仔猪致病性大肠杆菌的分离鉴定及药敏试验

仔猪致病性大肠杆菌的分离鉴定及药敏试验

程子兵1 董春霞2石国界3沙里塔那4 马长丽1

（1. 塔城地区动物疾控与诊断中心新疆塔城834700；2. 重庆市武隆县畜牧兽医局重庆市武隆县408500；3. 塔城市畜牧兽医工作站新疆塔城834700；4. 额敏县兽医工作站新疆额敏县834600）

摘要:对塔城地区一农户饲养猪群中仔猪发生的临床症状以水肿病、白痢、黄痢为特征的病例进行了样品采集，后经麦康凯、伊红美蓝分离培养，糖发酵生化试验、动物试验等结果显示均为大肠杆菌，同时通过药敏试验筛选出敏感抗生素。

关键词：仔猪；大肠杆菌；分离鉴定；药敏试验

Abstract：Specimens with dropsy and dysentery clinical symptoms were isolated from one household raises pig group in Tacheng area. By bacteria culture, biochemical test and animal test, the results indicate the bacterium is pathogenic Escherichia Coli. Meanwhile, we ascertain sensitive antibiotics to this E coli by medicine test.

Key words:pig; Escherichia Coli; isolate indentify; medicine test

仔猪大肠杆菌病是由大肠杆菌引起的肠道传染病，主要表现为仔猪白痢、黄痢和水肿病，其中黄痢多发生于1周内哺乳仔猪，病猪主要表现为排黄色糊状粪便；白痢多发于10～30日龄，病猪主要表现为排乳白色或灰白色腥臭糊状粪便；水肿病多发于断奶仔猪，主要有神经症状、胃壁、肠黏膜等组织水肿，四季均可发生，发病率和致死率

高低不等，严重者同窝仔猪中发病率可达90％以上，致死率可达100％，幸存者则影响生长，甚至成为僵猪【l】。由于致病性大肠杆菌的血清型复杂，在不同猪场、不同季节、不同批次，不同年龄流行菌株均可能不相同，造成规模化猪场的防控困难，引起较大的经济损失[2]。笔者对塔城地区农户散养猪群中采集的仔猪白痢、黄痢和仔猪水肿病的病料进行了细菌分离培养、鉴定及药敏试验。现将结果报告如下：

1 材料与方法

1．1 材料

1.1.1 采取农民散养户中临床症状较为典型的5份仔猪白痢、黄痢肛门拭子及仔猪水肿病的小肠黏膜2份。

1.1.2 培养剂、普通肉汤、血清琼脂平板由本实验室自行配制，麦康凯琼脂（MCK）、伊红美蓝琼脂（EMB）按参考文献[3]制备；三糖铁琼脂培养基、三糖铁琼脂斜面、MR、V—P、Idole、H2S、枸橼酸盐琼脂斜面、葡萄糖微量生化反应管、乳糖微量生化反应管、麦芽糖微量生化反应管、甘露醇微量生化反应管购自杭州微生物试剂有限公司，10种药敏试纸购自北京天坛生物技术有限公司。

1.1.3 实验动物 12只小白鼠。

1.1.4 药敏试验抗生素药敏纸片青霉素（PG）、丁胺卡那霉素（AKN）、头孢噻肟（CTX）、复合磺胺（SXT）、庆大霉素（GEN）、妥布霉（TOB）、苯唑青霉素（OXA）、头孢唑啉（CFZ）、头孢三嗪（CRO）、氟派酸（NOR）。

1.2 方法

1.2.1 细菌分离培养与镜检

将待检样品接种于普通肉汤进行细菌培养，置37℃温箱培养12～16h观察结果；然后将培养物分别划线接种于麦康凯琼脂平板和伊红美蓝琼脂平板进行细菌培养，37℃温箱培养20-24h后挑取平板上可疑菌落抹片革兰氏染色镜检。

1.2.2 生化试验

生化鉴定挑取经纯培养的菌落分别接种于三糖铁琼脂斜面、MR、V—P、Idole、H2S、枸橼酸盐琼脂斜面和葡萄糖、乳糖、麦芽糖、甘露醇等发酵管，37℃培养24 h。

1.2.3 致病性试验

将分离菌的肉汤纯培养物对10只健康小白鼠分别腹腔注射0.4～0.5 mL，另2只小白鼠腹腔注射0.4～0.5 mL无菌肉汤培养液作为对照，24～48 h 死亡或发病者取肝脏抹片革兰氏染色镜检。

1.2.4 药敏试验

采用药敏纸片扩散法[4],37 ℃培养18～24 h 后观察结果并测量抑菌圈。

2 结果

2.1 分离培养疑似培养物在麦康凯琼脂培养20h后均为红色菌落，在伊红美蓝琼脂上培养20h后为中心暗蓝黑色并有绿色金属闪光的菌落；革兰氏染色镜检均为革兰氏阴性中等大小杆菌。

2.2 生化反应从7份样品中分离的细菌经生化鉴定后，确定均为大

肠埃希氏菌，具体结果见表1：

表1：大肠杆菌生化鉴定结果

2.3 致病性结果将分离菌的肉汤纯培养物对12只健康小白鼠分别

腹腔注射0.4～0.5 mL，另2只小白鼠为对照，24～36 h内死亡6只,48 h后死亡2只,另2只发病, 对照鼠不发病。取发病者肝脏抹片革兰氏染色镜检，结果均为革兰氏阴性中等大小杆菌。

2.4 药敏试验

药敏试验结果见表2。

表2 大肠杆菌抑菌圈直径测量结果

3 小结与讨论

3.1 鉴定结果

根据培养特性、形态、生化试验、致病性试验鉴定结果表明此细菌分离株为致病性大肠杆菌。

3.2 动物试验结果

根据动物试验结果，显示分离株毒力较强，为致病性大肠杆菌，可使小鼠发病率达100%，致死率达80%。

3. 3 治疗药敏试验结果

当前大多猪场致病性大肠杆菌对许多药物具有不同程度的耐药性，这可能与猪饲料中长期使用某些抗菌药物及滥用抗生素有关，因

此，使用药物治疗大肠杆菌病时，应根据药敏试验结果，选择敏感药物，且应注意交替使用。从本次药敏试验结果可以看出，分离的大肠杆菌对青霉素（PG）、头孢噻肟（CTX）、复合磺胺（SXT ）、苯唑青霉素（OXA）等不敏感；对庆大霉素（GEN）、妥布霉（TOB）、头孢唑啉（CFZ）等中敏；而对头孢三嗪（CRO）、丁胺卡那霉素（AKN）、氟派酸（NOR）高敏。因此，应该避免盲目使用抗生素,在治疗时采用广谱抗菌药与特效抗生素结合对症治疗，才能使病情得以控制，防止产生耐药性和错过治疗时机。

3.4 防治

大肠杆菌分布广泛，也是动物肠道内的正常寄居菌，当肠道内环境发生变化时,附着在肠黏膜上并大量繁殖,产生许多对宿主有害的

毒性物质，如肠毒素、内毒素及其他有害产物引起动物发病。特别是初生仔猪十分易感，常发生严重腹泻和败血症，严重影响生长和造成死亡，给养猪业带来严重的损失。而防控仔猪大肠杆菌病方面，结合多年的临床工作经验，笔者认为应该重点考虑以下三点：（1）加强饲养管理应从疫苗、药物预防、温度、湿度、饲料配方、环境卫生、消毒、饮水、饲养密度等方面采取综合的生物安全措施，做到预防为主。

（2）从源头上采取措施坚持自繁自养的原则，不从疫情不明的猪场引进种猪；做好母猪分娩前后的环境清扫和消毒工作，尽快让仔猪吸吮到初乳，使仔猪迅速获得初乳抗体，以增强抵抗力。

（3）药物防治需慎重不要盲目的长期大剂量使用某种药物，