高效液相色谱_质谱联用技术的应用进展

ESI/MS2 12
茶树 老叶 白花 前胡
红花
7 种儿茶素 8 个香豆素类化合物 红花红色素
川芎 阿魏酸和藁本内酯 扣子七 人参皂苷
Zorbax SB C18 ( 25 cm ×4. 6 mm , 5μm ) 水 ( 0. 05%三氟乙酸 ) - 甲醇 ( 74∶26)
MS
13
A lltam i C18 ( 250 mm ×4. 6 mm , 5μm )
ESI/MS 30
苦味叶 下珠
多酚类成分
A lltima C18 ( 250 mm ×4. 6 mm , 5μm )
甲醇 - 1%乙酸梯度洗脱
M S2
31
1. 2 中药指纹图谱研究 中药指纹图谱技术是采用现代化的分析技术和手段建 立 ,能够测定中药材或中成药共有的 、具有特异性的某类或 几类成分的色谱或光谱信息的图谱 。它具有系统性 、整体 性 、特征性等特点 ,符合现代中药质控的要求 ,较之单一成分 或指标成分的质控方法 ,更具有科学性和全面性 。已经获得 国际社会的广泛认可 ,可以为中药进入世界医药主流市场 , 参与国际竞争提供有力的支持 。 H PLC方法非 常 适 合 中 药 复 杂 体 系 的 分 析 及 其 指 纹 图 谱的建立 ,是目前中药指纹图谱研究中应用最广泛的方法 。 HPLC - M S联用技术随着接口技术的成熟和质谱检测器离 子源种类的增多 ,逐渐在中药指纹图谱的研究中得到广泛应 用。 (1)单味中药指纹图谱研究 马欣等 [32 ]采用 HPLC - DAD /M S建立了银杏叶提取物 的多维指纹图谱 ,同时检测了其中的黄酮和内酯类化合物 , 考察了指纹图谱的精密度 ,重现性和稳定性 ,计算了指纹图 谱相似度 ,并利用 M S碎片信息解析化合物的信息 。张尊建 等 [33 ]建立密花 、马鞭 、短棒 、鼓槌和金钗等 5种石斛的 HPLC - M S指纹图谱 ,并考察了样品的制备方法 。李松林等 [34 ]对 9个批号的川芎药材 HPLC - M S指纹图谱进行了研究 ,确定 了 21个色谱共有峰 ,并对其中阿魏酸 、藳苯内酯 、川芎嗪等
药物 名称
样本
联机方式
研究内容
文献
罗红 人体 HPLC - ESD 霉素 尿样 HPLC - MS
测定人尿样中的罗红霉素 ( E - Rox) 及其活性代谢产物 Z - Rox
- M S在药物代谢研究方面的部分应用 。 1. 4 体内药代动力学研究 顾泳川等 [62 ]采用 HPLC - M S测定了大鼠静注黄芪甲甙 后的尿药浓度并计算了药代动力学参数 。彭文兴等 [63 ]研究
孟兆玲 ,等 :高效液相色谱 - 质谱联用技术的应用进展
101
表 2 HPLC - MS在药物代谢研究方面的应用
ES I
20
朝鲜淫 羊藿
6 种黄酮类化合物
Capcell Pak C18
甲醇 - 水 (0. 5%乙酸 )梯度洗脱
ES I
21
丹参 大豆
15种化学成分 ,两种未 知的化学成分 大豆皂甙 SS - Ⅰ、SS Ⅱ、SS - Ⅲ
Agilent SB - C18 柱 150 mm ×2. 1 mm , ( 4. 6 ±0. 3) μm Zorbax SB - C18 ( 150 mm ×2. 1 mm , 5μm )
APC I/MS 24
枳壳和 枳实
柚皮苷 、柚皮苷 元 、新 橙皮苷 、橙皮苷 、辛 弗 林等
Symmetry ShieldTM RPC18 ( 150 mm ×3. 9 mm , 5 μm )
甲醇 - 水 (0. 6%乙酸 )梯度洗脱
ESI/MS 25
黄芪 异黄酮苷类化合物
Hypersil C18 ( 250 mm ×4. 6 mm , 5μm )
18
Phenomenex Luna C18 ( 250 mm ×4. 6 mm , 5 水 ( 0. 005 %甲酸 ) - 乙腈 ( 0. 005 %甲
μm )
酸 ) ,梯度洗脱
ESI/MS 19
D iamonsil C18 ( 250 mm ×4. 6 mm , 5 μm )
乙腈 ( 0. 1%乙酸 ) - 水 ( 0. 1%四氢呋 喃 )梯度洗脱
甲酸胺 ( 5. 0 ×10 - 3 mol/L ) - 甲醇 , 梯 度洗脱 乙腈 - 0. 07%乙酸铵水溶液 (29∶71)
ESI/M S2、 ESI/M S3
22
ESI/MS 、 ESI/M S2
23
抱茎獐 牙菜
5 种苷性成分
C18 ( 250 mm ×4. 6 mm , 5μm )
甲醇 - 水梯度洗脱
ESI/MS 28
大豆 大 豆 皂 苷 Ba、Bb 和 W atersAccQ. Tag ( 150 mm ×319 mm , 5 含 0. 05% 三氟乙酸的乙腈 - 水梯度洗
胚芽 Bb′
μm )
脱
M S2
29
大豆 6种大豆皂苷
Zorbax SB - C18 ( 150 mm ×2. 1 mm , 5μm ) 乙腈 - 0. 07%乙酸铵水溶液 ( 29∶71)
宜分离或在分离过程中容易发生变化或损失的成分 。
对分子质量和结构信息 。童玉玺等 [4 ]运用 HPLC - M S3联用
邓亦峰等 [1 ]采用 HPLC - APC I(大气压化学离子化 ) -
技术分析朝鲜淫羊藿有效部位中的化合物结构 ,从中鉴定出
M S联用技术 ,以选择离子监测 ( SIM )方式测定了半边旗中
化学成分的特征峰进行了鉴定 。另外 , HPLC - M S指纹图谱 还用于刺五加 [35 ] 、丹参 [ 36 ] 、茯苓 [ 37 ] 、牛 膝 [38 ] 、忍 冬 及 山 银 花 [39 ] 、牛黄 [40 ] 、密花石斛 [41 ] 、丹皮 [42 ] 、山麦冬 [43 ]等的成分 分析 。 (2)复方中药指纹图谱研究 马仁玲等 [44 ]建立了苦参注射液及其药材和中间体的生 物碱类成分的总离子流指纹图谱 ,考察了精密度 、重复性和 稳定性 ,鉴别了其中 5 个色谱峰 。张尊建等 [45 ]研究了由石 斛 、牛膝 、玄参和金银花制成的脉络宁注射液的 HPLC - M S 指纹图谱 。 1. 3 药物代谢研究 药物代谢是指药物进入体内后在体液 、酶等作用下进行 的生化反应过程 。药物代谢研究包括代谢物的鉴定 、代谢途 径追踪 、体内体外代谢的比较等 。M S一直是进行药物代谢 和生物处置研究的强有力手段 。采用 HPLC - M S法进行药 物代谢研究 ,不仅可以避免繁琐地分离纯化代谢物样品 ,而 且能分离鉴定难于辨识的痕量代谢物 。HPLC - M S在药物 代谢研究中的应用已有报道 [46 ] ,表 2归纳了近几年来 HPLC
进行一级和二级质谱分析 ,与对照品比较鉴定了提取物中 4
1 药物分析
个已知的黄酮类化合物 ,推断出 3个未知黄酮苷类化合物可
1. 1 中草药成分分析
能的结构 。李丽等 [3 ]利用 HPLC - M S联用技术分析鉴定了
中草药中含有的化学成分往往种类众多 、结构复杂 、含 量低 ,相当一部分稳定性差 ,采用常规的分离鉴定技术 ,难度
9个化合物 。其它中草药分析见表 1。
表 1 部分中草药的 HPLC - MS分析
中药名称
测定化合物
大豆 异黄酮
蘑菇柄 大豆
银杏叶
5 ′2核苷酸 大豆异黄酮和皂苷
白果内酯和银杏内酯 A、B、C、J
色谱柱 Supelcosil C18 ( 25 cm ×4. 6 mm ) Zorbax C18 (25 cm ×4. 6 mm , 5 μm ) Symmetry C8
Inertsil ODS - 3
流动相 30% ～60%的甲醇线性梯度 (流动相中 含乙酸 0. 5% )洗脱 0. 05 %磷酸的水 - 甲醇 (体积比为 95∶5) 1%乙酸的甲醇和 1%乙酸 ,梯度洗脱
MS检测器 文献
ESI/MS 5
MS
6
ESI/MS 7
甲醇 - 水 (体积比为 36∶64)
备型 : 250 mm ×8. 0 mm , 5 μm ,色谱填料 (含 0. 1%乙酸 ) 梯度洗脱 ; 色谱制备 : DAD /MS 16
均为 Kromasil)
50 %甲醇
YMC - Pack ODS - AQ
乙腈 - 水梯度洗脱
AP I/MS 17
收稿日期 : 2006208221
100
关键词 高效液相色谱 质谱 联用 综述
高效液相色谱 - 质谱 ( HPLC - M S)联用技术是近几年 二萜类化合物 ,该方法可用于半边旗中二萜类抗癌化合物的
来发展起来的一项新的分离分析技术 。它将 HPLC对复杂 深入研究和生药标准的制 定 。郭 继 芬 等 [2 ] 选 用 D iscovery
APC I/MS
10
红毛 五加
鸟苷 、腺苷和紫丁香树 Zorbax SB - C18 ( 250 mm ×4. 6 mm, 5 乙腈 - 水 (用冰乙酸调 pH 值为 3. 0 )梯
脂苷
μm )
度洗脱
ES I/M S2
11
天麻 对羟基苯类化合物
Hypersil C18 ( 250 mm ×4. 6 mm , 5μm ) 不同比例乙腈等度淋洗
乙腈 (0. 5%甲酸 ) - 水 ( 0. 5%甲酸 )线 性梯度洗脱
M S2
26
大青叶
胞苷 、尿苷 、鸟苷 、黄嘌 呤和次黄嘌呤
D iamonsil C18 ( 200 mm ×4. 6 mm , 5 μm )
甲醇 - 水 (5∶95)
APC I/MS 27
苏薄荷 8个黄酮类成分
L ichrospher C18 ( 250 mm ×4. 6 mm , 5μm ) 乙腈 - 0. 5%冰乙酸水溶液梯度洗脱
甲醇 - 水 (75∶25)
M S2
14
A lltima C18 ( 250 mm ×4. 6 mm , 5 μm ) 乙腈 - 甲醇 - 水 ( 30∶10∶60) (用磷酸调
KR100 - 5C18 ( Kromasil)
节 pH为 3. 0)
API
15
C18 (分析型 : 200 mm ×4. 0 mm , 5μm; 制 定量分析 : 乙腈 (含 0. 1%乙酸 ) - 水
ESI
8
刺五加
数种已知及 5 种未知 的化合物
C18 ( Supelc, 150 mm ×4. 6 mm , 5 μm )
Baidu Nhomakorabea
甲醇 - 乙酸铵缓冲液 ( 40 mmol /L, pH = 4. 0) ( 1∶9)
M S2
9
银杏叶 聚戊烯醇
ODS - 3
异丙醇 - 甲醇 - 正己烷 - 水 ( 50 ∶25 ∶15 ∶2)
样品的高分离能力 ,与 M S具有高选择性 、高灵敏度及能够 提供相对分子质量与结构信息的优点结合起来 ,在药物分
C18柱 ,以甲醇 - 水 - 甲酸 ( 40 ∶60 ∶0. 025)为流动相 ,经紫外 检测后 ,在 ESI- 扫描方式下 ,对 HPLC - UV 图谱中各色谱峰
析 、食品分析和环境分析等许多领域得到了广泛的应用 。
孟兆玲 ,等 :高效液相色谱 - 质谱联用技术的应用进展
99
高效液相色谱 - 质谱联用技术的应用进展
孟兆玲 齐元英 柳仁民
(聊城大学化学化工学院 ,聊城 252059)
摘要 高效液相色谱 - 质谱联用技术具有高分离能力 、高灵敏度 、应用范围广和极强的专属性等特点 。对高效 液相色谱 - 质谱联用技术在药物分析 、食品分析和环境分析等领域的应用 ,特别是在中草药成分分析 、中药指纹图 谱研究 、药物代谢研究 、体内药代动力学研究 、西药及中成药成分分析 、药物筛选研究等方面的应用进行了综述 。
化学分析计量
2006年 ,第 15卷 ,第 6期
续表 1
中药 名称
测定化合物
色谱柱
流动相
MS检测器 文献
腺叶 蔷薇
5 种成分
三七 皂苷类成分
马兜铃 6 种马兜铃酸
Hypersil BDS C18 ( 150 mm ×2. 1 mm , 5 μm )
乙腈 - 水梯度洗脱
ESI离子源正 、 负离子检测
人参粗提物中人参皂苷类化合物 。实验采用反相 C18色谱 柱 ,二元线性梯度洗脱 ( 0. 2%的乙酸水溶液和乙腈 ) ,分离
较大 。HPLC - M S联用技术分析此类样品 ,高效快速 、灵敏 并检测了人参中的皂苷类化合物 ; 通过与 ESI的联用和 M S
度高 ,只需简单预处理或衍生化样品 ,尤其适用于含量少 、不 的源内 C ID技术获得了其中主要色谱峰相对应化合物的相