细胞工程习题(答案)(1)

细胞培养技术习题（含答案）第一章动物细胞培养概述一、名词解释细胞培养：是指将动物活体体内取出的组织用机械或消化的方法分散成单细胞悬浮液，然后放在类似于体内生存环境中，进行孵育培养，使其生存、生长并维持其结构与功能的方法。

组织培养：从生物体内取出活的组织在体外进行培养的方法。

器官培养：将活体内的器官（一般是胚胎器官）、器官的一部分或器官原基取出，在体外培养的方法。

二、填空题1.体外培养（或组织培养）主要包括_细胞培养_，_组织培养_，和_器官培养_三种类型。

2._Harrison_的实验开创了动物组织和细胞培养的先河，他建立了_盖玻片悬滴_培养法3.在卡氏瓶原理的启发下，出现了用试管培养，继而又出现了多种类型的_培养瓶、_培养皿和_多孔培养板_的培养。

从20世纪40年代开始，大多数培养工作都过渡到用_瓶子_ 培养4.在动物细胞培养方法的发展过程中，具有历史意义的培养方法有盖玻片悬滴培养法，_ 旋转管培养的方法_，_灌注小室培养法_，和目前普遍应用的单层细胞培养法5.早期细胞培养采用_天然_培养基，现在广泛采用添加___血清_____的_人工合成培养基，近二十年来，动物细胞培养朝着无血清_培养基的方向发展。

三问答题1、动物细胞培养技术现已应用到那些领域？请举例说明。

动物细胞培养技术几乎已应用到生物、医学研究的各个领域。

这门技术自创立至今，已在多个学科领域乃至生产实践中均发挥了巨大的作用。

一、在生物学领域的基础研究中的应用离体培养的动物细胞具有培养条件可人为控制且便于观察检测的特点，因而可广泛应用于生物学领域的基础研究中。

1．在细胞生物学上的应用2．在遗传学上的应用除了可用培养的动物细胞进行染色体分析外，还可结合细胞融合技术建立细胞遗传学，进行遗传分析和杂交育种。

3．在胚胎学上的应用通过体外培养卵母细胞，并进行体外受精、技术而应用于家畜的繁殖生产中。

4．在病毒学上的应用胚胎分割和移植己发展成了一种较成熟的在制备减毒活疫苗和诊断用抗原时，离不开细胞这一病毒增殖的场所。

另外，在病毒学研究中，用培养的动物细胞代替试验动物做斑点分析．5.在药理学领域的应用二、在临床医学上的应用1．用于遗传疾病和先天畸型的产前诊断目前，人们已经能够用羊膜穿刺技术获得脱落于羊水中的胎儿细胞，经培养后进行染色体分析或甲胎蛋白检测即可诊断出胎儿是否患有遗传性疾病或先天畸型。

2．用于癌症的早期诊断和预防我国的科学工作者通过培养淋巴细胞，病人，以便进行及早的预防和治疗。

3．用于临床治疗并对其染色体进行对比分析检测出易患癌症的4．用于药物效应的检测检测治疗肝病的药物可选用肝细胞、检测抗癌药物可选用癌细胞。

三、在动物育种上的应用四、在生物制品生产上的应用2、动物细胞培养有哪些要求和那些方法？动物细胞培养工作的基本要求：1.培养前准备2．操作间消毒3．洗手和着装4．火焰消毒5．实验中的操作要求动物细胞培养工作的工作方法：细胞培养是一种操作程序比较复杂、需求条件多而严格的实验性工作，工作时必须注意一定的方法，主要有以下几点予以重视。

①将所有操作程序如洗刷、配液、消毒等，制定出统一的规范和要求，并在一定时间内保持相对稳定和要求人人遵守。

③各种用液(培养液、胰蛋白酶、 Hanks液、NaHCO2、抗生素液)均应由专人负责配制，并保证做到制备浓度精确、灭菌可靠。

所有制备好的溶液和试剂瓶上都要有标签，注上名称、浓度、消毒与否和制备日期。

③一切培养用品都要有固定的存放地点，其中尤为重要的是，培养用品与非培养用品应严格分开，已消毒与末消毒品应严格分开存放。

以上一切措施都是为了避免各种杂质混入细胞生存环境、防止微生物感染和细胞“污染”。

所谓细胞污染，是指不同细胞之间因操作不当造成的相互混杂，使细胞群体不纯的现象。

近年来世界上不少实验室都出现过这种事故，应引起注意。

第二章动物细胞培养的基本知识一、名词解释贴壁依赖性细胞：细胞必须贴附于支持物表面才能生长，因此又称为贴壁型细胞。

非贴壁依赖性细胞：细胞在体外生长时不需要贴附于支持物表面，可以悬浮状态在培养液中生长，这种细胞又称为悬浮型细胞。

接触抑制：是指体外培养的细胞在贴附底物上连接成片、相互接触后失去运动的现象，这是某些贴附生长型细胞的特征之一。

无限细胞系：由于某种因素的影响，细胞可能发生自发转化，即细胞获得持久性增殖能力，这样的细胞群体称为连续细胞系。

脱分化：指的是细胞在体外不可逆地失去它们原有的特性。

二、填空1.体外培养的动物细胞其生长方式主要贴壁生长和悬浮生长两种，分别称为贴壁型细胞和悬浮型细胞。

体外培养的动物细胞其生长方式以贴附生长为主。

2.贴壁生长的体外培养动物细胞，按形态来分，大体分为成纤维细胞型、上皮细胞型、游走细胞型、多形细胞型四种类型，最常见的为前两种。

3.细胞在体外生长时具有一些特点，其中主要是贴附生长、接触抑制和密度依赖性。

4.培养细胞生命期可分为原代培养期、传代培养期、衰退期三个阶段。

三、问答题1.什么是培养细胞的一代生存期？培养细胞的一代生存期可分为哪几个阶段？各有何特点？答：a，细胞的一代生存期指从细胞接种到下一次再传代接种的一段时间。

b，培养细胞的一代生存期分为潜伏期、指数生长期、停滞期三个阶段。

C，潜伏期：又分为悬浮期，细胞质回缩，胞体呈球形；贴壁期，细胞开始附着或贴附于底物表面上，并逐渐伸展；潜伏期，细胞可有运动活动，基本无增殖，少见分裂相。

指数生长期：是细胞一代中活动最好的时期，培养物中的细胞数量呈指数生长，在接种适宜的情况下，指数生长期持续一段时间后，随细胞数量不断增多，生长空间渐趋减少，最后细胞相互接触汇合成片。

停滞期：细胞数量达到饱和密度，细胞停止增殖，但仍有细胞代谢活动，接着培养液中营养渐趋耗尽，代谢产物积累，PH降低。

2.培养细胞需要哪些营养？它需要在什么样的环境下生长？这些环境如何获得？答：A.营养需要：氨基酸、碳水化合物、无机盐、维生素、促生长因子及一些生长必须的钾、钠、铁等元素。

B.生存环境：培养用水充足，培养温度及PH适宜，气体条件及渗透压适宜，还有无毒无菌无污染的培养环境。

C.环境的获得：3.培养细胞需要哪些主要仪器？在使用时需要注意什么？第三章动物细胞培养的准备工作一、填空题1、玻璃器皿的清洗程序主要包括＿浸泡＿、刷洗、＿浸酸、和＿＿冲洗。

2、目前大多数实验室采用的浸酸酸液的主要成分是＿浓硫酸＿＿和重鉻酸钾＿＿。

3、细胞培养用品的包装主要包括＿局部包装＿＿和＿＿＿全包装＿＿两种类型，如前者适宜的器皿有＿烧杯＿＿、＿容量瓶＿＿等，后者适宜的器皿有＿＿注射器、＿胶塞＿＿等。

细胞培养中塑料制品中主要采用＿射线消毒＿方法进行灭菌，人工合成培养基和酶液采用＿＿＿过滤消毒＿＿＿方式进行灭菌。

细胞培养实验前实验者的皮肤主要用＿＿75%的酒精＿或＿＿新洁尔灭＿＿＿来消毒灭菌，实验室地面采用＿来苏儿＿＿定期拖洗消毒，培养室空气可以用紫外线＿或＿乳酸蒸汽＿＿消毒。

BSS中文名称为＿＿平衡盐溶液＿，具有维持渗透压、稳定PH等作用，常用作洗涤组织和细胞以及配置各种培养用液的基础溶液。

动物细胞培养基中常用的消化液有＿胰蛋白酶消化液＿、＿胶原酶消化液和＿EDTA—2Na ＿三种，常在＿贴附型细胞原代＿培养或＿传代培养中用来离散细胞。

要想取得好的细胞培养效果，在合成培养基中添加＿天然培养基＿＿构成完全培养基是非常必要的，通常它的灭活处理方法是＿热灭活＿＿。

二、简答题1、塑料制品的清洗步骤是什么？答：塑料器皿耐腐蚀能力强，但质地软，大多不耐热。

塑料器皿的清洗意识要防止划痕，二是用后要立刻浸入清水中，严防附着物干结。

如果残留有附着物，可先用脱脂棉轻轻擦掉，再用流水冲洗干净，接着用2%的NaOH液浸泡过夜，取出后用自来水冲洗8-10次，然后用3%-5%盐酸溶液浸泡15-30 分钟，取出后用自来水冲洗多次，在在双蒸水漂洗5-6次，倒净器皿内的双蒸水，置37度恒温箱内晾干即可。

2、用高压蒸汽灭菌锅进行湿热灭菌时应注意什么？答；湿热灭菌时，消毒品不能装得过满，以保证消毒器内气体的流通，在加热升压之前先要打开排气阀门，排除残留在容器内的冷空气，导气管一定要沿着灭菌锅内胆上的升制的通气孔道到达灌的底部并且不能堵塞。

冷空气排尽后，关闭排气阀门；继而开始升压，当达到所需要的压力时，通过调节高压蒸气锅的电源开关，是压力稳定在所需数值后并开始计算时间。

在消毒过程中，消毒者不能离开，要经常检查压力是否恒定，如有偏离，应及时调整。

3、谷氨酸胺在培养基中的主要作用是什么？配液时应该注意哪些问题？答：1）谷氨酰胺的作用：在细胞的代谢工程中发挥重要作用，是细胞合成核酸和蛋白质的必需的氨基酸；缺少谷氨酰胺时，细胞会因为生长不良而死亡。

培养液在4°C冰箱中储存2周以上时，还应重新加入原来量的谷氨酰胺。

一般来说，谷氨酰胺溶液都是单独配制的，以便在需要时加入培养液内。

常把其配制成100倍的浓缩母液，浓度为200mmol/L（29.22g/L）。

使用时，在每100ml培养液中加入0.5—2ml谷氨酰胺母液，使其终浓度为1—4mg/L即可。

4、人工培养基常用的有哪些（列举1~2种）？采用人工培养基有什么优点？答：1）人工培养基常用培养基：主要有有MEM培养液，DMEM培养液，RPMI—1640培养液，HamF12培养液等等。

2）采用人工培养基优点：因为合成培养基是根据动物体内细胞生长所需成分人工模拟合成的、配方恒定的一种较理想的培养基，其主要成分是氨基酸，维生素，碳水化合物，盐离子和一些其他辅助物质，培养基成分固定，有利于控制实验条件的标准化，合成培养基的应用促进了培养细胞的发展，合成培养基可以用于特殊研究的细胞培养工作，杂交瘤技术细胞培养，肿瘤细胞培养，单细胞培养等等方面。

2）配液时应该注意的问题：谷氨酰胺在溶液中很不稳定，应置于-20°C冰箱中保存，在使用前加入培养液中。

因为谷氨酰胺在4°C下放置7d就会分解 50%，所以已含谷氨酰胺的5、胎牛血清在细胞培养中起什么作用？如何从外观大致判断血清质量的好坏？胎牛血清在细胞培养中对许多细胞系均有促生长作用，主要用于细胞株的保藏以及特殊娇贵细胞株的体外培养。

质量好的血清应该是透明清亮的土黄色或棕黄色，无沉淀或是极少量沉淀，比较粘稠。

如发现血清浑浊、不透明、含有许多沉淀物，说明血清污染或是血清中的蛋白质变性；若血清呈棕红色，说明血清中的血红蛋白含量太高，取材时有溶血现象；如果摇晃时感觉液体稀薄，说明血清中渗入的生理盐水太多。

6、完全培养基中各成分在细胞培养过程中的作用分别是什么？答：在基础培养基中添加血清、抗生素等物质后成为完全培养基，也叫（血清）细胞培养基。

完全培养基根据添加血清量的多少，可分为细胞生长培养基和细胞维持培养基两种。