肉露出肋骨，切口位置有两块肌肉，胸浅肌和胸深肌，注意按照肌肉的纹路分离可以避免将肌肉扯烂，如图2（6）在第三根肋骨下用止血钳将肌肉分离开，然后左手用止血钳挑住肋骨，右手持剪刀剪开第三根肋骨，如图3（7）用止血钳将剪断的肋骨夹住掰开，放入开睑器，用止血钳剥离心包膜，如图4（8）用止血钳将胸腺（心脏上面白的像脂肪一样的东西）夹住拉出，如图5（9）在左心耳与肺动脉圆锥间穿6~0号线，拉紧丝线，形成心肌缺血，观察线扎紧的部位上下大约2mm范围的心肌是发白色的，如图6（10）闭合胸腔，注意将胸腔内的空气挤出（这点非常关键，这个模型最容易失败导致大鼠死亡的就是这个地方），对肌肉和皮进行缝合，挤空气的手法如图7（11）结扎术后6小时可进行TTC染色：将大鼠脱颈处死，打开胸腔，将心脏剪下，用生理盐水将心脏清洗干净并排出心脏内的淤血，沿冠状沟将心房切除留下心室，用刀片将心脏切成1mm厚的切片，放入0.1%的TTC磷酸盐缓冲液（pH 7.4）37℃水浴7~10分钟，取出切片用生理盐水冲洗数次，观察结果。
非梗死区因脱氢酶还原TTC而呈红色，梗死区因脱氢酶流失而呈白色，将梗死区和非梗死区分离并分别称重，梗死范围以梗死心肌占缺血心肌重量的百分比表示。
下图是染色的结果，图8结扎位置，梗死的地方其实肉眼大致能看出，和其他地方相比发白，图9：下面再发正常大鼠和梗死大鼠的心电图区别，是用的PowerLab做的，正常的如下22小时后的心电。