流式细胞仪常用的几种检测方法

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1) 流式细胞仪常用的几种检测方法（转载） 一、测定用乙醇固定的DNA的含量 1、培养细胞的DNA含量的测定 制备单细胞悬液于200μl的PBS缓冲液中； 加入2ml预冷的70%乙醇，4℃保存； 附:细胞固定的一般步骤 取单细胞悬液1～2×106个细胞于PBS（PH=7.2）缓冲液中； 2) 300g离心5分钟，弃上清，反复两次； 3) 重悬细胞于0.5ml PBS缓冲液中； 将细胞悬液放置于2～3ml冷70%乙醇中，混匀，保存于4℃，至少30分钟。在4℃条件下可保存2~3周。 注意： 2 根据实验的要求，固定剂也可选用1～3%多聚甲醛； 2 将乙醇作为固定剂时，乙醇应预冷至0～4℃； 细胞在固定时，固定剂应缓慢滴入细胞悬液中，使固定剂的浓度缓慢增加，并不断震摇，以免细胞成团（特别是用乙醇固定时）。 2 300g离心5分钟，去上清，再重悬于400μl PBS中； 2 显微镜下观察，若有明显的黏附，须再用筛网过滤； 2 加入PI（含Rnase），避光孵育30分钟； 2 上机检测。 2、新鲜组织的DNA含量的测定 1) 用200mg湿重组织用机械法制成单细胞悬液； 2) 500g离心5分钟； 3) 弃上清，重悬于10ml染色-去污剂中； 4) 再过滤，用200目的筛网或70~80μm的筛网过滤； 5) 上机检测。 3、石蜡包埋组织切片的DNA含量的测定 从石蜡包埋切取切片50 μm厚，2~3片，制成单细胞悬液；
2) 用PBS缓冲液洗涤，500g离心5分钟，弃上清；
3) 加入PI液1ml室温避光30分钟；
4) 调整细胞浓度为1×106/ml；
5) 上机检测。
二、细胞凋亡检测及相关分子检测
1、细胞DNA含量分布（由细胞DNA降解方式检测细胞凋亡）