五日生化需氧量的测定BOD5.

葡萄糖-谷氨酸溶液。分别称取150mg葡萄糖和谷 氨酸（均于130℃烘过1h），溶于水中，稀释至 1000mL。 盐酸溶液，0.5mol/L。
氢氧化钠溶液，0.5mol/L。 稀释水。在20L玻璃瓶内加入18L水，控制水温在 20℃左右，用抽气或无油压缩机通入清洁空气 2~8h，使水中溶解氧饱和或接近饱和（20℃时溶 解氧大于8mg/L）。使用前，每升水中加入氯化钙 溶液、三氯化铁溶ຫໍສະໝຸດ Baidu、硫酸镁溶液和磷酸盐溶液各 1mL，混合均匀。稀释水pH值应为7.2，其BOD5值 应小于0.2mg/L。
1000～2000mL量筒。 特制搅拌棒，在玻璃下端安装一个2mm厚，大小 和量筒相匹配的有孔橡皮片。 250~300mL碘量瓶，带有磨口玻璃塞并具有供水 封用的钟形口。 虹吸管，供分取水样和添加稀释水用。



氯化钙溶液。称取27.5g无水氯化钙，溶于水中，稀 释至1000mL。 三氯化铁溶液。称取0.25g三氯化铁（FeCl3· 6H2O）， 溶于水中，稀释至1000mL。
实验六 五日生化需氧量的测定——BOD5 一、目的和要求

了解BOD5测定的意义及稀释与接种法测BOD5的 基本原理。 掌握本方法操作技能，如稀释水的制备、稀释倍 数选择、稀释水的校核和溶解氧的测定等。

二、原理

生化需氧量是指在好氧条件下，微生物分解存在水中的有 机物质的生物化学过程中所需的溶解氧量。


接种稀释水。取适量生活污水于20℃放置24~36h， 上层清液即为接种液，每升稀释水中加入1~3mL 接 种液即为接种稀释水。接种稀释水pH值应为7.2，其 BOD5值以在0.3～1.0mg/L之间为宜，接种稀释水配 制后应立即使用。对某些特殊工业废水最好加入专门 培养驯化过的菌种。 其他溶液。与碘量法测定溶解氧实验相同的硫酸锰溶 液、碱性碘化钾溶液、（1+5）硫酸、0.025mol硫代 硫酸钠标准溶液和1%的淀粉溶液（详见实验四“水 中溶解氧的测定”）。

3、对照样的配置
另取两个有编号的碘量瓶加入稀释水或接种稀释 水作为空白。
4、培养
将各稀释比的水样，稀释水（或接种稀释水）空 白各取一瓶放入20+1℃的培养箱内培养5d，培养 过程中需每天添加封口水。
5、溶解氧的测定


参见实验 “水中溶解氧的测定”。 用碘量法测定未经培养的各份稀释比的水样和空白 水样中的剩余溶解氧。

用同样方法测定经培养5d后，各份稀释水样和溶解 水样中的剩余溶解氧。
五、数据处理

根据公式计算BOD5，并以表格形式表示测定数据和结果。
f1 BOD5（以O2计）（mg/L）= [(D1-D2)-(B1-B2)]× f2
式中：

D1—稀释水样培养前的溶解氧量，mg/L； D2—稀释水样培养5d后剩余溶解氧量，mg/L； B1—稀释水（或接种稀释水）培养前的溶解氧量，mg/L； B2—稀释水（或接种稀释水）经培养5d后剩余溶解氧量，mg/L； f 1—稀释水（或接种稀释水）在培养溶液中所占的比例； f 2—水样在培养液中所占的比例。

四、实验步骤
1、水样的采集、存储和预处理

采集水样于适当大小的玻璃瓶中（根据水质情况而定）， 用玻璃塞塞紧，且不留气泡。采样后，需在2h内测定；否 则，应在4℃或4℃以下保存，且应在采集后10h内测定。 用1mol/L氢氧化钠溶液或1mol/L盐酸溶液调节pH值接近7。

游离氯大于0.10mg/L的水样，加亚硫酸钠或硫代硫酸钠除 去[见注意事项1]。


硫酸镁溶液。称取22.5g硫酸镁（MgSO4· 7H2O）,溶 于水中，稀释至1000mL。
磷酸盐溶液。称取8.5g磷酸二氢钾（KH2PO4）、 21.75g磷酸氢二钾（K2HPO4）、33.4g磷酸氢二钠 （NaHPO4· 7H2O）和1.7g氯化氨（NH4Cl），溶于约 500mL水中，稀释至1000mL并混合均匀，此缓冲溶 液的pH应为7.2。
20℃培养5d所需溶解氧含量作为指标，单位以的mg/L表
示，简称BOD5。
水体发生生物化学过程必须具备：

水体中存在能降解有机物的好氧微生物。对易降解的有 机物，如碳水化合物、脂肪酸、油脂等，一般微生物均 能将其降解，如硝基或硫酸取代芳烃等，则必须进行生 物菌种驯化。

有足够的溶解氧。为此，实验用的稀释水要充分曝气以 达到氧的饱和或接近饱和。稀释还可以降低水中有机污 染物的浓度，使整个分解过程在有足够的溶解氧的条件 下进行。

根据参加反应的物质和最终生成的物质，可用下列的反应 式来概括生物化学反应过程： 酶 6C6H12O6+16O2+4NH3 4C5H7O2N+16CO2+28H2O
微生物 有机污染物 O2 CO2+H2O+NH3
微生物分解有机物是一个缓慢的过程，要把可分解
的有机物全部分解掉常需要20d以上的时间，微生物的活 动与温度有关，所以测定生化需氧量时，常以20℃作为 测定的标准温度。一般来说，在第5天消耗的氧量大约是 总需氧量的70%，为便于测定，目前国内外普遍采用
有微生物生长所需的营养物质。本实验加入了一定量的 无机营养物物质，如磷盐酸、钙盐、镁盐和铁盐等。


稀释法测定BOD5是将水样经过适当稀释后，使其中含 有足够的溶解氧供微生物5d生化需氧的要求，将此水样 分成两份。一份测定培养前的溶解氧；另一份放入20℃ 恒温箱内培养5d后测定溶解氧，两者的差值即为BOD5。
水中有机污染物的含量越高，水中溶解氧消耗愈多， BOD5值也愈高，水质愈差。BOD5是一种量度水中可被 生物降解部分有机物（包括某些无机物）的综合指标， 常用来评价水体有机物的污染程度，并已成为污水处理 过程中的一项基本指标。

三、仪器与试剂

恒温培养箱[（20+1）℃]。
20L细口玻璃瓶。
确定稀释倍数[见注意事项2]。

2、水样的稀释

根据确定的稀释倍数，用虹吸法把一定量的污水引入 1000mL量筒中，再沿壁慢慢加入所需稀释水（接种 稀释水），用特制搅拌棒在水面以下慢慢搅匀（不应 产生气泡），然后沿瓶壁慢慢倾入两个预先编号、体 积相同的(250mL)的碘量瓶中，直到充满后溢出少许 为止。盖严并水封，注意瓶内不有气泡。 用同样方法配置另两份稀释比水样。