流式细胞术检测凋亡的方法
细胞凋亡途径实验报告
细胞凋亡途径实验报告一、实验目的细胞凋亡是一种由基因调控的程序性细胞死亡方式，对于维持细胞内环境稳定、生物体的正常发育和生理功能具有重要意义。
本实验旨在探究细胞凋亡的主要途径，包括内源性线粒体途径和外源性死亡受体途径，以及相关的分子机制和检测方法。
二、实验原理（一）内源性线粒体途径细胞在受到内部或外部应激信号刺激时，线粒体外膜通透性发生改变，导致细胞色素 C 等凋亡因子释放到细胞质中。
细胞色素 C 与凋亡蛋白酶激活因子 1（Apaf-1）结合形成凋亡小体，激活 caspase-9，进而激活下游的 caspase 级联反应，最终导致细胞凋亡。
（二）外源性死亡受体途径死亡受体（如 Fas、TNFR1 等）与相应的配体结合后，通过其死亡结构域招募接头蛋白（如 FADD），进而激活 caspase-8。
激活的caspase-8 可以直接激活下游的 caspase 级联反应，也可以通过切割 Bid 蛋白使其形成 tBid，从而促进线粒体释放细胞色素 C，激活内源性凋亡途径。
（三）检测方法1、流式细胞术：通过检测细胞膜磷脂酰丝氨酸（PS）外翻、DNA 片段化等指标来定量分析细胞凋亡的比例。
2、荧光显微镜观察：使用荧光染料标记凋亡细胞的特征结构，如细胞核、线粒体等，直观地观察细胞凋亡的形态变化。
3、 Western blotting：检测凋亡相关蛋白（如 caspase-3、PARP 等）的表达和活化情况。
三、实验材料1、细胞系：＿____细胞株2、试剂：Annexin VFITC/PI 凋亡检测试剂盒、细胞色素 C 抗体、caspase-3 抗体、PARP 抗体、Fas 抗体、TNFR1 抗体等。
3、仪器：流式细胞仪、荧光显微镜、电泳仪、转印仪、酶标仪等。
四、实验步骤（一）细胞培养与处理将_____细胞株接种于培养皿中，在适宜的条件下培养至对数生长期。
分别使用不同的处理因素（如紫外线照射、化疗药物处理等）诱导细胞凋亡。
流式细胞术步骤
利用流式细胞仪检测细胞周期和凋亡1.细胞按每孔4×105个的密度接种于60 细胞培养皿内，培养过夜后，用相应药物处理细胞。
(设置实验组和对照组，实验组依辛伐他汀浓度分为3组，2μ、5μ、10μ辛伐他汀组正常对照组(组)：胰岛素终浓度0.058A组：辛伐他汀终浓度2μ胰岛素终浓度 0.058；B组：辛伐他汀终浓度5μ胰岛素终浓度0.058；C组：辛伐他汀终浓度10μ胰岛素终浓度0.058；于37℃，52培养箱中孵育48h）2.胰酶消化收集细胞，并用1 缓冲液清洗剩余细胞一次，全部加入15管中。
3.800 离心5分钟，去除上清，加5 缓冲液重悬细胞，再次离心弃上清，重复两次，最后重悬细胞于0.5 中。
4.用低速振荡器边震动边加入5 预冷的70%乙醇，固定，4℃过夜。
5.次日将固定好的细胞以1000 的转速离心5分钟，弃上清，加入4 清洗一次，用0.4 重悬细胞。
6.加入5 μL （10 ）37℃消化1小时，加入终浓度50 碘化丙啶（）4℃避光染色过夜（或者37℃避光染色1小时），在流式细胞仪上分析。
利用流式细胞抗体检测检测细胞膜表面蛋白的变化1.细胞按每孔4×105个的密度接种于60 细胞培养皿内，培养过夜后，用相应药物处理细胞。
2．胰酶消化收集细胞，并用 1 缓冲液清洗剩余细胞一次，全部加入15管中。
3 . 800 离心5分钟，去除上清，加5 缓冲液重悬细胞，再次离心弃上清，重复两次，最后重悬细胞于0.1 中，并转移到1.5 离心管中。
4. 按照1:100加入1一抗（如下图对应），置于垂直混合液上室温孵育1-2小时。
5. 1500，小型离心机离心5分钟，去除上清，加1 缓冲液重悬细胞，再次离心弃上清，重复3次，最后将洗好的细胞重悬于0.1 中。
6.分别将荧光二抗 488、 567按照1:100比例加入细胞悬液中，室温孵育1小时。
7. 1500离心5分钟，去除上清，加1 缓冲液重悬细胞，再次离心弃上清，重复3次，最后重悬细胞于0.2 中。
凋亡流式检测步骤
凋亡流式检测步骤凋亡是细胞生命的一个重要过程，它在生物体的正常发育和维持内稳态中起着关键作用。
凋亡的流式检测是一种常用的实验方法，通过分析细胞的染色性质和形态特征，可以快速准确地检测细胞的凋亡状态。
下面将介绍凋亡流式检测的具体步骤。
一、细胞样本的准备1. 收集需要检测的细胞样本，可以是细胞培养物或组织样本。
2. 用无菌PBS缓冲液洗涤细胞样本，去除培养基或组织液中的杂质。
3. 用离心机将细胞沉淀下来，去除上清液。
二、细胞的染色1. 用无菌PBS缓冲液重新悬浮细胞，使细胞浓度达到合适的浓度。
2. 加入适量的凋亡检测染料，常用的染料有Annexin V和PI。
3. 在室温下孵育一定时间，使染色剂与细胞充分反应。
三、流式细胞仪的设置1. 打开流式细胞仪，进行仪器的预热和校准。
2. 根据染色的荧光信号选择相应的检测通道，并设置适当的增益和门控。
3. 将已染色的细胞样本加入流式细胞仪的样本管中。
四、数据采集与分析1. 开始流式细胞仪的运行，以恒定的速度将细胞样本通过激光束。
2. 细胞在激光束中逐个通过，激光照射下的细胞会发出特定的荧光信号。
3. 流式细胞仪会记录下每个细胞的荧光信号，并将其转化为数字信号。
4. 利用流式细胞仪软件对采集到的数据进行分析和统计。
5. 根据细胞的荧光强度和染色的特征，可以判断细胞的凋亡状态。
通过以上步骤，我们可以快速准确地检测细胞的凋亡状态。
凋亡流式检测的优点是可以同时检测大量的细胞，具有高通量和高灵敏度的特点。
它在细胞生物学、免疫学和药物研发等领域都有广泛的应用。
值得注意的是，凋亡流式检测中的染色剂选择和流式细胞仪的设置对结果的准确性和可靠性有重要影响。
因此，在进行凋亡流式检测之前，需要仔细选择适合的染色剂和校准流式细胞仪。
同时，对于不同类型的细胞和凋亡机制，可能需要针对性地进行优化和调整。
凋亡流式检测是一种重要的实验方法，可以快速准确地检测细胞的凋亡状态。
通过合理的样本准备、细胞染色、仪器设置和数据分析，可以获得可靠的实验结果。
凋亡细胞线粒体膜电位的流式细胞术分析
凋亡细胞线粒体膜电位的流式细胞术分析细胞的凋亡是一个复杂的过程，由多种信号通路和调控机制共同参与控制和调节。
细胞凋亡过程可以在细胞内部可见到，特别是细胞膜电位变化。
因此，通过细胞膜电位变化分析凋亡细胞是非常重要的。
研究表明，在细胞凋亡过程中，线粒体膜电位的变化是最具代表性的指标。
线粒体膜电位的变化是细胞凋亡的重要指标，但是由于耗时且复杂的实验操作，传统的细胞膜电位测定方法很难满足测量细胞凋亡的高精度需求。
因此，开发出高精度定量分析凋亡细胞线粒体膜电位的快速有效的细胞测定方法，具有重要的意义。
随着流式细胞术在生物医学研究中的广泛应用，它被用于在线监测细胞凋亡，特别是线粒体膜电位的变化，这受到了研究者的欢迎。
在流式细胞术检测凋亡细胞的线粒体膜电位变化，可以帮助研究者快速、高准确度的定量分析测定凋亡细胞的线粒体膜电位变化，以更深入地了解凋亡细胞的特性和分子机制。
流式细胞术指的是一种在一个流程中对活细胞进行定量分析的技术，其基本原理是通过使用流体力学和电磁学原理，在特定流动媒介中利用物理和化学效应引起细胞分散和微粒聚集，从而使细胞形成信号模板和聚集，最终实现细胞的定量分析。
在分析凋亡细胞线粒体膜电位变化的过程中，研究者可以采用流式细胞术分析细胞凋亡线粒体膜电位变化的程度。
流式细胞术分析凋亡细胞线粒体膜电位变化的具体过程是这样的：首先，样本中的细胞被收集到流式细胞检测仪中，然后将细胞悬浮液以规定的流量经芯片中的微管流动。
当细胞在芯片上流动时，不同类型的钠离子对细胞的线粒体膜电位产生影响，从而形成不同的悬浮液浓度和电阻模式，研究者可以通过流式细胞检测仪中的电阻模式识别凋亡细胞，定量分析凋亡细胞的线粒体膜电位变化。
在流式细胞术分析凋亡细胞线粒体膜电位变化时，可以用到更加先进技术，如利用标记技术对凋亡细胞中特定蛋白质的表达水平进行检测，从而更好地理解凋亡细胞的特性。
此外，研究者还可以利用其他细胞定量分析技术，例如荧光素酶报告技术，以及改良的激光共聚焦显微镜和细胞免疫荧光技术，进一步深入研究凋亡细胞的分子机制。
annexin v-fitc细胞凋亡检测原理
annexin v-fitc细胞凋亡检测原理Annexin V-FITC（荧光素I同型体）细胞凋亡检测是一种常用的流式细胞术，用于检测细胞凋亡的早期事件。
该方法基于细胞表面的磷脂酰丝氨酸（PS）的外露，这是许多凋亡细胞的特征之一。
Annexin V是一种结合于PS上的蛋白质，它与FITC标记结合后，可以通过流式细胞仪检测到荧光信号。
以下是Annexin V-FITC细胞凋亡检测的基本原理：1.PS外露：在细胞凋亡过程中，磷脂酰丝氨酸（PS）会从细胞内层翻转到胞外层，暴露在细胞表面。
这一步骤是凋亡的早期事件之一，通常在细胞膜破裂之前发生。
2.Annexin V的结合：Annexin V是一种蛋白质，具有高亲和力与PS结合。
在细胞表面的PS外露后，Annexin V能够结合到PS上形成Annexin V-PS复合物。
3.FITC标记：Annexin V-FITC是一种带有荧光素I同型体（FITC）标记的Annexin V。
FITC是一种荧光标记，可以通过流式细胞仪检测。
4.流式细胞仪检测：经过Annexin V-FITC标记的细胞在流式细胞仪中被激发，FITC会发出荧光信号。
通过检测FITC的荧光信号，可以识别PS外露的细胞，从而确定细胞是否经历了凋亡。
通过Annexin V-FITC细胞凋亡检测，可以将细胞分为四个主要类别：活细胞（Annexin V-FITC和PI均阴性）、早期凋亡细胞（Annexin V-FITC阳性、PI阴性）、晚期凋亡细胞（Annexin V-FITC和PI均阳性）和坏死细胞（Annexin V-FITC阴性、PI阳性）。
这种方法常用于研究药物诱导的细胞凋亡、细胞毒性等生物学过程。
细胞凋亡 流式
细胞凋亡流式导言细胞凋亡（Apoptosis）是细胞程序性死亡的一种形式，被认为是生命发展中非常重要的一环。
细胞凋亡通过一系列精确的信号传导和分子机制来调控，以保持细胞内外环境的平衡。
流式细胞术（Flow cytometry）是一种高效的技术手段，可以用于检测和分析细胞凋亡。
细胞凋亡的定义与特征细胞凋亡是一种高度保守的细胞死亡方式，与其他形式的细胞死亡如坏死和自噬有明显的区别。
细胞凋亡的特征包括细胞体积减小、细胞核形态变化、染色体DNA切割以及胞外囊泡的形成等。
细胞体积减小细胞凋亡过程中，细胞体积逐渐减小是一个显著特征。
通常细胞凋亡前期，细胞体积较正常时期减小约20%至30%。
细胞核形态变化在细胞凋亡过程中，细胞核也经历一系列形态上的变化。
最早期细胞凋亡的特征之一是染色质浓缩沉积，出现核固缩现象，此时核仁消失。
后期细胞凋亡的特点是细胞核膨胀，染色质进一步凝缩，核质交界明显。
DNA切割和胞外囊泡的形成细胞凋亡进程中，细胞核DNA会出现明显的切割现象，形成特定的DNA片段。
这一片段长度通常为200bp的倍数，紧接着凋亡细胞进行DNA的固缩和包裹形成胞外囊泡。
细胞凋亡的信号传导机制细胞凋亡的调控包括许多信号传导分子和途径的参与，其中最关键是细胞凋亡信号通路的激活和效应基因的表达调控。
以下是细胞凋亡信号传导机制的一些重要组分。
细胞凋亡信号通路细胞凋亡信号通路主要包括内源性和外源性两类通路。
内源性通路通过一系列激活因子（如细胞因子、激素）调控细胞凋亡。
外源性通路主要是通过细胞外因素（如放射线、化学药物）诱导细胞凋亡。
Bcl-2家族蛋白Bcl-2家族蛋白是细胞凋亡过程中的一类重要调控因子。
Bcl-2家族蛋白包括抑制性成员和促进性成员，通过调节线粒体膜电位和细胞色素c释放等机制参与细胞凋亡。
单独凋亡信号通路除了Bcl-2家族蛋白，细胞凋亡信号通路中还有许多其他独立的分子机制参与调控。
例如，肿瘤坏死因子受体（TNFR）信号通路和热休克蛋白（HSP）信号通路等。
细胞凋亡检测方法
细胞凋亡检测方法细胞凋亡检测方法是利用特定的实验手段和技术来识别细胞凋亡的发生与否，观察细胞凋亡的程度。
细胞凋亡检测是生物过程中重要的一块，其能够反映细胞死亡的类型，从而可以帮助研究者确定细胞是否已经进入凋亡状态。
现在，细胞凋亡检测的常用方法有多样，包括水解酶活力分析、流式细胞术、免疫组化、细胞图像分析等。
1. 水解酶活力分析：水解酶活力分析法是目前使用最多的细胞凋亡检测方法，原理是以细胞内的水解酶活性（如肌酸激酶、核糖核酸酶）来反映细胞凋亡程度。
细胞凋亡检测方法将细胞悬液添加到活性检测液体，然后经过细胞溶解和脱水稀释后，细胞内的水解酶（如肌酸激酶或核糖核酸酶）就会被释放出来，测定其活力值。
通过比较正常细胞和凋亡细胞的活力值，可以判定细胞凋亡的程度。
2. 流式细胞术：流式细胞术是一种常用的检测细胞凋亡的方法，主要以细胞的DNA含量与形态特点作为检测凋亡的标志物。
通常，凋亡细胞的DNA含量要明显低于正常细胞，且凋亡细胞的形态特征也会发生明显的变化，比如大小、形状、酸性等。
3. 免疫组化：免疫组化是一种利用免疫细胞学技术检测细胞凋亡的方法，它主要是针对细胞凋亡伴随而出现的特定抗原，如多种酶、APO2.7及特有蛋白等。
通过洗涤细胞，并用带有特定抗原的抗体制作出免疫印迹，就可以观察到细胞凋亡的现象。
4. 细胞图像分析：这是一种以细胞形态及细胞图像分析来检测细胞凋亡的方法，主要是利用荧光显微镜或电子显微镜观察细胞，以及对被观察细胞的形态特点进行分析，根据细胞形态变化观察凋亡程度。
通过观察正常细胞与凋亡细胞的形态比较，便可以判断细胞是否进入凋亡状态。
上述是现时比较常用的细胞凋亡检测方法，它们都有一定的特点，可以根据不同的实验需求选择合适的检测方法。
然而，对于不同的细胞类型，其凋亡方式也可能会有所不同，可能需要使用不同的检测方法来进行识别细胞凋亡的发生与否。
因此，根据具体的实验，研究者可以选择合适的检测方法，配合研究凋亡发生机制，为研究凋亡提供科学依据。
流式细胞术检测凋亡的方法
洗细胞
TUNEL法(末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记法)
注意事项：
成纤维细胞、上皮细胞凋亡时并不发生核小体间DNA的断裂(DNA仅断裂为50300kb的大片段即终止)，TUNEL法的灵敏度无法检测出
产品名称 ApoBrdU DNA Fragmentation Assay Kit ApoDirect DNA Fragmentation Assay Kit
规格 25 tests/100tests 25 tests/100tests 25 tests/100tests 25 tests/100tests 25 tests/100tests
生产商 Biovision Biovision Biovision Biovision Biovision
注意事项：
固定：乙醇，不能用多聚甲醛。联科公司即将引进小片段DNA高效抽提试剂盒。
对照
(未诱导凋亡)
凋亡
(常规方法抽提)
凋亡
(高效抽提)
亚二倍体峰(凋亡峰)
注意事项：
试剂的选择---不能用抽提细胞核的试剂：
BD公司的Cycletest Plus DNA Reagent Kit (用去污剂Spermine tetrahydrochloride破膜) Beckman Coulter公司的DNA-Prep Reagent System (用DNA-Prep LPR破膜) 凋亡细胞的核碎片被误认为多个凋亡细胞； 进行有丝分裂的标本破膜后释放出的多个染色体或其聚集体被误认为多个凋亡细胞； 细胞辐射等造成的微核体也可被误认为多个凋亡细胞。
注意事项：
重悬于孵育缓冲液中
最近研究发现，线粒体膜电位的崩 溃在有些细胞中并不是细胞色素c和 AIF释放的必需条件。
细胞凋亡流式细胞术检测
该法简单、快速，但不适于常规多功能流式细胞仪 (不具备紫外光源)的检测。 主要有Caspases-3流式细胞检测试剂盒，Caspases-
2/ Caspases-4/Caspases-6/Caspases-7/Caspases-9等抗
体
2.6 DNA 碎片分析：Apo-BrdU
核酸内切酶活化使核小体内DNA断裂为50~300kb片段，裂解为200bp
通透性和对称性均会改变。
解决方法： 形态学特征是区分凋亡和坏死的“金标准”。
3.3 样本制备过程中凋亡细胞的选择性丢失：
贴壁培养细胞的分离
凋亡早期，细胞即脱离培养瓶表面并悬浮在培养液中。因此去除培养液， 然后加胰酶或EDTA消化的方法不可避免的会失去很多凋亡细胞。 ---将培养液和消化下来的细胞合在一起 胰酶消化本身就倾向于破坏细胞膜已破损的晚期凋亡和坏死细胞，导致 丢失。
2 细胞凋亡的流式检测方法
利用流式仪测定细胞光散射可对凋亡细胞进行分析 凋亡早期细胞因体积减小，胞浆及染色质固缩，FSC变 小，SSC增大 凋亡晚期细胞FSC、SSC均变小 坏死细胞则因细胞膜通透性改变，细胞肿胀， FSC 、 SSC 变大，胞膜破裂，胞内含物释出后 FSC 、 SSC 均变 小。
此法简单、可靠，由于凋亡时 细胞膜的改变大大早于DNA 的 改变，因此Annexin V/PI(或7-
AAD )双染色是检测早期凋亡
细胞的敏感方法。 由于该法必须用活细胞，因此 检测时间受到限制，且对凋亡 晚期细胞和坏死细胞无法准确 区分。
2.3 细胞内钙离子测定
Fluo-3-Am为新型的高度特异性Ca2+荧光指示剂，进入细胞后
2.1 PI单染检测
与细胞周期相同，利用PI染色，通过检测DNA含量来 同时判定细胞周期和凋亡。 凋亡过程中，细胞内核酸酶释放，细胞DNA发生有序
流式测细胞凋亡原理
流式测细胞凋亡原理
细胞凋亡是一种形态学特征独特的程序性细胞死亡方式，它在多种生理和病理状态下发挥重要作用。
流式细胞术可以用来分析和测量细胞凋亡，其中包括细胞表面标记物的检测和细胞染色。
流式细胞术是一种流式细胞仪结合荧光标记物的技术。
在细胞凋亡的研究中，最常用的荧光染料是亚碧菜素（annexin V）和PI（propidium iodide）。
亚碧菜素可以结合凋亡细胞表面的磷脂（phosphatidylserine），而PI则可以进入破损的细胞膜并结合DNA。
流式细胞术中，细胞样本首先经过适当的处理，如细胞固定和染色，以保持细胞形态并增强荧光信号。
然后，样本通过流式细胞仪中的流动通道，单个细胞经过激光束的照射而产生荧光信号。
流式细胞仪会同时检测和记录细胞的形态学特征和荧光信号。
在细胞凋亡的测量中，亚碧菜素和PI的荧光信号用于区分不同类型的细胞。
在正常细胞中，磷脂位于细胞膜的内侧，不会结合亚碧菜素。
而在凋亡细胞中，磷脂外露到细胞膜的外侧，可以与亚碧菜素结合。
通过检测亚碧菜素的荧光信号，可以确定凋亡细胞的比例。
同时，PI的荧光信号用于鉴定破损的细胞，因为PI只能进入破损的细胞并结合DNA。
通过流式细胞术，可以获得细胞凋亡的定量信息，例如凋亡细
胞的比例和凋亡细胞的亚型。
这对于研究细胞凋亡的机制以及相关疾病的发生和发展具有重要意义。
流式细胞术在细胞凋亡检测中应用
检测究竟是如何进行的呢？一、细胞凋亡检测的意义和方法正常细胞的周期时相 细胞凋亡和周期上图为流式测定细胞凋亡图，通过PI染色来测定细胞含量。
正常的细胞的周期为第一张图中所示的G1、G0期，S期、G2/M期，那么在G1、0期前面没有亚二倍体峰，也就是M1这个位置它的含量会很低。
这是一个正常细胞的周期时相，当这个细胞发生凋亡之后，在G1G0期的前面出现了一个亚二倍体峰，我们也把它叫做凋亡峰，M1这个位置细胞数百分率明显增多，相对其他的时相，G1G0、S期和G2/M期的含量就会相对减少。
（3）获取参数通过DNA含量分析所获取的、信息包括两个参数：凋亡细胞的百分率，和细胞周期当中其它时相的百分率。
（4）方法学评价DNA含量分析方法比较简便，而且经济，在临床上用的比较多，而且标本制备也比较容易，但是它有它的缺点：只有当凋亡细胞达到一定浓度的时候才能够检测出亡峰来。
所以在早期凋亡的时候采用DNA含量分析可能是不合适的，因为可能检测不出凋亡峰，含量太少。
所以比较适合的是中晚期凋亡的检测。
另外DNA含量分析也无法获取一些信息，也就是这个凋亡到底是S期还是G2/M期，有的时候无法反应这个情况。
2.Caspase-3活性的检测（1）原理检测原理主要是由于半胱氨酰基天冬氨酸蛋白酶家族，也叫做Caspases-3的家族有一种酶：是一个重要的凋亡指示蛋白，在凋亡发生的早期就可以被激活。
该酶的活性被激活之后，就在整个凋亡过程当中不断地升高，直到凋亡的晚期酶的活性才能够迅速下降。
因此，对Caspase-3酶的连续检测可以动态地观察凋亡的整个过程。
（2）检测试剂通常检测此酶的活性的试剂包括一个荧光底物，其中它的荧光基团被激活的Caspase-3切断后可以释放荧光物质，在380nm的紫外波长下发出450nm波长的荧光，这样就可以用流式细胞仪来检测。
我们通常通过对荧光强度的检测来测定出Caspase-3的活性并进行定量分析。
但是由于它是紫外激发的检测方式，因此对于没有紫外光的流式细胞仪是无法来获取Caspase-3的活性检测信息。
凋亡细胞线粒体膜电位的流式细胞术分析
凋亡细胞线粒体膜电位的流式细胞术分析近年来，细胞凋亡作为一种重要的细胞衰老和细胞死亡机制受到广泛关注。
为了研究凋亡细胞机制，研究人员需要准确有效地检测和识别凋亡细胞。
对细胞凋亡的研究已经发展了几种常用的方法，其中包括光学显微镜、荧光染色、流式细胞术、细胞膜电位分析等。
其中，流式细胞术是目前用于研究凋亡细胞的最为常用的方法。
流式细胞术是一种利用荧光染色技术和血液细胞分离技术检测细胞凋亡的方法。
该技术通过检测细胞膜电位变化，识别凋亡细胞及不同凋亡阶段的细胞。
在流式细胞术中，通过检测细胞膜电位的变化来识别凋亡细胞。
当细胞进入凋亡状态时，细胞膜电位会发生一定的变化，而流式细胞术可以通过检测细胞膜电位的变化来识别细胞的凋亡。
细胞膜电位的流式细胞术分析主要分为四个步骤：制备样品、检测细胞膜电位、识别凋亡细胞和统计凋亡细胞比例。
首先，将血液样品放入细胞分离器中，在较高的离心力下分离细胞；然后，将分离的细胞放入染色液中染色，然后根据不同的特征来分离凋亡细胞；接下来，在检测细胞膜电位时，首先需要对细胞单独放入孔板中；最后，测量离子通道变化和细胞膜电位变化，将它们转换成数字值，以获取凋亡细胞的活动状态，以用于衡量凋亡细胞的比率。
另外，线粒体膜电位分析是一种有效检测凋亡细胞的新方法。
线粒体膜电位是一种生物细胞内可检测的重要生物参数，是细胞凋亡中关键的生物参数之一，因此，它可以有效地检测凋亡细胞的活动状态和数量。
线粒体膜电位分析仪（MOPA）是一种专门用于研究凋亡细胞的新技术，它可以通过检测细胞线粒体膜电位的变化，准确地识别凋亡细胞，可大大提高凋亡细胞的检测灵敏度。
综上所述，凋亡细胞线粒体膜电位的流式细胞术分析是一种有效的凋亡细胞检测技术，通过流式细胞术识别凋亡细胞，并通过线粒体膜电位分析仪检测细胞线粒体膜电位的变化，可以高效、准确地检测凋亡细胞的活动状态及数量。
此外，该技术还可以研究细胞凋亡的机制，并用于进一步研究细胞的衰老和死亡机制，以期获得更多的科学发现。
凋亡细胞线粒体膜电位的流式细胞术分析
凋亡细胞线粒体膜电位的流式细胞术分析细胞凋亡是细胞的生物学程序，它的发生是维持肿瘤恶性发展和移植排斥的重要因素。
研究凋亡细胞的特征及其机制对于深入了解癌症的发生发展过程而言，具有重要的意义。
目前，研究凋亡细胞特征的常用方法为细胞形态学观察、流式细胞术检测各种凋亡指标等。
流式细胞术分析是目前研究凋亡细胞特征的最常用方法之一，用于定量检测凋亡细胞的线粒体膜电位（MMP）及其相关的细胞表面抗原的变化。
线粒体膜电位是指线粒体中的膜的电位，是一种特定的电势，是细胞正常运行的必要条件之一。
线粒体膜电位的变化是细胞凋亡的重要指标，可以反映线粒体功能的改变。
线粒体膜电位的改变会导致细胞周期节奏的失调，促进细胞凋亡的发生。
细胞凋亡可以通过细胞分裂周期节奏的破坏来诊断，其调节因子主要是线粒体膜电位（MMP）。
凋亡细胞线粒体膜电位的流式细胞术分析是一种工艺简单、灵敏度高的技术，可以快速、准确地检测凋亡细胞的线粒体膜电位及其相关的细胞表面抗原。
首先，细胞标记为流式细胞检测用的特定抗原，如细胞凋亡标记的细胞表面抗原（e.g., phosphatidylserine）；接着，将标记的细胞移植到流式细胞分析仪中，然后用流式细胞仪扫描凋亡细胞及其相关标志，最后检测线粒体膜电位及其他细胞表面抗原。
此外，利用流式细胞术可以观察不同细胞凋亡表型之间线粒体膜电位的差异，反映细胞凋亡性质的变化，从而深入了解凋亡机制。
凋亡细胞线粒体膜电位的流式细胞术分析非常有用，它可以定量检测特定细胞凋亡的标志，从而提供明确的诊断依据。
截至目前，研究者们已经实现了利用流式细胞术来检测细胞凋亡状态的变化，包括检测线粒体膜电位及其他细胞表面抗原的变化。
流式细胞仪的分析和检测方法不仅可以定量检测凋亡细胞的线粒体膜电位，而且可以检测凋亡细胞的形态特征，如细胞大小、形状、色素沉积等。
总之，凋亡细胞线粒体膜电位的流式细胞术分析是一种实用的技术，可以快速、准确地检测凋亡细胞的线粒体膜电位及其相关的细胞表面抗原。
流式检测凋亡的讨论
流式检测凋亡的讨论关于凋亡的流式检测wanhood一PI单染色法基本原理其原理主要是根据细胞凋亡时在细胞、亚细胞和分子水平上所发生的特征性改变。
这些改变包括细胞核的改变、细胞器的改变、细胞膜成分的改变和细胞形态的改变等，其中细胞核的改变最具特征性，主要包括以下几个方面：1. 细胞核的改变：由于凋亡细胞核的改变，造成各种染色体荧光染料对凋亡细胞DNA可染性发生改变。
研究表明，用各种染色体荧光染料对经固定的凋亡细胞进行染色，其DNA可染性降低。
许多学者把这种DNA可染性的降低认为是凋亡细胞的标志之一。
2. 光散射特性：凋亡细胞形态上的改变影响它们的光散射特性。
在流式细胞仪上，前散射光与细胞的大小有关，而侧散射光反映的是光在细胞内的折射作用，与细胞内的颗粒多少有关。
在细胞凋亡时，细胞固缩，体积变小，故前散射光降低，这一特性往往被认为是凋亡细胞的特点之一。
此外细胞凋亡时由于染色体降解，核破裂形成，细胞内颗粒往往增多，故凋亡细胞侧散射光常增加。
细胞坏死时，由于细胞肿胀，其前散射光增大；侧散射光在细胞坏死时也增大，因此可根据前散射光和侧散射光区别凋亡细胞和坏死细胞。
但需要注意的是，根据前散射光和侧散射光判断凋亡细胞的可靠性受被检测细胞形态上的均一性和核胞浆比率影响很大。
因此在某些淋巴细胞凋亡中，用光散射特性检测凋亡的可靠性较好，而在肿瘤细胞凋亡中，其可靠性就较差。
根据光散射特性检测凋亡细胞最主要的优点是可以将光散射特性与细胞的表面免疫荧光分析结合起来，用以区别经这些特殊处理发生选择性凋亡的淋巴细胞亚型。
也可用于活细胞的分类。
试剂与仪器PBS溶液（配制方法见附录）；PI染液：将PI溶于PBS（pH7.4）中，终浓度为100ug/ml。
用棕色瓶4℃避光保存。
70%乙醇400目筛网流式细胞仪实验步骤1. 收集细胞｛数目约（1~ 5）×106个/mL｝，500 ~ 1000 r/min离心5min，弃去培养液。
流式检测细胞凋亡的原理
流式检测细胞凋亡的原理细胞凋亡，简称细胞死亡，是指由程序性细胞死亡，是生物体正常生长发育过程中必须的一环。
细胞从生长到级别最高的有机体，都将涉及到细胞凋亡这个过程，否则生物体将无法完成正常生长发育。
流式检测细胞凋亡是常见的生物学试验之一，它可以对细胞进行快速、准确的检测，为后续实验研究提供便利。
下面将主要介绍流式检测细胞凋亡的原理和步骤。
一、细胞的凋亡过程细胞凋亡是一种生物化学过程，它的主要过程是细胞凋亡重要调节因子激活细胞衰弱程序，导致细胞内分子分解代谢剩余物质的过程。
在这个过程中，会发生细胞内蛋白质降解、DNA碎片形成等一系列现象，最终导致整个细胞的死亡。
二、流式检测细胞凋亡的原理流式细胞术是一种常用的细胞学分析技术，其主要原理是应用光学探测技术，通过单极性离子、核糖体染色剂、荧光染料等特殊化学试剂，将暴露在细胞表面的遗传信息和表面分子等特征，转化为光信号进行检测和分析。
流式检测细胞凋亡实质上是采用流式细胞术技术，基于不同的信息特征分析细胞内外的化学变化，在细胞凋亡过程中，有一些化学变化可以被检测。
- 流式细胞术的样品准备。
首先需要将待测细胞减少到相同的浓度范围，对于稀缺细胞或者活细胞，可以使用双空室离心管，在离心管内使用半鸟嘴型腔吸管反复冲洗，接着加入抗体或者荧光染料等化学试剂处理5-10分钟。
接下来，用含有凝血剂的PBS洗液洗涤细胞。
- 流式细胞术的检测参数选择。
检测细胞凋亡的重要参数可以是DNA含量、细胞膜透性变化以及染色体结构的改变等，但细胞膜透性变化用EthD-1可以更好的达到。
- 流式细胞术中细胞的检测。
将细胞样品通过荧光素与流动细胞术相结合后，开始对细胞悬液进行检测，检测细胞表面分子的化学信息和代谢分解活性。
细胞在流动中遇到光束时，根据不同的荧光信号输出，流式细胞术将其区分为不同的类型，以便进行进一步分析和研究。
三、流式检测细胞凋亡的步骤1. 细胞培养和收集。
首先要将细胞置于适宜的培养基中，促进其生长和细胞凋亡。
流式凋亡检测原理
流式凋亡检测原理
流式凋亡检测原理是一种基于流式细胞术的细胞凋亡检测方法。
细胞凋亡是一种自我程序性死亡方式，它在维持机体内部环境稳态和细胞生长发育中起着重要作用。
因此，对于细胞凋亡的研究具有重要的生物学意义。
流式凋亡检测原理基于细胞死亡过程中细胞膜磷脂外翻和细胞
核DNA片段化两个生物化学特性。
在细胞死亡的早期阶段，磷脂外翻导致细胞膜上的磷脂分子从细胞内侧翻转到胞外侧，使得细胞表面暴露出磷脂分子。
同时，DNA片段化会导致DNA碎片在细胞内释放。
流式凋亡检测原理利用荧光标记的磷脂分子和DNA染料，通过流式细胞术检测细胞膜上磷脂外翻和DNA片段化的信号，可以快速、准确地检测细胞凋亡。
该方法具有高灵敏度、高精度、高通量等优点，尤其适用于研究大量样本的凋亡检测。
总之，流式凋亡检测原理是一种重要的细胞凋亡检测技术，其原理和方法的研究可以为细胞凋亡的研究提供有力的技术支持。
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流式细胞仪常用的几种检测方法
流式细胞仪常用的几种检测方法转载一、测定用乙醇固定的DNA的含量1、培养细胞的DNA含量的测定制备单细胞悬液于200μl的PBS缓冲液中；加入2ml预冷的70%乙醇,4℃保存；附:细胞固定的一般步骤;并5 上机检测;3、石蜡包埋组织切片的DNA含量的测定1 从石蜡包埋切取切片50 μm厚,2~3片,制成单细胞悬液；2 用PBS缓冲液洗涤,500g离心5分钟,弃上清；3 加入PI液1ml室温避光30分钟；4 调整细胞浓度为1×106/ml；5 上机检测;二、细胞凋亡检测及相关分子检测1、细胞DNA含量分布由细胞DNA降解方式检测细胞凋亡²收集已固定的单细胞悬液约5×105~1×106/ml；²离心除去固定液,3ml PBS重悬细胞;² 1500rpm离心,5分钟 ,弃去PBS；²加PI染液1ml,室温避光20分钟；²调整细胞浓度5×105/ml；²上机检测;2、磷脂酰丝氨酸外翻分析检测细胞凋亡1 常规制备单细胞悬液,用PBS洗两次.若为全血要先溶血,取约5×106个细胞,1500rpm离用5 弃上清,加入20μl PE标记的Apo2.7 单克隆抗体和80μl PBSF液,用vortex轻轻震荡,室温避光孵育15分钟；6 加入2ml PBSF液,室温离心200g,6min；7 弃上清,加入1ml PBSF液重悬细胞；8 避光保存,直到流式细胞仪检测;PBSF：含2.5% FCSv/v和0.01%NaN3w/v的PBS;三、用流式细胞术进行DNA周期分析1、方法：同DNA含量检测2、注意：单细胞浓度应约106/ml,以免影响检测的CV值和检测结果；制备完成后的标本应用光学显微镜检查其质量如细胞是否聚集或过多碎片,以保证得到足够的细胞含量；醛类固定会影响PI与核酸的结合;四、免疫荧光标记法1、细胞膜上的免疫荧光检测法间接标记法1 制备单细胞悬液；,4 用PBS洗涤两次；5 加入第一抗体,室温30～60分钟,或4℃过夜,同时须设阴性对照或同型对照管；6 用PBS洗涤两次；7 加入二抗荧光标记的抗体室温20分钟,避光；8 用PBS洗涤1～2次,弃上清；9 重悬细胞于500μlPBS中,上机检测;直接荧光标记法①～⑤同间接荧光标记法；加入荧光素标记好的抗体,避光30分钟同时做同型对照管；用PBS洗涤１～２次,弃上清；加300μl PBS上机检测;细胞膜上及细胞内双标记法直标法1 取出已制备好的未固定的单细胞悬液1×10 6个细胞于试管中；2 用PBS洗涤两次；3 加入用荧光素标记的抗体来标记细胞膜上的抗原,同时加上阴性对照管,室温孵育20分钟；所标记的荧光颜色相同的同型对照来作为阴性对照;2、阳性对照的设置：在实验过程中如涉及到表达缺失或减少的实验,应设置阳性对照组,其设置方法与阴性对照设置相同;2、几点建议：1 在实验过程中,在保证实验的科学性和准确性的基础上,应尽量减少实验工序和过程;由于间接标记法的工序多,实验过程长,如再加之操作的不熟练,细胞更容易丢失和受损,而造成实验结果的误差;因此,在条件允许的范围内,建议尽量做直接标记法而不去做间接标记法,以保证实验的真实性和准确性;2 建议送检细胞一定要足够量,一般要求1×106个细胞;不要过少;因为,如细胞太少检测时样本流量相对会增大从而影响变异系数,结果也不可信;细胞量也不宜过多,因细胞量太多加入的抗体或染料相对不足,结果也由此受影响;3 同一种细胞需同时做双标记时,须做双标记的同型对照,且两种抗体所标记的荧光颜色务必不同;。
流式细胞仪检测细胞凋亡操作流程
流式检测细胞凋亡Annexin V检测细胞凋亡Annexin V (2)实验原理 (2)实验用品 (2)操作步骤 (3)Annexin V Blocking (5)凋亡细胞的断裂片段分析 (7)DNA实验原理 (7)实验用品 (8)操作步骤 (9)BrdU Flow Kits检测细胞增殖BrdU Flow (12)实验原理 (12)BrdU Flow Kits试剂盒 (12)结果分析 (17)流式仪器设置指南 (18)线粒体膜电位变化检测细胞凋亡 (22)实验原理 (22)实验用品 (22)样本制备 (23)结果分析 (24)注意事项 (24)Active Caspase-3检测细胞凋亡Active (26)实验原理 (26)实验步骤 (27)结果分析 (28)A n n e x i n V检测细胞凋亡实验原理Annexin V是检测细胞凋亡的灵敏指标之一。
它是一种磷脂结合蛋白，可以与早期凋亡细胞的胞膜结合，而细胞质膜的改变是细胞发生凋亡时最早的改变之一。
在细胞发生凋亡时，膜磷脂酰丝氨酸(PS)由质膜内侧翻向外侧。
Annexin V与磷脂酰丝氨酸有高度亲和力，因而与细胞外侧暴露的磷脂酰丝氨酸结合。
由于在发生凋亡时，磷脂酰丝氨酸外翻的发生早于细胞核的改变，因此，与DNA碎片检测比较，使用Annexin V可以更早地检测到凋亡细胞。
因为细胞坏死时也会发生磷脂酰丝氨酸外翻，所以Annexin V常与鉴定细胞死活的核酸染料(如PI或7-AAD)合并使用，来区分凋亡细胞(Annexin V+/核酸染料-)与死亡细胞(Annexin V+/核酸染料+)。
实验用品1. 一次性12×75mm Falcon试管。
2. PBS缓冲液：含0.1%NaN3，过滤后2-8°C保存。
3. 微量加样器和加样头。
4. Annexin V Binding Buffer缓冲液（Cat. No. 66121E）：浓度为10×，使用时，用稀释为1×浓度的应用液。
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活化Caspase的检测
1. 荧光标记的Caspase抑制性底物 注意事项：
荧光标记的Caspase抑制性底物的特异性不够高，在凋亡细胞中可能也会与Caspase 以外的蛋白结合。适用于区分凋亡和坏死的细胞。
产品名称 CaspGLOWTM Green(Red) Multi-Caspase Staning Kit CaspGLOWTM Green(Red) Caspase-2 Staning Kit CaspGLOWTM Green(Red) Caspase-3 Staning Kit CaspGLOWTM Green(Red) Caspase-8 Staning Kit CaspGLOWTM Green(Red) Caspase-9 Staning Kit
注意事项：
固定：乙醇，不能用多聚甲醛。联科公司即将引进小片段DNA高效抽提试剂盒。
对照
(未诱导凋亡)
凋亡
(常规方法抽提)
凋亡
(高效抽提)
亚二倍体峰(凋亡峰)
注意事项：
试剂的选择---不能用抽提细胞核的试剂：
BD公司的Cycletest Plus DNA Reagent Kit (用去污剂Spermine tetrahydrochloride破膜) Beckman Coulter公司的DNA-Prep Reagent System (用DNA-Prep LPR破膜) 凋亡细胞的核碎片被误认为多个凋亡细胞； 进行有丝分裂的标本破膜后释放出的多个染色体或其聚集体被误认为多个凋亡细胞； 细胞辐射等造成的微核体也可被误认为多个凋亡细胞。
活化Caspase的检测
1. 荧光标记的Caspase抑制性底物 检测方法：
诱导细胞凋亡
检测特点：
简单； 灵敏
加入荧光标记的抑制性底物 (如FITC-VAD-FMK等) 37oC孵育0.5-1小时 离心、洗涤2次
快速(0.5-1小时)
重悬细胞、流式分析
FITC:FL1；Rhodamine:FL2
例证：
化疗后患者骨髓中的非凋亡细胞，主要是单核和巨噬细胞中可发现大量的凋亡小体，且 TUNEL法检测时强阳性。 Bedner E., Li X., et al. 1999. Cytometry 29:191-196
加荧光标记的Annexin V和PI 室温、避光孵育5分钟 活细胞 早期凋亡细胞 流式细胞仪检测结果
细胞膜事件—Annexin V
检测特点：
简便、快速、准确区分活细胞、凋亡细胞和坏死细胞。
注意事项：
细胞制备(如贴壁细胞)或储存时细胞膜的破损会导致PS跨膜分布的改变，造成假阳性； 巨噬细胞或其他细胞吞饮凋亡小体时，Annexin V检测也会阳性。
核染色质凝缩
★ 线粒体膜电位丧失
凋 亡 启 动
★ 细胞膜PS外翻
凋 亡 小 体 形 成
激 活
★ 核碎片形成
★DNA被切割成低分子量片段
细胞内酸化
细胞膜事件
多色流式分析试剂典范
细胞膜事件—Annexin V
正常细胞(Normal Cell):
染料—JC-1(5,5’ 6,6’-tetrachloro-1,1’,3,3’-tetraethylbenzimidazolylcarbocyanine iodide)
亲脂性阳离子荧光染料 正常细胞—线粒体内多聚体---红色荧光(Ex:488nm, Em:580/590nm) 凋亡细胞—细胞质内单 体---绿色荧光(Ex:488nm, Em:510/527nm)
喜树碱(Campothecin)(2uM)诱导Jurkat 细胞4小时，收集细胞并用 CaspSCREEN Caspase Screening Kit(产品编号：K200-100)染 色，流式分析。
活化Caspase的检测
2. Caspase底物 检测方法：
收集细胞并重悬于D2R Incubation Buffer(孵育液)中
膜内----磷脂酰丝氨酸(PS) 膜外----磷脂酰胆碱、鞘磷脂
凋亡细胞(Apoptotic Cell):
膜内----磷脂酰丝氨酸(PS) 膜外----磷脂酰胆碱、鞘磷脂、PS
细胞膜事件—Annexin V
检测方法：
独立的核 膜破损严重的细胞 晚期凋亡细胞
坏死细胞
收集细胞并重悬于Binding Buffer(结合液)中
注意事项：
重悬于孵育缓冲液中
最近研究发现，线粒体膜电位的崩 溃在有些细胞中并不是细胞色素 AIF释放的必需条件。
流式分析
FL1:凋亡细胞；FL2:正常细胞
产品名称 MitoCaptureTM Apoptosis Detection Kit
产品编号 K250-25 K250-100
规 格 25 tests 100 tests
非典型性凋亡 操作不当 TUNEL实验时TdT酶因保存不当而失活；染色时出现错误。
解决方法：
设立阳性质控 设立阴性质控 自己制备质控细胞或由公司提供(如TUNEL法试剂盒内包含了阳性和阴性质控细胞)
检测时面临的问题
2. 凋亡假阳性：
产生原因：
PS的外翻使得凋亡细胞和凋亡小体很容易被邻近的细胞所吸附并被吞噬 吞噬细胞 并非仅为专职的吞噬细胞(如单核和粒细胞)，成纤维细胞或上皮细胞也具吞噬作用。 尤其是实体瘤，常可见在凋亡细胞周围的肿瘤和非肿瘤细胞中有含有凋亡小体的吞噬体。 邻近细胞吞噬凋亡细胞后的残留物中即包含了变化的细胞膜、断裂DNA等凋亡特征物。 即使很轻微的处理，如胰酶消化、机械振荡、细胞刮取等，均会造成PS的外翻。
凋亡简介
多色流式分析试剂典范
凋亡与坏死
凋亡的途径
外源性途径
内源性途径
凋亡启动
细 胞 内
凋亡早期
凋亡中期
脱水致细胞皱缩
凋亡晚期
Ca2+ 动 员 ★ Caspase
TUNEL法(末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记法)
检测方法：
固定：多聚甲醛(交联型)
洗细胞 固定细胞/组织
TUNEL/PI双染：
区分凋亡和非凋亡细胞 同时分析细胞周期 Apo-BrdU Kit TdT/BrdU 标记细胞 洗细胞 Anti-BrdU-FITC 染细胞 PI/Rnase处理 洗细胞 洗细胞 PI/Rnase处理 流式分析 流式分析 Apo-DIRECT Kit TdT/FITC-dUTP 标记细胞
细胞凋亡时活化Caspase-3的检测。
Jurkat 细胞无诱导(A)或用喜树碱诱导6h后，使用CaspGLOWTM FITC Caspase3 Staining Kit(产品编号：K183-100)检测活化的Caspase-3。
检测原理：
荧光标记的Caspase抑制性底物被凋亡细胞 摄取并结合，而正常细胞不能结合该底物。 因此洗涤后，凋亡细胞可检测到荧光，正常 细胞则不能。
洗细胞
TUNEL法(末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记法)
注意事项：
成纤维细胞、上皮细胞凋亡时并不发生核小体间DNA的断裂(DNA仅断裂为50300kb的大片段即终止)，TUNEL法的灵敏度无法检测出
产品名称 ApoBrdU DNA Fragmentation Assay Kit ApoDirect DNA Fragmentation Assay Kit
活化Caspase的检测
2. Caspase底物 D2R [(aspartyl)2-rhodamine 110，二门冬氨酰-罗丹明110] –Caspase通用底物
膜通透性高 D2R为非荧光物质 D2R被活化的Caspase剪切后，释放出Rhodamine110，发出绿色荧光
CaspSCREEN 凋亡检测试剂盒对凋亡的分析。
生产商 Biovision Biovision
Caspase事件
多色流式分析试剂典范
活化Caspase的检测
1. 荧光标记的Caspase抑制性底物 荧光标记的Caspase抑制性底物
膜通透性高；不可逆结合
产品编号 K401-60 K401-60
规 格 60 tests 60 tests
生产商 Biovision Biovision
检测中面临的问题
多色流式分析试剂典范
检测时面临的问题
1. 阳性和阴性质控：
产生误差的原因：
FITC(Rhodamine)-VAD-FMK(通用) FITC(Rhodamine)-VDVAD-FMK(Caspase-2) FITC(Rhodamine)-DEVD-FMK(Caspase-3) FITC(Rhodamine)-IETD-FMK(Caspase-8) FITC(Rhodamine)-LEHD-FMK(Caspase-9)
注意事项：
BrdUTP的掺入率显著高于dUTP，因此检测灵敏度高；而且经济。
TUNEL法(末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记法)
凋亡细胞
凋亡细胞
用树碱(CPT)诱导HL-60细胞凋亡，0、120和150分钟时用TUNEL(BrdUTP)/PI双染法检测DNA断裂，同时分析细胞周期。可见凋亡随着诱导时 间的增加而增多，且可知凋亡发生的时相。
流式检测细胞凋亡几种方法的比较
2005 年 10月 合肥
多色流式分析试剂典范
凋亡简介 细胞膜事件 线粒体事件 Caspase事件 细胞核事件 检测中面临的问题
多色流式分析试剂典范
线粒体事件
多色流式分析试剂典范
线粒体膜电位(△Ψm)的崩溃
发生在凋亡的早期 可能与细胞色素c和AIF的释放相关， 在存在活化Caspase的细胞中持续 一段时间后恢复正常