细胞项目工程实验报告
细胞生物学小鼠细胞培养实验报告
广州大学综合设计性实验报告学院生命科学学院课程细胞生物学实验实验项目细胞培养实验题目小鼠肝细胞的原代培养专业生物技术年级、班别生技142 姓名徐嘉宽学号 1414300030 任课教师陈鲲细胞培养——小鼠细胞的原代培养摘要目的探讨体外分离和培养小鼠肾、脑、心肌细胞的方法。
方法采用脱臼法处死新生小鼠，结合酶消化法和组织块法对新生小鼠肾、脑、心肌细胞进行了体外分离、培养。
（用眼科剪把新生小鼠心肌细胞组织剪成小于1mm³大小的植块，然后用胰蛋白酶消化5~10min，最后将心肌组织块接种于培养瓶中进行体外培养。
脑和肾直接进行组织块培养。
）结果比较成功地进行了原代肾、脑、心肌细胞培养，并进行了形态学观察。
结论采用该方法能够实现对小鼠心肌、肾、脑细胞的体外原代培养，较好观察到心肌、脑、肾细胞的形态。
关键词原代培养小鼠细胞组织块法酶消化法1前言初步了解动物细胞原代培养的基本方法、原理和基本操作过程，初步掌握无菌操作方法。
学习植块培养法、营养液的配置及酸碱度的调节。
细胞培养是当前细胞生物学乃至整个生命科学研究与生物工程中最基本的实验技术。
当前，细胞培养技术广泛应用于分子生物学、遗传学、免疫学、肿瘤学、细胞工程等领域，已发展成为一种重要的生物技术。
了解动物细胞培养的技术的基本操作过程，观察体外培养细胞的生长特征，并对原代培养有一个基本概念。
结合酶消化法和组织块法通过无菌操作培养新生小鼠细胞。
2实验原理原代细胞培养是指直接从动物体内获取的细胞、组织或器官，经体外培养后，直到第一次传代为止。
这种培养，首先用无菌操作的方法，从动物体内取出所需的组织（或器官），用植块培养法或酶解法，在人工培养下，使其不断地生长及繁殖。
细胞培养是一种操作繁琐而又要求十分严谨的实验技术。
要是细胞能在体外长期生长，必须满足两个基本要求：一是供给细胞存活所必须的条件，如适量的水、无机盐、氨基酸、维生素、葡萄糖及其有关的生长因子、氧气、适宜的温度，注意外环境酸碱度与渗透压的调节。
2021 细胞工程实验报告
2021 细胞工程实验报告细胞工程试验报告要求：1、因需上报细胞工程实验成绩，实验报告要求每人一份。
2、请使用实验报告纸、手写（不能打印）。
实验1 细胞培养室的设置和无菌操作一、【实验原理】细胞培养技术与其他一般实验室工作的主要区别在于要求保持无菌操作，避免微生物及其他有害因素的影响。
一般标准的细胞培养室应包括配液室、准备室和培养室。
三室既相互连接又相对独立，各自完成培养过程中的不同操作。
二、【实验目的】①了解培养室的设置和设备。
②学习无菌概念和无菌操作要领。
三、【操作步骤】1．实验室设置（1）配液室（2）准备室（3）培养观察室（4）储藏室（5）清洗灭菌室 2．实验室常用设备（1）准备室的设备（2）配液室的设备（3）细胞培养室的设备 3．无菌操作（1）无菌室的灭菌：①紫外灯无人时就要打开；②进无菌室要穿无菌服、戴帽子和口罩；③每周清洗消毒一次；④所用物品要以外科手术方式严格消毒；—1—⑤室内台面要要保持洁净，做完实验后，用75％酒精或千分之三新洁尔灭棉球擦拭超净工作台的台内、边台的台面、倒置显微镜的载物台等；⑥所用物品要一次性准备好；⑦瓶口要用酒精火焰消毒；⑧尽量减少出入。
（2）实验人员的无菌准备：①肥皂洗手②穿好隔离衣③酒精棉球擦手四、【实验报告】画出本细胞培养室的草图，标明各室的必需设备。
（1）准备室的设备①双蒸馏水蒸馏器②酸缸③烤箱④高压锅：玻璃器皿、解剖用具、部分液体、塑料器具等灭菌。
不同物品其有效灭菌压力和时间不同。
⑤储品柜1：放置未消毒物品。
⑥储品柜2：放置已消毒物品。
⑦包装台：灭菌前的包装用。
准备室注意事项：①预防蒸馏器被烤干。
②放置水池中的水渗出。
③勿将酸液溅到衣物或地面。
④勿将高压锅排气阀和安全阀堵塞。
⑤已消毒物品应与未消毒物品分柜存放。
（2）配液室的设备①天平（扭力天平和电子天平）：称量用②pH计：③磁力搅拌器：①超净工作台：超净工作台的种类很多，有单面单人、单面双人、双面双人或双面四人等，其工作原理是利用鼓风机，使通过高效滤气的空气，徐徐通过台面，这样使工作环境中具无菌而均匀的空气。
细胞合成工程实验报告
实验日期： 2023年11月15日实验地点：生物技术实验室实验目的：1. 掌握细胞合成工程的基本原理和操作技术。
2. 学习如何利用基因工程技术改造细胞，使其能够合成特定的化合物。
3. 通过实验验证改造细胞的合成能力。
实验原理：细胞合成工程是利用基因工程技术，将具有特定功能的基因导入细胞中，使细胞能够合成特定的化合物。
通过调节基因表达，可以控制细胞合成产物的产量和质量。
实验材料：1. 实验细胞：大肠杆菌（E. coli）2. 基因构建工具：DNA连接酶、限制性内切酶、质粒载体等3. 实验试剂：DNA模板、引物、PCR试剂、抗生素等4. 实验仪器：PCR仪、电泳仪、离心机、培养箱等实验步骤：一、基因克隆与构建1. 设计并合成引物，用于扩增目的基因。
2. 使用PCR技术扩增目的基因。
3. 使用限制性内切酶切割目的基因和质粒载体。
4. 将目的基因与质粒载体连接，形成重组质粒。
5. 将重组质粒转化大肠杆菌，筛选阳性克隆。
二、细胞培养与转化1. 将阳性克隆接种于含有抗生素的培养基中，培养过夜。
2. 收集菌液，制备感受态细胞。
3. 将重组质粒与感受态细胞混合，进行电转化或化学转化。
4. 在含有抗生素的培养基中培养转化细胞，筛选阳性克隆。
三、基因表达与产物检测1. 将阳性克隆接种于含有诱导剂的培养基中，诱导基因表达。
2. 收集培养液，进行蛋白质检测。
3. 使用SDS-PAGE电泳分析蛋白质条带，确定目标蛋白的表达。
四、产物纯化与鉴定1. 对目标蛋白进行纯化，去除杂质。
2. 使用Western blot等方法鉴定纯化蛋白。
实验结果：1. 成功构建了重组质粒，并转化大肠杆菌。
2. 通过PCR和测序验证了重组质粒的正确性。
3. 通过SDS-PAGE电泳和Western blot检测，成功表达了目标蛋白。
4. 对目标蛋白进行纯化，并鉴定了其特性。
实验讨论：本次实验成功实现了细胞合成工程的基本操作，从基因克隆、细胞转化到基因表达和产物检测，均取得了预期的结果。
陕师大细胞工程实验报告
一、实验目的1. 掌握细胞工程的基本原理和实验技术。
2. 学习细胞培养、细胞融合、基因工程等细胞工程技术的操作方法。
3. 培养学生的实验操作能力和科学思维。
二、实验原理细胞工程是利用现代生物技术手段，对细胞进行改造、培养和应用的一门新兴学科。
本实验主要涉及以下原理：1. 细胞培养：在适宜的培养条件下，使细胞在体外生长、繁殖，为后续实验提供细胞材料。
2. 细胞融合：将两个或多个细胞合并成一个细胞的过程，可用于基因转移、细胞治疗等。
3. 基因工程：通过分子生物学技术对基因进行改造，实现特定性状的表达。
三、实验材料、试剂和仪器设备1. 实验材料：人胚胎肾细胞（HEK293）、小鼠成纤维细胞（NIH3T3）、小鼠血清、胰蛋白酶、DMSO等。
2. 试剂：DMEM培养基、胎牛血清、青霉素、链霉素、Hoechst 33342染料等。
3. 仪器设备：细胞培养箱、倒置显微镜、离心机、PCR仪、凝胶成像系统等。
四、实验步骤1. 细胞培养（1）将HEK293和NIH3T3细胞分别接种于培养瓶中，置于细胞培养箱中培养。
（2）待细胞长满瓶底后，用胰蛋白酶消化细胞，按1:1的比例将两种细胞混合。
（3）将混合细胞接种于新的培养瓶中，继续培养。
2. 细胞融合（1）将混合细胞培养至对数生长期，加入适量的聚乙二醇（PEG）诱导细胞融合。
（2）将融合细胞接种于新的培养瓶中，继续培养。
（3）用Hoechst 33342染料检测融合细胞。
3. 基因工程（1）设计并合成目的基因的引物，进行PCR扩增。
（2）将扩增的目的基因克隆到载体上。
（3）将重组质粒转化到HEK293细胞中。
（4）用荧光素酶报告基因检测目的基因的表达。
五、实验结果与分析1. 细胞培养HEK293和NIH3T3细胞在培养过程中生长良好，细胞形态规则，细胞活力较高。
2. 细胞融合Hoechst 33342染料检测结果显示，部分细胞核融合，表明细胞融合实验成功。
3. 基因工程荧光素酶报告基因检测结果显示，目的基因在HEK293细胞中成功表达。
细胞工程实验
实验一细胞工程实验室、器皿的洗涤与灭菌一、目的要求通过实验，培养学生良好的卫生习惯、树立组织培养的无菌意识；掌握组织培养实验室器皿的洗涤与灭菌方法。
二、材料与用具2%新洁尔灭、高锰酸钾、甲醛、70%酒精、洗涤剂、喷雾器、各种培养器皿、工作服、口罩和手套等。
三、方法步骤1、地面、墙壁和工作台的灭菌将配好的2%新洁尔灭溶液倒人喷雾器中，对地面、墙壁、角落均匀地喷务。
在喷房顶时间，注意不要让药液滴入眼睛。
2、无菌室和培养室的灭菌首先将房子关闭，然后用10ml甲醛和5g高锰酸钾的配比液进行熏蒸。
操作时要戴好口罩和手套，用甲醛与高锰酸钾配比时要注意避开烟雾。
3、培养器皿的洗涤与灭菌将培养器皿先用肥皂水或洗衣粉浸泡几小时，然后用清水冲洗，最后用三级水和一级水各冲3遍，烘干后备用。
四、实验报告1、将本次实验内容整理成实验报告2、简述组织培养实验室的灭菌过程与注意事项。
实验二:细胞培养基的配制及灭菌一、目的要求：1．了解基本设备以及有关仪器的用途与功能。
2．通过实际操作，学会洗涤剂的配制和各种器皿的清洗和灭菌方法。
3．通过掌握培养基对母液制备及常用培养基的配制和灭菌方法，为植物组织培养准备合适的营养条件。
4．每四人一组，每人接种一个三角瓶，2支试管；每两组制备一套培养基母液。
二、材料用具：每组所需器皿：50ml三角瓶×8 ；试管×16试剂瓶×5（200ml、2×1000ml、100ml、500ml）容量瓶烧杯量筒漏斗玻璃棒移液管pH试纸称量纸封口膜橡皮筋标签纸记号笔所需仪器：高压灭菌锅、烘箱、超净工作台、百分之一与万分之一天平、电炉、冰箱、所需药品：重铬酸钾、浓硫酸等、CaCl2·2H2O，KNO3，MgSO4·7H2O，NH4NO3，KH2PO4，Na2—EDTA，FeSO4·7H2O，MgSO4·4H2O，Zn SO4·7H2O，H3BO3，KI，NaMoO4·2H2O，CuSO4·5H2O，CoCl2·6H2O，甘氨酸，盐酸硫胺素，盐酸吡哆醇，烟酸，肌醇，蔗糖，琼脂，HCL,NaOH,酒精。
细胞培养技术实验报告单
一、实验目的1. 熟悉细胞培养的基本原理和操作步骤。
2. 掌握原代细胞培养和传代细胞培养的方法。
3. 了解细胞培养过程中常见问题的处理方法。
二、实验原理细胞培养是指将生物体内的细胞取出，在无菌条件下，模拟体内环境，使其在体外生长、繁殖和传代的过程。
细胞培养技术在生物学、医学和生物工程等领域具有广泛的应用。
三、实验材料与仪器1. 材料：原代细胞、培养皿、培养瓶、吸管、移液器、胰蛋白酶、EDTA、D-Hank's液、胎牛血清、PBS缓冲液、消毒剂等。
2. 仪器：显微镜、生物安全柜、CO2培养箱、超净工作台、离心机、水浴锅、酒精灯等。
四、实验步骤1. 原代细胞培养（1）取原代细胞，加入适量D-Hank's液，轻轻吹打使细胞悬浮。
（2）将细胞悬液加入培养皿，在CO2培养箱中培养。
（3）观察细胞生长情况，待细胞贴壁后，用移液器将细胞悬液转移至培养瓶中。
（4）加入适量胎牛血清，轻轻摇匀，放入CO2培养箱中继续培养。
2. 传代细胞培养（1）将培养瓶中的细胞用胰蛋白酶或EDTA消化。
（2）加入适量PBS缓冲液，终止消化反应。
（3）将细胞悬液转移至离心管中，离心去上清液。
（4）加入适量胎牛血清，轻轻摇匀，使细胞重新悬浮。
（5）将细胞悬液转移至新的培养瓶中，加入适量胎牛血清，放入CO2培养箱中继续培养。
3. 细胞冻存（1）将培养瓶中的细胞用胰蛋白酶或EDTA消化。
（2）加入适量胎牛血清，终止消化反应。
（3）将细胞悬液转移至离心管中，离心去上清液。
（4）加入适量冻存液（如DMSO），轻轻摇匀，使细胞重新悬浮。
（5）将细胞悬液转移至冻存管中，放入液氮中冻存。
五、实验结果与分析1. 原代细胞培养：细胞在培养皿中贴壁生长，细胞形态良好。
2. 传代细胞培养：细胞在培养瓶中生长旺盛，细胞形态良好。
3. 细胞冻存：冻存细胞复苏后，细胞生长状况良好。
六、实验结论1. 成功掌握了原代细胞培养和传代细胞培养的方法。
2. 了解了细胞培养过程中常见问题的处理方法。
细胞工程实践报告
细胞工程实践报告学院：至诚学院专业：生物技术姓名：许超然学号： 211312203日期： 2016.06.07 任课老师：李昊1.超低温保存箱型号：DW-86L338功能：应用于科研研究、医疗用品的保存、生物制品、远洋制品、电子元件、化工材料等特殊材料的低温实验及储存2.冷冻干燥机型号：FD-1A-50功能：冻干技术主要用于血清、血浆、疫苗、酶、抗生素、激素等药品的生产；生物化学的检查药品、免疫学及细菌学的检查药品；血液、细菌、动脉、骨骼、皮肤、角膜、神经组织及各种器官长期保存等3.微量高速离心机型号：TG-16W功能：分离提纯产物，根据每种物质的密度不同，经过高速旋转，密度大的液体沉在底层，密度小的液体浮在上面，这样就将液体分层，提炼出我所需要的纯净物。
它应用于医药、化工等许多领域。
4.定量PCR仪型号：BIO-RAD CFX Connect功能：用来监测循环过程的荧光。
与实时设备相连的计算机收集荧光数据。
数据通过开发的实时分析软件以图表的形式显示。
原始数据被绘制成荧光强度相对于循环数的图表。
原始数据收集后可以开始分析。
实时设备的软件能使收集到的数据进行正常化处理来弥补背景荧光的差异。
正常化后可以设定域值水平，这就是分析荧光数据的水平。
针对一些感染性疾病的药物，如各种病毒病、细菌病等，在新药的开发过程中，快速了解药物对疾病进程的影响可以为新药开发节约大量的人力、时间和资金，与以前所用的Elisa等方法相比，实时荧光定量PCR技术可以快速、准确、定量、灵敏地测定血液或组织中病原体的含量，因此有利用分析药物的作用效果，为比较不同的配方的疗效、用药量、用药时间等等提供快速、定量的评价。
5.多功能摇床型号：HYG-C功能：仪器广泛应用于对温度、振荡频率有着较高要求的细菌培养、发酵、杂交和生物化学反应以及酶、细胞组织研究等。
在医学、生物学、分子学、制药、食品、环保等研究应用领域有着广泛而重要的应用。
6.低温高速离心机型号：H1850R功能：台式结构，进口冷轧板机身，不锈钢离心腔，美观实用微机控制，触摸面板，数字显示，采用进口法国泰康压缩机组, 无刷电机电子门锁及超速、超温多种保护人性化设计，有停电应急功能和参数自动记忆功能。
生物技术细胞工程实验报告
课程学习报告课程名称：细胞工程大实验实验一培养基母液和培养基的配置实验二胡萝卜再生体系的建立实验三水稻再生体系的建立实验四水稻悬浮细胞系的建立及胚状体的诱导与观察实验五水稻遗传转化实验六烟草的组织培养实验七百合组织培养实验八原生质体游离、融合与培养实验九玉米幼胚再生系统的建立实验十植物快速繁殖实验1 培养基母液和培养基的配制摘要：培养基是供植物离体培养组织或细胞赖以生存的营养基质，相当于人公配制的“土壤“，在植物组织培养过程中，外植体生长所必需的营养成分、生长因子、理化环境等主要由培养基提供。
为了避免每次配制培养基都要对几十种化学药品进行称量，应该将培养基中的各种成分，按原量10倍、100倍或1000倍称量，配成浓缩液，这种浓缩液叫做母液。
这样，每次配制培养基时，取其总量的1/10、1/100、1/1000，加以稀释，即成培养液。
关键词：培养基母液、培养基、无机营养物、碳源、维生素、生长调节物质、有机附加物培养基实际一是一个人工模拟的植物生长、发育环境。
在植物组织培养过程中，外植体生长所必需的营养万分生长因子、理化环境等主要同培养基提供。
在植物组织培养中，选用适当的培养基，是组织培养成功与否至关重要的因素。
不同植物材料对培养基的要求不尽相同，进行一系列的预培养和筛选是很必要的。
由于离体的培养材料不像完整植物体那样具有自我平衡的能力，所以在配制培养基时，离子失衡或某种物质过量都可能导致培养物生长不良或导致死亡。
另外，组织培养物的脱分化、分化等状态的调控，次生代谢物的产出等都要通过调节培养基成分来实现。
本实验的目的是要学习并掌握培养基母液和培养基配制的方法，掌握不同物质浓度按比例稀释和转化的计算方法。
1 材料与方法步骤1.1试剂培养基母液（以MS 为例）：NH 4NO 3；KNO 3 ；CaCl 2.2H 2O ；MgSO 4.7H 2O ；KH 2PO 4；(NH4)2SO 4；H 3BO 3；KI ；MnSO 4.H 2O ；ZnSO 4.7H 2O ；NaMoO 4.2H 2O ；CuSO 4.5H 2O ；CoCl 2.6H 2O ；Na 2EDTA.2H 2O ；FeSO4. 7H2O ；甘氨酸；盐酸吡哆醇；盐酸硫氨素；烟酸；肌醇；2，4—D ；6—BA ；NAA培养基：1N HCl ；1N KOH ； 标准pH 溶液（25℃下，pH4.01和pH6.08的标准溶液各100ml ）；蔗糖；琼脂；水解蛋白酶；谷氨酰胺；脯氨酸。
细胞工程综合实训报告
2010—2011学年第二实践学期细胞工程综合实训报告专业：班级：姓名：学号：2011年 9月1日实验日期：2011.7.4-2011.7.12实验地点：农学院生物技术实验室及农学院创新实验室蓝莓细胞悬浮培养一、实验目的（1）掌握蓝莓细胞悬浮系建立的方法和原理（2）学会对悬浮细胞培养物进行细胞计数及绘制细胞生长曲线二、实验材料蓝莓愈伤组织三、实验试剂MS液体培养基、三氧化铬、0.1%酚藏红花、0.1%荧光素双醋酸酯（FDA）四、实验仪器超净工作台、高压灭菌锅、旋转式摇床、水浴锅、倒置显微镜、镊子、酒精灯、100ml三角瓶、移液管、PH计、漏斗、不锈钢网、血细胞计数板五、实验步骤1、配制MS液体培养基500ml（平均分装在11个三角瓶中），高压灭菌，常温放置1-2天，观察无菌后备用。
2、超净台内，镊子夹取生长旺盛的蓝莓愈伤组织，夹碎放入含MS的培养瓶中，每瓶1-1.5g.扎紧瓶口。
3、将接种完毕的三角瓶置于旋转式摇床上。
100r/min,25-28℃条件下进行振荡培养。
4、培养6-10天后，进行第一次继代培养。
5、悬浮培养物的过滤：继代培养几天后，若仍含有较大的细胞团，则用适当孔径不锈钢网过滤，再将滤后的悬浮细胞继续培养。
6、细胞数目计算：取一定体积的细胞悬液，加入2倍体积的8%三氧化铬，置于70℃水浴处理15分钟。
冷却后，用移液管重复吹打细胞悬液，以使细胞充分分散。
混匀后，取一滴悬液置于细胞计数板上计数。
六、注意事项1、各步骤均需无菌操作！培养基、用具、器皿等要高压灭菌后方可使用。
2、如培养液浑浊或呈现乳白色，表明已污染。
3、每次继代培养时，应在倒置显微镜下观察培养物中各类细胞及其残余物的情况，有意识的留下圆细胞，弃去长细胞。
七、实验记录蓝莓愈伤组织悬浮培养松江鲈鱼细胞体外培养一、实验材料松江鲈，捕于鸭绿江。
透明质酸酶、II型胶原酶、碱性成纤维细胞生长因子、表皮细胞生长因子、胰蛋白酶、L-15、MEM、DMEM/F-12培养基、胎牛血清、含羧甲基壳多糖（50ug/ml）、N-乙酰葡萄糖盐酸盐（50ug/ml）、碱性成纤维细胞生长因子（bEGF，10ng/ mL）、表皮生长因子( EGF , 10 ng/mL)。
小鼠腹腔巨噬细胞和肾脏细胞的原代培养2013
细胞工程综合实验报告小鼠腹腔巨噬细胞和肾脏细胞的原代培养班级 xxxx姓名 xxxx学号 xxxxxxxxxx指导教师 xxxx实验时间 xxxx成绩小鼠腹腔巨噬细胞和肾脏细胞的原代培养姓名学号班级一、实验目的1.了解细胞原代培养培养的基本方法和操作过程。
2.初步掌握培养过程中的无菌技术。
3.了解在相差显微镜下观察培养细胞的形态和生长状况。
二、实验原理原代细胞培养是指直接从动物体内获取的细胞、组织和器官，经体外培养后，直到第一次传代为止。
这种培养，首先用无菌操作的方法，从动物体内取出所需的组织（或器官），经消化，分解成单个游离细胞，在人工培养下，使其不断的生长及繁殖。
细胞培养是一种操作繁琐而又要求十分严谨的实验技术。
要使细胞能在体外长期生长，必须满足两个基本要求：一是供给细胞存活所必须的条件，如适量的水、无机盐、氨基酸、维生素、葡萄糖及其有关的生长因子、氧气、适宜的温度，注意外环境酸碱度与渗透压的调节。
二是严格控制无菌条件。
巨噬细胞属天然免疫细胞，具有趋化运动、吞噬、分泌和参与免疫调节等功能，是科学工作者研究细胞吞噬、细胞免疫和分子免疫学的重要对象。
巨噬细胞容易获得，便于培养，并可进行纯化。
巨噬细胞属不繁殖细胞群，在条件适宜下可生活2－3周多用做原代培养，不易长期生存。
巨噬细胞也建有无限细胞系，大多来自小鼠，如P331、S774A.1、RAW309Cr.l等，均获恶性，培养中呈巨噬细胞形态和吞噬功能，易于传代和瓶壁分离，但难以建株。
目前，单核巨噬细胞株也有，比如RAW264.7，但价格比较贵，且保存也不方便。
培养巨噬细胞可用各样方法和各种来源来获取细胞，目前以小鼠腹腔取材法最为实用，而目前获取小鼠巨噬细胞的方法有两种，一种是直接用培养液灌洗实验动物腹腔，从腹腔灌洗液中分离巨噬细胞，还有一种方法向动物腹腔中注射刺激物（如牛血清，淀粉，糖原，脂多糖，矿物油，PRMI1640培养液等），这样使机体产生大量巨噬细胞后再腹腔灌洗，但由于许多刺激物能激活巨噬细胞，而被激活的巨噬细胞大量吞噬刺激物，有此得到的巨噬细胞培养用于培养时，细胞中的刺激物不能很快被消化而残留在细胞中，影响细胞代谢，同时也不能很好的模拟体内环境，所以我们直接用培养液灌洗实验动物腹腔，从腹腔灌洗液中分离巨噬细胞。
细胞实验报告
细胞实验报告细胞实验报告细胞实验是生物学研究中的重要手段之一，通过对细胞的观察和实验操作，可以揭示细胞的结构、功能和相互关系，从而深入了解生命的奥秘。
本文将围绕细胞实验展开讨论，探究细胞实验在生物学研究中的重要性和应用前景。
1. 细胞培养实验细胞培养实验是细胞实验的基础，通过将细胞在培养基中进行体外培养，可以观察和研究细胞的生长、分裂和功能。
在细胞培养实验中，我们可以利用显微镜观察细胞的形态和结构变化，通过细胞计数仪统计细胞数量的变化，还可以利用细胞培养的技术手段进行细胞的分离和纯化，以便进行后续的实验操作。
2. 细胞凋亡实验细胞凋亡是细胞自我调控的一种重要机制，通过细胞凋亡实验，我们可以研究细胞凋亡的调控机制和信号通路。
常用的细胞凋亡实验方法包括DNA断裂检测、细胞色素c释放检测和TUNEL染色等。
通过这些实验手段，我们可以了解细胞凋亡在生物体发育、免疫应答和疾病发生中的作用，为疾病的治疗提供新的思路和方法。
3. 细胞增殖实验细胞增殖是细胞生长和分裂的过程，通过细胞增殖实验，我们可以研究细胞增殖的调控机制和影响因素。
常用的细胞增殖实验方法包括MTT法、BrdU标记法和细胞周期分析等。
通过这些实验手段，我们可以了解细胞增殖与肿瘤发生、组织再生和干细胞研究的关系，为疾病的治疗和组织工程的应用提供理论和实验基础。
4. 细胞转染实验细胞转染是将外源基因导入到细胞内的一种技术手段，通过细胞转染实验，我们可以研究基因的功能和调控机制。
常用的细胞转染实验方法包括质粒转染、病毒转染和基因敲除等。
通过这些实验手段，我们可以研究基因的表达和调控、基因突变的影响以及基因治疗的潜力，为疾病的诊断和治疗提供新的思路和方法。
5. 细胞信号转导实验细胞信号转导是细胞内外信息传递的过程，通过细胞信号转导实验，我们可以研究细胞信号转导的机制和调控。
常用的细胞信号转导实验方法包括Western blot、免疫组织化学和荧光共聚焦显微镜等。
细胞培养实验报告
一、实验目的1. 熟悉细胞培养的基本原理和操作步骤。
2. 掌握哺乳动物细胞原代培养和传代培养的方法。
3. 了解细胞培养在生物学研究中的应用。
二、实验原理细胞培养是将生物体内的细胞取出，在体外模拟体内生理条件下，使其生长、繁殖或传代的过程。
细胞培养技术的最大优点是能够直接观察活细胞，并在有控制的环境条件下进行实验，避免了体内实验时的许多复杂因素，还可以与体内实验互为补充。
细胞培养技术在生物学研究、医学、生物工程等领域中具有广泛的应用。
三、实验用品1. 仪器：显微镜、细胞培养箱、超净工作台、离心机、移液器、培养皿、载玻片、盖玻片等。
2. 试剂：胰蛋白酶、胎牛血清、DMEM培养基、青霉素、链霉素、D-Hank's液、75%酒精等。
四、实验步骤1. 原代细胞培养（1）取动物组织，用D-Hank's液清洗，去除血污。
（2）将组织剪成1mm×1mm×1mm的小块，加入胰蛋白酶，37℃消化30分钟。
（3）消化完成后，用吸管轻轻吹打组织块，使其分散成单个细胞。
（4）加入胎牛血清终止消化，用离心机离心收集细胞。
（5）用DMEM培养基重悬细胞，调整细胞浓度至1×10^6个/ml。
（6）将细胞接种于培养皿中，放入细胞培养箱培养。
2. 传代培养（1）待细胞长满培养皿后，用吸管轻轻吹打细胞，使其从培养皿壁上脱落。
（2）收集细胞，用离心机离心收集细胞。
（3）用DMEM培养基重悬细胞，调整细胞浓度至1×10^6个/ml。
（4）将细胞接种于新的培养皿中，放入细胞培养箱培养。
五、实验结果1. 原代细胞培养过程中，细胞从组织块中脱落，分散成单个细胞，细胞形态呈梭形或圆形。
2. 传代培养过程中，细胞生长旺盛，细胞形态稳定。
六、实验讨论1. 细胞培养过程中，温度、pH值、气体环境等因素对细胞生长影响较大。
实验中应严格控制培养条件，以保证细胞正常生长。
2. 细胞培养过程中，细胞传代次数过多会导致细胞老化，影响实验结果。
干细胞研发实验报告
一、实验背景干细胞作为一种具有自我更新和多向分化潜能的细胞群体，在再生医学、组织工程和疾病治疗等领域具有巨大的应用潜力。
本实验旨在探究人脐带间充质干细胞（hUCMSCs）的分离、培养和诱导分化，为后续的临床应用和研究提供基础。
二、实验材料与仪器1. 材料：- 人脐带组织- DMEM/F12培养基（含10%胎牛血清）- 0.25%胰蛋白酶- 细胞计数板- 干细胞专用培养皿- 干细胞培养箱- CO2培养箱- 电子显微镜- 流式细胞仪2. 仪器：- 高速离心机- 超净工作台- 恒温培养箱- 光学显微镜- 冰箱- 移液器三、实验方法1. 人脐带间充质干细胞的分离：- 将人脐带组织剪成小块，用0.25%胰蛋白酶消化处理，离心去除细胞碎片。
- 将消化后的细胞悬液接种于干细胞专用培养皿中，置于37℃、5%CO2的培养箱中培养。
2. 细胞培养：- 每天更换新鲜培养基，观察细胞生长情况。
- 待细胞长满培养皿后，进行传代培养。
3. 细胞鉴定：- 采用流式细胞仪检测细胞表面标志物，如CD29、CD73、CD90和CD105。
- 采用免疫荧光染色检测细胞表面标志物，如CD29、CD73、CD90和CD105。
4. 细胞诱导分化：- 将hUCMSCs接种于新的培养皿中，加入诱导分化培养基（如含1%胰岛素、10 ng/mL骨形态发生蛋白-2和BMP-12的DMEM/F12培养基）。
- 每天更换诱导分化培养基，观察细胞形态和功能变化。
- 采用免疫荧光染色检测细胞分化标志物，如碱性磷酸酶（ALP）和骨钙素（OCN）。
四、实验结果1. 细胞分离：- 成功分离出hUCMSCs，细胞形态为长梭形，呈悬浮生长。
2. 细胞培养：- 细胞生长旺盛，传代培养过程中细胞活力保持良好。
3. 细胞鉴定：- 流式细胞仪检测结果显示，hUCMSCs表达CD29、CD73、CD90和CD105等干细胞标志物。
- 免疫荧光染色结果显示，hUCMSCs表达CD29、CD73、CD90和CD105等干细胞标志物。
细胞培养小实验实验报告(3篇)
第1篇一、实验目的1. 掌握细胞培养的基本操作流程，包括原代培养和传代培养。
2. 了解细胞培养过程中的无菌操作规范。
3. 观察细胞在体外培养过程中的生长、增殖和形态变化。
二、实验原理细胞培养是从生物体中取出某种组织或细胞，模拟体内生理条件，在人工培养条件下使其生存、生长、繁殖或传代的过程。
细胞培养技术的最大优点是使我们得以直接观察活细胞，并在有控制的环境条件下进行实验，避免了体内实验时的许多复杂因素，还可以与体内实验互为补充。
三、实验用品1. 仪器及器材：显微镜、载玻片、盖玻片、移液枪、培养皿、无菌操作台、无菌操作箱、细胞培养箱、CO2培养箱、细胞计数器等。
2. 试剂：细胞培养液、胰蛋白酶、胎牛血清、抗生素、无菌水等。
四、实验步骤1. 原代细胞培养（1）取动物组织，剪碎后用胰蛋白酶消化，制成细胞悬液。
（2）将细胞悬液加入培养皿，置于CO2培养箱中培养。
（3）观察细胞生长情况，每隔24小时更换一次培养液。
2. 传代培养（1）当细胞达到一定密度时，用胰蛋白酶消化细胞，制成细胞悬液。
（2）将细胞悬液按1：2的比例传代到新的培养皿中。
（3）观察细胞生长情况，每隔24小时更换一次培养液。
3. 细胞计数（1）取适量细胞悬液，加入细胞计数器。
（2）计数细胞数量，计算细胞密度。
4. 细胞形态观察（1）取细胞培养皿，用盖玻片覆盖。
（2）置于显微镜下观察细胞形态、生长情况。
五、实验结果1. 细胞生长情况：原代细胞在培养皿中生长良好，细胞密度逐渐增加。
传代培养后，细胞生长速度略有下降，但总体状况良好。
2. 细胞形态：细胞呈多边形，细胞核清晰可见，细胞间连接紧密。
3. 细胞计数：细胞密度为1×10^6个/mL。
六、实验结论1. 成功进行了原代细胞培养和传代培养。
2. 细胞在体外培养过程中生长良好，细胞形态正常。
3. 细胞培养技术为生物学研究提供了有力工具。
七、实验总结本次实验成功掌握了细胞培养的基本操作流程，了解了无菌操作规范，并观察了细胞在体外培养过程中的生长、增殖和形态变化。
细胞工程实习报告
一、实习目的通过本次细胞工程实习，使学生了解细胞工程的基本原理、实验技术及在生物技术领域的应用，培养学生的动手操作能力、分析问题和解决问题的能力，提高学生的综合素质。
二、实习时间2022年6月1日至2022年6月15日三、实习地点某高校生物技术实验室四、实习内容1. 细胞培养技术（1）细胞培养的基本概念：细胞培养是指将细胞从生物体内取出，在适宜的培养基中培养，使其生长、繁殖和分化的技术。
（2）细胞培养的基本原理：细胞培养的原理是利用细胞增殖和分化的能力，在适宜的条件下使细胞生长、繁殖和分化。
（3）细胞培养的操作步骤：①制备培养基：根据细胞种类和实验要求，配制适宜的培养基。
②消毒：对实验器材进行消毒，确保无菌操作。
③接种：将细胞接种到培养皿中。
④培养：将培养皿放入培养箱中，进行适宜温度和湿度的培养。
⑤观察：定期观察细胞生长情况，记录实验数据。
2. 细胞融合技术（1）细胞融合的基本概念：细胞融合是指两个或两个以上细胞合并成一个细胞的过程。
（2）细胞融合的原理：细胞融合的原理是利用细胞膜和细胞壁的物理和化学特性，使细胞膜和细胞壁相互融合。
（3）细胞融合的操作步骤：①制备细胞悬液：将细胞制备成悬液。
②细胞融合：将细胞悬液加入适当的融合剂，如聚乙二醇（PEG）。
③培养：将融合后的细胞培养在适宜的培养基中。
④筛选：通过筛选方法，得到融合成功的细胞。
3. 细胞工程在生物技术领域的应用（1）基因工程：利用细胞工程技术，将目的基因导入受体细胞，实现基因表达和调控。
（2）蛋白质工程：利用细胞工程技术，对蛋白质进行修饰和改造，提高蛋白质的功能和稳定性。
（3）细胞治疗：利用细胞工程技术，制备具有治疗作用的细胞，如干细胞、免疫细胞等。
五、实习体会和收获1. 通过本次实习，我对细胞工程的基本原理、实验技术及在生物技术领域的应用有了更深入的了解。
2. 在实习过程中，我学会了细胞培养、细胞融合等实验操作，提高了自己的动手操作能力。
细胞工程实验报告
细胞工程实验报告专业：生物技术班级：0801 姓名：励丹学号：30804305一、实验目的1、了解动物细胞培养的相关实验器材以及实验前器材的清洗与消毒、无菌室灭菌与消毒等基本方法，以建立起无菌操作的概念。
2、了解和掌握动物细胞原代培养的基本方法，熟悉组织块法和消化法培养的基本操作过程。
初步掌握无菌操作技术。
3、学习与了解细胞超低温冻存于复苏的基本原理，初步掌握培养细胞常规超低温冻存于复苏以及玻璃化超低温冻存于复苏的方法。
4、掌握ELISA测定抗体效价的方法，细胞的超低温冻存和复苏，及MTT法测定细胞活性的方法。
5、学习和掌握制备饲养层细胞的方法，为杂交瘤细胞的制备做准备。
6、学习从脾脏组织制备免疫细胞的方法，从免疫脾脏中制备免疫细胞悬液，用于杂交瘤细胞的融合。
7、学习和掌握动物细胞融合的基本方法，通过免疫脾细胞与骨髓瘤细胞融合制备杂交瘤细胞，并进行选择。
8、学会细胞形态的观察和分析，细胞技术等细胞培养中常见的问题。
二、实验原理1、原代培养原代细胞培养是指直接从动物体内获取的细胞、组织或器官，经体外培养后直到第一次传代为止。
原代培养首先用无菌操作的方法，从动物体内取出所需的组织或器官，切成一定大小的组织块，直接或经消化分散成单个游离的细胞，在人工培养条件下，使其不断地生长、繁殖。
2、细胞活性测定——MTT法MTT法是利用细胞线粒体呼吸链上的琥珀酸脱氢酶四氮唑蓝还原成难溶的蓝紫色结晶——甲瓒，经二甲基亚砜（DMSO）溶解后，在490nm处测吸收值，其吸收值可间接反映细胞的活性状态及活细胞数量。
3、培养细胞的超低温冻存于复苏为了保持细胞株（系）遗传的稳定性以及非连续使用细胞的长期保存，建立了细胞超低温冻存于复苏技术。
目前细胞超低温冻存技术主要有两种方法，即常规超低温冻存和玻璃化超低温冻存。
活细胞在超低温下克服了分子间的热运动，因而可长期保存而不影响活力。
在不加任何条件下直接冻存细胞时，细胞内和外环境中的水都会形成冰晶，能导致细胞内发生机械损伤、电解质升高、渗透压改变、脱水、PH改变、蛋白变性等，能引起细胞死亡。
水产细胞工程实验设计报告
水产细胞工程实验设计报告引言水产养殖是目前重要的经济产业之一，但其面临的问题也不容忽视。
其中，疾病防控是水产养殖中的重要环节，传统的防疫方式受到环境限制和效果不佳的影响。
随着细胞工程技术的发展，水产细胞工程在水产养殖领域的应用也逐渐得到关注。
本实验旨在通过水产细胞工程，研究和应用细胞工程技术在水产养殖中的潜力。
实验目的本实验的主要目的是探索利用细胞工程技术在水产养殖中进行疾病防控的可能性，并评估其效果。
具体实验目标如下：1. 研究细胞工程技术在水产养殖中的应用潜力；2. 通过细胞工程技术提高水产养殖物种的抵抗力；3. 评估细胞工程技术在水产养殖中的效果。
实验设计1. 实验材料- 水产养殖物种（如鱼类、虾类等）- 细胞培养基- 细胞培养试剂（如胰蛋白酶、细胞增殖素等）- 细胞培养器具（如培养皿、离心管等）- 实验室设备（如显微镜、离心机等）2. 实验步骤1. 准备细胞培养基，并根据水产养殖物种的特点进行相应的优化调整。
2. 从水产养殖物种中采集细胞样本，如鱼鳃组织、虾脚组织等。
将细胞样本置于含有胰蛋白酶的细胞培养基中，用于细胞的离体培养。
3. 经过胰蛋白酶消化后，将细胞转移至培养皿中，并培养在适宜的温度和湿度条件下。
4. 观察细胞的增殖情况。
根据需要，可以添加适量的细胞增殖素来促进细胞的增殖。
5. 对增殖的细胞进行鉴定和筛选，挑选出具有高抗病能力的细胞株。
6. 根据实验需要，对选出的细胞株进行基因编辑，增加抗病相关基因的表达量。
7. 将编辑过的细胞株培养至足够数量后，进行体内实验。
将编辑过的细胞株注射到水产养殖物种体内，观察其对疾病的抵抗能力。
8. 根据实验结果，评估细胞工程技术在水产养殖中的应用效果。
3. 实验预期结果通过以上实验设计，我们预期可以得到以下结果：- 细胞工程技术可以提高水产养殖物种的抵抗力，降低疾病发生率。
- 经过基因编辑的细胞株可以进一步提高水产养殖物种的抗病能力。
- 细胞工程技术在水产养殖中有潜力成为一种有效的疾病防控方法。
实验室培育细胞实验报告(3篇)
第1篇一、实验目的1. 掌握细胞培养的基本原理和方法；2. 了解细胞培养过程中的无菌操作和细胞传代技术；3. 观察细胞在体外培养过程中的生长和变化。
二、实验原理细胞培养是将细胞从生物体中取出，在体外模拟生物体内环境，使其在适宜的条件下生长、繁殖和传代。
细胞培养技术是生物学研究的重要手段，广泛应用于医学、生物工程等领域。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：小鼠脾脏细胞、胰蛋白酶、细胞培养液、DMSO（二甲基亚砜）、培养瓶、移液器、细胞计数板、显微镜等。
2. 仪器：超净工作台、细胞培养箱、离心机、冰箱等。
四、实验步骤1. 细胞复苏：将冷冻保存的细胞复苏，解冻后用移液器吹打均匀，加入适量培养液，调整细胞浓度；2. 细胞接种：将复苏后的细胞接种于培养瓶中，放入细胞培养箱培养；3. 细胞传代：待细胞长满培养瓶后，用胰蛋白酶消化细胞，调整细胞浓度后，重新接种于新的培养瓶中；4. 细胞观察：定期观察细胞生长情况，记录细胞形态、数量和生长速度；5. 细胞冻存：将细胞传代后，取适量细胞加入DMSO，冷冻保存。
五、实验结果与分析1. 细胞复苏：复苏后的细胞呈圆形，细胞膜完整，无碎片；2. 细胞接种：接种后的细胞在培养箱中生长良好，细胞形态规则，细胞间连接紧密；3. 细胞传代：传代后的细胞生长迅速，细胞数量逐渐增加；4. 细胞观察：细胞在体外培养过程中，形态、数量和生长速度逐渐稳定。
六、实验结论1. 成功掌握了细胞培养的基本原理和方法；2. 掌握了细胞培养过程中的无菌操作和细胞传代技术；3. 观察到细胞在体外培养过程中的生长和变化。
七、实验讨论1. 细胞培养过程中，无菌操作至关重要，应严格遵循无菌操作规程；2. 细胞传代时，应选择合适的胰蛋白酶浓度和消化时间，以减少对细胞的损伤；3. 细胞培养过程中，应定期观察细胞生长情况，及时调整培养条件，以保证细胞生长良好。
八、实验总结本次实验成功进行了细胞培养，掌握了细胞培养的基本原理和方法，为后续的细胞学研究奠定了基础。
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细胞工程实验报告专业：生物技术班级：0801 姓名：励丹学号：30804305一、实验目的1、了解动物细胞培养的相关实验器材以及实验前器材的清洗与消毒、无菌室灭菌与消毒等基本方法，以建立起无菌操作的概念。
2、了解和掌握动物细胞原代培养的基本方法，熟悉组织块法和消化法培养的基本操作过程。
初步掌握无菌操作技术。
3、学习与了解细胞超低温冻存于复苏的基本原理，初步掌握培养细胞常规超低温冻存于复苏以及玻璃化超低温冻存于复苏的方法。
4、掌握ELISA测定抗体效价的方法，细胞的超低温冻存和复苏，及MTT法测定细胞活性的方法。
5、学习和掌握制备饲养层细胞的方法，为杂交瘤细胞的制备做准备。
6、学习从脾脏组织制备免疫细胞的方法，从免疫脾脏中制备免疫细胞悬液，用于杂交瘤细胞的融合。
7、学习和掌握动物细胞融合的基本方法，通过免疫脾细胞与骨髓瘤细胞融合制备杂交瘤细胞，并进行选择。
8、学会细胞形态的观察和分析，细胞技术等细胞培养中常见的问题。
二、实验原理1、原代培养原代细胞培养是指直接从动物体内获取的细胞、组织或器官，经体外培养后直到第一次传代为止。
原代培养首先用无菌操作的方法，从动物体内取出所需的组织或器官，切成一定大小的组织块，直接或经消化分散成单个游离的细胞，在人工培养条件下，使其不断地生长、繁殖。
2、细胞活性测定——MTT法MTT法是利用细胞线粒体呼吸链上的琥珀酸脱氢酶四氮唑蓝还原成难溶的蓝紫色结晶——甲瓒，经二甲基亚砜（DMSO）溶解后，在490nm处测吸收值，其吸收值可间接反映细胞的活性状态及活细胞数量。
3、培养细胞的超低温冻存于复苏为了保持细胞株（系）遗传的稳定性以及非连续使用细胞的长期保存，建立了细胞超低温冻存于复苏技术。
目前细胞超低温冻存技术主要有两种方法，即常规超低温冻存和玻璃化超低温冻存。
活细胞在超低温下克服了分子间的热运动，因而可长期保存而不影响活力。
在不加任何条件下直接冻存细胞时，细胞内和外环境中的水都会形成冰晶，能导致细胞内发生机械损伤、电解质升高、渗透压改变、脱水、PH改变、蛋白变性等，能引起细胞死亡。
如向培养液加入保护剂，可使冰点降低。
在缓慢的冻结条件下，能使细胞内水份在冻结前透出细胞。
贮存在－130℃以下的低温中能减少冰晶的形成。
4、饲养层细胞的制备在体外培养细胞实验中，对于难养的细胞或者数量较少的细胞，常常需要预先在培养瓶或培养板底部加入一些活的原代细胞或者静息的肿瘤细胞以辅助目的细胞的生长，这就是饲养层细胞。
它可能在饲养细胞的生长过程中会释放一些细胞生长刺激因子或提供细胞接触的信号。
5、免疫脾细胞的制备小鼠经抗原多次免疫后，可从脾脏组织细胞分裂和分化出较多能分泌相应抗体的B淋巴细胞，脾脏内细胞连接不紧密可通过机械分离和过滤网筛选，将这些细胞制备成游离的单个细胞悬液。
6、杂交瘤细胞的制备（细胞融合）通过对免疫动物B细胞和某一个永久细胞系进行融合，杂交后代称之为杂交瘤。
杂交瘤细胞可以将分泌特异性抗体B细胞的遗传特性和骨髓瘤细胞系体外增殖的遗传特性合二为一。
一种淋巴细胞克隆只产生一种特异性抗体；细胞融合技术产生的杂交瘤细胞可以保持亲代双方的特性；杂交瘤细胞的筛选，体外培养大量增殖，获得所需抗体。
7、ELISA检测使抗原或抗体结合到某种固相载体表面，并保持其免疫活性。
使抗原或抗体与某种酶连接成酶标抗原或抗体，这种酶标抗原或抗体既保留其免疫活性，又保留酶的活性。
在测定时，把受检标本（测定其中的抗体或抗原）和酶标抗原或抗体按不同的步骤与固相载体表面的抗原或抗体起反应。
用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与其他物质分开，最后结合在固相载体上的酶量与标本中受检物质的量成一定的比例。
加入酶反应的底物后，底物被酶催化变为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据颜色反应的深浅刊物定性或定量分析。
由于酶的催化频率很高，故可极大地地放大反应效果，从而使测定方法达到很高的敏感度。
三、实验内容1、动物细胞培养技术2、杂交瘤技术与单克隆抗体制备3、细胞工程相关技术1）动物细胞培养实验器材的准备无菌室：首次启用的无菌室一般可采用福尔马林熏蒸（5～6m2无菌室用KMnO4 50g，倒入100ml甲醛（用搪瓷盘），冒浓烟，24hr，氨水中和至无甲醛味），经常使用的无菌室在每次实验前必须开启紫外灯照射0.5至l小时，然后避光0.5至l小时后方可进入操作。
培养器材的消毒：干热灭菌法：玻璃器皿、金属器具等的消毒方法，140～150℃，2～3小时；湿热灭菌法：橡胶制品、无菌衣、帽和口罩以及除菌过滤器的清毒，高压蒸汽灭菌15磅20—30分钟；紫外线照射灭菌：多孔培养板的灭菌－30分钟。
抽滤除菌：培养基等（培养基通过0.22过滤装置－除菌）2）杂交瘤技术与单克隆抗体制备1、小鼠的免疫方法：脾脏直接注射：一般免疫后3～4天即可制备抗体。
其它途径注射：一般采用间隔免疫的方法，分3次，间隔2～3周进行免疫。
步骤：取绵羊静脉血0.2mL（加肝素或枸橼酸钠抗凝）用0.9％NaCl或PBS 1000~ 1500rpm离心5分钟涤洗3次，收集血细胞。
血球计数板计数，用0.9％NaCl或PBS调整细胞浓度至4×107个/ml（10个/小格）。
向小鼠腹腔注射血细胞悬液0.5ml 。
每隔15天重复注射作加强免疫，共重复2次，第2次加强免疫后10天，检测血清效价，若血清效价低则要继续免疫。
小鼠处死前2～3天加强免疫1次，以活化B淋巴细胞。
注：细胞计数：一个大方格被分成16个中方格。
每一个大方格边长为1mm，盖上盖玻片后，载玻片与盖玻片之间的高度为0.1mm，所以计数室的容积为0.1mm3。
一个大方格被分成16个中方格。
每一个大方格边长为1mm，盖上盖玻片后，载玻片与盖玻片之间的高度为0.1mm，所以计数室的容积为0.1mm3。
细胞浓度（个/ml）=细胞数/体积即：细胞浓度（个/ml）= 一个大格的细胞数×104。
打入的免疫红细胞数要在一定范围内，细胞数量太多会免疫耐受；太少得到的免疫细胞数少。
2、小鼠血清的制备取五只没有免疫过的小鼠---每只小鼠眼球取血0.5mL以上于1mLEP管中----小鼠短颈处死后，放于装有75%酒精的烧杯中消毒灭菌，带入无菌室备用——取出血清放于37℃水浴保温30min——2000转离心10min——取上清于干净的离心管中，作为ELISA的阴性对照取五只免疫过的小鼠——同上操作——取血清作为ELISA的阳性对照3、单克隆抗体的制备流程4、骨髓瘤细胞的培养1、选择生长旺盛，形态良好的细胞2、将上清倒入离心管内，剩余贴壁的细胞用0.02％EDTA消化液消化细胞5分钟后倒入同一离心管，1000～1500rpm离心5分钟，收集细胞。
3、加6mL含10％小牛血清的DMEM培养液悬浮细胞，分装于两个细胞培养瓶，5％CO2培养箱37℃培养。
5、饲养层细胞的制备1、每组1只小鼠，断颈处死后浸泡在75％乙醇消毒5分钟。
2、在无菌室内小心剪开小鼠腹部皮肤，暴露腹腔，用注射器腹腔注射3～4ml 1640培养液，按摩片刻。
3、左手用镊子夹起腹腔肌肉，右手用剪刀剪开一个小口，小心用吸管吸出腹腔液体于离心管。
4、低速离心洗涤细胞一次后，用12~15ml 1640培养液悬浮细胞（5×104），取100~200 l滴96孔板（一般用吸管滴2~3滴）。
5、免疫脾细胞的制备1.将免疫过并取完血清后的浸泡在75％乙醇中的小鼠带入无菌室。
2.小心剪开腹腔，取出脾脏。
3.用一次性注射器将脾脏刺几个洞，再吸3～4mLPBS液吹打脾脏。
4.收集吹打的细胞悬液，经低速离心洗涤后将细胞悬浮在培养液。
6、杂交瘤细胞的制备（细胞融合）1.将骨髓瘤细胞(2×107）与脾细胞按1:10的比例混合，低速离心后弃上清，用手指弹匀细胞。
2.将1mL50％的PEG在1分钟内缓缓加到混合的细胞内，注意边滴加PEG边摇动离心管。
3.PEG作用1分钟后，迅速滴加培养液终止PEG作用，低速离心洗涤细胞。
4.用10mLDEME培养液悬浮融合细胞，按每孔3滴的量滴加到含滋养层的96孔板内，置37℃5％CO2培养箱中培养。
（注：因为实验时间有限，我们只是操练单克隆抗体的制备方法和过程，并没有制备到单克隆抗体，但是单克隆抗体的制备过程和操作注意事项已经基本了解。
）3）原代细胞的培养组织块法培养小鼠肝脏组织:1.取出肝脏，经PBS漂洗三次后，放在表面皿中。
2.在表面皿中，用滴管加入少量PBS（RPMI1640含20％小牛血清，0.2%白蛋白，10ug/ml胰岛素，100U青霉素和链霉素）用锋利的剪刀将组织块剪成约1mm3的小块。
3.用弯头镊子将组织小块移入细胞瓶中，把它们排列成行，每块组织相距约0.5cm，每瓶细胞贴20～30小块，随即翻转细胞瓶，使贴组织块的一面朝上，然后加培养液3ml。
4．将细胞瓶置于37℃，5％CO2培养箱中静置2~4小时，然后将瓶轻轻翻转，使组织块浸入培养液中，继续静止培养。
5．72小时后在显微镜下检查，若见细胞自组织边缘长出，则继续培养3-5日，再换部分或全部培养液，待多数组织块的生长晕相接时，可进行传代培养。
肝细胞培养的实验结果：若培养液显为淡黄且清澈，一般显示细胞生长良好。
培养3～5日，在相差显微镜下观察，若见细胞自组织边缘长出，更换部分或全部培养液，待多数组织块的生长晕相接，小心挑掉组织块，继续培养3～4天。
7天左右后，生长晕扩大到直径为15mm左右小鼠肝脏细胞原代培养的生长晕是多角形上皮样细胞与梭形细胞混合的细胞群体。
24～48小时后若培养液变成黄色且混浊，表示已被污染；若培养液变成紫色，一般细胞生长不好，则培养液pH过高；消化法培养小鼠肾细胞:1、将消毒过的小鼠，剖腹取出肾脏于放有ＰＢＳ的培养皿中洗涤。
2、尽量剪碎肾脏。
3、用ＰＢＳ洗涤２～３次。
4、加入５mL胰酶，37℃（30min）。
5、过筛，１０００转离心１０min，用PBS洗涤2~3次。
6、加培养液，计数至3~5×105/Ml.(1.5个每中格)。
7、细胞悬液装瓶3mL放于CO2培养箱培养。
4）抗体IgG ELISA检测1.取0.2ml绵羊红细胞，加6ml PBS 1000rpm离心10min洗涤，重复一次。
2.取下层红细胞，加1.2ml磷酸盐缓冲液（Na2HPO45mmol/L, NaH2PO45mmol/L pH7.6）（低渗）混匀后，常温处理20~25min，4℃12000~13000 rpm离心15min，去上清，重复一次。
3.取乳白色沉淀（血影）用包被液稀释至后，按50g（老师制备）加入96孔酶标板内，放于湿盒4℃冰箱过夜，备用。
4.吸去孔中的抗原液（自制吸头，这样冲击力会小，不会使包被的抗原脱落），用洗涤液洗涤3次（将洗涤液沿孔壁注入200L/孔，放置3分钟，甩去洗涤液，重新注入），加封闭液（含1％牛血清白蛋白的洗涤液）200L/孔，封闭30min。