神经细胞黏附分子NB-3在调节胚胎来源神经干细胞分化和迁移中的作用
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５０ ９ ＷＷ ｒｈ ｂ ．Ｏ ｔ ｃ Ｗ．ｅ ａ ｉ ｔ ．ｎ Ｃ ｔ
中 复 亏 未 ２１ Ｆ ７ 第７ 两腐 区 骠 ０ ＆， 卷， 期 ２ 第２
质 等 。 神 经 细 胞 黏 附 分 子 （ｅｒｌｃｌ ｄ ｅｉｎ ］ ｎｕａ ｅｌ ｈｓ ａ ｏ ｍｏ ｃｌ，Ｎ Ａ 是 在 神经 系 统 中介 导 细胞 与 细胞 、 ｌ ｕｅ Ｃ Ｍ） ｅ
Ａ ｂｓ ｒ ｃ ｔａ ｔ
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摘 要
欣 赵
华 吴奎 武 。 朱玲 玲
范 明
目的： 探讨 Ｎ ３ 因在调节小 鼠探讨神经干细胞分化 和迁移 中的作用。 Ｂ基 方法： 分离培养来 源于 Ｅｌ． Ｂ 缺失 和野 生型小 鼠海 马的神经前体 细胞 ， ４５ Ｎ ３ ｄ 通过 免疫 荧光染色 方法检测 Ｎ ３ Ｂ 缺失 对神经干细胞 （ Ｓ ｓ诱导分化后神经元分化和迁移 的影 响。 ＮＣ） 结果： Ｎ ３ ① Ｂ 在体外培 养的神经 干细胞 中表达 ， 并和干细 胞的标记分 子 Ｎ ｓｎ ｅｆ 共定位 ； Ｎ ３ 因缺 失后对 神经干 ｉ ② Ｂ基 细胞 的体外增殖 能力无明显影响 ， 在用 ｌ 但 ％胎牛血清诱导分化后 ， Ｂ 缺失 的神经 干细胞产生更多 的神经元 ； Ｎ３ ③与 对照组相 比 ， Ｎ ３ 因缺失 的神经 干细胞分 化而来 的神经元表现为相互聚集而不 向神经球外迁移 。 从 Ｂ基 结论 ： Ｂ 在神经元 的再生 和迁移 中具有一 定的调节作用。 Ｎ３ 关键词 神 经黏附分子 ； 神经干 细胞 ； 迁移 ； 化 分
ｍ ｎ Ｓ．
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分 化和 迁移 的影 响 。
１ 材料 与方 法 １１ 实验 动物 ．
Ｎ ３ 基 因小 鼠 由本 院 动 物 中心 饲 养 和 繁 殖 。 Ｂ转
小 鼠妊 娠 时 间 的计 算 ：— ８ 龄 Ｎ ３ ６ 周 Ｂ 杂合 子 雄性 和
雌性小 鼠于傍晚合笼 ， 日清晨检查阴栓后 ， 次 分开饲 养 ， 为 ０５ （ ０５ 。 记 ． Ｅ ．） ｄ
Ｄ Ｉ ０３ ６ ／ｉ ｎ１０ — ２ ２２ １ ．７０ ２ Ｏ ： ．９９ｊｓ ． １ １４ ．０ ２０ ． １ ．ｓ ０ ０
等 几 个 不 同 的 阶段 。而 这 些 过 程 又 是 由不 同 的 内
外因素共 同调节 的， 如生长 因子 、 细胞因子 、 胞外基
基金项 目： 国家 自然科学基金面上项 目 ３ ６ ０ ９ ；０ ７ ７ ９ ； （ ７７２３８０９） ０ 北京市 自然科 学基金 面上项 目（ ９ ０ ３ ５ ２２） ０ １ 军事 医学科 学院基础医学研究所认知科学研究 室， 北京 ， ０ ５ ；２ 军事医学科学院基础医学研究所 ；３ 通讯作者 １ ８０ ０ 作者简介 ： 赵彤 ， ， 女 硕士 ， 助理研究员 ；收稿 日 ： １－ ２ ２ 期 ２ １０—８ ０
离培养来 源于胚胎 １．天小 鼠海马 的神经前体 细 ４ ５
胞 ， 过 免 疫荧 光 染 色 的方 法 检 测 Ｎ ３ 失 对 神 经 通 Ｂ缺
干 细 胞 ｎ ｕａ ｓ ｍ／ｒｇ ｎ ｏ ｅ ｓ Ｓ ｓ 的 增 殖 ｅ ｒｌ ｔ ｐｏ ｅ ｉ ｒ ｃｌ ，Ｎ Ｃ ） ｅ ｔ ｌ
处 理 过 ３ｍｍ培 养 皿 。诱 导 分 化 液 为含 １ ５ ％胎 牛血 清 的 Ｄ Ｍ Ｆ２其 中添 加 １ Ｂ ＋ ％ Ｎ培 养 ５ ｄ ＭＥ ／ｌ ， ％ １ —７ 后 ， ４ Ｐ Ａ（ 聚 甲醛 ） 用 ％ Ｆ 多 室温 固定 ３ ｍｎ ０ ｉ。进 行神 经元 标 记分 子 Ｔ ｊ免 疫荧 光染 色检 测 。 ｕ １ １５ 免疫 荧光 染 色检 测 ． 将 固 定 后 的神 经 干 细 胞 或 分 化 后 的细 胞 ， 用 ０ＯｍｏＬ Ｐ Ｓ ３次 ； ３ ．ｌ ｌ Ｂ 洗 ／ 用 ％马／ 血 清 （．％ Ｔｉ 羊 ０３ ｒ — ｔｎ 一 ０ 稀 释） 温 ３ｒｉ； 加适 当 比例 稀 释 的一 ｏＸ １０ 室 ０ ｎ滴 ａ 抗 （ Ｂ ３ 体 １２ ０ Ｒ Ｄ Ｓ ｓ ｍ 或 Ｎ ｓｎ 体 １ Ｎ一抗 ：０ ； ＆ ｙｔ ｓ ｅ ｅｔ 抗 ｉ ：
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１ ， 主要 试剂 ２
１０ ； ｕ１ 体 １ ２０ ； ｈｍｃｎ ， ℃孵育 过夜 ； ００ Ｔ ｉ抗 ：００ Ｃ ｅ ｉ ） ４ ｏ
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于 以下 实 验研究 。
附分 子 ， 于免 疫 球 蛋 白超 家族 的 Ｃ ｎａｔ ］ 属 ｏｔｃｎ亚 家 ｉ 族 ， 中表 达 于神 经 系 统 ， 神 经元 的形 成 ， 集 对 突起 的 生 长具 有 重要 的调控 作用 。 目前对 于 Ｎ 一 Ｂ ３的研
究报道较少 ， 研究拟利 用 Ｎ ３ 因敲除小 鼠， 本 Ｂ基 分
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文献标识码 ： Ａ 文章编号 ：０ １ １４ （０ ２ 一 ７ ０ ９ — ４ １０ — ２ ２ ２ １ ）０ — ５ ０ ０ 中图分 类号 ： ２ ９ Ｒ ９ Ｑ ４ ，４
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ｃｎ ，２ １ ，２ （ ） ９ ＿ ５ ３ ｉｅ ０ ２ ７ ７ ：５ ｏ 一 ９
１ 神 经干 细胞 的诱 导分 化 ． ４ 将 传 至 Ｐ 代 生 长 ４ ｄ的神 经 干 细胞 球 （ 含 ２ —６ 约
２ （ ３ ０ 细 胞 ） 用 胰 酶 消 化 吹散 为 单 细 胞 （ ０卜 ０ 个 ， １ Ｘ １ ｃｌ ／ 的 密 度 ） 液 ， 种 于 ０１ ０ ｅｓ ｌ ｍｌ 悬 接 ．％多 聚赖 氨 酸
Ｃ ｉｅ ｕｎｌｆ ｅ ａｉｔｔ ｎＭｅｉｎ，Ｊ１ ０２ ｏ ２， ｏ ｈｎｓ Ｊ ｒａ Ｒ ｈ ｂｌａｉ ｄｃ ｅ ｕ． １，Ｖ １ ７ Ｎ ． ｅｏ ｏ ｉ ｏ ｉ ２ ． ７
・Biblioteka Baidu
基础 研 究 ・
神经细胞黏附分子 Ｎ 一 在调节胚胎来源神经干细胞 Ｂ３ 分化和迁移中的作用
赵 彤 黄
后 进 行 细 胞计 数 ， ２Ｘ１ ｃ ｌ ｍ 密 度重 悬 于 培 以 ０ ｅ ｓ／ ｌ ｌ 养 液 Ｄ Ｍ／１ （ １ ｌ ， ％Ｐ ， ％Ｂ ７ ｌ ： ＭＥ Ｆ ２ 含 ％Ｇ ｕ ｌ Ｓ １ ２ ， ％Ｎ ，
细胞与细胞外基质问相互识别 、 黏附和信号转导的 重 要 信 号 分子 。对 于 脑 组织 形 态 、 经 元 延伸 、 神 建 立 突触 连 接及神 经 细胞 间相 互作 用 等方 面都 有重 要
意 义 。神 经 细胞 黏 附分 子 Ｎ 一 是 １９ 年 发 现 的黏 Ｂ３ ９６
２ ｎ Ｆ Ｆ和 ２ｎ Ｇ ） ０ｇｂ Ｇ ０ｇ Ｅ Ｆ 中 ， 种 于 ２ｃ 养 瓶 接 ５ｍ 培
中培养 。培养 ５ ７ 后 ， ０１ ５ — ｄ 用 ．２ ％胰 酶消 化 ， 轻 吹 轻
散 细 胞 至单 细胞 悬 液进 行 传代 ， ２ ５ 的细 胞 用 第 — 代
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神经 系统 的发 育是 一 个 比较 复 杂 的过 程 ， 主要 经 历 细胞 的增 殖 、 化 、 移 、 起 生 长 、 成 突 触 分 迁 突 形
ｃｌ（ Ｓ ｓ ｅｓ Ｃ） ｌＮ ．
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中 复 亏 未 ２１ Ｆ ７ 第７ 两腐 区 骠 ０ ＆， 卷， 期 ２ 第２
质 等 。 神 经 细 胞 黏 附 分 子 （ｅｒｌｃｌ ｄ ｅｉｎ ］ ｎｕａ ｅｌ ｈｓ ａ ｏ ｍｏ ｃｌ，Ｎ Ａ 是 在 神经 系 统 中介 导 细胞 与 细胞 、 ｌ ｕｅ Ｃ Ｍ） ｅ
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摘 要
欣 赵
华 吴奎 武 。 朱玲 玲
范 明
目的： 探讨 Ｎ ３ 因在调节小 鼠探讨神经干细胞分化 和迁移 中的作用。 Ｂ基 方法： 分离培养来 源于 Ｅｌ． Ｂ 缺失 和野 生型小 鼠海 马的神经前体 细胞 ， ４５ Ｎ ３ ｄ 通过 免疫 荧光染色 方法检测 Ｎ ３ Ｂ 缺失 对神经干细胞 （ Ｓ ｓ诱导分化后神经元分化和迁移 的影 响。 ＮＣ） 结果： Ｎ ３ ① Ｂ 在体外培 养的神经 干细胞 中表达 ， 并和干细 胞的标记分 子 Ｎ ｓｎ ｅｆ 共定位 ； Ｎ ３ 因缺 失后对 神经干 ｉ ② Ｂ基 细胞 的体外增殖 能力无明显影响 ， 在用 ｌ 但 ％胎牛血清诱导分化后 ， Ｂ 缺失 的神经 干细胞产生更多 的神经元 ； Ｎ３ ③与 对照组相 比 ， Ｎ ３ 因缺失 的神经 干细胞分 化而来 的神经元表现为相互聚集而不 向神经球外迁移 。 从 Ｂ基 结论 ： Ｂ 在神经元 的再生 和迁移 中具有一 定的调节作用。 Ｎ３ 关键词 神 经黏附分子 ； 神经干 细胞 ； 迁移 ； 化 分
ｍ ｎ Ｓ．
Ａ ｔ ｏ‘ ａ ｄ ｅｓ Ｄ ｐ￣ ｅ ｔｏ ｏｎｔ ｅ Ｓｉ ｃ，Ｉｓｔｔ ｏ ａｉ Ｍｅ ｉ ｌＳ ｉ ｃｓ ｅ ｉｇ ０ ８ ０ ｕ ｈ ｒ ｄ ｒｓ Ｓ ｅａ ｍ ｎ ｆＣ ｇ ｉｖ ｃ ｎ ｅ ｎｔｕｅ ｆＢ ｓ ｄｃ ｃ ｎ ｅ，Ｂ ｉｎ，１０ ５ ｉ ｅ ｉ ｃ ａ ｅ ｊ
分 化和 迁移 的影 响 。
１ 材料 与方 法 １１ 实验 动物 ．
Ｎ ３ 基 因小 鼠 由本 院 动 物 中心 饲 养 和 繁 殖 。 Ｂ转
小 鼠妊 娠 时 间 的计 算 ：— ８ 龄 Ｎ ３ ６ 周 Ｂ 杂合 子 雄性 和
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等 几 个 不 同 的 阶段 。而 这 些 过 程 又 是 由不 同 的 内
外因素共 同调节 的， 如生长 因子 、 细胞因子 、 胞外基
基金项 目： 国家 自然科学基金面上项 目 ３ ６ ０ ９ ；０ ７ ７ ９ ； （ ７７２３８０９） ０ 北京市 自然科 学基金 面上项 目（ ９ ０ ３ ５ ２２） ０ １ 军事 医学科 学院基础医学研究所认知科学研究 室， 北京 ， ０ ５ ；２ 军事医学科学院基础医学研究所 ；３ 通讯作者 １ ８０ ０ 作者简介 ： 赵彤 ， ， 女 硕士 ， 助理研究员 ；收稿 日 ： １－ ２ ２ 期 ２ １０—８ ０
离培养来 源于胚胎 １．天小 鼠海马 的神经前体 细 ４ ５
胞 ， 过 免 疫荧 光 染 色 的方 法 检 测 Ｎ ３ 失 对 神 经 通 Ｂ缺
干 细 胞 ｎ ｕａ ｓ ｍ／ｒｇ ｎ ｏ ｅ ｓ Ｓ ｓ 的 增 殖 ｅ ｒｌ ｔ ｐｏ ｅ ｉ ｒ ｃｌ ，Ｎ Ｃ ） ｅ ｔ ｌ
处 理 过 ３ｍｍ培 养 皿 。诱 导 分 化 液 为含 １ ５ ％胎 牛血 清 的 Ｄ Ｍ Ｆ２其 中添 加 １ Ｂ ＋ ％ Ｎ培 养 ５ ｄ ＭＥ ／ｌ ， ％ １ —７ 后 ， ４ Ｐ Ａ（ 聚 甲醛 ） 用 ％ Ｆ 多 室温 固定 ３ ｍｎ ０ ｉ。进 行神 经元 标 记分 子 Ｔ ｊ免 疫荧 光染 色检 测 。 ｕ １ １５ 免疫 荧光 染 色检 测 ． 将 固 定 后 的神 经 干 细 胞 或 分 化 后 的细 胞 ， 用 ０ＯｍｏＬ Ｐ Ｓ ３次 ； ３ ．ｌ ｌ Ｂ 洗 ／ 用 ％马／ 血 清 （．％ Ｔｉ 羊 ０３ ｒ — ｔｎ 一 ０ 稀 释） 温 ３ｒｉ； 加适 当 比例 稀 释 的一 ｏＸ １０ 室 ０ ｎ滴 ａ 抗 （ Ｂ ３ 体 １２ ０ Ｒ Ｄ Ｓ ｓ ｍ 或 Ｎ ｓｎ 体 １ Ｎ一抗 ：０ ； ＆ ｙｔ ｓ ｅ ｅｔ 抗 ｉ ：
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究报道较少 ， 研究拟利 用 Ｎ ３ 因敲除小 鼠， 本 Ｂ基 分
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文献标识码 ： Ａ 文章编号 ：０ １ １４ （０ ２ 一 ７ ０ ９ — ４ １０ — ２ ２ ２ １ ）０ — ５ ０ ０ 中图分 类号 ： ２ ９ Ｒ ９ Ｑ ４ ，４
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ｃｎ ，２ １ ，２ （ ） ９ ＿ ５ ３ ｉｅ ０ ２ ７ ７ ：５ ｏ 一 ９
１ 神 经干 细胞 的诱 导分 化 ． ４ 将 传 至 Ｐ 代 生 长 ４ ｄ的神 经 干 细胞 球 （ 含 ２ —６ 约
２ （ ３ ０ 细 胞 ） 用 胰 酶 消 化 吹散 为 单 细 胞 （ ０卜 ０ 个 ， １ Ｘ １ ｃｌ ／ 的 密 度 ） 液 ， 种 于 ０１ ０ ｅｓ ｌ ｍｌ 悬 接 ．％多 聚赖 氨 酸
Ｃ ｉｅ ｕｎｌｆ ｅ ａｉｔｔ ｎＭｅｉｎ，Ｊ１ ０２ ｏ ２， ｏ ｈｎｓ Ｊ ｒａ Ｒ ｈ ｂｌａｉ ｄｃ ｅ ｕ． １，Ｖ １ ７ Ｎ ． ｅｏ ｏ ｉ ｏ ｉ ２ ． ７
・Biblioteka Baidu
基础 研 究 ・
神经细胞黏附分子 Ｎ 一 在调节胚胎来源神经干细胞 Ｂ３ 分化和迁移中的作用
赵 彤 黄
后 进 行 细 胞计 数 ， ２Ｘ１ ｃ ｌ ｍ 密 度重 悬 于 培 以 ０ ｅ ｓ／ ｌ ｌ 养 液 Ｄ Ｍ／１ （ １ ｌ ， ％Ｐ ， ％Ｂ ７ ｌ ： ＭＥ Ｆ ２ 含 ％Ｇ ｕ ｌ Ｓ １ ２ ， ％Ｎ ，
细胞与细胞外基质问相互识别 、 黏附和信号转导的 重 要 信 号 分子 。对 于 脑 组织 形 态 、 经 元 延伸 、 神 建 立 突触 连 接及神 经 细胞 间相 互作 用 等方 面都 有重 要
意 义 。神 经 细胞 黏 附分 子 Ｎ 一 是 １９ 年 发 现 的黏 Ｂ３ ９６
２ ｎ Ｆ Ｆ和 ２ｎ Ｇ ） ０ｇｂ Ｇ ０ｇ Ｅ Ｆ 中 ， 种 于 ２ｃ 养 瓶 接 ５ｍ 培
中培养 。培养 ５ ７ 后 ， ０１ ５ — ｄ 用 ．２ ％胰 酶消 化 ， 轻 吹 轻
散 细 胞 至单 细胞 悬 液进 行 传代 ， ２ ５ 的细 胞 用 第 — 代
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神经 系统 的发 育是 一 个 比较 复 杂 的过 程 ， 主要 经 历 细胞 的增 殖 、 化 、 移 、 起 生 长 、 成 突 触 分 迁 突 形
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