土壤农化分析下

1植物分析按照测试方式和所测成分形态的不同，又可分为全量分析，可溶性养分的组织速测2 植物样品的采集原则：代表性，典型性，适时性，防止污染3 植物组织样品的采集，首先要定样株。

制备：鲜样；干样①洗涤：在刚采集的新鲜状态冲洗，否则一些易溶性养分很容易从已4 经死亡的组织中洗出，洗去表层。

②杀酶：80~90℃，15~30min（新鲜样品应该立刻干燥，减少体内因呼吸作用和霉菌活动引起的生物和化学变化）③粉碎→保存（磨口的广口瓶）（分析后，最好在玛瑙研钵上研磨）5 籽粒样品的采集，制备：定样株，采籽粒→一公斤左右瓜果蔬菜样品的采集和制备：采回时应冲洗，擦干，短时间内保存可以采用冷藏式，酒精浸泡处理，分析时，一般采取新鲜样品。

6 植物水分的测定目的：①水分含量是鉴定品质和判断是否适于储存的重要标准。

②植物体内的水分和干物质含量是植物生理状态和成熟度的重要指标。

7 水分的测定：（1）常压直接烘干法。

原理：样品在100—105℃情况下烘干一定时间至恒重，失去的质量被认为是水分的质量。

注意：本法适用于含水较少的样品。

恒重：前后两次重量之差不超过2mg。

（2）减压加热干燥法。

原理：在减压条件下，样品中水分在很低温度时蒸发逐尽，样品在干燥前后质量之差即为水分质量。

（3）常压二步烘干法。

原理：将鲜样置于口径稍大的容器中，添加硅砂和硅藻作为干燥辅助剂，先在低温（50--55℃）鼓风至烘脆，再在沸水浴中加热20—40h，除去大部分水分，大致干燥后再在100—105℃烘至恒重。

（4）共沸蒸馏法。

原理：用一种与水不溶，能与水形成恒沸混合物，或沸点在100℃以上的有机液体为载体，与含水的样品一起蒸馏，使待测样品中水分的沸点降低，由此可以在较低温度下样品中的水分能迅速的蒸馏出来，将蒸馏的水和载体的混合蒸汽冷凝，并收集在有刻度的接收器中，待水相和有机相分开后，即可读出水分的体积，计算样品的水分%。

此法更加适用于含有挥发性和干性油的样品。

8总灰分（粗灰分）：在植物组织的农产品分析中，样品经高温灼烧，有机物中的C H O等物质与氧气结合生成CO2，水等而炭化，残留物呈无色或灰白色的氧化物的总称。

测定的意义：（1）测定植株各部的灰分含量，可以了解各种作物在不同生育期和不同器官中灰分及变动情况，对于确定作物收获期等都有重要参考价值。

（2）除测定总灰分外，其他各种灰分元素的测定，对于评价植株的营养状况也具有参考价值。

为什么是粗灰分？由于在实验中燃烧的炭粒不易完全燃尽，样品上可能粘附少量的尘土和泥沙，而且灼烧后无机盐组成有所改变或损失。

9常用灰分测定方法：一般灰化法；灰化后的残灰用水浸湿后在次灰化；灰化后的残灰用热水溶解过滤后再次灰化残渣；添加醋酸镁或碳酸钙等灰化；添加硫酸灰化(使阳离子全部为硫酸盐)10粗灰分的测定：（1）直接灰化法（一般不做空白试验）原理：将样品小心加热炭化和灼烧，除尽有机质，剩下的有机矿物质冷却后称重，即可计算样品总灰分含量。

干燥剂：一般用用135℃下烘几小时的变色硅胶注意：灰化过程中，加热速度不可太快，以防急剧于馏时灼热物局部产生大量气体而至微粒爆炸，而且在高温时p,s等也可能被炭粒还原为氢化物公式：粗灰分%=（m2-m1）/(m3-m1)×100（2）添加醋酸镁灰化法。

原理：谷物及其制品中，PO43-一般过剩阳离子，高温时P等酸性离子易遗失，且灰化中形成K Na磷酸盐，容易形成较低温度下熔融的较低温度的有机物，因而包裹在炭表面，造成供氧不足，延长灰化时间，且难以灰化完全。

因此添加灰化辅助剂，如醋酸镁与过剩的磷酸结合，残灰不熔融，呈白色松散状态，避免P的损失。

灰化时间大大缩短。

并且不损坏灰化容器。

但需做空白实验。

粗灰分（%）=（m2-m1-b）100/（m3-m1），b 为空白实验时残渣质量。

11植物常量元素的测定。

（1）植株全N的测定。

开氏法：用浓硫酸与混合加速剂消煮样品，将有机N转化铵态氮后用蒸馏滴定法。

混合加速剂：硫酸钾或硫酸钠、硫酸铜、Se。

（2）硫酸—双氧水，一次消煮可同时测N P K多种元素。

（3）硫酸—高氯酸，的氧化剂作用过于强烈，易造成N的损失，使结果不可靠。

12（1）植株全N的测定：原理：植物样在浓硫酸溶液中，历经脱水碳化，氧化等一系列作用，而氧化剂H2o2在热H2S溶液中分解出的新生态O具有强烈的氧化作用，分解硫酸没有破坏的有机物和C使有机N、P等转化为无机铵盐和磷酸盐等，因此可以在同一消煮液分别测定N、PK等元素的联合测定。

（2）奈式比色法原理：待测液中的铵在PH=11的碱性条件下，与奈式试剂作用生成橘黄色配合物，PH=4时褐色，从ph=4~11之间随ph值升高而颜色加深，ph=11时显色完全，其橘黄色的深浅在显色液NH4+~N的浓度在0.2~3mg/L时符合定律。

注意：（1）测定中有很多物质会引起浑浊，尤其是钙离子和镁离子的干扰，可加酒石酸钠掩蔽。

（2）做空白（3）双氧水滴加时直接加入溶液中，挂在壁上会很快分解，失去效用。

（4）溶液中残余的双氧水要加热分解，否则会影响N P的比色测定。

（5）如果待测液含量过高，则稀释后在测定。

（3）水扬酸—Zn粉还原法。

原理：硝态氮室温下与硫酸介质中水扬酸作用，生成硝基水扬酸，再用Na2S2O3或锌粉还原，变成氨基水扬酸，然后进行硫酸—混合加速剂法消煮分解，将全部有机N转化为铵盐，铵态氮的测定用半微量蒸馏法进行。

13植物中P的测定：当P的含量高时，选用钒钼黄法为佳，反之则可用钼蓝法原理：消煮分解制备待测液同测全N，待测液中正磷酸能与偏钒酸盐和钼酸盐在酸性条件（酸度太低时显色不完全或不显色，太低时可能生成沉淀或其它物质）下作用，形成黄色的杂聚化物钒钼酸盐。

溶液的黄色很稳定，起深浅与P含量成正比，可用比色法测定P的含量。

全P（%）=p*v*ts*10-4/m特点：H2SO4-H2O2消煮，钒钼黄比色法做空白，灵敏度较钼蓝法低，但其干扰离子少，特别是FE3+的允许量适高于钼蓝法14 植物中全K的测定：植物体内的K素几乎全部以离子态存在于组织中，用火焰光度计法测定（快速方便，结果可靠准确）全K (%)=p*v*ts*10-4/m ts=消煮液定容体积（ml）/吸收消煮液体积（ml）要求：溶液酸度不超过0.25mol/L15溶液中钙镁离子的测定—EDTA配合滴定，或AAS法EDTA配合滴定原理，植物经干灰化后用稀HCL煮沸，溶解样品中的钙和镁，待测溶液中CA2+ MG2+用EDTA直接滴定法测量，对P较高的用EDTA反滴定法16 植物微量元素的测定，Cu Zn的测定—AAS法（原子吸收分光光度法）11Pr分样方法：（1）利用Pr共性，即含N量，肽键，折射率测定Pr含量（2）利用Pr中特定An残基，酸，碱性基团和芳香基团测定Pr含量粗Pr：开氏法因其中上有氨基酸，酰氨等非Pr氨，故称粗Pr纯Pr：如果Pr用重金属盐等沉淀分离以后，进行全N测定，有N换算而成的Pr的含量，称为“纯Pr”17 籽粒中粗Pr的测定：H2SO4——K2SO4——CUSO4——SE消煮法方法原理：用开氏消煮法定N，再将测得的含N值乘以Pr换算系数，即得粗Pr含量。

N含量换算成Pr的系数，一般采用6.25，这是由Pr平均含N16%为根据导出的值。

双缩脲法：原理：pr的肽结构，具有类质于双缩脲可溶性基因，在碱性条件下能与Cu2+生成紫红色可溶络合物，Pr含肽键多时呈兰色，反之肽键呈红色，这种那个颜色反应为双缩脲反应，实验证明，Pr溶液浓度在1-1.5mg之间，呈色溶液的吸收值与Pr含量成正比关系，故可用此法18水溶性糖的测定：首先用80摄氏度水浸提，也可以用酒精浸提（淀粉和葡萄糖高时采用）水果蔬菜等通常用水作浸提剂。

干扰物质有：Pr An多糖及色素等澄清剂的作用：沉淀一些干扰物质。

澄清剂的要求：（1）能完全除去干扰物质（2）不会吸附糖类,也不改变糖类的比旋光度等理化性质（3）过剩的澄清剂应不干扰后面的操作或易于除，掉澄清剂种类（避免使用过量）：（1）中性醋酸铝：能除去Pr，丹宁，有机酸，果胶，还能凝聚其它胶体，脱重力差，不能用于深色糖及糖浆制品，果蔬等（2）碱性醋酸铝：缺点：生成体积较大的沉淀，可带走还原糖，特别是用于处理深色的蔗糖溶液，作供旋光仪测定之用。

（3）醋酸锌和重铁氯化钾溶液：澄清效果好，使用色泽较浅，富含Pr的提取液（4）Al(OH)3：浅色糖的澄清（5）活性炭19 单糖的测定：单量分析法，铜还原法，氰化盐碘量法，铜还原—直接测定法（适宜于含糖量高的样品）方法原理：还原糖可使菲林试剂还原生成CU2O的沉淀，而本身被氧化和降解成糖酸。

菲林试剂是由CUSO4溶解，NAOH和KNO2C4H4O6溶液组成，酒石酸盐可与铜盐形成配离子而不致生成氢氧化铜沉淀。

在煮沸条件下，用还原糖待测液滴定一定量的菲林试剂时，铜的酒石酸配离子被还原糖还原，产生红色CU2O沉淀，还原糖则被氧化和降解。

滴定时是以亚甲基盐为氧化还原指示剂，稍过量的还原糖可使蓝色的氧化型亚甲基蓝还原为无色的还原型甲基蓝，即达滴定终点。

以亚甲基蓝为氧化还原指示剂，由兰色变为无色注意：（1）加粉状CACO3目的：中和样品中的酸度（2）无色的还原型亚甲基蓝极易被大气中的氧气氧化，恢复原来的兰色，所以滴定过程中三角瓶不能离开水溶性糖包括单糖（葡萄糖，果糖）双糖（蔗糖）20 水溶性糖的测定：（1）夏费—索姆吉法（2）半微量法（3）适用于含糖少的植物样品（4）需做空白标定方法原理：夏费—索姆吉试剂与还原糖作用生成CU2O沉淀，其原理与铜还原法相同。

用H2SO4取时，CU2O即溶解成CU+离子。

试剂中的KIO3与KI在酸化同时发生，试剂中的KIO3，是定量加入的，所以生成的I2也是一定量的，生成的I2与CU+离子发生氧化还原反应，消耗一部分I2溶液中剩余的I2以淀粉为指示剂，用NA2SO2O3标准溶液滴定，在测定同时做空白标定，以水代替糖试液，由空白标定消耗的NA2S2O3升数减去实测糖液消耗的NA2S2O3毫升数，查表即得所测糖液中还原糖的毫克数。

21蔗糖的测定：蔗糖（%）={（水溶性糖总量%）—（水解前的还原糖含量%）}*0.9522 淀粉的测定：淀粉经由酸水解成葡萄糖淀粉经由酶水解成麦芽糖和糊精再经酸水解成葡萄糖淀粉经分散和酸解后具有一定的旋光性，则是旋光法测定淀粉含量的基础23谷物种子粗淀粉的测定CACL2—HOAC浸提—旋光法（重复性好，操作也简单，快速）方法原理：淀粉是多糖聚合物，可用CACL2—HOAC为分散和液化剂，在一定酸度和加热条件下，是淀粉溶解和部分醇酸解，生成一定的水解产物，具有一定的旋光性，可用旋光计测定。

注意事项：（1）CACL2—HOAC溶液的酸度必须调节至PH2.3 (2)样品中含有水溶性糖类，须先用80%乙醇洗糖（3）CACL2—HOAC溶液应放在放入甘油浴前约5MIN时，才加入，以防样品粘附在瓶底，影响分散效果（4）试液证明，在加热初期搅拌，淀粉易结块。