高效液相色谱操作步骤
waters超高效液相色谱仪操作步骤
第一部分：仪器准备1. 确保waters超高效液相色谱仪处于正常工作状态，检查仪器是否连接电源，是否有故障指示灯显示。
2. 打开色谱仪软件，检查仪器参数设置是否符合实验要求，包括流速、温度、检测波长等。
3. 准备所需的色谱柱、色谱柱连接器、进样器以及其他实验所需的耗材。
第二部分：样品准备1. 准备实验所需的样品，确保样品已经滤过或者处理过以去除杂质。
2. 根据实验要求，将样品溶解在适当的溶剂中，并进行稀释或者稀释。
第三部分：超高效液相色谱仪操作步骤1. 开始操作前，先进行系统平衡。
具体操作步骤为：将色谱柱连接至色谱柱连接器上，然后连接至色谱仪，用洗脱液平衡色谱柱。
2. 设置色谱仪的操作参数，包括流速、温度、检测波长等。
3. 进行样品进样，具体操作步骤为：将进样器连接至色谱仪，将稀释好的样品注入进样器中，设置好进样量。
4. 开始进行实验，监控色谱图谱的变化，记录实验数据。
5. 实验结束后，对色谱柱和色谱仪进行清洗和维护，确保仪器干净、整洁。
第四部分：数据处理和分析1. 对实验获得的数据进行处理和分析，比对标准曲线，计算样品中所含物质的浓度或者纯度。
2. 对实验结果进行统计分析，进行数据呈现，如绘制色谱图谱、制作数据统计图表等。
3. 通过数据处理和分析，得出实验结论，对实验结果进行解释和讨论。
第五部分：实验安全及注意事项1. 在操作过程中，注意个人安全，避免发生化学品溅泼或者接触有害物质。
2. 操作过程中需严格按照实验要求和操作规程进行，如有疑问请及时向实验指导老师或专业人士请教。
3. 实验结束后，及时清理实验台面和仪器设备，妥善存放试剂和耗材。
通过以上步骤的操作，可以保证在使用waters超高效液相色谱仪进行实验时，能够得到准确、可靠的实验结果，为科研工作和学术研究提供有力支持。
第六部分：精密控制与调试1. 在进行实验操作前，要确保色谱仪的各项参数已经精确调试完毕。
这包括流速、温度、压力、检测波长等参数的精准控制。
高效液相色谱仪的操作步骤
高效液相色谱仪的操作步骤高效液相色谱仪（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）是一种常用的分离和分析技术。
它利用液体流动相和固定相之间的相互作用，将样品中的混合物分离出来，并通过检测器进行定量分析。
本文将介绍高效液相色谱仪的具体操作步骤。
1. 准备工作在进行高效液相色谱仪的操作之前，首先需要进行一些准备工作。
检查色谱柱是否安装正确，确保色谱柱是干净的，并检查流动相的配制是否准确。
2. 样品制备根据需要分析的物质，准备好待测样品。
样品制备可以包括溶解样品、过滤样品等步骤，以确保样品的纯净度和稳定性。
3. 仪器开机将高效液相色谱仪接通电源，打开仪器的电源开关。
等待仪器初始化，并确保仪器各个部分正常工作。
4. 设置参数在仪器上设置分析所需的参数。
包括选择适当的检测器类型和检测波长、设置流量、温度等。
5. 启动系统启动高效液相色谱仪系统，等待系统稳定。
通常需要一段时间使得流动相在管路中充分平衡，并确保流量稳定。
6. 校正进行色谱柱的校正。
校正过程包括流量校正、波长校正等。
通过校正可以保证仪器输出结果的准确性和可靠性。
7. 注射样品将样品通过注射器引入色谱柱中，控制样品的注射量，通常在微升至毫升的量级。
确保样品的注射量稳定和准确。
8. 分离分析开始运行高效液相色谱仪系统，进行样品的分离与分析。
在此期间，流动相通过色谱柱，将样品中的化合物根据它们与固定相之间的相互作用进行分离。
9. 监测结果通过检测器对分离后的化合物进行监测。
根据检测器的信号，可以得到每个化合物的峰面积、保留时间等数据。
10. 数据处理将监测到的信号输入到数据处理软件中，进行结果的计算和分析。
通常可以得到各个化合物的峰高、峰面积等数据，从而实现对样品的定量分析。
11. 关机分析结束后，关闭高效液相色谱仪的电源开关，并进行必要的清洗和维护工作。
确保仪器的正常运行，并延长其使用寿命。
总结：高效液相色谱仪的操作步骤涵盖了仪器准备、样品制备、仪器设置、校正、样品注射、分离分析、结果监测和数据处理等多个方面。
高效液相色谱法操作步骤
高效液相色谱法操作步骤
高效液相色谱法的操作步骤如下:
1. 过滤流动相并根据需要选择不同的滤膜。
溶剂必须为色谱纯，且溶剂及样品必须过膜（0.45μm）。
超声脱气30分钟以上。
2. 用流动相冲洗金属过滤器，然后将过滤器浸入储液罐的流动相中。
有一段时间没用或者换了新的流动相，需要先冲洗泵和进样阀。
3. 将储液罐放置在一定的高度，以避免由于搬运和其他操作人员的移动而造成不必要的跌落。
4. 然后按以下顺序依次启动高效液相色谱仪：泵→检测器→高效液相色谱软件→设置软件参数，如分析时间、检测波长、流速等。
5. 启动泵，运行5分钟，主要是为了排除系统中的气泡，结束后关闭所有排气阀。
6. 然后按照预先计划的速度，以固定的速率，如1mL/min左右，运行流动相，走基线，直到基线平稳。
7. 基线平稳后，在软件中设置样品的运行参数，如流速和分析时间等。
分析时间会因样品、流速、柱长等因素变化。
8. 设计走样方法。
9. 在进样和进样后操作的过程中，需要及时调整和监控各项参数。
高效液相色谱仪操作说明书
高效液相色谱仪操作说明书一、引言高效液相色谱仪（HPLC）是一种广泛应用于化学、生物医药、环境监测等领域的分析仪器。
本操作说明书旨在帮助用户正确有效地操作HPLC仪器，以获得准确可靠的分析结果。
二、仪器概述1. 主要组成：HPLC仪器主要包括进样系统、色谱柱、流动相装置、检测器及数据分析系统等组成部分。
2. 基本原理：HPLC利用流动相在高压下通过色谱柱，样品分离后再由检测器进行检测和信号记录，通过数据分析系统生成分离效果图谱或定量结果。
三、操作步骤1. 准备工作a) 确保仪器电源已接通，并检查各部分连接是否牢固。
b) 打开相关软件并进行系统初始化。
c) 根据待分析样品的特性，选择适宜的色谱柱和流动相。
2. 进样系统操作a) 将待测样品通过合适的方法制备成溶液。
b) 打开进样系统的相关开关，将样品通过进样针注入进样口。
c) 调整进样量和进样速度，确保样品完全被进样器吸取。
3. 色谱柱操作a) 将色谱柱连接到系统中，并确保连接处密封良好。
b) 根据样品性质选择合适的流动相和梯度条件，设置柱温以提高分离效果。
c) 在柱前和柱后设置适当的减压阀，调节流量和压力，确保色谱柱正常运行。
4. 流动相装置操作a) 根据检测要求准备合适的流动相溶液。
b) 将流动相溶液通过流动相装置输送至色谱柱，确保流速和流量稳定。
5. 检测器操作a) 打开检测器并进行相关参数设置，如波长选择、灵敏度调节等。
b) 将流经色谱柱的样品原液通过检测器进行检测，并记录信号。
6. 数据分析与结果生成a) 使用相应的数据分析软件，导入检测到的信号数据。
b) 根据需求进行峰面积积分、峰高浓度定量等相关数据分析。
c) 生成分析图谱或报告，并保存结果。
四、故障排除在操作过程中，可能会遇到一些故障情况，以下列举一些常见故障及其排除方法：1. 柱堵塞：检查柱前和柱后的减压阀是否打开和调整流量。
2. 波峰异常：检查流动相和检测器参数设置是否正确。
3. 信号丢失：检查进样系统是否正常工作，检查柱连接是否存在泄漏。
高效液相色谱仪的操作步骤 液相色谱解决方案
高效液相色谱仪的操作步骤液相色谱解决方案高效液相色谱仪操作步骤：1）．过滤流动相，依据需要选择不同的滤膜.2）．对抽滤后的流动相进行超声脱气10—20分钟。
3）．打开hplc工作站（包括计算机软件和色谱仪），连接好流动相管道，连接检测系统。
4）．进入hplc掌控界面主菜单，点击manual，进入手动菜单。
5）．有一段时间没用，或者换了新的流动相，需要先冲洗泵和进样阀。
冲洗泵，直接在泵的出水口，用针头抽取。
冲洗进样阀，需要在manual菜单下，先点击purge，再点击start，冲洗时速度不要超过10 ml/min。
6）．调整流量，初次使用新的流动相，可以先试一下压力，流速越大，压力越大，一般不要超过2000、点击injure，选用合适的流速，点击on，走基线，察看基线的情况。
7）．设计走样方法。
点击file，选取se—lect users and methods，可以选取现有的各种走样方法。
若需建立一个新的方法，点击new method。
选取需要的配件，包括进样阀，泵，检测器等，依据需要而不同。
选完后，点击protocol。
一个完整的走样方法需要包括：a.进样前的稳流，一般2—5分钟；b.基线归零；c.进样阀的loading—inject转换；d.走样时间，随不同的样品而不同。
8）．进样和进样后操作。
选定走样方法，点击start。
进样，全部的样品均需过滤。
方法走完后，点击postrun，可记录数据和做标记等。
全部样品走完后，再用上面的方法走一段基线，洗掉剩余物。
9）．关机时，先关计算机，再关液相色谱。
10）．填写登记本，由负责人签字。
注意事项：11）．流动相均需色谱纯度，水用20m的去离子水。
脱气后的流动相要当心振动尽量不引起气泡。
12）．柱子是特别脆弱的，第一次做的方法，先不要让液体过柱子。
13）．全部过柱子的液体均需严格的过滤。
14）．压力不能太大，可以不要超过2000 psi。
液相色谱流动相说明流动相相当于液相的血液，可以想象对液相的紧要程度。
高效液相色谱仪操作步骤
高效液相色谱仪操作步骤1.准备工作：a.检查设备是否正常运转，所有零件是否安装和连接正确。
b.检查每个必需的溶液和试剂是否充足并且符合规定的质量标准。
c.检查色谱柱是否装配完好，并根据要进行的分析校准适当的流量和压力范围。
d.打开色谱软件，并设置所需的分析方法和参数。
e.开始预热色谱柱直到达到所需的温度。
2.样品制备：a.准备待检测样品的溶液或提取物，并进行必要的预处理步骤，例如固相萃取、浓缩、稀释或离心等。
b.将样品溶液通过0.22微米滤膜过滤，以去除杂质、微粒和可能堵塞色谱柱的颗粒。
3.样品进样：a.打开进样器，并选择合适的样品进样模式（如定量进样或自动进样）。
b.使用微量注射器或自动进样器将样品注入进样器，并确定进样量符合分析方法的要求。
4.色谱柱选择：a.根据样品特性和分析目的选择合适的色谱柱类型（如反相、离子交换、大小排阻等），尺寸（长度和内径）和填充材料等。
b.根据样品的pH值调节移动相的酸碱度，以满足分析要求和保护色谱柱。
5.色谱条件设置：a.设置流量速率，根据色谱柱的额定最大流速和样品的分离要求来确定。
一般来说，较高的流速可提高分离速度，但也会降低分离效果。
b.设置柱温，并确保温度稳定在所需的分析条件下。
c.设置检测器的参数，如波长、增益、灵敏度等，以适应待测试样品的检测需求。
6.分析运行：a.开始进样和运行色谱，确保流量和压力稳定。
b.监测色谱峰形的变化和信号强度，以评估分离速度和效果。
c.记录每个样品的保留时间和峰高（面积），并进行相应的数据处理和分析。
7.数据处理：a.使用色谱软件导出和处理分析数据，如生成色谱图、峰面积测定、峰高度测定、定量计算等。
b.根据实验目的和要求，对分析数据进行统计学分析、校正和解释。
c.对数据进行结果汇总、报告撰写和存档。
8.后期维护：a.定期检查和维护仪器，如清洁色谱柱、更换零件、校准仪器、更换溶液等，以确保仪器的正常运行和结果的准确性。
b.对废液和废品进行妥善处理，符合环境保护要求。
高效液相色谱十大步骤
高效液相色谱十大步骤
1.样品准备：将待测样品制备成合适的溶液，通常需要进行提取、纯化或稀释等处理。
2.色谱柱选择：根据待测化合物的特性选择合适的色谱柱，如
反相色谱柱、离子交换色谱柱等。
3.溶剂选择：根据待测化合物的亲水性或疏水性选择合适的溶剂，以保证化合物在柱上有足够的保留时间。
4.样品注入：使用自动进样器或手动注射器将样品注入色谱柱。
5.溶剂梯度：设定一定的梯度条件，根据溶剂极性的变化来分
离不同化合物。
6.检测器选择：根据待测化合物的特性选择合适的检测器，如
紫外检测器、荧光检测器等。
7.梯度程序设定：根据待测化合物的特性设定合适的梯度程序，如流速、溶剂比例等。
8.流速调控：根据实际需要调整色谱柱的流速，以控制分离的
时间和峰形。
9.峰识别和定量：根据峰的保留时间、峰面积或高度来识别和
定量待测化合物。
10.数据分析和报告：对得到的数据进行分析处理，生成色谱图和报告，对结果进行解释和总结。
实验室高效液相色谱安全使用及注意事项
实验室高效液相色谱安全使用及注意事项高效液相色谱是一种非常常用的分析技术，广泛应用于化学、生物、医药等领域。
在实验室中使用高效液相色谱需要注意一些安全问题，本文将介绍高效液相色谱的使用方法以及注意事项，以帮助实验室工作者更好地使用高效液相色谱。
一、高效液相色谱的使用方法1. 实验前准备在进行高效液相色谱实验前，需要进行一些准备工作。
首先，要检查设备是否正常工作，包括系统的泵、检测器、进样器、柱等是否工作正常。
其次，要检查试剂的浓度和纯度是否符合要求。
最后，要准备好实验所需的溶液和样品，并按照实验要求进行处理和标记。
2. 操作步骤高效液相色谱的操作步骤包括：样品进样、柱温控制、流动相控制、检测器设置等。
具体步骤如下：（1）样品进样将样品注入进样器中，注意不要超出进样器的容积范围。
（2）柱温控制根据实验要求设置柱温，通常情况下柱温为室温或略高于室温。
（3）流动相控制设置合适的流动相组合和流速，以达到最佳分离效果。
（4）检测器设置根据实验要求选择合适的检测器，比如紫外检测器、荧光检测器等，并设置检测器的参数，如波长、灵敏度等。
3. 实验后处理实验结束后，需要对设备和试剂进行清洗和储存。
首先，要将进样器和柱进行清洗，以避免残留样品和流动相对下一次实验的影响。
其次，要将检测器进行清洗和维护，以保证检测器的正常工作。
最后，要妥善储存试剂和设备，以便下一次实验使用。
二、高效液相色谱的注意事项1. 实验室安全在使用高效液相色谱时，需要注意实验室的安全问题。
首先，要穿戴好实验室所需的防护设备，如实验服、手套、护目镜等。
其次，要保持实验室的整洁和干净，避免化学品的混合和交叉污染。
最后，要遵守实验室的规定和操作程序，以确保实验室的安全。
2. 操作注意事项在进行高效液相色谱实验时，需要注意以下几个方面：（1）样品的选择和准备在选择样品时，要注意样品的性质和纯度，以避免对实验结果的影响。
同时，要进行适当的样品处理和标记，以确保样品的准确性和可靠性。
高效液相色谱的使用流程
高效液相色谱的使用流程简介高效液相色谱（High-Performance Liquid Chromatography，简称HPLC）是一种用于分离、鉴定和定量化分析化学物质的常用技术。
本文将介绍高效液相色谱的使用流程。
使用流程1.准备工作–检查仪器：确保HPLC仪器处于正常工作状态，检查进样器、流动相泵、柱温箱和检测器等部件。
–准备试剂：根据需要，准备好所需的溶剂、标样溶液和样品溶液，并确保它们纯净、稳定且符合实验要求。
–校准仪器：进行必要的仪器校准，包括流速校准、进样器校准和检测器校准等。
2.设置分离条件–选择合适的柱：根据需要选择合适的固定相柱，例如反相柱、离子交换柱或手性柱等。
–设置流速：根据柱的要求和分离物的性质，设置合适的流速，一般为0.5-2.0 mL/min。
–选择合适的流动相：根据待分离物的性质，选择合适的流动相体系，包括溶剂和缓冲液等。
–设置柱温：根据实验要求和分离物的性质，设置适当的柱温，一般常温即可。
–设置检测器：选择合适的检测器，如紫外检测器、荧光检测器或质谱检测器，根据需要设置检测器的波长、激发波长等参数。
3.进样与分析–进样方式：根据需求和样品性质，选择适合的进样方式，包括自动进样器、手动进样器或固相萃取柱等。
–进样量：根据样品的浓度和分析要求，设置合适的进样量，一般范围为1-20 μL。
–开始分析：点击软件界面上的“开始”按钮，启动HPLC运行，此时仪器开始运行，进行样品分离和检测。
–数据记录：在分离过程中，系统会实时记录和显示数据，包括峰面积、保留时间和峰高等结果。
4.数据分析与解读–峰面积计算：根据检测器记录的峰面积数据，通过内置的计算公式，计算出目标化合物的峰面积。
–保留时间测定：根据检测器记录的保留时间数据，可以获得目标化合物的保留时间，用于鉴定和定量分析。
–峰高测定：根据峰高数据，可以了解化合物的峰高大小，用于比较不同样品或条件下的分离结果。
–结果解读：根据数据分析结果，判断样品中所含化合物种类和含量，并与已知标准进行对比验证。
高效液相色谱使用方法
高效液相色谱使用方法高效液相色谱（HPLC）是一种常用的分析技术，广泛应用于化学、生物、医药等领域。
本文将介绍高效液相色谱的基本原理、操作步骤以及一些常见的注意事项。
一、高效液相色谱的基本原理高效液相色谱是基于溶液通过固定相的柱子进行分离的原理。
通过控制溶液的流动速度，样品中的化合物将根据其化学特性在固定相上产生不同的保留时间，进而实现分离和定量分析。
在高效液相色谱中，离子交换、尺寸排除、亲和力、反相等不同的柱填料被广泛应用。
根据不同的样品性质和需要分离的化合物，选择合适的柱填料是非常重要的。
此外，流动相的选择也是影响分离效果的重要因素。
二、高效液相色谱的操作步骤1. 样品准备：样品应经过适当的前处理，如过滤、稀释等，以确保样品中的杂质不会影响分析结果。
需要注意的是，样品的pH值也会对分析结果产生影响，因此在样品准备过程中可根据需要进行调整。
2. 样品进样：将经过适当处理的样品注入进样器中，控制进样量和进样速度。
可以选择自动进样或手动进样的方式，保证样品的稳定和准确性。
3. 流动相的配制：根据分析需要，选择适当的溶剂组合并按照一定比例进行配制。
流动相的配制既要保证溶剂的纯度，又要考虑溶剂对柱填料的影响。
4. 柱温和流速的选择：根据柱填料的要求，选择合适的柱温和流速。
在进行分析前，需要对柱温和流速进行优化和调试，以获得较好的分离效果。
5. 检测器的选择和参数设置：根据需要分析的化合物特性，选择合适的检测器，并设置相应的参数。
常见的检测器包括紫外-可见光谱检测器、荧光检测器和质谱检测器等。
6. 数据分析与结果解释：根据检测器输出的信号，利用计算机软件对数据进行处理和分析。
根据不同的化合物特性，可以采用不同的数据分析方法和曲线拟合技术来定量分析目标化合物。
三、常见的注意事项1. 制备和使用流动相前，需仔细检查溶剂纯度，避免杂质对结果产生干扰。
2. 柱子的保养和维护非常重要，定期进行柱子的清洗和再生，以保证分离效果和柱寿命。
hplc操作流程
hplc操作流程高效液相色谱（HPLC）是一种常用的分析技术，它能够对化合物进行快速、高效、精确的分离和定量分析。
在实验室中，HPLC操作流程的规范性和准确性对于保证实验结果的可靠性至关重要。
下面将介绍HPLC操作流程的具体步骤，希望能够对大家有所帮助。
1. 样品处理。
首先，对待测样品进行处理。
通常情况下，样品需要通过溶解、过滤等步骤进行前处理，以确保样品的纯度和稳定性。
在处理过程中，需要注意避免样品受到外界污染或损害。
2. 色谱柱装填。
接下来是色谱柱的装填。
在进行色谱柱装填之前，需要根据待测化合物的性质选择合适的色谱柱和填料。
在装填过程中，要确保色谱柱的完整性和稳定性，避免气泡和漏液的产生。
3. 流动相配置。
根据待测样品的特性和分析要求，配置合适的流动相。
流动相的选择和配置对于分离和分析的效果具有重要影响，需要根据实际情况进行调整和优化。
4. 仪器参数设置。
在进行HPLC分析之前，需要对色谱仪进行参数设置。
包括流速、检测波长、温度等参数的设定，以确保分析的准确性和稳定性。
5. 样品进样。
将处理好的样品注入到进样装置中，进行自动或手动进样。
在此过程中，需要保证样品的进样量和速度均匀稳定，避免产生进样峰。
6. 色谱条件优化。
在进行分析之前，可以通过调整色谱条件来优化分离效果。
包括流速、温度、梯度程序等参数的调整，以获得最佳的分离效果和分析结果。
7. 数据采集和分析。
在分析过程中，需要对数据进行实时采集和记录。
通过色谱软件进行数据处理和分析，得到分析结果并进行解释和评价。
8. 仪器维护。
分析结束后，需要对色谱仪进行清洗和维护。
包括色谱柱的冲洗、流动相的更换、仪器的保养等工作，以确保仪器的正常运行和延长使用寿命。
以上就是HPLC操作流程的基本步骤，希望能够对大家在实验中的操作有所帮助。
在进行HPLC分析时，需要严格按照操作流程进行，确保实验的准确性和可靠性。
同时也要注意安全操作，避免发生意外事故。
祝大家实验顺利，取得理想的分析结果！。
高效液相操作规程
高效液相操作规程一、目的本操作规程旨在规范高效液相色谱（HPLC）的使用流程，确保实验的准确性和重复性，同时保障操作人员的安全。
二、适用范围本规程适用于所有使用高效液相色谱仪进行分析的实验室人员。
三、操作步骤1. 准备工作a. 确保所有使用的试剂纯度符合要求，且无污染。
b. 检查并清洁色谱柱，保证无残留物影响分析结果。
c. 根据实验要求准备流动相，并调整至适当比例。
2. 仪器开机a. 打开电源，预热仪器至工作温度。
b. 检查并确保所有管道连接正确无漏液现象。
c. 启动色谱软件，进行系统自检。
3. 样品准备a. 根据实验要求，准确称量并溶解样品。
b. 通过适当方式（如过滤或离心）去除样品中的不溶物。
4. 样品注射a. 使用适当的注射器抽取样品。
b. 打开注射口，准确注射样品，然后封闭注射口。
5. 分析运行a. 根据实验方法设置流动相流速、柱温等参数。
b. 启动分析程序，实时监控色谱图谱。
c. 记录并保存分析数据。
6. 结束操作a. 关闭分析程序，停止流动相输送。
b. 清洗系统，包括色谱柱和注射器。
c. 关闭仪器电源，清理工作台面。
四、注意事项1. 在操作过程中应穿戴适当的实验室防护装备。
2. 避免直接接触有毒或腐蚀性的试剂和样品。
3. 定期对仪器进行维护和校准，确保分析结果的准确性。
4. 遇到任何异常情况，应立即停止操作并报告给实验室负责人。
五、安全措施1. 熟悉并遵守实验室安全规程。
2. 操作过程中应使用防护眼镜、实验服和手套。
3. 对于易挥发或有毒溶剂，应在通风良好的环境下操作。
4. 紧急情况下，立即启动紧急冲淋设备，并寻求医疗救助。
六、记录与报告1. 记录所有操作参数和样品分析结果。
2. 对于任何偏离标准操作的情况，应详细记录并报告。
3. 定期对操作记录进行审核，以优化操作流程和提高分析质量。
简述下高效液相色谱仪的操作全流程
高效液相色谱仪的操作全流程一、实验准备阶段1. 配置流动相：高效液相色谱仪的操作首先需要配置好所需的流动相。
流动相是液相色谱中推动样品组分在色谱柱上移动并分离的溶剂或溶剂混合物。
配置流动相时，应注意所使用的溶剂不能对实验或设备造成影响或损害，如堵塞或腐蚀。
同时，流动相必须经过滤和脱气处理，以避免气泡对实验结果的影响。
在更换流动相时，还需要保证两种溶剂的互溶性，如不互溶，则需要使用一种中间溶剂进行过渡。
2. 冲洗和平衡色谱柱及仪器：在配置好流动相后，需要对仪器及色谱柱进行冲洗和平衡。
这是为了确保仪器压力正常，基线稳定，以及色谱柱的填料处于最佳状态。
冲洗和平衡的过程中，应使用与实验流动相相同的溶剂，并设定适当的流速和压力。
3. 样品处理：在进样前，样品需要经过必要的净化处理。
这包括通过0.45um以下的微孔滤膜过滤，确保样品是澄清溶液。
过滤后的样品应装入合适的液相色谱样品瓶中待用。
二、样品运行阶段1. 设置方法参数：根据实验需要，在仪器的控制软件中设置或调用相应的参数。
这些参数包括流速、流动相组成、进样量、柱温、检测波长等。
这些参数的设定将直接影响色谱分离的效果和实验结果的准确性。
2. 编辑进样序列表：根据样品信息，编辑进样序列表。
进样序列表应包含每个样品的名称、进样量、进样次数等信息。
编辑完成后，保存并运行序列方法以分析样品并得到数据。
三、数据分析阶段色谱得到的原始数据为色谱图，色谱图上的每个峰代表一个组分。
需要对色谱峰进行积分处理，获得峰面积。
峰面积的大小与组分的浓度成正比，因此可以用来定量计算组分的浓度。
根据实验需要，可以使用不同的方法进行定量计算，如外标法、内标法、面积百分比法等。
此外，仪器还可以得到光谱或质谱信息，通过这些信息可以获得定性信息，如组分的结构、分子式等。
四、实验结束阶段1. 冲洗色谱柱：在实验结束后，应使用高有机相/水相冲洗柱子以清除残留的样品和杂质。
冲洗时，应注意纯相的比例不要超过95%，以避免对色谱柱造成损害。
高效液相色谱仪使用方法
高效液相色谱仪使用方法
高效液相色谱仪（HPLC）是一种常用的分析仪器，用于分离
和定量分析化合物的混合物。
以下是HPLC的基本使用方法：
1. 样品准备：将待分析的混合物或溶液准备好，通常需要进行前处理，例如过滤、稀释或提取。
2. 系统准备：打开色谱仪的电源，启动仪器，确保所有组件处于正常工作状态。
检查液相、气相和其他溶剂的供应，并确保其质量良好。
3. 进样：将样品注射器连接到色谱柱，并根据实验要求设置注射器体积。
将样品注射器插入进样口，并将样品注入到色谱柱。
4. 创建梯度：根据分析要求，创建一个梯度程序。
这涉及到设置流动相的组成和梯度变化的速率。
5. 运行分析：点击开始按钮，启动分析过程。
色谱系统将自动进行溶剂梯度变化，使样品中的化合物逐步从色谱柱中分离出来。
6. 数据采集和分析：在分离过程中，色谱仪将采集到一系列数据点，包括峰高、峰面积、保留时间等。
使用相关的数据处理软件，可以对这些数据进行处理和分析。
7. 清洗和维护：在分析完成后，需要进行系统的清洗和维护。
这包括冲洗色谱柱、清理进样器和其他组件，并储存色谱仪在
正确的环境条件下。
以上是高效液相色谱仪的基本使用方法。
具体的使用流程和操作步骤可能会有细微的差异，取决于具体的仪器品牌和型号。
建议在使用前仔细阅读和理解相关的操作手册和使用说明。
waters 高效液相操作规程
waters 高效液相操作规程
《waters高效液相操作规程》
在液相色谱分析中，waters高效液相技术被广泛应用。
为了保证色谱分析的准确性和可靠性，操作规程至关重要。
下面是waters高效液相操作规程的一般步骤：
1. 样品准备：准备样品并将其溶解在合适的溶剂中。
2. 色谱柱准备：根据分析的要求选择合适的色谱柱，并进行适当的洗涤和平衡。
3. 色谱条件设置：设置流速、温度、检测波长等色谱条件。
4. 样品进样：按照预定的体积和条件将样品进样进入色谱仪。
5. 色谱分离：启动色谱仪进行色谱分离，并记录相关数据。
6. 数据处理：对色谱数据进行处理和分析，得出结果。
7. 清洗设备：分析结束后，对色谱柱和仪器进行彻底的清洗。
以上是waters高效液相操作规程的一般步骤，具体操作还需根据实验室的具体情况和分析要求进行调整和完善。
这些步骤的严格执行和规范操作将有助于提高色谱分析的准确性和可靠性，确保实验结果的有效性和科学性。
高效液相色谱仪操作流程
高效液相色谱仪操作流程高效液相色谱仪操作流程1、准备工作：（1）校准：在使用高效液相色谱仪之前，应先进行校准，以保证测定结果的准确性。
校准时要使用一系列标准物质，以便检验仪器的性能和精密度。
常用的校准模式有线性校准、多项式校准和外部校准等。
（2）柱温控制：所有的分析柱都有一定的温度要求，高效液相色谱仪的温度控制精度要求比较高，因此需要进行柱温控制。
（3）泵调试：泵是气液色谱系统中最重要的部件，也是最容易发生故障的部件。
使用前，应检查泵的抽真空度、流量稳定性等性能，以保证测定的精度和准确性。
（4）色谱柱稳定性检查：色谱柱的稳定性是检测的重要因素，影响到测定结果的准确性和精度。
在使用之前，应检查柱内各部分的稳定性，以确保其能够按照设定的条件正常工作。
2、色谱柱装载：（1）清洗色谱柱：色谱柱在使用前必须进行清洗，以去除柱内可能存在的有机物，并保证柱内液体的稳定性。
（2）安装色谱柱：色谱柱的安装是非常重要的，因为不正确的安装会影响测定结果的准确性。
色谱柱的安装应紧固，确保柱的稳定性，避免柱管损坏。
（3）组装液体系统：液体系统的组装包括柱头部、柱底部、负压调节器等，组装时应确保所有部件的密封性，以免出现压力泄漏等情况。
3、液相色谱仪系统调试：（1）开机：首先将高效液相色谱仪通电，根据用户手册按步骤启动计算机系统，以及液相色谱仪的电子控制系统。
（2）程序设定：根据实际检测要求，设定相应的程序参数，包括柱温、梯度曲线、进样量、采集时间等。
（3）样品进样：根据实际检测要求，将样品按要求的体积加入样品管中，然后将样品管放入色谱柱内，以开始检测。
4、色谱检测：（1）检测：将样品按照设定的梯度曲线进行移动，并根据程序参数进行数据采集和处理。
（2）分析数据：根据所采集的数据，可以分析出样品中各种成分的含量、比例等信息，从而得出测定结果。
（3）打印报告：将测定结果打印出来，以便查看和记录。
5、清洁：（1）清洁柱头部：在使用完毕后，应及时清洗柱头部，以免柱头部的污染影响下一次测定的准确性。
高效液相色谱使用方法
高效液相色谱使用方法一、流动相准备将流动相按比例混合，注意混合的流动相必须相互溶解，最好能将流动相混合在一起，若相互溶解性不好，可分成两种。
流动相配好后，将管路放入，注意不要将瓶口密封。
二、开机首先将真空泵打开，待泵的指示灯由黄变绿打；打开600泵开关，按Direct键，进入操作菜单。
三、抽气抽取管路A液体：先将注射器旋转插入，将旋钮由Run转至 Draw,抽液，完成后将旋钮由Draw至Run，再将注射器旋转取下，反复1-2次，抽至管路内无气泡。
抽取管路B液体：在泵操作菜单上将B设为100%，给0.2ml/min的流速，听到泵转换的声音后，将流速设为0，以抽取管路A的步骤进行抽气。
四、调节流动相比例与流速在泵操作菜单上设定流动相比例，并以0.2、0.4、0.6、0.8、1.0ml/min的速度逐步升高流速，每次间隔3-5分钟。
五、2410示差检测器的使用1、打开2410示差检测器开关2、调整检测器内、外温度3、实验前一天晚上，使用“purge”状态平衡过夜，若第二天还要做实验，结束工作后不关机，节省第二天的平衡时间，保持0.2ml/min的流速。
六、2487紫外检测器的使用1、打开2487示差检测器开关，机器自动进入自检过程，约需7分钟。
2、设置检测波长3、预热30分钟左右，即可注样测定。
试验四、番茄内源激素高效液相色谱法测定一、样品准备取新鲜番茄根、茎、叶5克左右，液氮冷冻，放入冰箱储存。
配80％甲醇，冰箱冷冻。
二、提取样品放入预冷研钵，加l0ml 80％的冰冻甲醇研磨至匀浆，转入小烧杯中，再用甲醇清洗研钵2次，每次l0ml，转入小烧杯中。
小烧杯放入冰箱(0～4℃)冷藏14小时以上。
三、过滤取出用漏斗滤纸过滤，并用10m180％甲醇清洗残渣，合并滤液；如果提取液中沉淀物或色素多，则用10000g离心l0~12min，上清液转入冻干瓶中。
四、浓缩将冻干瓶中的液体用减压蒸干机蒸干(至瓶中液体结冰)，然后用2m1 80％的甲醇冲洗，如果有浑浊物，再次用离心机12000g离心l0min，倒入带有刻度的试管中，为保证试管中的液体有5ml左右，将不足5ml的试管中再加入一些甲醇。
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作用：平衡活化色谱柱并清除管路中的杂质和残留的水分。
步骤：分析样品前先用甲醇或乙腈冲洗流路20min~30min
如果流动相为有机相和纯水相的混合液，在用甲醇或 乙腈冲洗流路后，按照分析样本的需要调节比例阀的比例，冲 洗流路约20min；
如果流动相含有缓冲盐溶液、有机酸、无机酸或其他 电解质，则应该用与分析样品流动相中缓冲盐溶液或有机酸、 无机酸、其他电解质与有机相相同比例的水加有机相冲洗流路 约20min以上，再按照分析样品的需要调节有机相与缓冲溶液 等的比例冲洗流路约20min，平衡进样环境。
2：冲洗进样系统
a:清洗手动进样阀，将手动进样阀的扳手逆时针扳 到头，用一次性平头微量注射编器辑p吸pt 入2~4ml的50%甲 14
十二：关机
依次关闭检测器的氘灯 将高压泵的流速降为“0” 关闭检测器开关 关闭高压泵开关 关闭仪器色谱工作站 关闭检测器电源开关 关闭高压泵电源开关 关闭柱温箱电源开关 关闭电脑开关 关闭稳压电源开关 并在仪器使用登记本上记录环编境辑p温pt 度、湿度、仪器工 15
高效液相色谱仪的应用
1.环境污染物分析：大气、水、土壤和食品中的多环芳烃、 多环联苯，阴离子表面活性剂，有机氯农药、有机磷农药， 除草剂，酚类胺类、黄曲霉毒素等污染物的分离与测定。
2.精细化工 ：在精细化工生产中使用的具有较高分子量和 较高沸点的有机化合物，如高碳数脂肪族或芳香族的醇、 剂、药物、农药、燃料、炸药等工业产品的醛、酮、醚、 酸、酯等化工原料，以及各种表面活性分离与测定。
简而言之：根据流动相的不同选择不同的溶液冲洗流路。
具体问题具体分析！
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八：设定分析方法
1：设置程序文件（流 4：待进样环境平衡后， 动相通道、流速、比例、 打开检测器的氘灯，检 检测器检测波长、分析 测器开始自检和教正， 时间、最高压力、最低 进行基线检测，待基线
压力）
打平开稳检测后器进的氘样灯分析。
数据处理系统。
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6、色谱工作站
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一：流动相的配制
1：有机溶剂的过滤 （使用 0.45um的一次 性水系滤膜过滤）
2：流动相超声脱气 （10~30min）
滤膜
开关
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二：样品处理
1：样品过滤（过滤装置： 2:把经过称量、定容、超
一次型注射器;一次性滤 声处理后的样品溶液，
头）进入高效液相色谱 用一次性注射器和一次
仪样品液都必须经过样 性滤头过滤后，加入2ml
品过滤装置过滤
具塞试管中备用。
一次性滤头：由机系、水系组成；
滤膜的孔径为0.45um
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三：色谱柱的连接
将色谱柱按流动相流动 方向即色谱柱标示箭头
方向安装在仪器上
色谱是一种分离分 析手段，分离是核 心，因此担负分离 作用的色谱柱是色 谱系统的心脏。对 色谱柱的要求是柱 效高、选择性好，
2、 使用符合要求的流动相；
3、 使用保护柱；
4、 如所用流动相为含盐流动相，反相色谱柱使用后，
先用水或低浓度甲醇水（如5％甲醇水溶液），再用甲
醇冲洗。
5、 色谱柱在不使用时，应用甲醇冲洗，取下后紧密
封闭两端保存；
6、 不要高压冲洗柱子；
7、 不要在高温下长时间使用硅胶键合相色谱柱；
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样品：
3：进入色谱工作站，待
1：行进 样系统的清洗
4：用一次性平
头微量注射器
色谱工作站
吸入1~2ml的样
快速排气阀
品溶液，注入
手动进样阀的
2：按下泵前面的“排气”键 进样口
排气5min后拧紧快速排气阀
一次性平头 微量注射器
排气
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七：冲洗流路（进样前的系统准备）
3.食品质量分析：农药残留，兽药残留；防腐剂、抗氧化 剂、人工合成色素等食品添加剂的分离与测定，保健食品 中的功效成分检测，真菌毒素分析等
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1
前
后
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1、溶剂（流动相）
真空脱气机
2、输液系统 （四元泵） 3、手动进样器 4、柱温箱 （色谱柱， 固定相）
5、检测器
高效液相色谱分析仪的 型号、外形因生产厂家 的不同而有较大的差异。 各型号仪器配有相应的
1、 采用过滤或离心方法处理样品，确保样品中不含 固体颗粒； 2、 用流动相或比流动相弱（若为反相柱，则极性比 流动相大；若为正相柱，则极性比流动相小）的溶剂 制备样品溶液，尽量用流动相制备样品液； 3、手动进样时，进样量尽量小，使用定量管定量时， 进样体积应为定量管的3～5倍；
1：冲洗流路和色谱柱
a:若流动相为有机相和超纯水的混合溶剂，则直接 用甲醇或乙腈冲洗流路约30min，待基线无杂质峰出 现走平稳后可停泵关机。
b:若流动相含有缓冲盐溶液、有机酸、无机酸或其 他电解质溶，则先用5%甲醇冲洗流路30~60min，其 次用50%甲醇溶液冲洗流路约30min，再用甲醇或乙 腈冲洗流路约30min，待基线无杂质峰出现走平稳后 可停泵关机。
分析速度快等。
拧紧色谱柱的接口
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四：放置流动相
1：将储存流动相的贮 2：更换仪器泵头里清 液瓶放置于贮液瓶架上 洗瓶中的超纯水（以确 保仪器外回路系统清洁 和良好的工作状态）
清洗瓶
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五：开机
依次打开： 稳压器 柱温箱 高压泵 检测器 计算机电源开关
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六：系统排气
2：设定分析方法的方
法文件（文件名称，表
示浓度的单位）
3：设定样品分析表
简（而标言准之名称：、软测件定的次各数种、设置；繁杂但不复杂
样品名称、编号）
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九：进样分析
1：启动设置程序文件、 设定分析方法的方法文 件、设定样品分析表按 照样品分析表的顺序， 用平头微量注射器将经 过0.45um滤膜过滤的标 准溶液和样品溶液逐次 注入六通进样阀中，
2：顺时针旋转六通阀， 仪器开始进行分析
顺时针旋转
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十：数据处理
1：根据样品的出峰时间定性
2：根据样品的峰面定量
（在一定的色谱操作条件下，流入检测器的待测组分的 含量、质量或浓度与检测器的响应信号：峰面积或峰 高成正比。）
色 谱 图 示 例
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十一：仪器工作完成后的必要维护
操作过程中应注意的事项
流动相 ： 1、 流动相应选用色谱纯试剂、高纯水或双蒸水，酸 碱液及缓冲液需经过滤后使用，过滤时注意区分水系 膜和油系膜的使用范围； 2、 水相流动相需经常更换（一般不超过2天），防止 长菌变质；
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色谱柱：
1、 使用前仔细阅读色谱柱附带的说明书，注意适用
范围，如pH值范围、流动相类型等；