高效液相色谱操作步骤

3：进入色谱工作站，待
1：拧松泵右侧的快速排气 阀（两圈即可）
仪器自检完成后进行进 样系统的清洗
4：用一次性平
头微量注射器
色谱工作站
吸入1~2ml的样
快速排气阀
品溶液，注入
手动进样阀的
2：按下泵前面的“排气”键 进样口
排气5min后拧紧快速排气阀
一次性平头 微量注射器
排气
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七：冲洗流路（进样前的系统准备）
操作过程中应注意的事项
流动相 ： 1、 流动相应选用色谱纯试剂、高纯水或双蒸水，酸 碱液及缓冲液需经过滤后使用，过滤时注意区分水系 膜和油系膜的使用范围； 2、 水相流动相需经常更换（一般不超过2天），防止 长菌变质；
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色谱柱：
1、 使用前仔细阅读色谱柱附带的说明书，注意适用
范围，如pH值范围、流动相类型等；
高效液相色谱仪的应用
1.环境污染物分析：大气、水、土壤和食品中的多环芳烃、 多环联苯，阴离子表面活性剂，有机氯农药、有机磷农药， 除草剂，酚类胺类、黄曲霉毒素等污染物的分离与测定。
2.精细化工 ：在精细化工生产中使用的具有较高分子量和 较高沸点的有机化合物，如高碳数脂肪族或芳香族的醇、 剂、药物、农药、燃料、炸药等工业产品的醛、酮、醚、 酸、酯等化工原料，以及各种表面活性分离与测定。
2：设定分析方法的方
法文件（文件名称，表
示浓度的单位）
3：设定样品分析表
简（而标言准之名称：、软测件定的次各数种、设置；繁杂但不复杂
样品名称、编号）
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九：进样分析
1：启动设置程序文件、 设定分析方法的方法文 件、设定样品分析表按 照样品分析表的顺序， 用平头微量注射器将经 过0.45um滤膜过滤的标 准溶液和样品溶液逐次 注入六通进样阀中，
3.食品质量分析：农药残留，兽药残留；防腐剂、抗氧化 剂、人工合成色素等食品添加剂的分离与测定，保健食品 中的功效成分检测，真菌毒素分析等
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1
前
后
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2
1、溶剂（流动相）
真空脱气机
2、输液系统 （四元泵） 3、手动进样器 4、柱温箱 （色谱柱， 固定相）
5、检测器
高效液相色谱分析仪的 型号、外形因生产厂家 的不同而有较大的差异。 各型号仪器配有相应的
分析速度快等。
拧紧色谱柱的接口
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四：放置流动相
1：将储存流动相的贮 2：更换仪器泵头里清 液瓶放置于贮液瓶架上 洗瓶中的超纯水（以确 保仪器外回路系统清洁 和良好的工作状态）
清洗瓶
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五：开机
依次打开： 稳压器 柱温箱 高压泵 检测器 计算机电源开关
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六：系统排气
2、 使用符合要求的流动相；
3、 使用保护柱；
4、 如所用流动相为含盐流动相，反相色谱柱使用后，
先用水或低浓度甲醇水（如5％甲醇水溶液），再用甲
醇冲洗。
5、 色谱柱在不使用时，应用甲醇冲洗，取下后紧密
封闭两端保存；
6、 不要高压冲洗柱子；
7、 不要在高温下长时间使用硅胶键合相色谱柱；
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样品：
2：顺时针旋转六通阀， 仪器开始进行分析
顺时针旋转
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十：数据处理
1：根据样品的出峰时间定性
2：根据样品的峰面定量
（在一定的色谱操作条件下，流入检测器的待测组分的 含量、质量或浓度与检测器的响应信号：峰面积或峰 高成正比。）
色 谱 图 示 例
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十一：仪器工作完成后的必要维护
2：冲洗进样系统
a:清洗手动进样阀，将手动进样阀的扳手逆时针扳 到头，用一次性平头微量注射编器辑p吸pt 入2~4ml的50%甲 14
十二：关机
依次关闭检测器的氘灯 将高压泵的流速降为“0” 关闭检测器开关 关闭高压泵开关 关闭仪器色谱工作站 关闭检测器电源开关 关闭高压泵电源开关 关闭柱温箱电源开关 关闭电脑开关 关闭稳压电源开关 并在仪器使用登记本上记录环编境辑p温pt 度、湿度、仪器工 15
仪样品液都必须经过样 性滤头过滤后，加入2ml
品过滤装置过滤
具塞Βιβλιοθήκη Baidu管中备用。
一次性滤头：由机系、水系组成；
滤膜的孔径为0.45um
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三：色谱柱的连接
将色谱柱按流动相流动 方向即色谱柱标示箭头
方向安装在仪器上
色谱是一种分离分 析手段，分离是核 心，因此担负分离 作用的色谱柱是色 谱系统的心脏。对 色谱柱的要求是柱 效高、选择性好，
简而言之：根据流动相的不同选择不同的溶液冲洗流路。
具体问题具体分析！
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八：设定分析方法
1：设置程序文件（流 4：待进样环境平衡后， 动相通道、流速、比例、 打开检测器的氘灯，检 检测器检测波长、分析 测器开始自检和教正， 时间、最高压力、最低 进行基线检测，待基线
压力）
打平开稳检测后器进的氘样灯分析。
数据处理系统。
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6、色谱工作站
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一：流动相的配制
1：有机溶剂的过滤 （使用 0.45um的一次 性水系滤膜过滤）
2：流动相超声脱气 （10~30min）
滤膜
开关
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二：样品处理
1：样品过滤（过滤装置： 2:把经过称量、定容、超
一次型注射器;一次性滤 声处理后的样品溶液，
头）进入高效液相色谱 用一次性注射器和一次
作用：平衡活化色谱柱并清除管路中的杂质和残留的水分。
步骤：分析样品前先用甲醇或乙腈冲洗流路20min~30min
如果流动相为有机相和纯水相的混合液，在用甲醇或 乙腈冲洗流路后，按照分析样本的需要调节比例阀的比例，冲 洗流路约20min；
如果流动相含有缓冲盐溶液、有机酸、无机酸或其他 电解质，则应该用与分析样品流动相中缓冲盐溶液或有机酸、 无机酸、其他电解质与有机相相同比例的水加有机相冲洗流路 约20min以上，再按照分析样品的需要调节有机相与缓冲溶液 等的比例冲洗流路约20min，平衡进样环境。
1、 采用过滤或离心方法处理样品，确保样品中不含 固体颗粒； 2、 用流动相或比流动相弱（若为反相柱，则极性比 流动相大；若为正相柱，则极性比流动相小）的溶剂 制备样品溶液，尽量用流动相制备样品液； 3、手动进样时，进样量尽量小，使用定量管定量时， 进样体积应为定量管的3～5倍；
1：冲洗流路和色谱柱
a:若流动相为有机相和超纯水的混合溶剂，则直接 用甲醇或乙腈冲洗流路约30min，待基线无杂质峰出 现走平稳后可停泵关机。
b:若流动相含有缓冲盐溶液、有机酸、无机酸或其 他电解质溶，则先用5%甲醇冲洗流路30~60min，其 次用50%甲醇溶液冲洗流路约30min，再用甲醇或乙 腈冲洗流路约30min，待基线无杂质峰出现走平稳后 可停泵关机。