生物化学真题之酶

酶

2017 试比较s m K K 、定义即相互关系。（算式详细说明）

m K ，米氏常数，是由一些速率常数组成的一个复合物，在酶促反应过程中，此值代表是酶促反应速率达到最大反应速率一半时的底物浓度。

s K 是酶-底物复合物解离时的常数，也叫底物常数。

2017 很多酶的活性中心都有His （组氨酸））残基参与，请解释

酶的催化能力只局限在大分子的一定区域在，只有少量特异的氨基酸残基参与底物结合及催化作用，这些特异氨基酸残基比较集中的区域，即与酶活力直接相关的区域为酶的活性部位。

His 的咪唑基是一种亲核基团，在催化反应中对底物的亲电子的碳原子进行进攻，生成一种活性很高的共价中间物，后者可迅速变成过渡态，继而转变为底物。

同时酶蛋白分子中组氨酸的侧链咪唑基 pK 值为 6.0~7.0,在生理条件下,一部分解离,可 以作为质子供体,一部分不解离,可以作为质子受体,既是酸,又是碱,可以作为广义酸碱 共同催化反应,因此常参与构成酶的活性中心。同时咪唑基接受质子和供出质子的速率十分迅速，咪唑基有如此特点，所以在很多蛋白质中His 含量很少，却很重要。

2016 为了终止限制性内切酶的作用，研究者经常加入高浓度的金属螯合剂EDTA.为什么加入EDTA 能终止酶反应。

限制性内切酶是一种核酸酶，大多数核酸发挥其酶活性需要镁离子参与作用，金属螯合剂EDTA 的加入使镁离子被螯合，终止了限制性内切酶的作用。

2016 分离某种天然来源的酶，需要设计一种测量纯化过程 酶活性的方法。然而，无论是底物或酶反应的产物都不能用光谱法检测，但你发现反应产物注射到小鼠体内具有高度的抗原性。请设计一种方案，检测这种酶。（666）

1.将酶与过量底物进行反应，提取反应物

2.将反应产物注入小鼠体内，多次免疫后提取抗体

3.将抗体进行纯化

4.将酶、过量底物、荧光标记的抗体进行反应

5.定期用荧光光度计进行检测

2014 实验表明如果将纯化的ATcase 的调节亚基和催化亚基再度混合起来，则ATcase 的结构和活性将恢复，试解释本实验的生物学意义（四级结构的优越性 666）

ATcase （天冬酰胺转甲酰酶）的催化亚基和调节亚基的混合属于亚基的缔合，可说明亚基缔合即四级结构的诸多优点，大多数寡聚蛋白质调节其生物活性都是借助于亚基相互作用。亚基缔合使蛋白一般具有多个结合部位，使其具有协同性和别构效应。

对于天冬酰胺转甲酰酶来说，其催化亚基与调节亚基缔合使酶与底物结合具有协同性，

加快了酶反应时间，效率增高。别构效应有利于酶活性的调节，进而更好得调节生物反应。

2013 某种酶纯化后的活力单位比粗提取的活力单位还要高，为什么？

酶活力的大小即酶含量的多少。在最适宜反应条件下，每一分钟催化一微摩尔底物转化为产物所需的酶量定为一个酶活力单位。

酶纯化以后，纯度提高，杂质减少，故用较少的酶既可催化1微摩尔的底物，即酶活力单位提高。

2012 酶在有底物和没有底物存在时更稳定，解释一下

因为酶与底物结合后，二者相互诱导契合，酶活性中心和底物都发生一定形变，从而紧密结合。且酶与底物结合后酶活性中心不易被外界所破坏。

2009 简述酶活性的的调节方式有那些？

1.酶浓度的调节

2.通过激素调节酶活性

3.酶的别构调控

4.酶原的激活

5.可逆的共价修饰

6.抑制剂和激活剂

7.酶的反馈调节

8.能荷的调节

9.激促蛋白质和抑促蛋白质的调节（如钙调蛋白）

2009 举例说明别构效应的生物学意义

多亚基具有多个结合部位，结合在蛋白质分子的特定部位上的配体对该分子其他部位所产生的影响称为别构效应。对于别构效应，最典型的例子就是别构酶。

例如天冬氨酸转氨甲酰酶，是一个典型的别构酶。其由催化部位和调节部位组成。如将调节部位与催化部位分离，则催化部位与底物的结合就不再具有协同性。另外ATP是ATcase 的别构激活剂，CTP是ATcase的别构抑制剂。所以别构酶能够与不同的配体结合产生别构效应，进而增大或减少对底物的亲和力，影响酶促反应的进行，进而调节生物体内的生命活动反应。

生物体内具有多种别构酶，通过别构效应来该酶活性，从而更好得控制体内反应以及基因表达。

2009 有人研究了不同温度对酶的稳定性与酶活力的影响，得到如下图所示结果。基于此，他得到结论是：该酶在50°C 以下是稳定的，并且最适反应温度为35°C。这一结论正确与否，请说明。（不一定对）

（a）无底物存在时，保温10min 后残存活力。（b）在0.5M 底物存在下,保温10min 后产物生成量。

第一个对，第二个不对，最适温度应该是酶促反应速率最大。

2008在生产应用中，如何判断某一酶抑制剂是竞争性抑制剂，非竞争性抑制剂还是反竞争性抑制剂？

可以通过酶促反应动力学知识进行判别，不同的抑制剂对酶促曲线的影响是不一样的。 在未加入酶抑制剂的情况下，使酶与底物反应，并对酶反应速率与底物浓度进行双倒数作图，可测得m K V 、max

加入抑制剂后，同样的方法作图，同样可求得m K V 、max 。

两次的数值相比较。

若m ax V 不变，m K 增加，则为竞争性抑制剂

若m ax V 减小、m K 不变，则为非竞争性抑制剂

若m ax V 减小、m K 减小，则为反竞争性抑制剂

2008 许多酶催化水解反应的机制式为：

整个反应分两个阶段进行，分别采用快速平衡法和稳态法建立反应动力学方程，均可写成如 下形式：

试比较采用上述两种方法所获得的反应方程中的K cal 和 K K m m 与 k k 1 1 、 k k 2 2 和 k k −1 、 C H2O 有何关系，写出相关式子（待）

2007 简述酶作为生物催化剂的特性。

1.酶易失活：酶是由细胞产生的生物大分子，凡能使生物大分子变性的因素，如高温、强碱、强酸和重金属都能够使酶失去催化活性，因此酶所催化的反应都是在比较温和的常温、常压和接近中性的酸碱调节下进行

2.酶具有很高的催化效率：生物体内的大多数反应，在没有酶的催化下，几乎是无法进行的。

3.酶具有高度的专一性：酶对催化的反应和反应物具有严格的选择性，通常酶只能催化