猪瘟疫苗的及制作过程

该病毒不产生细胞病变效应(CPE)，可连续多次 收液。取已形成良好单层的牛睾丸细胞（或羊肾 细胞），弃去培养液，接种含3%～5%细胞毒种 或0.2%～0.3%脾毒种的维持液。接毒后4或5日第 一次收获换液，以后每4－6日收获换液1次，可 连续12～15收左右，有的厂家可收更多。一般来 说，12～15收前的毒价合格率高，疫苗质量好。 接毒时，细胞生长状态的好坏影响细胞产毒。也 可对细胞带毒分散，分散比率1：4左右，可增加 收次和产量。
猪瘟疫苗的概述及制作过程
08动医班 401宿舍
猪瘟疫苗生产历程
1956—1957 猪瘟脾淋组织苗（湿苗） 1958—1959 猪瘟脾淋组织苗（湿苗） 1959—1963 猪瘟脾淋组织冻干苗
1964—1971 猪瘟乳兔组织苗（湿苗） 猪瘟牛体反应苗（湿苗）
1972—1973 猪瘟乳兔组织苗（湿苗） 猪瘟牛体反应苗（湿苗）
1）细胞培养液（乳汉液）营养不足，尤其是使用高压灭 菌液，高温可使一些营养成分损失，造成细胞生长状态不 良；
2）细胞培养液较多存在外源病毒，尤其是牛病毒性腹泻 病毒（BVDV）会直接造成病毒滴度降低；
3）成熟释放的病毒在维持液中耐受性较差，造成病毒滴 度较低；
4）病毒毒种毒力较低，并在传代过程中弱化。
牛血清+1%双抗（青/链霉素），pH7.0～7.2左右。 3、维持液 目前的维持液为乳汉（欧）液，或MEM＋2～5%新生牛
血清+1%双Hale Waihona Puke Baidu（青/链霉素），pH7.4～7.6。
细胞生长良好的几个注意事项
（1）制苗用细胞应选用非猪瘟疫区，无口蹄疫、粘膜病等 传染病地区的1～4日龄健康小公牛或10日龄以内的健康羔 羊。其家H健康生长的
3、猪瘟病毒的抗原性和血清学与牛粘膜/病毒性腹泻病毒 (MD/BVDV)密切相关，两者同源性很高，能互相诱导一 定程度的同源病毒抗体，细胞或培养液中若存在牛病毒性 腹泻病毒(BVDV)及其抗体，可与猪瘟病毒发生中和反应 ，造成疫苗生产的失败。
病毒收获液毒价不高的可能原因
如果病毒收获液毒价不高，即病毒家兔感染量（RID）较 低，制成的疫苗易造成免疫失败。猪瘟疫苗生产中毒价不 高的可能原因：
，容易导致细胞不贴壁生长。
二、 病毒感染、维持和收获
1.生产用毒种有脾毒和细胞毒，脾毒是用选择定 型热反应兔脾脏冷冻或冻干保存制备的；细胞毒 是将用新鲜脾毒制成0.3%～0.5%的病毒悬液接种 生长良好的牛睾丸细胞或羊肾单层细胞，取二收 、三收的细胞培养液作为生产用毒种。脾毒应选 择兔体反应在36小时之前，同时防止脾毒采集过 程的污染。
将检验合格的病毒培养液和5%蔗糖脱脂牛奶稳 定剂按一定比例混合，分装，进行冻干。
猪瘟病毒的病毒特征
1、猪瘟病毒（HCV）感染细胞超薄切片的电子显微镜观 察表明，该病毒颗粒在膜结合的胞浆内空胞中装配并成熟 ，然后经胞外释放。
2、56℃处理60分钟或60℃10分钟可灭活细胞培养液中的 HCV。HCV在pH5～10时稳定，pH5.2时最适宜生长，但在 低于pH4或高于pH11时快速灭活。
（2）培养基和血清的质量可靠、稳定。应确保无外源病毒 、支原体、细菌等污染，无牛病毒性腹泻病毒（BVDV）及 其抗体。用于生产猪瘟细胞苗的牛血清都要事先检测有无 BVDV中和抗体的存在。
（3）制备原代牛睾丸细胞时，防止细胞消化过度。 （4）合适、营养丰富的细胞培养基。丰富的营养成分对细
胞的生长、带毒状态维持和毒价的提高有直接影响。 （5）转瓶的洗涤应遵循严格的清洗程序。转瓶洗涤不干净
1974—1975 猪瘟乳兔组织冻干苗 1976—1981 猪瘟乳猪肾细胞冻干苗 1981—1983 猪瘟乳兔组织冻干苗 1982—1987 猪瘟羊肾细胞冻干苗 1987—2002 猪瘟牛睾丸细胞冻干苗 2002至今 猪瘟牛睾丸细胞冻干苗
猪瘟脾淋组织冻干苗
猪瘟疫苗系列
1.猪瘟细胞苗 （1）普通苗 （2）零免苗 （3）精制苗 （4）政府采购专用苗
2.猪瘟脾淋苗 （1）普通苗 （2）政府采购专用苗
我国猪瘟的流行特点
流行范围广 呈散发流行趋势 发病年龄小，成年猪带毒现象严重 非典型和繁殖障碍型猪瘟增多 免疫失败现象严重 与猪蓝耳病、猪园环病毒病、猪伪狂犬病、猪链球菌病、
猪肺疫等并发或继发感染
我国猪瘟疫苗的特点
我国的猪瘟疫苗是用中国系猪瘟兔化弱毒 株（简称C株）生产的，它是我国于20世纪 50年代初期，从河北省石家庄地区的患猪瘟 的病猪中分离到的一株猪瘟强毒，称为石 门株（Shimen strain），将该强毒株通过大 耳白兔经历4年多时间，传代至430代，使毒 力减弱成为疫苗株，即C株。
猪瘟疫苗生产工艺改进的几点考虑
1、使用化学成分明确的细胞培养基 化学成分明确的细胞培养基一方面能提供足够的营养，供细胞生长，同时避免动物来
源成分（如由水解乳蛋白）带来外源病毒（如BVDV）及其抗体的污染。 2、使用低血清细胞培养基，减少血清使用量，提高细胞维持时间 清大天一有适合细胞培养生长的低血清MEM（MD611）细胞培养基，可使血清使用量
猪瘟免疫失败的原因
疫苗质量不高 疫苗管理不当 免疫程序不合理 猪群中存在其它免疫抑制病感染 母猪持续感染和仔猪胎盘感染——是免疫失败的重要原因
猪瘟亚临床感染→胎盘感染→母猪繁殖障碍→仔猪带毒 →后备母猪→ 亚临床感染 免疫后过敏反应时有发生
猪瘟疫苗的制作过程
一、细胞培养 1、制苗用细胞 牛睾丸细胞或羊肾细胞。 2、生长培养液 目前的细胞培养液为乳汉（欧）液，或MEM＋10%新生
C株的特点： ①免疫原性良好，经肌肉注射可产生坚强的免疫
力，并可维持1~2年。 ②免疫力产生快，48小时产生完全免疫力，96小
时产生坚强免疫力。
③安全性高，反应小，各种类型的猪均可使用 ， 剂量加大至10~20头份甚至更大无明显不良反应。
④稳定性好，不变异，不散毒，不返祖。C株疫 苗早已是被世界公认的优秀疫苗，并在国内及其 它国家广泛应用获得很高的评价。