2 生物大分子的制备 - 精品课程
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生物大分子的分离与制备(共89张PPT)
2022/9/24
2022/9/24 7
生物分子的结构与功能分析：
1. 蛋白质结构分析
2. 酶活力检测
3. 蛋白质组学分析
4. DNA序列分析
5. 聚合酶链反应（PCR）6. 分子杂交
7. 基因克隆8. 基因组构建9. cDNA构建
10. 筛选11. 报告基因检测12. 基因芯片
13. 基因敲除
➢ 核酸是遗传信息的携带者，在生物体中指导各种蛋 白质的合成。
2022/9/24
生物化学分离方法与一般的化学分离方法相比，有下列
几个特点： • 生物材料组成非常复杂。其中包括数百种甚至数千种化
合物，并且在分离过程中，这些化合物仍在发生代谢 变化，如蛋白质和核酸的水解。
有些化合物的含量极微，如激素等。 许多具有生物活性的物质一旦离开活体，很易变 变性破坏，因此常选用比较温和的条件进行制备。
• 功能或分子生物化学阶段（1950 年至今）。研究生命的本质和奥秘： 运动、神经、内分泌、生长、发育、繁殖等的分子机理 。
2022/9/24
2022/9/24
3
生物化学研究技术方法
❖ 生物化学研究的方法：
– 观察：生命现象
– 分离：未知蛋白组分，新基因片段，新的次生代谢物。 （抽提、过 滤、离心、色谱）
立了一系列研究核酸及蛋白质相互作用的技 确定要制备的生物大分子的目的和要求，是进行科研、开发还是要发现新的物质。
盐析的发生在于盐浓度增高到一定数值时，使水活度降低，进而导致蛋白质分子表面电荷逐渐被中和，水化膜逐渐被破坏，最终引起蛋白质分子之 间相互聚集并从溶液中析出。 其他化学性质：如对各种蛋白酶、水解酶的稳定性和对各种化学试剂的稳定性。
脂溶性的有机溶剂（丙酮，乙醚）中脱脂；采用快速加热 （50℃左右），快速冷却的方法，使溶化的油滴冷却后 凝聚成油块而被除去。
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生物分子的结构与功能分析：
1. 蛋白质结构分析
2. 酶活力检测
3. 蛋白质组学分析
4. DNA序列分析
5. 聚合酶链反应（PCR）6. 分子杂交
7. 基因克隆8. 基因组构建9. cDNA构建
10. 筛选11. 报告基因检测12. 基因芯片
13. 基因敲除
➢ 核酸是遗传信息的携带者，在生物体中指导各种蛋 白质的合成。
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生物化学分离方法与一般的化学分离方法相比，有下列
几个特点： • 生物材料组成非常复杂。其中包括数百种甚至数千种化
合物，并且在分离过程中，这些化合物仍在发生代谢 变化，如蛋白质和核酸的水解。
有些化合物的含量极微，如激素等。 许多具有生物活性的物质一旦离开活体，很易变 变性破坏，因此常选用比较温和的条件进行制备。
• 功能或分子生物化学阶段（1950 年至今）。研究生命的本质和奥秘： 运动、神经、内分泌、生长、发育、繁殖等的分子机理 。
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生物化学研究技术方法
❖ 生物化学研究的方法：
– 观察：生命现象
– 分离：未知蛋白组分，新基因片段，新的次生代谢物。 （抽提、过 滤、离心、色谱）
立了一系列研究核酸及蛋白质相互作用的技 确定要制备的生物大分子的目的和要求，是进行科研、开发还是要发现新的物质。
盐析的发生在于盐浓度增高到一定数值时，使水活度降低，进而导致蛋白质分子表面电荷逐渐被中和，水化膜逐渐被破坏，最终引起蛋白质分子之 间相互聚集并从溶液中析出。 其他化学性质：如对各种蛋白酶、水解酶的稳定性和对各种化学试剂的稳定性。
脂溶性的有机溶剂（丙酮，乙醚）中脱脂；采用快速加热 （50℃左右），快速冷却的方法，使溶化的油滴冷却后 凝聚成油块而被除去。
生物大分子提取技术 ppt课件
❖ 植物组织和细胞由于具有纤维素、半纤维素和果胶等 物质组成的细胞壁，一般常用与石英砂和适当的提取 液一起研磨的方法破碎或用纤维素酶处理也能达到目 的。
❖ 细菌细胞的破碎比较困难，因为整个细菌细胞壁的骨 架实际上是一借共价键连接而成的肽聚糖囊状大分子， 非常坚韧。破碎的方法常有超声波、与石英砂研磨、 高压挤压或溶菌酶处理（以分解肽聚糖）。
3. 酚抽提纯化DNA：
冷却至室温后，加入等体积的饱和酚溶液，温和地上下转动离心管5-10min，直至 水相与酚相混匀成乳状液。5000g离心15min，用大口吸管小心吸取上层粘 稠水相，移至另一离心管中。重复酚抽提一次。加等体积的氯仿﹕异戊醇 （24﹕1），上下转动混匀，5000g离心15min，用大口吸管小心吸取上层粘 稠水相，移至另一离心管中。重复一次。
19
五、分离纯化
• 从细胞中提取得到的生物大分子往往是不纯净的，含有大量杂质，必
须进一步分离纯化，这一阶段可分为粗分级分离和细分级分离两
步进行。
20
核酸分离纯化的一般程序
破碎细胞或组织 提取 纯化
21
核酸提取技术
• DNA提取技术
原理、方法、应用
• RNA提取技术
原理、方法、应用
22
核酸提取的要求
1
桂花赞
• 几度风雨一场凉 • 人间迎来桂花芳 • 银桂周身亮繁星 • 丹桂浓妆新嫁娘 • 枝头鸟雀絮絮赞 • 树下骚客搜枯肠 • 清风淡云圆月下 • 乾坤万里共清香
2
生物大分子分离纯化的意义
①生命科学研究的需要：
从生物材料中分离制备核酸、蛋白质，研究其结构与功能，对 于了解生命活动的规律，阐明生命现象的本质有重大意义。
透析袋 蛋白质溶液
蒸馏水
❖ 细菌细胞的破碎比较困难，因为整个细菌细胞壁的骨 架实际上是一借共价键连接而成的肽聚糖囊状大分子， 非常坚韧。破碎的方法常有超声波、与石英砂研磨、 高压挤压或溶菌酶处理（以分解肽聚糖）。
3. 酚抽提纯化DNA：
冷却至室温后，加入等体积的饱和酚溶液，温和地上下转动离心管5-10min，直至 水相与酚相混匀成乳状液。5000g离心15min，用大口吸管小心吸取上层粘 稠水相，移至另一离心管中。重复酚抽提一次。加等体积的氯仿﹕异戊醇 （24﹕1），上下转动混匀，5000g离心15min，用大口吸管小心吸取上层粘 稠水相，移至另一离心管中。重复一次。
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五、分离纯化
• 从细胞中提取得到的生物大分子往往是不纯净的，含有大量杂质，必
须进一步分离纯化，这一阶段可分为粗分级分离和细分级分离两
步进行。
20
核酸分离纯化的一般程序
破碎细胞或组织 提取 纯化
21
核酸提取技术
• DNA提取技术
原理、方法、应用
• RNA提取技术
原理、方法、应用
22
核酸提取的要求
1
桂花赞
• 几度风雨一场凉 • 人间迎来桂花芳 • 银桂周身亮繁星 • 丹桂浓妆新嫁娘 • 枝头鸟雀絮絮赞 • 树下骚客搜枯肠 • 清风淡云圆月下 • 乾坤万里共清香
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生物大分子分离纯化的意义
①生命科学研究的需要：
从生物材料中分离制备核酸、蛋白质，研究其结构与功能，对 于了解生命活动的规律，阐明生命现象的本质有重大意义。
透析袋 蛋白质溶液
蒸馏水
《生物大分子分离纯》PPT课件
(2)物理法： 1) 反复冻融法：将待破碎的细胞冷至－15℃到－20℃，然后放于室温(或40℃) 迅速融化，如此反复冻融屡次，由于细胞内形成冰粒使剩余胞液的盐浓度增高 而引起细胞溶胀破碎。 2) 超声波处理法：此法是借助超声波的振动力破碎细胞壁和细胞器。破碎微生 物细菌和酵母菌时，时间要长一些。 3) 压榨法：这是一种温和的、彻底破碎细胞的方法。在1000×105Pa～ 2000×105Pa 的高压下使细胞悬液通过一个小孔突然释放至常压，细胞将彻 底破碎。 4) 冷热交替法：从细菌或病毒中提取蛋白质和核酸时可用此法。在90℃左右 维持数分钟，立即放入冰浴中使之冷却，如此反复屡次，绝大局部细胞可以被 破碎。
⑴ 水溶液提取：蛋白质和酶的提取一般以水 溶液为主。稀盐溶液和缓冲液对蛋白质的稳 定性好，溶解度大，是提取蛋白质和酶最常 用的溶剂。 ⑵ 有机溶剂提取：一些和脂类结合比较结实 或分子中非极性侧链较多的蛋白质和酶难溶 于水、稀盐、稀酸、或稀碱中，常用不同比 例的有机溶剂提取。
别离纯化
• 刚提取得到的大分子物质，往往是粗制品， 含有许多杂质，必须进一步别离纯化。别 离提纯各种生物大分子，主要根据各种物 质的分子大小、溶解度、带电性、亲和力 大小等差异，选用有机溶剂沉淀，等电点 沉淀，盐析，层析，电泳，超离心，吸附， 结晶等方法
《生物大分子分离纯》 PPT课件
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一、生物大分子的别离与纯化技 术
二、肝酶提取
• ⑶许多生物大分子一旦离开了生物体内的环境 时就极易失活，因此别离过程中如何防止其失活， 就是生物大分子提取制备最困难之处。
生物大分子的制备公开课一等奖优质课大赛微课获奖课件
低盐浓度下伴随盐浓度升高，蛋白质溶解度增 加，称为盐溶；当盐浓度继续升高时，蛋白质 溶解度不同程度下降并先后析出，这种现象称 为盐析。
第16页
血浆蛋白质分段盐析
硫酸铵饱和度g . (100ml H2O )-1
20 48－33 40－46
> 50
沉淀蛋白质
纤维蛋白 r 球蛋白 a 球蛋白 清蛋白
第2页
而在所有这些办法应用中必须注意保留生物大 分子完整性，预防酸、碱、高温及猛烈机械作用而 造成所提物质生物活性丧失。 生物大分子制备普通分为下列四个阶段：
①选择材料和预处理； ②细胞破碎及细胞器分离； ③提取和纯化； ④浓缩干燥和保留。
第3页
第一节 选择材料及预处理
选材：微生物、植物和动物都可作为制备生物大 分子原材料，所选取材料主要依据试验目的来确 定。 （一）微生物
第8页
2.玻璃匀浆器匀浆 此法对细胞破碎程度比高速组织捣碎机为 高，合用量少动物内脏组织。
第9页
3.重复冻融法 将细胞在－20℃下列冰冻，室温融解，重 复几次，由于细胞内冰粒形成和剩余细胞液 盐浓度增高引起溶胀，使细胞结构破碎。
4.化学处理法 有些动物细胞，如：肿瘤细胞可采用十二
烷基硫酸钠（SDS）、去氧胆酸钠等使细胞 膜破坏。假如细胞壁较厚，可采用溶菌酶处 理效果更加好。
第34页
实 验 碱性磷酸酶分离与纯化 磷酸苯二钠法
第35页
酶分离和纯化
① 基本原则：提取过程中避免酶变性而失去 活性
② 目的：一是把酶制剂从很大体积浓缩到比 较小体积；二是把酶制剂中大量杂质蛋白 和其它大分子物质分离出去。
③ 衡量指标：总活力回收；二是比活力提升
倍数。
表示提纯过程中酶 损失情况
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血浆蛋白质分段盐析
硫酸铵饱和度g . (100ml H2O )-1
20 48－33 40－46
> 50
沉淀蛋白质
纤维蛋白 r 球蛋白 a 球蛋白 清蛋白
第2页
而在所有这些办法应用中必须注意保留生物大 分子完整性，预防酸、碱、高温及猛烈机械作用而 造成所提物质生物活性丧失。 生物大分子制备普通分为下列四个阶段：
①选择材料和预处理； ②细胞破碎及细胞器分离； ③提取和纯化； ④浓缩干燥和保留。
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第一节 选择材料及预处理
选材：微生物、植物和动物都可作为制备生物大 分子原材料，所选取材料主要依据试验目的来确 定。 （一）微生物
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2.玻璃匀浆器匀浆 此法对细胞破碎程度比高速组织捣碎机为 高，合用量少动物内脏组织。
第9页
3.重复冻融法 将细胞在－20℃下列冰冻，室温融解，重 复几次，由于细胞内冰粒形成和剩余细胞液 盐浓度增高引起溶胀，使细胞结构破碎。
4.化学处理法 有些动物细胞，如：肿瘤细胞可采用十二
烷基硫酸钠（SDS）、去氧胆酸钠等使细胞 膜破坏。假如细胞壁较厚，可采用溶菌酶处 理效果更加好。
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实 验 碱性磷酸酶分离与纯化 磷酸苯二钠法
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酶分离和纯化
① 基本原则：提取过程中避免酶变性而失去 活性
② 目的：一是把酶制剂从很大体积浓缩到比 较小体积；二是把酶制剂中大量杂质蛋白 和其它大分子物质分离出去。
③ 衡量指标：总活力回收；二是比活力提升
倍数。
表示提纯过程中酶 损失情况
生物大分子的提取与沉淀分离技术课件
19
10
3.1 RNA提取
* 细胞破碎 →水溶 →过滤去渣 →调pH5 → tRNA ↓ * mRNA ，rRNA: * 3.1.1 稀盐溶液提取 * 细胞破碎 → 匀浆 0.14 mol/L NaCl → RNA- Pro 提取液
→分离DNA- Pro 、Pro、多糖 * RNA：tRNA15% ，mRNA5% ，rRNA80%
* 也可用苯酚法，苯酚层得到 DNA 、Pro
12
第三节 沉淀分离
* 分离纯化：除去各种杂质，获得较高纯度物质的过程 * 蛋白质和酶分离提纯方法：沉淀分离、层析分离、电泳
分离、超离心分离等。 * 沉淀分离：通过改变某些条件或加入某种物质，使溶液
中某种溶质的溶解度降低，从而从溶液中沉淀析出的技 术。包括盐析沉淀、等电点沉淀、有机溶剂沉淀、复合 沉淀法、金属盐沉淀法、选择性变性沉淀等。
6
2.1水溶液提取
* 水、稀盐、稀酸、稀碱溶液 * 常用稀盐溶液和缓冲液，应注意控制盐浓度、温度、
pH * 2.1.1盐浓度的选择 * 一般用等渗盐溶液。但根据溶解度，有些蛋白质要
用较高浓度盐溶液提取，而有些则用纯水提取。
7
* 2.1.2 pH的选择 * 不在等电点附近，但不宜太高或太低。 * pH3~4有利于离子键分离 * 2.1.3温度的选择 * 一般0~10℃ (常用4℃)， 对于耐高温的蛋白质和酶，
径等)、蛋白结构有关 * ks越大， 盐析效果越好 * I=(1/2)∑mizi2 * 一定条件下， S取决于I * 分段盐析： ks分段盐析( β一定， pH 、T一定)；
β分段盐析( ks 、I一定，改变pH 、T)
15
* 3.1.2盐的选择 * 通常采用中性盐，最常用( NH4 ) 2SO4 ，原因： * 水中S大，温度对S影响小，廉价易得，不易引起蛋
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3.1 RNA提取
* 细胞破碎 →水溶 →过滤去渣 →调pH5 → tRNA ↓ * mRNA ，rRNA: * 3.1.1 稀盐溶液提取 * 细胞破碎 → 匀浆 0.14 mol/L NaCl → RNA- Pro 提取液
→分离DNA- Pro 、Pro、多糖 * RNA：tRNA15% ，mRNA5% ，rRNA80%
* 也可用苯酚法，苯酚层得到 DNA 、Pro
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第三节 沉淀分离
* 分离纯化：除去各种杂质，获得较高纯度物质的过程 * 蛋白质和酶分离提纯方法：沉淀分离、层析分离、电泳
分离、超离心分离等。 * 沉淀分离：通过改变某些条件或加入某种物质，使溶液
中某种溶质的溶解度降低，从而从溶液中沉淀析出的技 术。包括盐析沉淀、等电点沉淀、有机溶剂沉淀、复合 沉淀法、金属盐沉淀法、选择性变性沉淀等。
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2.1水溶液提取
* 水、稀盐、稀酸、稀碱溶液 * 常用稀盐溶液和缓冲液，应注意控制盐浓度、温度、
pH * 2.1.1盐浓度的选择 * 一般用等渗盐溶液。但根据溶解度，有些蛋白质要
用较高浓度盐溶液提取，而有些则用纯水提取。
7
* 2.1.2 pH的选择 * 不在等电点附近，但不宜太高或太低。 * pH3~4有利于离子键分离 * 2.1.3温度的选择 * 一般0~10℃ (常用4℃)， 对于耐高温的蛋白质和酶，
径等)、蛋白结构有关 * ks越大， 盐析效果越好 * I=(1/2)∑mizi2 * 一定条件下， S取决于I * 分段盐析： ks分段盐析( β一定， pH 、T一定)；
β分段盐析( ks 、I一定，改变pH 、T)
15
* 3.1.2盐的选择 * 通常采用中性盐，最常用( NH4 ) 2SO4 ，原因： * 水中S大，温度对S影响小，廉价易得，不易引起蛋
医学生物分子的分离纯化PPT课件
第七章 生物分子的分离纯化
生物分子（Biomolecule）泛指生物体特有的各类分子，是自然存在 于生物体中的分子的总称，是组成生命的基本单位。
包括
小分子（如脂类、激素、维生素等） 生物大分子（蛋白质、核酸、糖复合物等）
生物分子是生物所特有的有机化合物， 具有如下主要特征：
1）结构复杂有序、具有特殊的层次； 2）行使专一的功能； 3）代谢是其存在的条件； 4）生物分子体系具有自我复制的能力； 5）能人工合成与改造。
DNA
质 粒 的 提 取 与 纯 化
质粒DNA的提取与纯化的经典方法包括： 碱裂解法 煮沸裂解法 SDS裂解法等
这些方法主要由质粒DNA的扩增、质粒DNA的释放、质粒 DNA的分离纯化三个步骤组成
1、碱裂解法
在NaOH提供的高pH（12.0～12.6）条件下，用强阳离子去垢剂 SDS破坏细胞壁，裂解细胞，与NaOH共同使宿主细胞的蛋白质 与染色体DNA发生变性，释放出质粒DNA。
分离纯化的原则
一是保持核酸碱基序列的完整性。二是尽量清除其它分子的污 染，保证核酸制品的纯度。
意义：遗传信息全部储存在一级结构之中，核酸的一级结构 还决定其高级结构的形式以及和其他生物大分子结合的方式。
对于核酸的纯化应达到以下三点要求：
1）核酸样品中不存在过高浓度的金属离子和对酶有抑制作用的有 机溶剂；
1. 回收率 为提高DNA片段的回收率，可通过提高DNA 样品的上样量和选择适宜的方法与材料而实现。
2. 纯度 常用的纯化方法包括有机溶剂抽提法与商品化 的柱层析法（column chromatography）。
柱层析法采用的是阴离子交换层析的原理
从琼脂糖凝胶中回收DNA片段
从琼脂糖凝胶中纯化DNA片段的方法主要有 二乙基氨基乙基（diethyl aminoethyl，DEAE）-纤维素 （cellulose）膜插片电泳法 电泳洗脱法（透析袋及非透析袋电泳洗脱法） 冷冻挤压法 低熔点琼脂糖凝胶挖块回收法等。
生物分子（Biomolecule）泛指生物体特有的各类分子，是自然存在 于生物体中的分子的总称，是组成生命的基本单位。
包括
小分子（如脂类、激素、维生素等） 生物大分子（蛋白质、核酸、糖复合物等）
生物分子是生物所特有的有机化合物， 具有如下主要特征：
1）结构复杂有序、具有特殊的层次； 2）行使专一的功能； 3）代谢是其存在的条件； 4）生物分子体系具有自我复制的能力； 5）能人工合成与改造。
DNA
质 粒 的 提 取 与 纯 化
质粒DNA的提取与纯化的经典方法包括： 碱裂解法 煮沸裂解法 SDS裂解法等
这些方法主要由质粒DNA的扩增、质粒DNA的释放、质粒 DNA的分离纯化三个步骤组成
1、碱裂解法
在NaOH提供的高pH（12.0～12.6）条件下，用强阳离子去垢剂 SDS破坏细胞壁，裂解细胞，与NaOH共同使宿主细胞的蛋白质 与染色体DNA发生变性，释放出质粒DNA。
分离纯化的原则
一是保持核酸碱基序列的完整性。二是尽量清除其它分子的污 染，保证核酸制品的纯度。
意义：遗传信息全部储存在一级结构之中，核酸的一级结构 还决定其高级结构的形式以及和其他生物大分子结合的方式。
对于核酸的纯化应达到以下三点要求：
1）核酸样品中不存在过高浓度的金属离子和对酶有抑制作用的有 机溶剂；
1. 回收率 为提高DNA片段的回收率，可通过提高DNA 样品的上样量和选择适宜的方法与材料而实现。
2. 纯度 常用的纯化方法包括有机溶剂抽提法与商品化 的柱层析法（column chromatography）。
柱层析法采用的是阴离子交换层析的原理
从琼脂糖凝胶中回收DNA片段
从琼脂糖凝胶中纯化DNA片段的方法主要有 二乙基氨基乙基（diethyl aminoethyl，DEAE）-纤维素 （cellulose）膜插片电泳法 电泳洗脱法（透析袋及非透析袋电泳洗脱法） 冷冻挤压法 低熔点琼脂糖凝胶挖块回收法等。
生物大分子的分离与纯化省名师优质课赛课获奖课件市赛课一等奖课件
3）透析法纯化过氧化氢酶:将沉淀重溶于 0.05mol/L旳磷酸缓冲液(pH=7.2) 中, 4 ℃ 透析过夜,然后按1∶1旳百分比向透析液中 加入预冷旳正丁醇进行脱脂,4℃静置过夜. 然后6000r/min离心,弃去沉淀以及正丁醇 层,反复2次,得粗酶液.
2.DEAE2Sep haro se 离子互换层析： 用磷酸缓冲液(0.05 mol/ L , p H =7.2) 平衡 至少4 倍柱体积(20 mL) , 上样5 mL . 用0～1 mol/ LNaCl溶液(含0.05 mol/ L , p H =7.2 旳 磷酸缓冲液) 进行梯度洗脱, 流速30 mL/ h , 每管搜集5 mL , 紫外监测波长为280 nm ; 测 定各管过氧化氢酶活性和蛋白含量; 搜集活 性较高旳各管酶液, 4 ℃透析过夜, 冷冻干燥 后进行凝胶过滤.
1.粗酶液旳制备：1）称取新鲜鸭肝100 g , 用自来水 洗净, 再用消毒双蒸水漂洗洁净. 按1:5 旳百分比加 入预冷旳0.05 mol/ L 旳磷酸缓冲液(p H 7.2) , 用高 速组织捣碎机捣碎, 置于4 ℃冰箱抽提2 h ; 离心(6 000 r/ min ,4 ℃, 30 min) , 搜集上清液。 2）盐析法粗提过氧化氢酶:加入硫酸铵至40 %饱和 度, 离心(6 000 r/ min , 4 ℃, 30 min) 去沉淀, 上清中 再加硫酸铵至60 %饱和度, 离心搜集沉淀。
试验原理
1.离子互换层析原理:固定相为离子互换剂， 是利用离子互换剂对多种离子有不同旳亲 和力，来分离混合物中多种离子旳层析技 术。
2.凝胶过滤层析原理:也称分子筛层析、排阻 层析。是利用具有网状构造旳凝胶旳分子 筛作用，根据被分离物质旳分子大小不同 来进行分离。
3.电泳法旳基本原理:电泳（electrophoresis）是指 带电荷旳溶质或粒子在电场中向着与其本身所带 电荷相反旳电极移动旳现象。物质分子在正常情 况下一般不带电，即所带正负电荷量相等，故不 显示带电性。但是在一定旳物理作用或化学反应 条件下，某些物质分子会成为带电旳离子（或粒 子）。不同旳物质，因为其带电性质、颗粒形状 和大小不同，因而在一定旳电场中它们旳移动方 向和移动速度也不同，所以可使它们分离。
生化技术 课件 第一章 生命大分子物质的制备[PPT课件]
![生化技术 课件 第一章 生命大分子物质的制备[PPT课件]](https://img.taocdn.com/s3/m/f086db64a6c30c2259019efa.png)
生命科学学院：金晶
Copyright(C) 2009
④固态时对温度、含水量和冻干时的稳定性。
⑤其他化学性质：如对各种蛋白酶、水解酶的稳定性 和对各种化学试剂的稳定性。
⑥对其他生物分子的特殊亲和力。
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第一节 材料的选择与处理
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一、材料的选择
制备生物大分子，首先要选择适当的生物材料。 材料的来源无非是动物、植物和微生物及其代谢产 物。所选用的材料主要依据实验目的来确定。
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例如：测定某一蛋白质溶液的浓度
方法：蛋白质与相关试剂（如双缩脲试剂）作用后 产生特定颜色的物质（紫色络合物），紫色络合 物颜色的深浅与蛋白质浓度成正比，于波长 540nm处进行比色测定。
最后与标准品比对即可计算出该待测蛋白质溶 液的浓度
精确性 重复性 灵敏度 比吸收光谱法好
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浊度法
主要用于悬浮液的测定。 测定悬浮液在不被吸收的波长下表现的消光值。 不被吸收，主要是散射、反射。
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OD260=1.0相当于 50μg/ml双链DNA 40μg/ml单链DNA（或RNA） 20μg/ml寡核苷酸
测定核酸\蛋白质的纯度:
DNA纯品: OD260/OD280 = 1.8 RNA纯品: OD260/OD280 = 2.0
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