浅谈病理制片中固定液的选择(一)
固定液总结
固定液总结什么是固定液？固定液是一种化学试剂，主要用于固定组织或细胞以保持其形态和结构。
固定液可以阻止生物材料的腐败和变性，防止其在处理和染色过程中失去结构和功能。
固定液在组织学、细胞学和病理学等领域中广泛应用，有助于观察和研究生物组织和细胞的形态、结构和功能。
常见的固定液福尔马林（Formalin）福尔马林是一种常见的固定液，广泛用于组织学研究和病理学诊断中。
它是一种含有37%甲醛的溶液，能够固定组织并保持其形态和结构。
福尔马林固定的组织可用于组织切片制备、免疫组化染色等进一步的实验。
福尔马林固定组织的优点是固定效果好、保存时间长，能够保存大部分的组织结构和抗原表达情况。
然而，福尔马林固定液会对细胞核和某些蛋白质产生交联作用，可能导致染色效果差，同时还有潜在的致癌风险，因此在使用福尔马林固定液时需要注意安全操作和废液处理。
乙醛（Glutaraldehyde）乙醛是一种常用的电子显微镜固定液，主要用于固定细胞和亚细胞结构以进行电子显微镜观察。
与福尔马林不同，乙醛固定液能够更好地保持细胞和细胞器的形态和结构，有利于观察细胞内部的细节。
乙醛固定液的使用需要注意浓度和固定时间的控制，过高的浓度和过长的固定时间可能会导致组织和细胞的变性和损伤。
此外，乙醛固定液对某些酶和蛋白质具有灭活作用，因此在使用乙醛固定液时需要根据实验需要选择合适的条件。
缓冲盐水（Buffered Saline）缓冲盐水是一种用于固定组织和细胞的温和固定液。
它通常由含有适当浓度的盐水和缓冲剂混合而成，能够保持组织和细胞的形态和结构，并且对某些抗原和酶具有较好的保存效果。
缓冲盐水固定液的优点是温和、安全、易于制备和使用，适用于一些对固定条件要求较宽松的实验。
然而，由于其固定效果不如福尔马林和乙醛固定液，保存时间较短，因此在实验设计时需要根据实验目的和需求来选择合适的固定液。
固定液的使用注意事项使用固定液需要注意以下几个方面：1.安全操作：固定液常常含有有害化学物质，使用时需要佩戴防护手套、口罩等个人防护装备，避免直接接触和吸入液体或气体，注意实验室通风。
常用固定液的性质、用途
常用固定液的性质、用途和配置1．单一固定液的性质和用途（1）乙醇（C2H5OH）（ethylalcohol）：又名酒精，可沉淀白蛋白、球蛋白、核蛋白，后者易溶于水，所以经酒精固定的标本对细胞核染色不良。
酒精可溶解脂肪、类脂体，所以不能用酒精固定脂肪。
酒精可沉淀肝糖，但仍可溶解于水，因此肝糖经酒精固定后不能在低于70％酒精中保存。
单独固定使用酒精的浓度应为95—100％。
无水酒精渗透力较差，并且能使组织收缩，在与醋酸、氯仿混合使用时，可增强它们的穿透力。
酒精除固定作用外，还具有硬化和脱水的作用，固定后的组织可保存于70％酒精中，所以酒精在制片过程中用途很大。
无水乙醇容易挥发，又容易吸收空气中的水分，所以瓶盖必须塞紧，为了吸去其中水分，最好在无水乙醇瓶内放入少量无水硫酸铜粉末。
酒精是一种还原剂，不能与重铬酸钾、锇酸等氧化剂混合使用。
（2）甲醛（HCHO）（formeldehyde）：是一种气体，溶于水成为甲醛水溶液或称福尔马林，一般使用浓度为10％福尔马林（formalin）液，其配法是取市售的甲醛液10ml 与90ml 蒸馏水混合即可，实际上其含量只有4％甲醛。
这样的配法已成为一般实验室常用的惯例。
甲醛不能沉淀白蛋白及核蛋白，但能与蛋白质化合。
它是一种应用广泛，使用简单的固定液，具有穿透力强、固定均匀、组织收缩小、硬度适当，适用于一般器官组织的固定及保存。
尤其对脂肪、神经组织固定效果较好。
更适于病理组织的制片及大体积标本的保存，一般组织需固定24 小时以上，固定后的组织可移入50％酒精中逐步脱水。
甲醛是一种强还原剂，不能与铬酸、重铬酸钾、锇酸等氧化剂混合，因极易被氧化为甲酸。
在配混合固定液时，如海利氏液等需临用前再加入，24 小时后失效。
甲醛由于长期贮存，特别是低温气候，容易产生多聚甲醛，即溶液中的白色沉淀，在高温下又成为甲醛。
不纯的甲醛易产生甲酸，使溶液变为酸性，影响核的染色。
所以在备用的福尔马林中加入小量的醋酸钙、碳酸镁或大理石作为中和剂。
固定液的选择原则
固定液的选择原则固定液的选择原则如下：1. 根据待分离组分的性质选择。
（1）分离非极性物质时，一般选用非极性固定液。
（2）分离极性物质时，一般选用极性固定液。
（3）分离极性和非极性物质时，一般选用极性或氢键型固定液。
（4）分离能形成氢键的物质时，一般选用氢键型固定液。
（5）分离具有不同程度极性或氢键的物质时，一般选用能形成氢键型的混合固定液。
2. 根据流动相的性质选择。
（1）当流动相极性小于固定相极性时，对非极性物质具有良好的分离效果。
（2）当流动相极性大于固定相极性时，对极性物质具有良好的分离效果。
（3）当流动相中含有亲水性的离子或粒子时，对极性物质具有良好的分离效果。
（4）当流动相中含有亲油性的分子或粒子时，对非极性物质具有良好的分离效果。
3. 根据分离模式选择。
（1）正相色谱：一般选用极性或氢键型固定液，对于极性较大的组分，可选用非极性固定液。
（2）反相色谱：一般选用非极性或中等极性的固定液，对于某些极性较大的组分，也可选用极性或氢键型固定液。
（3）离子色谱：一般选用离子交换型的固定液，根据所带电荷的性质选择合适的固定液。
（4）分子排阻色谱：一般选用凝胶型的固定液，根据分子尺寸的大小选择合适的固定液。
（5）疏水作用色谱：一般选用疏水型的固定液，根据疏水作用的强弱选择合适的固定液。
4. 根据实验条件和要求选择。
（1）对于需要高分辨率的分离，一般选用选择性较高的固定液。
（2）对于需要在较短时间内完成分离的，一般选用速度较快的固定液。
（3）对于需要在较高温度下进行分离的，一般选用高温稳定的固定液。
（4）对于需要痕量分析的分离，一般选用灵敏度较高的固定液。
5. 注意保护环境：选择环保型的固定液，避免使用对环境不友好的有机溶剂作为固定液。
总之，在选择固定液时，需要根据待分离组分的性质、流动相的性质、分离模式、实验条件和要求以及环保因素综合考虑，以得到最优的分离效果。
一些固定剂的配方及性能介绍
一些固定剂的配方及性能介绍固定，就是用某种方法以最快的速度将细胞杀死并保持组织及细胞原有的形态结构及其组成。
固定在组织制片中极为重要，因为机体死后血液循环停止，细胞逐渐死亡，如不立即处理，则细胞内的酶（水解酶）会使蛋白质分解为氨基酸渗出细胞，使细胞溶解破坏，组织变形，在无冰藏的条件下，更可因其病原微生物的迅速繁殖而腐败，组织结构破坏，不利于形态学的诊断。
组织固定的目的为1、迅速防止组织、细胞死后变化，防止自溶与腐败，以保持和细胞与正常生活时的形态相似；2、使细胞内的蛋白质、脂肪、糖、酶等各种成分转变成不溶解物质，以保持它原有的结构与生活时相仿；3、使组织中的各种物质沉淀和凝固起来而产生不同的折光率，造成光学上的差异，以便染色后易于鉴别和观察；4、固定剂兼有硬化作用，使组织硬化，增加组织硬度，便于制片；5、防止细胞过度收缩或膨胀而失去其原有的形态结构；经过固定的组织，能对染料产生不同的亲和力而着色清晰，便于辨认。
为了能够达到固定的目的，固定剂必须具备以下的性质和条件：1、迅速渗入组织而固定原生质，使短期解剖的组织细胞形态不至于有较大变化；2、固定液有相当的渗透力，对组织各部分的渗透力相等，可使组织内外完全固定；3、使组织细胞中不至于因固定引起人为的改变；4、在凝固原生质以后，增加细胞对于各种穿透的抵抗力，不至于因以后的处理，而使固定后的原生质变形；5、尽可能避免使组织膨胀或收缩（不致改变原生质原来的体积）；6、能使细胞内的成分（蛋白质）凝固或沉淀下来；7、增加细胞内含物的折光度，易于鉴别，增加媒染作用和染色作用；8、使细胞变硬，适于切片，但又不使材料太坚硬或松脆；9、使组织充分固定，便于保存。
[1][2]下面我们介绍中华医学会病理分会推荐的几种常用固定剂的性能[3]：1、4%中性甲醛（10%中性福尔马林）固定液配方：甲醛（40%）100ml，无水磷酸氢二钠6.5g，磷酸二氢钠4.0g，蒸馏水900ml。
固定液的要求
固定液在气相色谱、液相色谱以及组织学等领域中有着重要的作用，其主要要求如下：
1. 挥发性低：在操作温度下，固定液的蒸气压应尽可能低，以减少在分析过程中固定液的流失，确保色谱柱的稳定性和使用寿命。
2. 热稳定性好：在工作温度范围内，固定液必须具有良好的化学和热稳定性，避免因受热分解而影响分析结果或损坏色谱柱。
3. 适宜的粘度：固定液的粘度不宜过高，较低的粘度可以加快样品组分在两相之间的传质速度，提高色谱柱的分离效率。
高粘度会降低分子扩散速率，从而降低柱效。
4. 选择性匹配：对于不同的样品类型和分析目标，应选择具有合适选择性的固定液。
固定液的选择性决定了它对不同极性、沸点相近的物质的保留能力差异，以便有效分离复杂混合物中的各组分。
5. 溶解性能：固定液需要有足够的溶解能力来溶解待测样品的部分或全部组分，同时又不能与样品发生不可逆反应。
6. 无毒或低毒：尤其在生物样品分析时，所选用的固定液应尽量无毒或低毒，不会对人体健康和环境造成危害。
7. 兼容性：固定液需与色谱柱填料（载体）、载气及样品兼容，不产生不良反应。
总结来说，选择合适的固定液是保证色谱分析准确、高效的关键步骤之一，需要综合考虑多种因素，确保满足实验需求。
组织固定固定液的选择
组织固定固定液的选择影响标本固定的因素很多，如组织与固定液的比例、固定时间、固定温度等；除此之外，固定液本身也很重要，若所选固定液不当，细胞内蛋白质、脂类、核酸等成分将会有不同程度地损失。
固定剂最好随配随用，并注意其浓度和酸碱度。
因此根据实际工作的目的，选用合适的固定液非常重要。
下面是一些常用固定液的配制方法及适用范围。
1．单纯固定液(1)4％中性甲醛固定液：最常用的固定液，能满足常规HE及免疫组化、PCR等工作。
一般无特殊要求的病理标本均适用。
尤其值得注意的是，中性甲醛是以 pH7．2～7．4的磷酸缓冲液为溶剂配制的，其固定效果及对组织抗原性的保存均优于一般的4％甲醛固定液。
此固定液配制后应密封并保存在阴凉处，保存时间不超过一个月。
甲醛(40%) 100 ml无水磷酸氢二钠 6.5 g磷酸二氢钠 4.0g蒸馏水 900 ml(2)乙醇固定液：使用时以80％～95％的浓度为宜，具有硬化、固定、脱水等作用，对组织渗透力较弱，因此很少单独使用，但其保存组织中的核酸强于中性甲醛，故常用于有核酸操作的实验或检查，如果用于证明尿酸结晶和保存糖原，可用100%乙醇固定组织。
(3)4％的多聚甲醛：主要用于培养细胞的固定。
2．混合固定液(1)乙醇一甲醛(乙醇－福尔马林，AF)固定液：适用于皮下组织中肥大细胞的固定。
该固定液有固定兼脱水作用，固定后的标本可直接入95％乙醇脱水。
甲醛(40％) 100 ml95％乙醇 900 ml(2)B5(醋酸钠一升汞一甲醛)固定液：多用于固定淋巴组织。
染色前应进行脱汞沉淀处理。
无水醋酸钠 1.25 g升汞 6.0 g蒸馏水 90 ml使用前加入甲醛 10 ml(3)Bouin固定液：特别适用于睾丸活检组织的固定。
Bouin液对组织固定较均匀，收缩很少，不会使组织变硬变脆。
需现配现用。
饱和苦味酸水溶液(约1.22%) 75 ml甲醛 25 ml冰醋酸 5 ml(4)Carnoy固定液：穿透能力强，可很好的固定细胞质和细胞核，特别适合于固定外膜致密的组织，亦适用于糖原及尼氏小体的固定。
固定液的选择
之前交的作业固定液的选择总原则：“相似相溶”(1) 分离非极性组分时通常选用非极性固定相。
各组分按沸点顺序出峰,低沸点组分先出峰。
(2) 分离极性组分时一般选用极性固定液。
各组分按极性大小顺序流出色谱柱，极性小的先出峰。
(3) 分离非极性和极性的混合物一般选用极性固定液。
此时，非极性组分先出峰，极性的（或易被极化的）组分后出峰。
担体的作用气相色谱达到完全分离时的分离度，达到98%分离时的分离度影响高效液相色谱峰扩展的因素及可忽略因素气相色谱检测器根据响应原理的不同可分为浓度型检测器和质量型检测器两类。
浓度型检测器：如热导池检测器（TCD）质量型检测器，如氢火焰离子化检测器（FID）HPLC与GC差别：分析对象的区别；流动相的区别；操作条件差别提高柱效的途径：减小填料粒度以加快传质速率；提高柱内填料装填的均匀性。
液固吸附色谱法：影响k的因素：与固定相性质和流动相性质有关溶质分子极性↑，洗脱能力↓，k↑，t R↑溶剂分子极性↑，洗脱能力↑，k↓，t R↓出柱顺序：强极性组分后出柱，弱极性组分先出柱液液分配色谱法分离机制：利用组分在两相中溶解度的差异；正相色谱——固定液极性 >流动相极性（NLLC）极性小的组分先出柱，极性大的组分后出柱✓适于分离极性组分反相色谱——固定液极性<流动相极性（RLLC）极性大的组分先出柱，极性小的组分后出柱✓适于分离非极性组分化学键合相：利用化学反应将固定液的官能团键合在载体表面高效液相色谱仪由五大部分组成：高压输液系统、进样系统、分离系统、检侧系统、记录及数据处理系统影响原子吸收光谱谱线变宽的几个因素原子吸收光谱光源作用空心阴极灯优缺点原子化系统作用富燃火焰（燃助比大于计量比）还原性火焰；贫燃火焰（燃助比小于计量比）氧化性气氛原子化过程分为干燥、灰化（去除基体）、原子化、净化（去除残渣）四个阶段，待测元素在高温下生成基态原子。
原子吸收光谱法分析中的干扰主要包括物理干扰、化学干扰、电离干扰和光谱干扰（1）消电离剂—-为了克服电离干扰一方面可以控制火焰温度，另一方面可以加入大量的易电离元素以抑制待测元素的电离。
固定液的分类和选择原则
固定液的分类和选择原则以固定液的分类和选择原则为标题，我们来探讨一下固定液的相关知识。
一、固定液的分类固定液是一种用于固定生物组织或细胞的溶液，根据不同的固定目的和化学成分，可以将固定液分为以下几类：1. 醇类固定液：如乙醇、甲醇等。
这类固定液常用于快速固定和保存细胞和组织的形态结构，同时具有很好的保护作用，适用于常规组织学检查。
2. 酸类固定液：如酸性酒精、酸性硫酸铜等。
这类固定液主要用于固定某些特定的细胞或组织结构，例如染色体或胶原纤维等。
酸类固定液对脂质物质的固定效果较差，因此不适用于脂质含量较高的样本。
3. 中性缓冲液：如PBS（磷酸盐缓冲液）、Hank's液等。
这类固定液主要用于固定细胞和组织的生物学活性，能够较好地保持细胞和组织的形态和功能，适用于免疫组化和分子生物学实验。
4. 有机溶剂固定液：如乙酸、乙酸乙酯等。
这类固定液在固定过程中对细胞和组织的脂质物质和溶胀性物质具有较好的固定效果，适用于脂质或溶胀性物质含量较高的样本。
二、固定液的选择原则在选择固定液时，我们需要考虑以下几个原则：1. 根据固定目的选择：不同的实验目的需要选择不同的固定液。
例如，要观察细胞形态结构，可以选择醇类固定液；要进行免疫组化实验，可以选择中性缓冲液。
2. 根据样本性质选择：不同的样本性质对固定液的选择有所差异。
例如，脂质含量较高的样本适合选择有机溶剂固定液；而含有胶原纤维的样本可以选择酸类固定液。
3. 考虑固定液的渗透性：固定液的渗透性对于固定效果至关重要。
一般来说，较强的渗透性可以提高固定效果，但同时也可能对细胞或组织的形态和功能产生一定影响。
因此，需要根据具体实验要求选择合适的固定液。
4. 考虑固定液的毒性和安全性：固定液中可能含有一些有毒物质，因此在选择固定液时，需要考虑其对实验人员和环境的安全性。
同时，在实验过程中也要注意安全操作，避免接触到固定液。
总结：固定液的分类和选择原则是进行组织学和细胞学研究中非常重要的一环。
标本组织固定液的选择和方法
标本组织固定液的选择和方法病理组织学常用制备技术组织的固定（一）固定的概念应用各种方法使病理标本尽量保持其离体前状态的过程称为固定（fixation）。
病理标本（样本）离体后，由于微环境的变化将发生自溶和（或）***，使其结构破坏。
固定的目的和机制是：①使蛋白质凝固，终止或减少分解酶的作用，防止自溶，保存组织、细胞的离体前结构状态，包括保存组织或细胞的抗原性，使抗原不失活，不发生弥散。
②保存组织、细胞内的蛋白质、脂肪、糖原、某些维生素及病理性蓄积物，维持病变的特异性特征。
③使上述物质转为不溶解状态，防止和尽量减少制片过程中人为的溶解和丢失。
④起助染作用。
固定方法有：①物理学方法，如低温冷冻，干冰（dry ice，即固态无水碳酸）冰冻真空脱水，石蜡渗入法。
②化学方法，采用各种化学溶液作固定液，使组织细胞进入固定状态。
这是国内最常用的方法。
固定应在标本离体后尽快进行，小标本可在取材后直接放入固定液内，大标本应在手术结束前或结束后迅速放入固定液内。
固定液与标本的比例不得少于标本体积得5倍。
有特殊要求者应事先选定相应得固定液，如欲查糖原，应选择无水乙醇作固定液等。
固定得时间应适当，微小标本（如胃粘膜等）2～4h即可，大标本应置放12～24h，但亦不要过久，以免影响抗原性，造成免疫组化操作中得困难。
（二）常用固定液及其配制固定液分单纯固定液和混合固定液。
1甲醛（formaldehyde）是无色气体，易溶于水成为甲醛溶液。
易挥发，且有强烈刺激气味，常用得是37％～40％得甲醛溶液，商品名为福尔马林（formalin）。
用作固定的浓度习惯为10％福尔马林（即1份甲醛溶液加9份水配制而成），实际含甲醛4％。
10％福尔马林渗透力强，固定均匀，对组织收缩少。
对脂肪、神经及髓鞘、糖等固定效果好，是最常用的固定剂。
经福尔马林固定时间长的组织，易产生黑色的沉淀，称福尔马林色素。
2 乙醇无色液体，易溶于水，它除可作为固定剂外，还可作为脱水剂，对组织有硬化作用。
病理组织的固定
病理组织的固定㈠凡需要进行病理组织学检查的标本（器官或组织），于离体（活体或尸体）后，应尽快置放（浸泡）于装有足够量固定液的容器中固定。
固定液量应为被固定标本体积的5~10倍。
置放标本的容器大小视标本和固定液的体积而定，应适当大一些。
临床科室切取的标本置放于容器中固定后，应尽快送交病理科继续固定。
未能及时、充分固定的干涸或腐败标本不能再进行固定和用于制做切片。
㈡常规固定液为4%中性甲醛（10%中性福尔马林），应预先多量配制贮存，以备随时使用。
小标本的固定时间为4~6小时，大标本为18~24小时或更久。
㈢根据病理学特殊检查（特殊染色和组织化学染色、免疫组织化学染色和原位核酸分子杂交染色、电镜观察等）的需要，应选用其他适宜的固定液进行固定［参见后述的“㈦固定液的常用种类和制备”］。
㈣器官、组织固定的基本方法1．食管、胃、肠、胆囊、膀胱等空腔器官：依规范方法剪开后，按其自然状态平铺于硬纸板上（重点暴露黏膜面或内表面的病变处），并用大头针将标本边缘处固定于纸板上，然后放入4%中性甲醛中固定（黏膜面或内表面朝向容器的液面，并覆盖薄层脱脂棉）。
2．肝、脾：由器官背面，沿其长轴每间隔1.5~2.0cm纵向平行剖开，切成数片。
将每片肝或脾轻轻地平放于装有4%中性甲醛的容器中，容器底面衬以脱脂棉。
应避免标本弯曲和相互间的叠压。
3．肺叶：放入固定液中的肺叶漂浮于液面，需在肺表面覆盖薄层脱脂棉。
必要时从支气管注入适量4%中性甲醛。
4．肾：沿肾外缘中线朝肾门方向作一水平切面（深达于肾盏），再行固定。
5．淋巴结：先用4%中性甲醛固定1小时后，再沿其长轴切成数片（厚 2 ~3mm），继续固定。
6．骨组织：先锯成小片（若是长骨应作横向锯片），在4%中性甲醛中固定24小时后，再进行脱钙。
7．微小组织或液体沉淀物：先用拭纸或滤纸妥为包裹（需用大头针扎牢），然后放入专用小盒内进行中性4%甲醛固定，以防检材遗失。
8．凡进入固定程序的标本必须连带其正确无误的病理检验号（病理号）。
病理组织的固定
病理组织的固定㈠凡需要进行病理组织学检查的标本（器官或组织），于离体（活体或尸体）后，应尽快置放（浸泡）于装有足够量固定液的容器中固定。
固定液量应为被固定标本体积的5~10倍。
置放标本的容器大小视标本和固定液的体积而定，应适当大一些。
临床科室切取的标本置放于容器中固定后，应尽快送交病理科继续固定。
未能及时、充分固定的干涸或腐败标本不能再进行固定和用于制做切片。
㈡常规固定液为4%中性甲醛（10%中性福尔马林），应预先多量配制贮存，以备随时使用。
小标本的固定时间为4~6小时，大标本为18~24小时或更久。
㈢根据病理学特殊检查（特殊染色和组织化学染色、免疫组织化学染色和原位核酸分子杂交染色、电镜观察等）的需要，应选用其他适宜的固定液进行固定［参见后述的“㈦固定液的常用种类和制备”］。
㈣器官、组织固定的基本方法1．食管、胃、肠、胆囊、膀胱等空腔器官：依规范方法剪开后，按其自然状态平铺于硬纸板上（重点暴露黏膜面或内表面的病变处），并用大头针将标本边缘处固定于纸板上，然后放入4%中性甲醛中固定（黏膜面或内表面朝向容器的液面，并覆盖薄层脱脂棉）。
2．肝、脾：由器官背面，沿其长轴每间隔1.5~2.0cm纵向平行剖开，切成数片。
将每片肝或脾轻轻地平放于装有4%中性甲醛的容器中，容器底面衬以脱脂棉。
应避免标本弯曲和相互间的叠压。
3．肺叶：放入固定液中的肺叶漂浮于液面，需在肺表面覆盖薄层脱脂棉。
必要时从支气管注入适量4%中性甲醛。
4．肾：沿肾外缘中线朝肾门方向作一水平切面（深达于肾盏），再行固定。
5．淋巴结：先用4%中性甲醛固定1小时后，再沿其长轴切成数片（厚 2 ~3mm），继续固定。
6．骨组织：先锯成小片（若是长骨应作横向锯片），在4%中性甲醛中固定24小时后，再进行脱钙。
7．微小组织或液体沉淀物：先用拭纸或滤纸妥为包裹（需用大头针扎牢），然后放入专用小盒内进行中性4%甲醛固定，以防检材遗失。
8．凡进入固定程序的标本必须连带其正确无误的病理检验号（病理号）。
固定液主要成分
固定液主要成分
固定液的种类很多，根据配制成分可分为简单型与混合型。
1. 切片标本以一种化学药品配制的固定液叫做简单固定液。
常用的简单固定液有：酒精（乙醇）、福尔马林（甲醛）和醋酸。
其中，酒精穿透力强，固定时间常在1小时以内，高浓度酒精有使材料收缩的作用。
福尔马林固定液一般不单独作固定，而与其他液体混合使用。
醋酸以与水和酒精配成各种比例的溶液，所用浓度为0.2～5％，也常与其他固定剂配合使用。
醋酸穿透性很强，单独使用，有使原生质膨胀的作用，故常与酒精，甲醛等合用，醋酸为固定染色体的优良固定液，因此固定染色体的固定液中，几乎都含有醋酸。
2. 手术标本固定液成分包括：缓冲剂、醛固定剂。
此外，还有一种特殊类型的固定液叫做卡诺氏液，又名卡诺氏固定液，是1886年由比利时细胞学家让·巴蒂斯特·卡诺伊发明的一种固定液。
它是一种由乙醇和乙酸（也可以加入三氯甲烷，即氯仿）配制而成的非水相固定剂，需现配现用。
卡诺氏液主要适用于一般植物组织和细胞的固定，也可以用于手术切除角化囊肿后的局部治疗。
如需了解更多关于固定液的成分，建议咨询专业化学家或查阅化学书籍。
浅谈病理制片中固定液的选择(一)
浅谈病理制片中固定液的选择(一)论文关键词]病理；固定液；甲醛；乙醇论文摘要]在病理组织诊断中制片过程尤为重要，而在病理制片的过程中组织的固定更为关键，故而对于石蜡切片，组织的固定则是必不可少的重要步骤。
在多年的临床经验中，笔者对AF、AAF及甲醛一生理盐水三种混合固定液的优劣进行仔细分析、对比，从而认为混合固定液与其他固定剂固定效果相比之下较为优越。
由于病理学诊断是诊断的金标准，是辅助临床诊断的主要把关口，也是最后的宣判性诊断。
做好病理诊断，层层步骤就显得尤为重要，包括组织的取材，固定，脱水，浸蜡，包埋及染色。
组织的固定是一个关键的过程，因为没有好的固定就没有好的制片，没有好的制片就不会有好的成品，一张好的切片与固定有着密切的关系。
1固定的目的固定的概念是将采取的活体组织置于化学性溶媒(固定液)中，使其不发生自溶与腐败，保持被采取时的形态。
固定的目的是在于尽量使组织和细胞保持与生活时相仿的成分和形态，迅速防止组织、细胞的死后变化，防止自溶与腐败，使细胞内的蛋白质、脂肪、糖、酶等各种成分转变成不溶性物质，使组织中的各种物质沉淀和凝固起来，而产生不同的折射率，造成光学上的差异，以便染色后易于鉴别和观察。
因此，固定的组织愈新鲜愈好，固定组织时，应使用足量的固定液。
其固定液的量一般小于组织块总体积的4倍以上。
2固定液的选择固定液必需要有较强的渗透能力，能迅速地渗入组织内部，不会使组织过度收缩或膨胀，并且能使组织内易观察的成分可以凝固为不溶性物质，能使组织达到一定的硬度，获得较佳的折光率和对染料具有较强的亲和力。
组织细胞中不至于因固定引起人为的改变，因为在凝固原生质以后，增加了细胞对于各种穿透的抵抗力，不至于因以后的处理而使固定后的原生质变形，并尽可能地避免使组织膨胀或收缩，使细胞内的成分(蛋白质)凝固沉淀下来，由正常的半液体状(胶体)变为半固体状(凝胶)，增加媒染作用和染色能力，使组织能够得到充分的固定，便于以后的蜡块保存。
大体标本常用的固定液
大体标本常用的固定液
固定液是生物组织或细胞学研究中不可或缺的一部分，它可以帮助保存和稳定组织和细胞，使它们能够在后续的样品处理和分析中保持完整。
一般来说，固定液包括多种化学成分，不同的固定液适用于不同的组织和细胞类型。
以下是最常用的固定液：
1. 10% 福尔马林（Formaldehyde）
福尔马林是最常用的固定液之一，它可以作为一种信标分子，标记细胞蛋白。
福尔马林具有良好的渗透性，能够迅速渗透到组织中，提供良好的固定效果。
2. 十二烷基硫酸钠-10%EDTA浸液（SDS-EDTA Buffer）
SDS-EDTA浸液是常用的细胞质微管结构和线粒体固定液。
该固定液是一种离子池化学固定液，能够特异性地固定蛋白质，适用于研究细胞骨架和线粒体。
3. Bouin液
Bouin液是一种精细的组织学固定液，不过使用比较少。
该固定液包括福尔马林、酯化醛和乙酸，可以用于特异性地固定肝脏和其他含脂肪的组织。
4. Carnoy液
Carnoy液是一种比较强的组织学固定液，由95%的乙醇、氯仿和冰醋酸组成。
该固定液可以用于稳定核质和细胞膜，适用于肝脏和小肠等组织。
5. 4%多聚甲醛（Paraformaldehyde）
4%多聚甲醛是一种可以在室温下固定细胞和组织的固定液，可以优先固定蛋白质和核酸。
多聚甲醛很便宜，但其固定效果不及福尔马林。
需要注意的是，不同的固定液会对研究结果产生不同的影响。
因此，选择固定液前需考虑组织或细胞类型、后续的实验目的和预期结果等因素，才能选择最合适的固定液。
同时，固定液使用时需要注意安全，防止吸入和接触固定液。
病理组织常用固定液的配制
病理组织常用固定液的配制（免疫组化）一、常规固定液的配制（1）10%甲醛液浓甲醛 10ml蒸馏水 90ml(2 ) 缓冲中性甲醛液浓甲醛10mlPBS缓冲液（Ph7.2）90ml(3 ) 10%中性甲醛液浓甲醛10ml蒸馏水90ml碳酸钙加至饱和(4 ) Bouin氏固定液苦味酸饱和水溶液75 ml甲醛2 ml冰醋酸5 ml该固定液中的冰醋酸，对胶原纤维等组织有膨胀作用，而甲醛对组织有收缩作用，两种试剂的混合使用，用以抵消彼此间的副作用，使组织固定达到优良的固定水平。
（5）醛糖钙固定液甲醛100ml蔗糖300ml乙酸钙20g蒸镏水90ml先将蔗糖和乙酸钙溶于蒸镏水，后加入甲醛。
该固定液对于做酶的组织化学的研究效果较好，组织固定后，做冰冻切片，再给予显示。
当前国内外基本上都还是要用甲醛来固定组织。
从免疫组织化学的角度来说，甲醛固定的组织大部分都可以用免疫组化的手段来检测，据多人认为，它对lgA ，lgM，J链，K 链和λ链的标记效果较好，且背景清晰。
但美中不足的是：经它固定的组织，可与蛋白形成醛交联蛋白，这种醛键可封闭抗原。
固此，在免疫组化实际检测中，应根据不同的要求和需要，采用酶消化或者其它抗原修复如微波、高压等的方法，以便破坏醛键重新暴露抗原。
（6）Zenker氏固定液：重铬酸钾25g升汞50g蒸馏水1000ml冰醋酸50ml先将重铬酸钾和升汞溶于水中，尢其是重铬酸钾，应用热水或加温的方法将其溶解，然后过滤贮存于带盖的玻璃瓶中，如暴露于空气中，该溶液将会被慢慢氧化而便颜色加深，导致失效。
临用时，取贮存液950ml，加入50ml的冰醋酸，即可使用。
应用该固定液固定的组织，一般不要超过24h，取出组织，流水冲冼12小时以上，然后保存于75%-80%的酒精中，在切片染色前，必须用碘除去汞盐的沉着。
应用该固定液的组织，细胞核及细胞浆染色十分清晰，特别是要显示骨骼肌的横纹时，应用本液可获得满意的结果，但由于其含有醋酸，故不能用于保存细胞颗粒，红细胞及含铁血黄素。
如何选择合适的病理标本固定液容器
如何选择合适的病理标本固定液容器
杨毅斌;何泽生;黄宗涌
【期刊名称】《实用医技杂志》
【年(卷),期】2016(023)010
【摘要】活体组织病理诊断是外科疾病诊断的金标准-（[1]）,如果组织自溶、结构破坏、细胞变形就可能导致无法诊断-（[2]）。
病理标本固定液一般为甲醛溶液,市售的甲醛溶液为含40%甲醛的溶液,其最佳固定效果为含4%甲醛的溶液,又叫做福尔马林溶液,因此在固定病理标本前应将其稀释10倍,即1份的市售甲醛溶液加9份的水。
如果是一些怀疑恶性肿瘤或者恶性肿瘤需做免疫组织化学的,则应选择中性甲醛溶液固定,
【总页数】2页(P1134-1135)
【作者】杨毅斌;何泽生;黄宗涌
【作者单位】福建省厦门市妇幼保健院 361000;福建省厦门市妇幼保健院 361000;福建省厦门市妇幼保健院 361000
【正文语种】中文
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几种固定液在冰冻切片中的染色效果分析
几种固定液在冰冻切片中的染色效果分析【摘要】目的冰冻切片是一种在低温下使组织快速冷却，进行切片的一种方法，现在多应用于外科手术中快速病理诊断。
影响制片质量的因素诸多，固定就是其中之一，为了在短时间内制作出一张高质量的冰冻切片，固定液的选择显得尤为重要。
通过对4种固定液在冰冻切片中的染色效果进行对比分析，以筛选出对冰冻切片最适合的固定液，提高组织切片的染色效果。
方法选取四种使用频率较高的固定液，对63例乳腺组织标本冰冻切片组织进行固定，将固定后的冰冻切片进行HE染色，对染色结果进行对比分析。
结果使用甲醇固定液固定后，细胞形态显示一级、二级和三级的比例分别为92.1%、7.9%和0.0%，和其他三组两两比较，优势明显，差异有统计学意义（P＜0.05）；甲醇固定液固定后组织的染色效果优于其他三组，差异有统计学意义（P＜0.05）。
结论甲醇固定液对冰冻组织切片固定后，对细胞形态的影响小，且染色后细胞形态基本正常无明显收缩，胞浆胞核对比显著，染色效果理想。
【关键词】固定液；冰冻切片；HE染色冰冻组织切片染色对于临床病理学诊断有重要辅助价值[1]，选择不同的固定液对组织进行固定后，组织染色效果也不同程度的受到影响[2]。
为了将不同固定液在冰冻组织切片中的染色效果进行对比分析，筛选理想的固定液，提高HE染色的效果，笔者选取了常用的四种固定液对63例乳腺组织标本的冰冻切片进行固定处理，固定后进行HE染色，具体报告如下：1 资料和方法1.1临床资料收取63例乳腺组织标本，包括正常乳腺组织8例、导管原位癌11例、浸润性乳腺癌组织标本23例和乳腺肌瘤标本21例。
1.2固定液：AFA液（95%乙醇85ml、浓甲醛10ml、冰醋酸5ml）、95%乙醇、丙酮、甲醇（95%乙醇45ml、甲醇45ml、冰醋酸10ml）1.3方法1.3.1取材及切片大小为1.5m*1.5cm，厚2-3cm的新鲜乳腺组织，挤少许普通胶水放入冷冻组织托盘上，将胶水底层冷却变硬后，将组织块放在变硬的胶水上，再涂适量胶水覆盖在组织上30s，用冰冻锤使其快速冷却。
组织固定液与固定方法选择的探讨
“固定”是指将组织浸入适当的化学试剂中，使组织细胞内的物质尽量接近其取材时的形态结构和位置的过程［1］。
固定能使组织中的各种物质沉淀和凝固起来，终止或抑制外源性和内源性酶的活性，防止细胞自溶，保持细胞形态［2］。
固定是制作大体标本和显微镜切片标本的关键，良好的固定有利于切片标本的制作和染色，使组织产生不同的折射率，造成光学上的差异，以便观察、鉴别和硬化组织［3-4］。
固定液可以抑制组织自溶，保持离体组织细胞与生活时的形态相似，使细胞内一些蛋白质等沉淀或凝固，有利于固定后物质的确切定位，是保存组织器官用于病理诊断的必需过程［5-6］。
不同固定液对组织细胞的穿透力不同，可导致细胞内黏多糖、蛋白质、核酸、脂类和低分子质量物质等不同程度的丢失，由固定液因素导致组织细胞形态的改变，对病理诊断产生很大影响，比其他技术操作因素引起的组织细胞形态改变更难把握。
而选取良好的固定液可使组织固定均匀、收缩小、结构清晰，利于保存组织细胞的抗原性，为免疫组化、电镜观察等奠定坚实的基础［7-8］。
本研究就组织固定液和固定方法的选择作如下探讨。
1固定液1.1固定液成分甲醇：为沉淀类固定剂，对组织渗透性强，能迅速沉淀清蛋白、球蛋白和核蛋白［9］。
可以固定核染色质及其部分内容物、核膜、细胞质及胶质等［10］，且固定后核浆对比鲜明，组织结构清晰，能基本保持细胞的正常形态［11］。
乙醇：是一种可溶解脂肪和类脂的脂溶剂，穿透力缓慢，长时间浸泡可使组织硬化，细胞核变形，细胞质收缩，蛋白质变性，糖原沉淀［12］。
乙醇对组织细胞既有固定作用又有脱水作用，一般固定组织以80%～95%浓度为好［13］。
丙酮：是一种易燃易挥发的无色液体，对组织渗透力强，能使蛋白质沉淀，但不能很好地保存糖原，且在部分组织中对核的固定效果欠佳［14-16］。
戊二醛：是一种具有双重作用的醛类。
对糖原、糖蛋白、微管内质网和细胞基质等有较好的固定作用可使组织保存良好，适合电镜和酶组织标本的固定，但其穿透力较弱［12，17］。
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浅谈病理制片中固定液的选择(一)
论文关键词]病理；固定液；甲醛；乙醇论文摘要]在病理组织诊断中制片过程尤为重要，而在病理制片的过程中组织的固定更为关键，故而对于石蜡切片，组织的固定则是必不可少的重要步骤。
在多年的临床经验中，笔者对AF、AAF及甲醛一生理盐水三种混合固定液的优劣进行仔细分析、对比，从而认为混合固定液与其他固定剂固定效果相比之下较为优越。
由于病理学诊断是诊断的金标准，是辅助临床诊断的主要把关口，也是最后的宣判性诊断。
做好病理诊断，层层步骤就显得尤为重要，包括组织的取材，固定，脱水，浸蜡，包埋及染色。
组织的固定是一个关键的过程，因为没有好的固定就没有好的制片，没有好的制片就不会有好的成品，一张好的切片与固定有着密切的关系。
1固定的目的
固定的概念是将采取的活体组织置于化学性溶媒(固定液)中，使其不发生自溶与腐败，保持被采取时的形态。
固定的目的是在于尽量使组织和细胞保持与生活时相仿的成分和形态，迅速防止组织、细胞的死后变化，防止自溶与腐败，使细胞内的蛋白质、脂肪、糖、酶等各种成分转变成不溶性物质，使组织中的各种物质沉淀和凝固起来，而产生不同的折射率，造成光学上的差异，以便染色后易于鉴别和观察。
因此，固定的组织愈新鲜愈好，固定组织时，应使用足量的固定液。
其固定液的量一般小于组织块总体积的4倍以上。
2固定液的选择
固定液必需要有较强的渗透能力，能迅速地渗入组织内部，不会使组织过度收缩或膨胀，并且能使组织内易观察的成分可以凝固为不溶性物质，能使组织达到一定的硬度，获得较佳的折光率和对染料具有较强的亲和力。
组织细胞中不至于因固定引起人为的改变，因为在凝固原生质以后，增加了细胞对于各种穿透的抵抗力，不至于因以后的处理而使固定后的原生质变形，并尽可能地避免使组织膨胀或收缩，使细胞内的成分(蛋白质)凝固沉淀下来，由正常的半液体状(胶体)变为半固体状(凝胶)，增加媒染作用和染色能力，使组织能够得到充分的固定，便于以后的蜡块保存。
固定液的种类很多，分为单纯固定液和混合固定液，其中混合固定液比较常用。
2.1常用单纯固定液
2.1.1甲醛(formaldehyde)为非沉淀性固定剂，是一种约有40％重量溶于水的气体，易挥发，市售的为40％的甲醛水溶液，也称为福尔马林液(formalin)。
此液久存自行分解，形成白色沉淀为副醛(三聚甲醛或多聚甲醛)。
用于组织固定的浓度为10％，实际浓度含甲醛为4％。
其固定液渗透能力很强，固定均匀，对组织收缩小，故而对于免疫组织化学标本的制作常用此液。
2.1.2乙醇(alcoh01)即乙醇，为还原剂，无色液体，可与水无限相溶，固定兼脱水，用于固定的浓度为80％－95％。
用于糖原、纤维蛋白及弹性纤维的固定，乙醇的渗透力较甲醛弱，能沉淀白蛋白、球蛋白和核蛋白。
缺点为渗透能力相对较弱，且易挥发和吸收空气中的水分，故而使用时应盖好容器；并对色素有破坏。
2.1.3醋酸(aceticacid)又名乙酸，为带有刺激气味的无色液体，低于15℃为冰醋酸，可溶于水，能沉淀核蛋白，可较好地保持染色体结构，把未分裂细胞核的染色质沉淀为块状体，从而更清楚地显示细胞核结构。
5％的醋酸pH2－8，可抑制细菌和酶的活性，可防止自溶，缺点为组织膨胀较明显，对于胶原纤维与纤维蛋白尤其明显。
一般很少单独使用。
2.2常用混合固定液
2.2.1AF液(乙醇+甲醛液)配方：95％乙醇或无水乙醇90ml+40％甲醛10ml。
此液不但有甲醛的固定作用，并兼有脱水作用，用于固定肥大细胞和糖原，效果较好，米粒大小的胃镜等标本需要4－6h，其余外检的大块组织需用12－24h，其优点是固定后可不经水洗，直接放人
95％E,醇继续脱水，大大减少了脱水的过程和缩短了脱水时间，增加了工作效率。