蛋白质常用的检测方法

蛋白纯度鉴定的方法：
通常采用物理化学的方法
a. 电泳包括等电聚集、聚丙烯酰胺凝胶电泳、SDS－PAGE、毛细管电泳
b. 沉降纯蛋白在离心场中以单一的速度移动。

c. HPLC 常用于多肽、蛋白纯度鉴定。

纯的样品在HPLC的洗脱谱上呈现出单一的对称峰。

d. 溶解度分析恒浓度法（原理：纯蛋白在一定溶剂系统中具有恒定的溶解度，而不依赖于存在于溶液中未溶解固体的数量，在严格条件下，以加入的固体蛋白对溶解的蛋白做图，将只呈现一个折点，折点以前斜率为1，折点之后斜率为0，不纯的蛋白往往呈现2个或更多的折点。

）
e. N端分析纯的蛋白N端残基只能是一种氨基酸。

超速离心：既可以用来分离纯化蛋白质也可以用作测定蛋白质的分子量.
含量测定方法很多：
凯氏定氮：灵敏度低，适用于0.2~ 1.0mg氮，误差为±2％，干扰少，费时8小时
双缩脲法（Biuret法）：灵敏度低1～20mg，中速20~30分钟
紫外吸收法：较为灵敏50～100mg，快速5～10分钟
Folin－酚试剂法（Lowry法）：灵敏度高～5mg，40～60分钟，操作要严格计时；颜色深浅随不同蛋白质变化
考马斯亮蓝法(Bradford法)：灵敏度最高1～5mg，5～15分钟，常用
分子量测定：
SDS-PAGE：还原SDS测定结果比较接IC-MS，价格适中，常用
高效凝胶过滤色谱：标准蛋白质和待测蛋白质形状一致时，准确高，差别越大越不准确
电喷雾离子化质谱：最准确
等电点测定：在不同pH条件下测量蛋白质的电泳迁移率，然后用迁移率对pH 作图，对应于迁移率为零的pH就是蛋白质的等电点。