高效液相色谱质谱联用HPLC

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高效液相色谱质谱联用HPLC

.液相色谱-质谱联用技术（LC-MS）的各种模式探索一、实验目的1、了解 LC-MS 的主要构造和基本原理； 2、学习 LC-MS 的基本操作方法； 3、掌握 LC-MS 的六种操作模式的特点及应用。

二、实验原理 1、液质基本原理及模式介绍液相色谱 - 质谱法（ Liquid Chromatography/Mass Spectrometry ， LCMS）将应用范围极广的分离方法——液相色谱法与灵敏、专属、能提供分子量和结构信息的质谱法结合起来，必然成为一种重要的现代分离分析技术。

但是，LC 是液相分离技术，而 MS 是在真空条件下工作的方法，因而难以相互匹配。

LC-MS 经过了约 30 年的发展，直至采用了大气压离子化技术（Atmospheric pressure ionization，API）之后，才发展成为可常规应用的重要分离分析方法。

现在，在生物、医药、化工、农业和环境等各个领域中均得到了广泛的应用，在组合化学、蛋白质组学和代谢组学的研究工作中，LC-MS 已经成为最重要研究方法之一。

质谱仪作为整套仪器中最重要的部分，其常规分析模式有全扫描模式（Scan）、选择离子监测模式（SIM）。

（一）全扫描模式方式（Scan）：最常用的扫描方式之一，扫描的质量范围覆盖被测化合物的分子离子和碎片离子的质量，得到的是

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化合物的全谱，可以用来进行谱库检索，一般用于未知化合物的定性分析。

实例：（Q1 = 100259m/z）（二）选择离子监测模式（Selective Ion Monitoring，SIM）：不是连续扫描某一质量范围，而是跳跃式地扫描某几个选定的质量，得到的不是化合物的全谱。

主要用于目标化合物检测和复杂混合物中杂质的定量分析。

实例：（Q1 = 259m/z）本实验采用三重四极杆质谱仪（Q1：质量分析器；Q2：碰撞活化室；Q3：..

---------------------------------------------------------------最新资料推荐------------------------------------------------------ .质量分析器），由于多了 Q2、Q3 的存在，在分析测试的模式上又多了四种选择：（三）子离子扫描模式（Product Scan）：第一个质量分析器固定扫描电压，选择某一质量离子（母离子）进入碰撞室，发生碰撞解离产生碎片离子，第二个质量分析器进行全扫描，得到的所有碎片离子都是由选定的母离子产生的子离子，没有其它的干扰。

主要用于化合物结构分析。

实例：（ Q1 = 259m/z；Q3 = 100-259m/z）（四）母离子扫描模式（Precursor Scan）：第一个质量分析器扫描电压选择母离子（如分子离子），进入碰撞室碰裂后，第二个质量分析器固定扫描电压，只选择某一特征离子质量，该特征离子是由所选择的母离子产生的，由此得到所有能产生该子离子的母离子谱。

主要用于同系物的分析。

实例：（Q1 = 100-300m/z；Q3 = 259m/z）（五）中性丢失扫描模式（Neutral Loss）：第一个质量分析器扫描所有离子，所有离子进入碰撞室碎裂后，第二个质量分析器以与第一个质量分析器相差固定质量联动扫描，检测丢失该固定质量中性碎片（如质量数 15、18、45）的离子对，得到中性碎片谱。

主要用于中性碎片的分析。

实例：（ Q1 = 100-300m/z；Q3 = 82-282m/z）（六）多反应监测模式（MRM）：第一个质量分析器选择一个（或多个）特征离子，经

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过碰撞解离，到达第二个质量分析器再进行选择离子检测，只有符合特定条件的离子才能被检测到，因为是两次选择，比单四极质量分析器的 SIM 方式选择性、排除干扰能力、专属性更强，信噪比更高。

主要用于定量分析。

实例：（Q1 = 259m/z；Q3 = 138m/z） 2、实验内容简介邻苯二甲酸酯(简称PAEs)是一类重要的环境内分泌干扰物，常被用作塑料的增塑剂，也可用作农药载体。

近年来，随着工业生产和塑料制品的广泛使用，邻苯二甲酸酯不断进入环境，普遍存在于土壤、底泥、大气、水体和生物体等环境样品中，成为环境中无所不在的污染物。

据报道，邻苯二甲酸酯类具有较弱的环境雌激素成分，具有影响生物体内分泌和导致癌细胞增殖的作用。

环境内分泌干扰物是指能改变机体内分泌功能，并对机体、后代或（亚）种群产生有害效应的环境物质。

由于环境内分泌干扰物对人和动物有种种不良影..

---------------------------------------------------------------最新资料推荐------------------------------------------------------ .响，对环境内分泌干扰物的研究已成为国际关注的焦点。

我国也正在逐渐重视有关环境内分泌干扰物的研究。

三、仪器与试剂 1、仪器液相系统：Varian Pro Star；自动进样器：Varian 410 自动进样器；质谱仪：Varian 310 LC-MS/MS 三重四极杆质谱仪（ESI 离子源）；色谱柱：Varian Inertsil 3 ODS-3（150mm×2mm，3μm）。

2、试剂甲醇：HPLC 色谱纯；超纯水：Millipore Express 超纯水系统制备；标准溶液：用甲醇配制邻苯二甲酸二甲酯 (DMP) 、邻苯二甲酸二乙酯(DEP)、邻苯二甲酸二丁酯(DBP)混合标准溶液（0.1ppm）。

四、实验步骤 1、条件设置色谱条件：流动相（ 90%甲醇+10% 水）；流速（ 0.2ml/min ）；扫描时间（7min）；离子源模式：电喷雾电离（ESI），正离子模式；扫描条件： Detector ：1000V ； Needle ： 5000V ； Shield ： 600V ； Spray Chamber Temperature：50℃；Nebulizing Gas Pressure：55psi；Drying Gas Pressure：18psi，Drying Gas Temperature (℃)：250℃，Capilary Voltage 30(V)，Coll.Energy 30(v)；质量分析器：三重四极杆；进样体积：10ul。

2、实验测定按实验操作规程完成仪器开机、参数设置及测定。

根据表 1 中的数据，设置 m/z，选择各种扫描模式（全扫描、选择离子扫描、子离子扫描、母离子扫描、多反应监测模式）进行测定。

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