水的大肠菌群检测方法
水中总大肠菌群检测方法
水中总大肠菌群检测方法
水中总大肠菌群检测一般采用以下方法：
1. 高级培养基方法：将取样的水样加入适当的营养培养基中，培养出细菌，并计数大肠菌群的数量。
常用的培养基有大肠杆菌培养基、MacConkey培养基等。
2. 荧光定量PCR方法：通过PCR技术检测水中大肠菌群的DNA，使用荧光探针结构标记大肠杆菌特异性基因，通过测定荧光信号进行定量分析。
3. 流式细胞仪方法：将水样进行染色，然后通过流式细胞仪分析计数大肠菌群的数量。
常用的染色方法有DAPI染色法、荧光活菌染色法等。
4. 基于微生物生物传感器的方法：利用微生物细胞对特定细菌的识别和响应能力，设计合成生物传感器来监测水中大肠菌群的存在和数量。
以上方法可根据实际需要选择使用，各自具有不同的优缺点。
在进行水环境监测时，可以结合多种方法进行检测，以获得准确和可靠的结果。
水中总大肠菌、大肠埃希氏菌和耐热大肠菌群的测定 光度法
水中总大肠菌、大肠埃希氏菌和耐热大肠菌群的测定光度法
水中总大肠菌、大肠埃希氏菌和耐热大肠菌群的测定是一项重要的环境监测工作，对于保障水质安全具有重要意义。
光度法是一种常用的测定方法，通过测定样品中细菌的光学密度来间接反映其浓度，具有操作简便、结果准确等优点。
本文将介绍水中总大肠菌、大肠埃希氏菌和耐热大肠菌群的光度法测定方法。
一、实验仪器与试剂
1. 实验仪器：分光光度计
2. 试剂：含有氯化铁的培养基、无菌水
二、样品处理
1. 取水样：从待测水体中取得一定体积的水样，使用无菌容器收集。
2. 过滤处理：将水样通过0.45μm的微孔滤膜过滤，以去除大颗粒悬浮物和杂质。
3. 稀释处理：取适量过滤后的水样，用含有氯化铁的培养基进行适当稀释，以提高细菌在培养基中的生长适应性。
三、菌落计数
1. 培养条件：将处理后的水样接种在含有氯化铁的培养基上，进行37℃培养24小时。
2. 计数方法：取适量培养好的菌落涂布在琼脂平板上，进行菌落计数。
四、光度法测定
1. 光学密度测定：取适量经过稀释处理的水样，用分光光度计在特定波长下进行吸光度测定。
2. 细菌浓度计算：根据吸光度值和标准曲线，计算出水样中细菌的浓度。
五、结果分析
根据测定得到的数据，可以对水样中总大肠菌、大肠埃希氏菌和耐热大肠菌群进行浓度分析，为水质安全评价提供参考依据。
通过光度法测定水中总大肠菌、大肠埃希氏菌和耐热大肠菌群的浓度，可以及时了解水质情况，为环境保护和公共卫生安全提供重要数据支持。
希望本文介绍的光度法测定方法对相关工作人员有所帮助。
饮用水大肠菌群检测方法
饮用水大肠菌群检测方法大肠菌群是指在37℃培养24h 内能发酵乳糖产酸、产气的兼性厌氧的革蓝氏阴性无芽孢杆菌的总称。
主要由肠杆菌科中四个属内的细菌组成，即埃希氏杆菌属、柠檬酸杆菌属、克雷伯氏菌属和肠杆菌属。
水的大肠菌群数是指100 mL水检样内含有的大肠菌群实际数值，以大肠菌群最近似数(MPN)表示。
在正常情况下，肠道中主要有大肠菌群、粪链球菌和厌氧芽孢杆菌等多种细菌。
这些细菌都可以随人畜排泄物进入水源，由于大肠菌群在肠道内数量多，所以，水源中大肠菌群的数量，是直接反映水源被人畜排泄物污染的一项重要指标。
目前，国际上已公认大肠菌群是粪便污染的指标。
因而对饮用水必须进行大肠菌群的检查。
水中大肠菌群的检测方法，常用多管发酵法和滤膜法。
多管发酵法可适用于各种水样的检验，但操作繁琐，需要的时间较长。
滤膜法仅适用于自来水和深井水，操作简单、快速，但不适用于杂质较多、易于堵塞滤孔的水样。
(一)水样的采集供细菌学检验的水样，必须按一般无菌操作的基本要求采集，并保证再运送、贮存过程中不受污染。
水样从采集到检验不应超过4h，在0～4℃下保存不应超过24h ，如不能在4h 内分析，应在检验报告上注明保存时间和条件。
1、自来水取样：应在水龙头打开放水5min，再用无菌容器接取水样，待分析。
如水样内含有余氯，则采样瓶灭菌后按每500mL水样加3%Na2S2O3.5H2O溶液1mL。
2、江、河、湖、池自然水体取样：可用采样器，采样瓶应先灭菌。
采样后，瓶内应留有空隙。
如果与其他化验项目联合取样，细菌学分析水样应采在其他样品之前。
(二)初发酵试验1.水样稀释：制备水样10-1、10-2的稀释液，方法为用无菌移液管吸取水样10mL放于盛有90mL无菌水和若干玻璃珠的锥形瓶中，充分振荡使混合均匀，并使其中的细菌尽量呈单个存在，即为10-1稀释液;再从10-1制备10-2稀释液。
以此类推，稀释到所需倍数。
2.接种和培养：以无菌操作于5支三倍浓缩培养基(接种前一定应先检查杜汉氏小管内有无气泡)中各加入水样10mL，5支普通培养基试管中加入水样1mL，5支普通培养基试管中加入10-1稀释液1mL，小心混匀放入37℃培养箱中培养24h 。
水中大肠菌群的检测
水中大肠菌群的检测法——（多管发酵法）一、实验原理大肠菌群是评价水质好坏的一个重要的卫生指标，也是反映水体被生活污水污染的一项重要监测项目。
大肠菌群是一群以大肠埃希氏菌（Escherichia coli）为主的需氧及兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌，在37℃生长时，能在48小时内发酵乳糖并产酸产气。
我国生活饮用水卫生标准中规定一升水样中总大肠菌群数不超过三个。
多管发酵法包括初发酵试验、平板分离和复发酵试验三个部分。
发酵管内装有乳糖蛋白胨液体培养基，并倒置一德汉氏小套管。
乳糖能起选择作用，因为很多细菌不能发酵乳糖，而大肠菌群能发酵乳糖而产酸产气。
本实验为精简实验，所以省略了平板分离和复发酵试验后两部分，直接通过第一部分初发酵试验的颜色变化进行判断是否存在大肠菌群。
初发酵试验水样接种于发酵管内，37℃下培养，24小时内小套管中有气体形成，并且培养基混浊，颜色改变，说明水中存在大肠菌群，为阳性结果。
48小时后仍不产气的为阴性结果。
二、实验器材1.水样中心湖的湖水2．试剂三倍浓缩乳糖蛋白胨发酵管3．仪器及其它用品移液枪，16支试管（16支德汉氏小套管）三、实验步骤初发酵试验取16支发酵管，其中10支用移液管加入10ml一倍的乳酸蛋白胨培养液，5支加入5ml三倍乳糖蛋白胨培养液，1支加入9ml自然水。
然后往16支试管各倒置一支汉氏小套管。
完成后包装好，于121℃高压灭菌锅中灭菌30min 左右。
将取回来的中心湖水样稀释20倍。
待试管冷却后，在无菌操作条件下，向装有三倍的乳酸蛋白胨培养液的5支试管加入10ml水样，向装有一倍的乳糖蛋白胨培养液的5支试管中加入1ml水样，向装有一倍的乳酸蛋白胨培养液的另5支试管中加入1ml 10-1水样。
将各试管充分混均，置于37℃恒温箱中培养24h。
四、实验结果同时观察其他两组也是用中心湖水样的，其结果全都是显示为黄色。
初步得出，取回来的水样的大肠菌群严重超标，比检测表的上限还要高，已经失去检测的意义了。
水中耐热大肠菌群检测方法
水中耐热大肠菌群检测方法水中耐热大肠菌群检测是一种用于评估水质和判断水域环境卫生安全的重要方法。
下面是关于水中耐热大肠菌群检测的10条基本信息以及详细描述：1. 流式细胞术：流式细胞术是一种通过将水样中的细菌标记并通过流式细胞仪进行检测和计数的方法。
适用于快速分析水样中的大肠菌群含量。
2. 膜过滤法：膜过滤法通过将水样通过膜滤器，筛选并集落大肠菌群，并在适当的培养基上进行培养，可用于定量检测水样中的大肠杆菌。
3. PCR技术：PCR技术通过引物对大肠菌群的DNA进行扩增，从而快速检测水样中的大肠菌群的数量和种类。
可以利用PCR技术进行快速筛选和检测水质。
4. 培养方法：传统的培养方法通过将水样中的细菌在适当的培养基上进行培养，进行形态和生理特性的观察，并通过计数菌落形成单位(CFU)来评估水样中大肠菌群的含量。
5. 颜色指示法：这种方法通过将水样与专门的指示剂配合使用，观察颜色变化以识别大肠菌群污染。
可以通过比较颜色的深浅程度来估计水样中大肠菌群的含量。
6. 微生物生化方法：利用大肠菌群的特定生化反应，如气体产生、酶反应等来判断水样中是否存在大肠菌群污染。
适合用于水样中大肠菌群含量的快速筛查。
7. 荧光显微镜技术：荧光显微镜技术利用特定的荧光探针标记细菌，通过显微镜观察细菌的形态和分布情况，可以用来定性检测大肠菌群。
8. 免疫学检测方法：免疫学检测方法通过检测水样中的大肠菌群特异性抗原或抗体来判断细菌的存在与否。
可以利用快速免疫层析法或ELISA法进行大肠菌群的快速检测。
9. 流动细胞技术：流动细胞技术将水样通过流动细胞仪，利用荧光标记的细胞特异性探针检测水中的大肠菌群。
可用于快速检测水质中大肠菌群的含量和分布。
10. 分子生物学方法：分子生物学方法可以通过分析水样中的DNA或RNA序列，利用特定的引物对大肠菌群进行特异性检测。
使用16S rRNA基因扩增子测序技术可以鉴定水样中的大肠菌群种类和丰度。
水中总大肠菌群测定
水中总大肠菌群的测定－多管发酵法一、实验目的联合水净化工程中的细菌查验，掌握水环境监测中和给水水质查验中大肠杆菌群数的测定方法，同时经过大肠杆菌群的测定，认识大肠杆菌群的生化特征。
二、原理总大肠菌群可用多管发酵法或滤膜法查验。
多管发酵法的原理是依据大肠菌群细菌能发酵乳糖、产酸产气以及具备革兰氏染色阴性，无芽孢，呈杆状等相关特性，经过初发酵试验、平板分别和复发酵试验等三个步骤进行实验求得水样中的总大肠菌群数。
试验结果以最可能数（most probable number），简称MPN 表示。
三、仪器高压蒸气灭菌器；恒温培育箱；冰箱；生物显微镜；载玻片；酒精灯；镍铬丝接种棒；培育皿（直径 100mm）；试管（18× 180mm）；吸管（1、5、10mL）；烧杯；锥形瓶；采样瓶等等。
四、培育基的制备：1.乳糖蛋白胨培育液：将 10g 蛋白胨、 3g 牛肉膏、 5g 乳糖和 5g 氯化钠加热溶解于1000mL 蒸馏水中，调理溶液 pH 为—，再加入 1.6%溴甲酚紫乙醇溶液 1mL，充足混匀，分装于试管中，于 115℃高压灭菌器中灭菌 20min，储存于冷暗处备用。
2.三倍浓缩乳糖蛋白陈培育液：按上述乳糖蛋白胨培育液的制备方法配制。
除蒸馏水外，各组分用量增添至三倍。
3.品红亚硫酸钠培育基（ 1）储备培育基的制备：于2000mL 烧杯中，先将20—30g 琼脂加到900mL 蒸馏水中，加热溶解，而后加入 3.5g 磷酸氢二钾及10g 蛋白胨，混匀，使其溶解，再用蒸馏水增补到1000mL，调理溶液pH 至—。
趁热用脱脂棉或绒布过滤，再加10g 乳糖，混匀，定量分装于250 或 500mL 锥形瓶内，置于高压灭菌器中，在115℃灭菌20min，储存于冷暗处备用。
（2）平皿培育基的制备：将上法制备的储备培育基加热消融。
依据锥形瓶内培养基的容量，用灭菌吸管按比率汲取必定量的5%碱性品红乙醇溶液（ 1000mL培育基约加 20mL5%碱性品红乙醇溶液），置于灭菌试管中；再按比率称取无水亚硫酸钠（ 1000mL 培育基约加 5g 无水亚硫酸钠），置于另一灭菌空试管内，加灭菌水少量使其溶解，再置于开水浴中煮沸 10min（灭菌）。
地下水总大肠菌群的测定方法
地下水总大肠菌群的测定方法
地下水中总大肠菌群的测定是非常重要的，因为它可以反映出
水质的卫生状况。
以下是一些常用的测定方法：
1. 膜过滤法，这是一种常用的测定方法，通过将地下水样品通
过0.45微米的膜过滤器，然后将膜放置在含有大肠菌群特异培养基
的琼脂平板上进行培养。
培养后，通过计数形成的菌落来确定水样
中大肠菌群的数量。
2. 荧光素基因定量PCR法，这是一种分子生物学方法，通过提
取地下水中的DNA，使用荧光素基因特异引物进行PCR扩增，然后
使用荧光素探针进行定量检测。
这种方法可以快速准确地测定大肠
菌群的数量。
3. 色素培养基法，使用含有某种特定底物的琼脂平板进行培养，通过大肠菌群对底物的特异反应产生的颜色变化来测定其数量。
4. 流式细胞术，这是一种高通量的测定方法，通过将水样中的
微生物染色标记，然后通过流式细胞仪进行快速准确地测定大肠菌
群的数量。
总的来说，测定地下水中总大肠菌群的方法有多种，可以从不同的角度对水质进行评估。
在实际应用中，可以根据实际情况选择合适的方法进行测定。
水中耐热大肠菌群检测方法
水中耐热大肠菌群检测方法水中耐热大肠菌群是指在水体中生存繁殖的耐热性强的大肠杆菌及其近缘菌种。
这些菌群可以引起水污染，可能对人类健康造成潜在风险。
因此，水中耐热大肠菌群的检测对于水质评估和公众健康至关重要。
本文将介绍一种常用的水中耐热大肠菌群检测方法。
传统方法：1.涂标法：将水样涂于大肠杆菌选择性琼脂培养基的表面，培养并检测菌落形成。
2.溶解法：将水样固体沉淀后，培养在大肠杆菌选择性琼脂培养基中，培养并检测菌落形成。
这些传统方法的主要优点在于简单易行，但也存在着一些缺点，如操作时间长，对菌种的选择性不够明确，容易产生假阳性和假阴性结果等。
随着生物技术的不断发展，现代分子生物学技术的应用广泛，水中耐热大肠菌群的检测方法也得到了很大的改进和完善。
现代方法：1.PCR法：PCR（聚合酶链式反应）是一种高灵敏度的核酸检测方法，可以直接从水样中检测到耐热大肠菌的DNA。
通过PCR扩增特定的基因序列，如16SrRNA基因序列，来进行耐热大肠菌的检测。
这种方法具有高度的特异性和灵敏度，可以快速准确地检测到耐热大肠菌的存在。
2.荧光原位杂交法：荧光原位杂交（FISH）是一种直接在原位上检测特定细菌群落的方法。
通过标记具有亲缘关系的细菌的特定DNA序列，然后在水样中进行原位杂交，通过荧光显微镜观察，并计数特定菌群的数量。
这种方法不仅可以定量，还可以确定细菌群落的分布情况。
3.基于纳米技术的检测方法：近年来，基于纳米技术的检测方法也得到了广泛的应用。
例如，通过使用有特定响应于耐热大肠菌存在的纳米材料，如金纳米颗粒，可以实现对耐热大肠菌的快速检测和定量，并且具有高灵敏度和良好的选择性。
综上所述，水中耐热大肠菌群的检测是十分重要的，可以通过传统方法如涂标法和溶解法，也可以通过现代方法如PCR法、荧光原位杂交法和基于纳米技术的检测方法来进行。
这些方法各有优缺点，需要根据实际需要来选择合适的检测方法。
随着技术的发展和进步，相信将会有更多更高效的水中耐热大肠菌群检测方法被开发出来，为水质监测和公众健康保护提供更好的支持。
水中总大肠菌群的测定法(多管发酵法)
先将琼脂加至900ml蒸馏水中，加热溶解，然后加入磷酸氢二钾和蛋白胨，混匀使之溶解，再以蒸馏水补足至1000ml，用1mol/L的NaOH或HCl调节pH为7.2～7.4，趁热用脱脂棉或绒布过滤，再加入乳糖，混匀后定量分装于烧瓶内，置于高压蒸汽灭菌器中，以115℃灭菌20分钟，贮存于冷暗处备用。
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接种量，ml
每100ml水样中总大肠菌群数近似数
接种量，ml
每100ml水样中总大肠菌群数近似数
3.3.3平皿培养基的配制
将上法制备的贮备培养基加热融化，根据烧瓶内培养基的容量，用灭菌吸管按比例吸取一定量已灭菌的2%伊红水溶液及一定量已灭菌的0.5％美蓝水溶液，加入已融化的贮备培养基中，并充分混匀（防止产生气泡），立即将此种培养基适量倾入已灭菌的空平皿内，待其冷却凝固后置冰箱内备用。
生活饮用水中总大肠菌群三种不同检测方法比较
生活饮用水中总大肠菌群三种不同检测方法比较在生活饮用水中，大肠菌群是一种重要的指标，用来评价水源的卫生状况。
常见的三种大肠菌群检测方法包括MPN法（Most Probable Number）、膜过滤法和PCR法（聚合酶链式反应法）。
本文将对这三种方法进行比较，分析其特点和适用场景。
首先，MPN法是一种常用的大肠菌群检测方法。
该方法通过对一系列稀释液进行培养，根据培养液中菌落的种类和数量来评估大肠菌群的含量。
这种方法的优点是操作简单、成本较低，可适用于大批量的水样检测。
但是，MPN法的缺点是需要较长时间的培养过程，通常需要3-5天的时间才能得到结果。
此外，该方法对生活饮用水中的非培养大肠菌群无法进行检测。
其次，膜过滤法是一种较为常用的大肠菌群检测方法。
该方法通过将水样通过特殊大小的膜过滤器，使大肠菌群滞留在膜上，然后将膜转移到培养基上进行培养。
该方法的优点是操作相对简单，需要的时间较短，通常在24小时内可以得到结果。
此外，该方法可以对生活饮用水中的非培养大肠菌群进行检测。
但是，膜过滤法的缺点是需要较多的培养器材和耗材，成本较高。
最后，PCR法是一种较为先进的大肠菌群检测方法。
该方法通过扩增水样中大肠菌群的DNA片段，然后利用荧光技术进行检测。
PCR法的优点是快速、灵敏，可以在短时间内得到准确的结果。
此外，该方法可以对生活饮用水中的非培养大肠菌群进行检测，并可以进行定量分析。
但是，PCR法的缺点是需要较复杂的实验设置和专业的设备，操作要求较高，成本较高。
综上所述，生活饮用水中总大肠菌群的检测方法包括MPN法、膜过滤法和PCR法。
这三种方法各有特点，在不同的场景中适用。
MPN法适用于大批量的水样检测，操作简单、成本较低，但需要较长时间。
膜过滤法适用于一般的大肠菌群检测，操作相对简单、时间较短，但成本较高。
PCR 法适用于准确和快速的大肠菌群检测，可以进行定量分析，但需要较复杂的实验设置和专业设备。
在实际应用中，可以根据需求和实际条件选择合适的检测方法来评估生活饮用水的卫生状况。
水的大肠菌群检测方法修订稿
水的大肠菌群检测方法 WEIHUA system office room 【WEIHUA 16H-WEIHUA WEIHUA8Q8-4．1 在2个装有50ml三倍浓缩乳糖胆盐培养液的大试管或烧杯内各加入水样100mL。
4．2 在10支装有5mL三倍浓缩乳糖胆盐培养液的试管里各加入水样10mL。
4．3 轻摇试管，使液体充分混匀，置36±1℃培养箱中，培养24h。
4．4 观察每管是否产气，如不产气则报告为大肠菌群阴性；若有气体产生则为推测性试验阳性，需做进一步的证实试验。
5 证实试验5．1 平板分离自推测性检验阳性管中取一接种环培养液，接种到伊红美蓝琼脂平板上，置36±1℃培养箱培养18～24h，观察菌落形态，典型的大肠菌群菌落为黑紫色或红紫色，具有金属光泽。
5．2 复发酵试验挑取可疑大肠菌群菌落1或2个进行革兰氏染色，同时接种乳糖发酵管，于36±1℃培养箱中，培养24h。
5．3 凡乳糖发酵管最终产酸产气，革兰氏染色为阴性的无芽胞杆菌，为大肠菌群阳性。
记下证实实验的阳性管数，查最大可能数（MPN）检索表得出1000mL水样中总大肠菌群的MPN值。
总大肠菌群（MPN）检索表二、大肠菌群膜法测定1 定义大肠菌群（coliform bacteria）为需氧及兼性厌氧的革兰氏阴性无芽胞杆菌，将带菌滤膜贴在含乳糖的选择性培养基上，经37℃培养24小时后，呈现深暗红色带金属光泽的菌落。
2 仪器2．1 滤器2．2 滤膜，孔径0．45μm。
直径根据滤器规格，目前常用的有35mm和27mm两种。
2．3 抽滤设备2．4 无齿镊子2．5 其它仪器见《GB/T ××××－××公共场所茶具微生物检验方法，大肠菌群测定》中第3章。
3 培养基3．1 品红亚硫酸钠培养基3．1．1 成分：蛋白胨 10g酵母浸膏 5g牛肉膏 5g乳糖 10g琼脂 10～20g磷酸氢二钾 3．5g无水亚硫酸钠 5g5％碱性品红乙醇溶液 20mL蒸馏水 1000mL3．1．2 储备培养基的制备将磷酸氢二钾、酵母浸膏、牛肉膏及蛋白胨加到含有900mL蒸馏水的烧杯中，溶解后调pH值到7．2～7．4，加入琼脂加热溶解，用蒸馏水补足至1000mL，趁热用脱脂棉或绒布过滤，再加入乳糖，混匀后定量分装于烧瓶内，115℃高压灭菌20min，置冷暗处备用。
水的大肠菌群检测方法
水的大肠菌群检测方法水是生命的重要组成部分，也是人类日常生活中不可或缺的资源。
然而，水源的安全性和水质的卫生问题一直备受关注。
其中，水中的大肠菌群含量是衡量水质卫生程度的重要指标之一、大肠菌群是指肠道中的一类细菌，其中的分支肠杆菌是最常见的一种。
高含量的大肠菌群在水中存在，可能表明水源受到了粪便或下水道污染。
因此，检测水的大肠菌群含量对评估水源卫生问题至关重要。
以下是一些常见的水的大肠菌群检测方法：1. 集菌法（Most Probable Number Method，MPN）：这是一种传统的大肠菌群检测方法，常用于饮用水和游泳池水的监测。
该方法通过在不同稀释度的水样中进行培养，并观察菌落形成的情况来估算大肠菌群的含量。
这种方法的优点是简单易行，可以适用于一定量的水样，但需要较长的培养时间和专业实验室。
2. 膜过滤法（Membrane Filtration Method）：这是一种常用的水质检测方法，也常用于大肠菌群的检测。
该方法通过过滤水样，将其中的微生物捕捉在膜上，然后将膜转移到含有营养物质的培养基上进行培养。
通过计数培养基上的菌落数量，可估算出水样中的大肠菌群含量。
这种方法的优点是可以对大体积的水样进行检测，并且具有较高的准确性和灵敏度。
3. PCR法（Polymerase Chain Reaction）：PCR法是一种基于DNA分子的检测方法，可以快速检测和测定大肠菌群的含量。
该方法通过提取水样中的DNA，然后使用特定的引物和DNA聚合酶，在反应管中进行一系列温度变化的循环，扩增目标DNA片段。
最后通过凝胶电泳等技术，可以直接观察到扩增产物，从而判断水样中的大肠菌群含量。
PCR法具有高效快速、高灵敏度和高特异性等优点。
同时，PCR法还可以结合实时荧光定量PCR技术，通过测量荧光强度来定量水样中的大肠菌群含量。
4. 流式细胞仪法（Flow Cytometry Method）：流式细胞仪是一种高效、灵敏的细胞计数和分类技术。
水质大肠杆菌检测方法
水质大肠杆菌检测方法水质大肠杆菌是一种常见的水污染指标微生物，其存在表明水体可能受到了粪便或污水的污染。
因此，对于饮用水、游泳水、工业用水等不同用途的水体，检测水质中大肠杆菌的含量具有重要意义。
本文将介绍几种常用的水质大肠杆菌检测方法，以供参考。
一、培养基法。
培养基法是一种常见的大肠杆菌检测方法，其基本原理是将水样在含有大肠杆菌生长所需营养物质的培养基上培养，然后观察培养基上是否有大肠杆菌的生长。
这种方法操作简单，成本较低，但需要一定的培养时间，通常需要24-48小时才能得到结果。
此外，培养基法对于大肠杆菌的特异性较差，可能会同时检测出其他肠道菌群。
二、膜过滤法。
膜过滤法是一种常用的水质微生物检测方法，其原理是将水样通过微孔膜过滤，然后将膜放置在含有营养物质的培养基上进行培养。
通过计数膜上的大肠杆菌落，可以得到水样中大肠杆菌的数量。
这种方法操作简便，结果准确，而且可以检测到低浓度的大肠杆菌。
但是，膜过滤法需要一定的实验室设备和技术支持。
三、分子生物学方法。
随着分子生物学技术的发展，PCR（聚合酶链式反应）和实时荧光定量PCR等分子生物学方法也被应用于水质大肠杆菌检测中。
这些方法具有高度的特异性和灵敏度，可以快速准确地检测出水样中的大肠杆菌。
此外，分子生物学方法还可以对大肠杆菌进行分子鉴定和基因分析，为进一步研究提供了有力的支持。
然而，分子生物学方法需要相对复杂的实验操作和昂贵的设备，对操作人员的技术要求也较高。
综上所述，针对水质大肠杆菌的检测，可以根据实际情况选择合适的方法。
培养基法操作简单，成本低，适合于一般的水质监测；膜过滤法准确性高，可以检测低浓度的大肠杆菌；而分子生物学方法则具有高度的特异性和灵敏度，适合于对水质中微生物的深入研究。
在实际应用中，可以根据需求和条件选择合适的检测方法，以保障水质安全和生态环境的健康。
实验九 水中大肠菌群数的测定
实验九水中大肠菌群数的测定一、目的要求学习大肠菌群数的检测原理和方法。
二、实验材料1.样品：水样2. 培养基：乳糖胆盐发酵管(单料及双料)，伊红美兰琼脂(EMB)平板，乳糖发酵管。
3. 其他：显微镜，酒精灯，无菌吸管(10m1、1m1)，接种环，载玻片等三、基本原理水中的病原菌多数来源于病人和病畜的粪便。
由于病原菌的数量少，检测过程复杂，因此，直接测它们的存在是非常困难的专业化工作。
由于大肠菌群在粪便中数量大，在体外存活时间与肠道致病菌相近，且检验方法比较简便，因此一般采用测定大肠菌群或大肠杆菌的数量来作为水被粪便污染的标志。
如果水中大肠菌群的菌数超过一定的数量，则说明此水已被粪便污染，并有可能含有病原菌。
大肠菌群的定义是指一群好氧和兼性厌氧、革染氏阴性、无芽孢的杆状细菌，并能在乳糖培养基中，经37℃24~48h培养能产酸产气。
我国规定每升自来水中大肠菌群不得超过3个。
检测大肠菌群的方法有稀释培养法和膜滤法两种，其中稀释培养法是标准分析法，为我国大多数卫生单位和水厂所使用。
它包括初发酵试验、平板分离和复发酵试验三个部分。
四、方法与步骤1.采样：取100ml磨口带塞玻璃瓶，包扎后，干热灭菌备用。
取自来水样时，至少应先放水5min，以冲去龙头口所带的微生物，获得主流管中有代表性的水样。
取样时，用右手握瓶，左手启开瓶塞，用覆盖瓶口的纸托住瓶塞，收集样品后，连同覆盖纸一起将瓶口塞好，并用线绳在原处扎好。
注意手指不得触及瓶口内部。
在静水中取样时，先用右手揭去塞子，瓶口朝下浸入水下约30cm处，然后将瓶子反转过来，待水注满后，取出塞好瓶口。
如果水在流动，瓶口必须迎着水流，以免手上的细菌被水冲进瓶子。
2.水样放置过程中，内含的细菌数目和类型会发生变化，所以要求水样品应于6~10℃贮存，并不超过6h。
3.初发酵试验：吸取待检样品接种于乳糖胆盐发酵管内，10ml接种量采用双料发酵管，而lml及lml以下接种量采用单料管。
实验6 水中大肠菌群
实验六水中大肠菌群(Coliform group)细菌的检测一、实验目的1.采用多管发酵法，以最近似数的方式测定水中大肠菌群数。
2. 掌握微生物实验中无菌操作技术方法。
二、实验原理如果水源被粪便污染，则有可能也被肠道病原苗污染而引起肠道传染病。
由于肠道病原菌在水中数量较少，故从水中特别是自来水中分离病原菌常常非常困难。
大肠菌群细菌是肠道好氧菌中最普遍和数量最多的一类细菌，所以常常将其作为粪便污染的指示菌。
即根据水中大肠菌群细菌的数目来判断水源是否受粪便所污染，并间接推测水源受肠道病原菌污染的可能性。
一般规定每1000ml自来水中大肠菌群细菌不得超过3个．大肠菌群细菌是指一类好氧或兼性厌氧，革兰氏阴性，无芽孢的杆菌，包括四种细菌：大肠埃希氏杆菌、枸椽酸盐杆菌、产气杆菌及副大肠杆菌。
它们有相似的生化反应，能发酵葡萄糖，产酸产气，但发酵乳糖的能力不同。
当将它们接种到含乳糖的远滕氏培养基上生长时，四种菌的反应不一样，大肠埃希氏杆菌的菌落呈紫红色带金属光泽；枸椽酸盐杆菌的菌落呈紫红或深红色；产气杆菌的菌落呈淡红色，中心色深；副大肠杆菌的菌落无色透明(因不利用乳糖所致)。
本试验采用多管发酵法，以最近似数的方式来记载，这一数字是根据概率公式来估算，有大于实际数字的倾向，在增加每种稀释度的试管重复数后，可减少偏差。
本法除了用于检测水样(淡水或海水)外，尚可用于泥浆、沉积物、污泥等的检测。
测定时先将这类固体或半固体样品预先称重，再加水稀释，可取50g 样品，置于盛有450ml灭菌磷酸盐缓冲液并装有玻璃珠、石英砂的锥形瓶中，振荡l~2min，便成10-1稀释，以用于检验。
三、实验材料1.培养基；1.1乳糖胆汁液体培养基：蛋白胨：20.0g， 1.6％溴甲酚紫乙醇溶液：l ml，乳糖：5.0g，胆酸钠：5.0g将蛋白胨、乳糖、胆盐加热溶解于1000m1蒸馏水中，调pH值至7.2～7.4，加入1.6％溴甲酚紫乙醇溶液l ml，充分混匀，分装于有倒置杜汉氏小管的试管中，注意小管中不得有气泡，115ºC灭菌20min。
水质大肠菌群检测标准和检测方法
水质大肠菌群检测标准和检测方法一、水质大肠菌群检测标准。
1.1 首先啊，咱得知道，在不同的用水场景下，大肠菌群的检测标准是不一样的。
比如说，咱们日常生活里的饮用水，那对大肠菌群的要求就非常严格。
按照国家标准啊，饮用水里的大肠菌群数那得是每100毫升不得检出。
这就好比是在一个干干净净的房间里，连一粒灰尘都不允许有，就是这么严格。
为啥呢？因为大肠菌群要是出现在饮用水里，那可就意味着这水可能被粪便污染了，这喝到肚子里，那还了得，简直就是“病从口入”的典型啊。
1.2 再看一些用于灌溉农作物的水，虽然要求没有饮用水那么严苛，但也有明确的标准。
一般来说，允许有一定数量的大肠菌群存在，但这个数量也是被严格限制的。
就像是在农田里，虽然不是像饮用水那样要求一尘不染，但也不能太“乌烟瘴气”，毕竟这水要是大肠菌群太多，也可能影响农作物的生长，甚至会让农作物带上病菌，这可就是“城门失火，殃及池鱼”了。
二、水质大肠菌群检测方法。
2.1 多管发酵法是一种很常用的方法。
这就像是一场细菌的“大排查”。
首先呢，把水样接种到含有乳糖的培养基里。
这乳糖啊，就像是给大肠菌群准备的“美食”。
然后呢，把接种后的培养基放在合适的温度下培养，一般是37摄氏度左右，这个温度就像是大肠菌群最爱的“安乐窝”温度。
如果水样里有大肠菌群，它们就会在这个培养基里大量繁殖，分解乳糖，产生气体和酸。
这个过程就像是大肠菌群在培养基里“开派对”一样，它们产生的气体就会让小导管里出现气泡，这时候我们就可以初步判断有大肠菌群存在了。
2.2 还有滤膜法。
这个方法有点像“筛沙子”。
把水样通过特制的滤膜，大肠菌群就会被截留在滤膜上。
然后把滤膜放到含有营养成分的培养基上培养。
经过一段时间的培养，大肠菌群就会在滤膜上形成一个个的小菌落。
这就好比是在一片空旷的土地上，大肠菌群建立起了自己的一个个“小部落”。
我们通过观察这些小菌落的数量和特征，就能知道水样里大肠菌群的情况了。
2.3 酶底物法也是一种比较新颖的检测方法。
多管发酵法测定水中大肠菌群
多管发酵法测定水中大肠菌群
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多管发酵法测定水中大肠菌群
一、试验目标 二、试验原理 三、试验材料 四、试验步骤 五、试验汇报
多管发酵法测定水中大肠菌群
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一、试验目标
1、学习测定水中大肠菌群数量多管发酵法。 2、了解大肠菌群数量在饮水中主要性。
多管发酵法测定水中大肠菌群
划线接种于伊红美蓝琼脂平板上，再于37 ℃培养 18～24 h，将符合以下特征菌落进行染色镜检。
深紫黑色，有金属光泽；
紫黑色，不带或略带金属光泽；
淡紫红色，中心颜色较深。
多管发酵法测定水中大肠菌群
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（3）复发酵试验 将镜检为革兰氏阴性无芽孢杆菌菌株重复初
步发酵试验。并依据初发酵管试验阳性管查表， 即得大肠菌群数。
多管发酵法测定水中大肠菌群
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2）平皿分离（证实试验）
水中除大肠菌群外，还有其它细菌可能引 发糖类发酵，所以需要深入证实。
将初发酵管中已发酵菌液接种于伊红美兰 培养基，37 ºC培养24 h，依据菌落特征（带关 键、有金属光泽深紫色菌落），挑取可能为大 肠菌群菌落制片，经革兰氏染色，深入证实是 否为大肠菌群。
水样稀释： 10-1与10-2
接种：分别吸收1ml 10-2 、 10-1和原水样接入装 有10ml普通浓度乳糖蛋白胨发酵管 ；另取10ml原 水样接入装有5ml三倍浓缩乳糖蛋白胨发酵管 ， 混匀后，37 ℃培养24 h，24 h未产气继续培养48 h。
多管发酵法测定水中大肠菌群
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（2）平板分离 将经24 h和48 h培养后产酸产气发酵管，分别
2.思索题
（1） 何谓大肠菌群，它主要包含哪些细菌属？
水中总大肠菌、大肠埃希氏菌和耐热大肠菌群的测定 光度法 -回复
水中总大肠菌、大肠埃希氏菌和耐热大肠菌群的测定光度法-回复水中总大肠菌、大肠埃希氏菌和耐热大肠菌群的测定- 光度法1. 引言水是生命中不可或缺的重要资源，然而水中存在着许多潜在的细菌污染。
其中，大肠菌群中的大肠埃希氏菌在水体中的检测尤为重要，因为它们可以作为病原体或指示性微生物，反映水体是否受到了粪便污染。
耐热大肠菌群的测定则是为了评估水体中存在的耐热菌的数量，以考察水体的卫生质量。
2. 实验步骤2.1 样品收集与处理从水源中收集所需样品，并确保样品容器是消毒干净的。
将水样转移到试管中，透过120目的筛布过滤以去除杂质。
将筛布冲洗，大肠埃希氏菌和耐热大肠菌群的检测要求分别使用两个筛布。
2.2 媒介培养基的制备大肠埃希氏菌的培养基制备：使用大肠埃希氏菌选择液增殖大肠埃希氏菌菌种，然后按照制造商的说明添加适量的大肠埃希氏菌生长培养基。
将培养基搅拌均匀后，分装到培养皿中，并进行灭菌处理。
耐热大肠菌群的培养基制备：使用耐热大肠菌选择液增殖耐热大肠菌菌种，然后按照制造商的说明添加耐热大肠菌生长培养基。
将培养基搅拌均匀后，分装到培养皿中，并进行灭菌处理。
2.3 样品处理与菌落计数取一定体积的水样（一般为10ml），均匀地加入到含有大肠埃希氏菌和耐热大肠菌群培养基的两个培养皿中。
在分发前使用三倍无微生物水进行稀释，确保每个培养皿中的细菌数量适合计数。
将含样品的培养皿进行培养，在适当的温度条件下孵育一定的时间（一般为37摄氏度，大肠埃希氏菌为48小时，耐热大肠菌群为24小时）。
之后，观察并数计培养皿中的菌落形成单位（CFU）。
3. 结果与数据分析根据菌落计数的结果，可以得到大肠埃希氏菌和耐热大肠菌群在水样中的数量。
将每个培养皿中的菌落计数相加，并乘以稀释倍数，即可计算出水中大肠菌的浓度。
4. 结论光度法是一种常用的快速测定水中总大肠菌、大肠埃希氏菌和耐热大肠菌群的方法。
通过观察和计数菌落形成单位，我们可以得到这些细菌在水中的相对数量。
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水的大肠菌群检测方法文稿归稿存档编号：[KKUY-KKIO69-OTM243-OLUI129-G00I-FDQS58-
4．1 在2个装有50ml三倍浓缩乳糖胆盐培养液的大试管或烧杯内各加入水样100mL。
4．2 在10支装有5mL三倍浓缩乳糖胆盐培养液的试管里各加入水样
10mL。
4．3 轻摇试管，使液体充分混匀，置36±1℃培养箱中，培养24h。
4．4 观察每管是否产气，如不产气则报告为大肠菌群阴性；若有气体产生则为推测性试验阳性，需做进一步的证实试验。
5 证实试验
5．1 平板分离
自推测性检验阳性管中取一接种环培养液，接种到伊红美蓝琼脂平板上，置36±1℃培养箱培养18～24h，观察菌落形态，典型的大肠菌群菌落为黑紫色或红紫色，具有金属光泽。
5．2 复发酵试验
挑取可疑大肠菌群菌落1或2个进行革兰氏染色，同时接种乳糖发酵管，于36±1℃培养箱中，培养24h。
5．3 凡乳糖发酵管最终产酸产气，革兰氏染色为阴性的无芽胞杆菌，为大肠菌群阳性。
记下证实实验的阳性管数，查最大可能数（MPN）检索表得出1000mL水样中总大肠菌群的MPN值。
总大肠菌群（MPN）检索表
二、大肠菌群膜法测定
1 定义
大肠菌群（coliform bacteria）为需氧及兼性厌氧的革兰氏阴性无芽胞杆菌，将带菌滤膜贴在含乳糖的选择性培养基上，经37℃培养24小时后，呈现深暗红色带金属光泽的菌落。
2 仪器
2．1 滤器
2．2 滤膜，孔径0．45μm。
直径根据滤器规格，目前常用的有35mm和27mm两种。
2．3 抽滤设备
2．4 无齿镊子
2．5 其它仪器见《GB/T ××××－××公共场所茶具微生物检验方法，大肠菌群测定》中第3章。
3 培养基
3．1 品红亚硫酸钠培养基
3．1．1 成分：蛋白胨 10g
酵母浸膏 5g
牛肉膏 5g
乳糖 10g
琼脂 10～20g
磷酸氢二钾 3．5g
无水亚硫酸钠 5g
5％碱性品红乙醇溶液 20mL
蒸馏水 1000mL
3．1．2 储备培养基的制备
将磷酸氢二钾、酵母浸膏、牛肉膏及蛋白胨加到含有900mL蒸馏水的烧杯中，溶解后调pH值到7．2～7．4，加入琼脂加热溶解，用蒸馏水补足至1000mL，趁热用脱脂棉或绒布过滤，再加入乳糖，混匀后定量分装于烧瓶内，115℃高压灭菌20min，置冷暗处备用。
3．1．3 平皿培养基的制备
将上述培养基加热融化，根据培养基的用量，碱性品红乙醇溶液与培养基按1∶50的比例，用灭菌吸管吸取一定量的碱性品红溶液置于灭菌空试管中。
再按1∶200的比例称取所需的无水亚硫酸钠置于另一个灭菌空试管内，加灭菌水少许使其溶解，在沸水浴中煮沸灭菌10min。
用灭菌吸管吸取已灭菌的亚硫酸钠溶液，滴加于碱性品红乙醇溶液至深红色退成淡粉红色为止。
将此亚硫酸钠与碱性品红的混合液全部加入已融化的储备培养基中，并充分混匀（防止产生气泡），立即将此种培养基适量倾入灭菌的空平皿内，待其冷却凝固后置冰箱内备用。
此培养基
于冰箱中保存不宜超过两周，如培养基已由淡红色变成深红色，则不能再用。
3．2 乳糖蛋白胨培养液
见《游泳池中大肠菌群多管发酵测定法》
4 操作步骤
4．1 滤膜灭菌：将滤膜放入含蒸馏水的烧杯中，煮沸灭菌三次，每次15min。
前两次煮沸后需更换水洗涤2～3次，以除去残留溶剂。
4．2 滤器灭菌：用121℃高压灭菌20min或用点燃的酒精棉球火焰灭菌。
4．3 水样过滤：用无菌镊子夹灭菌滤膜边缘部分，将滤膜粗糙面向上，贴放在滤床上。
固定好滤器，打开滤器阀门，在－0．5大气压下抽滤。
4．4 培养：水样滤完后，再抽气约5s，关上滤器阀门，取下滤器。
用灭菌镊子夹滤膜边缘部分，移放在乳糖琼脂分离培养基上，滤膜截留细菌面向上，滤膜应与培养基完全贴紧，两者之间不得留有气泡。
然后将平皿倒置，放入36±1℃恒温箱内培养18～24h。
4．5 挑取滤膜上符合下列特征的菌落进行革兰氏染色、镜检。
紫红色，具有金属光泽的菌落；
深红色，不带或略带金属光泽的菌落；
淡红色，中心色较深的菌落。
4．6 将革兰氏染色为阴性的无芽胞杆菌接种到乳糖蛋白胨培养液中，于36±1℃培养48h。
产酸产气者证实为大肠菌群阳性。
5 检验结果报告
计算滤膜上生长的证实为大肠菌群的菌落数，再乘以10即为每1000mL 水样中的大肠菌群数。