第九章：血型及血痕检验

（四） 孟买型：1903年在印度首先发现
抗A
抗B
抗H ARBC + － +
BRBC
ORBC －
血型
父
母 子
－
－ －
－
－ +
+
+ +
+
+ －
O
OB h B
+
－
（五） 分泌型和非分泌型
分泌型——用常规的检测方法（中和法）在唾液中能
够检出ABO血型物质的人称为分泌型。 非分泌型——反之不能检出者。 一般用于精斑、唾液斑的检测
淀。利用已知抗人血清和抗人血红蛋白血清与未知检材浸出液反
应阳性结果说明是人血
(2)抗血清的标准：
无菌，澄清透亮，淡稻草黄色； 效价高（即灵敏度好）：至少10000倍以上，用已知人血作沉淀反应，
要求15min内出现白色沉淀； 沉淀素效价——能与已知抗体发生肉眼沉淀反应时，抗原 的最大稀释度的倒数。 至少1万倍，一般用2万——5万倍。
出血部位 出血时间 出血量 其他检验 出血者年龄 出血者性别 一人或多人血
DNA遗传标记测定
限制性片段长度多态性：DNA纹印、DNA指纹 扩增片段长度多态性：VNTR-PCR、STR-PCR 序列多态性分析 ABO、MN、血清蛋白、同工酶等基因分析
（一）、肉眼检查
意义：根据现场血痕的数量、分部、位置、大小、形状、
A、O基因为703(G)，长159bp B基因为703(A)，产生Alu Ⅰ酶切位点(AG CT) 基因扩增酶切后产生118、41bp
200bp
A基因：200bp、159bp B基因：200bp、118bp、41bp O基因：172bp、159bp、27bp
172bp 159bp
118bp
AA AO BB BO OO AB
若不出现结晶，可将载玻片置酒精灯上加微热，或延长反应时间，可
促进结晶形成。
(4)注意事项：
特异性好，阳性肯定是血痕（本实验意义在于阳性结果），迄今未发
现任何假阳性物质； 缺点：灵敏度低（1/200），需0.001ml血或0.1mg Hb可为阳性； 阴性结果，可能血少，或污染腐败、或试剂失效、或非血痕； 试剂配制后在棕色瓶避光低温保存，在1-2周内 使用。
范围、色泽等，推测案件的性质、案件发生的有关情况、
发案时间、移动尸体情况、加害人的行踪，为案件的侦破 提供线索。
1、部位
2、颜色 3、形状:滴状、流柱状、喷溅状、擦拭状、血印痕、血水、血 泊
不同高度滴状血痕
血滴方向
流注状血痕
(二)、预试验(preliminary test)
特点：灵敏度高、操作简便、快速
一、概述
（一）血 型 概 念
狭义的血型：红细胞表面抗原的差异 ，这种抗原差异是属于 同种异体的抗原差异是受遗传控制的。 红细胞血型——ABO、MN、Rh
广义的血型：人类血液各成分中由遗传基因控 制的遗传学多态性标记 血清蛋白型——Gc、Hp、Gm、Km 红细胞酶型——PGM、AcP 白细胞血型——HLA-A、B、C、DP、DQ、DR 精液酶型——DIA3、γ-GPT 粒细胞血型、血小板血型、唾液蛋白型胎盘酶型
免疫抗体——抗原刺激机体所产生的抗体。
单克隆抗体——由单个细胞增殖而形成的细胞克隆只产生完全均一
的单一特异性的抗体
（四）红细胞的凝集反应
RBC表面的负电荷及动电位
红细胞表面负电荷 是由红细胞表面唾
液酸羟基电离产生，
使红细胞表面之间 可保持一定的距离
动电位越大，两红细胞间距越大 动电位越小，两红细胞间距越小
血型物质 ——红细胞表面的特异性抗原物质。它同样也是同 种异体的抗原
血型测定
——根据抗体具有特异性这一特点，将特异性抗体血清和具有相应 特异性抗原的红细胞发生凝集反应，来决定红细胞的血型。
（二）红细胞血型抗原
抗原——凡能刺激机体引起特异性免役反应的物质均为Ag(antigen)。
红细胞抗原的化学本质： ABO——糖蛋白、糖脂（ABO血型的分泌型是糖蛋白） MN——糖蛋白 Rh——蛋白质
（3）注意事项：
灵敏度高（1/50万） ，微量血痕即可； 多种物质可出现假阳性反应，如脓液、鼻涕、排泄物、组织及一些植物 汁、水果、蔬菜的汁（石榴、苹果、银杏、大蒜、胡萝卜、土豆），含有过 氧化物酶或含具有氧化物酶活性，亦能使联苯胺试验呈生反应，因而联苯胺 试验阳性的检材只能说明检材可能是血痕，但不能确证血痕。 化学氧化剂如高锰酸钾、重铬酸钾、甲醛、铜盐、铁锈和镍盐等能直接 将联苯胺氧化为联苯胺蓝，但蓝色反应出现在未加过氧化氢之前。严格按顺
联苯胺试验（benzidine test）
原理：血痕中的血红蛋白或正铁血工素具有过氧化物酶活性， 能将过氧化氢分解，释放出新生态氧，后者将无色联苯胺氧化
为联苯胺蓝。
（1）试剂：
冰醋酸 联苯胺的无水乙醇饱和液 3%H2O2
（2）操作：
取针尖大血痕纤维，放在白色血痕板上
冰醋酸一滴
联苯胺一滴 30秒后再加H2O2一滴立即出现蓝色
1.血色原结晶试验（hemochromogen crystal test） 高山结晶试验（Takayama crystal test）。
(1)原理：血红蛋白在碱性溶液中分解为正铁血红素和变性珠蛋白，在还
原剂作用下，正铁血红素还原为血红素，后者与变性珠蛋白或其它含氮 化合物（如吡啶、氨基酸等）结合，形成血色原结晶。
血型与血痕检验
主讲：周鑫
我国三国时代记载“滴骨验亲法”；
1247年，宋慈《洗冤集录》记录“滴骨验亲法”、“合血法”； 1667年，法国Denys首次把羊血输给一名贫血病人；
19世纪英国Blundell重新尝试输血，主张用人血相输。1818年，
他成功地用输血疗法救活了一名产后大出血的产妇； 1900年，Ehrlich将一只山羊的红细胞注给另一只山羊后，在后者 的血清中发现了同族溶血素，能使前者的红细胞溶血，从而能鉴 别同一物种中的不同个体； 1901年，奥地利学者Landsteiner研究不同人的红细胞之间是否有 免疫学反应，终于发现了人类第一个血型系统，即ABO血型系统； 1924年，Bernsteiner提出ABO血型的遗传学说。
A基因和B基因间存在7个单碱基不同，其中3个属于同义突变， 4个属于错义突变，导致编码的酶蛋白有4个氨基酸残基不同。O基因
主要是由于单碱基缺失所致移码突变，导致终止密码提前出现，仅
编码合成一条无任何酶活性的短肽。
P1
P3
261(G)
P2
703(G/A)
P4
A、B基因为261(G)，长200bp O基因为G缺失，产生KpnⅠ的酶切位点(GGTAC C) 基因扩增酶切后为172、27bp
分泌型和非分泌型之间没有绝对界限，用更精确
的检测方法检测，则绝大多数人均为分泌型
ABO血型的遗传分析 父母的血型 子代可能有的血型 子代不可能有的血型
O×O
A×O A×A
O
A、O A、O
A、B、AB
B、AB B、AB
பைடு நூலகம்
A×B
B×O B×B AB×A
O、A、B、AB
B、O B、O A、B、AB
A、AB A、AB O
检，有褐色菱形结晶形成为阳性反应。
(4)注意事项： 特异性好； 灵敏度更低，不如血色原结晶试验； 加热不宜超过142℃，否则会破坏血红素而不能形成结晶。 真菌或细菌生长、水洗和过于陈旧的血痕常呈阴性反应。
（四）、种属鉴定（ Species Identification ）
——当可疑斑痕确定为血痕后，就必须研究和确定其种属来源，称为种属鉴定，主要 为解决该血痕是人血还是动物血，必要时还要确定是哪种动物血。
Hb
碱
正铁血红素+变性珠蛋白 还原剂 血红素+含氮物质（吡啶） 血色原结晶 为樱桃红色针状 或菊花状结晶
（2）高山试剂： 碱： 还原剂： 10%NaOH 30%葡萄糖 3ml 10ml 3ml
含氮物质： 吡啶 (3)方法：
剪取或刮取少量检材，置载玻片上，分解纤维或将血痂压碎，盖上盖 片，加1~2滴高山试剂，镜检，若出现樱桃红色菊花状、星状或针状结晶 为阳性反应。
种属鉴定的方法：
免疫学方法：环状沉淀反应、抗人Hb检测试纸条 酶联免疫吸附试验（ELISA） 生物化学方法：等电聚焦电泳（IEF）、 血红蛋白碱变性试验 分子生物学方法：DNA-PCR技术
1. 环状沉淀反应(Precipitation reaction)
(1)原理：可溶性抗原与相应抗体在一定条件下发生特异性结合， 抗原抗体在比例合适时，经过一段时间可形成肉眼可见的白色沉
序滴加试剂。
勿直接在衣物或斑痕上滴加试剂。 联苯胺是强致癌物。
（4）此实验的意义
在于阴性结果。因为它灵敏度高，排除血痕，起筛选作用。 阳性：可能是血痕 阴性：在送检检材上未检出血痕
（三）、确证试验（conclusive test）
特点：（1）特异性好，阳性即确证血痕；（2）灵敏度低，阴性不能排除血痕；（3）该步可省略。
抗原决定簇Antigenic determinant ——又称表位，是指抗原性物质表面决定该抗原特异性的特殊 化学基团，是抗原分子结构中的免疫显性基因。
ABO血型抗原决定簇为六碳糖所组成的多糖
（三）红细胞血型抗体
天然抗体——未曾与有关抗原接触过的血清中的抗 体。如RBC血型中的抗A、抗B
特点： 主要组成是IgM，长度是950A~1000 A ； 属于盐水抗体，在盐水介质中可发生肉眼可见的凝集反应； 是冷抗体，发生最适宜的温度为4~18℃； 是规则抗体，天然在体内规则存在。
（二）ABO血型系统的分类
血型 A B O AB