01 猪生长轴的发育规律

261 gatgtactgt gcacccctca agcctgccaa gtcggcccgc tccgtccgtg gatgtactgt gcacccctca agcctgccaa gtcggcccgc tccgtccgtg
311 cccagcgcca cacggacatg cccaaggctc agaaggaagt acatttgaag cccagcgcca cacggacatg ccaaagggtc agaaga

蓝塘猪为广东省地 方猪种，头部及背部为 黑色，四肢及腹部为白 色；头型大小适中，体 躯宽深短圆 ，背腰微凹， 腹大；具有早熟易肥、 肉质优美、耐粗饲、适 应性强、遗传性稳定、 杂交优势明显等特点。
研究基地
——广东省板岭原种猪场 猪场位于广东省 东莞市， 1993 年 被农业部定为第 一批国家级重点 猪场；该场现有 大白、长白，以 及广东省地方良 种猪——蓝塘猪
10 8 6 4 2 0 0d 3d 21d
¸ Ô Î à ¡ È ¼ â
而
35d
¼ Í 7£ º × Ð Ö í ¸ Î Ô à ¡ ¢ ¼ ¡ È â × é Ö ¯ Ò º Ö Ð IGF-1± ä » ¯
结果
4) Leptin、TNF-α
蓝塘仔猪血液Leptin、TNF-α浓度变化
5 4 3 2 1 0 LEPTIN TNF 1d
图3-8 GHR cDNA的PCR产物正向、反向测序图谱
实时荧光定量PCR

检测肝脏、肌肉IGF-I mRNA含量 检测肝脏、肌肉GHR mRNA含量
M A
2000bp
B
C D
E
N
500bp
250bp
179bp 100bp
图3-2
IGF-ⅠcDNA的PCR产物的凝胶电泳图
注: M：DNA marker；N：阴性对照；A、B为肌肉样品；C 、D、E为肝脏样品
图3-8 GHR cDNA的PCR产物正向、反向测序图谱
IGF-I样品实时监测曲线
IGF-I 标准品实时监测曲线
IGF-I重复性检测
IGF-I标准曲线
结果

1) 体重 仔猪初生重较小，平 均为0.57Kg左右（杜洛 克猪初生重为1.52Kg 、 长白猪为1.35Kg、杂交 猪大长为1.45Kg）。随 着日龄增大，体重迅速 增长，至35日龄时仔猪 体重为初生重的10.58 倍。
8
Ø (kg) å Ö Ì
6 4 2 0 0d 3d 21d 35d
¼ Í 5£ º² »Í ¬È ÕÁ ä× ÐÖ íÌ åÖ Ø± ä» ¯
结果

2).甲状腺激素 与生长相关的甲状 腺激素（ FT3和FT4） 水平在出生的当天 很低. 随日龄的增 大而升高, 至断乳 期为最高水平，血 中FT3和FT4与体重变 化呈正相关,堤示仔 猪出生后甲状腺活 动增强
材料与方法—激素含量测定

血液中激素含量的测定
用放射免疫分析法 ( RIA )
组织中激素含量的测定
–制备组织匀浆液 –测定组织液中蛋白质含量 –用放射免疫分析法测定组织液中激素含量 –结果表示为每毫克蛋白质所含激素的量
放射受体分析法(RBA)
原理：采用过量的（相对受体的位点数而 言）125I标记的人生长激素与细胞膜受体 制剂在特定条件下反应得出总结合量 （TB）；采用过量的非标记的人生长激 素与125I标记的人生长激素在同样条件下 反应竞争结合细胞膜制剂，得出非特异 性结合量（NSB）。总结合减去非特异性 结合即为特异性结合量（B）
ຫໍສະໝຸດ Baidu

1881 tctctcatcg tgtggctatg tgagcacaga ccaactgaac aaaatcatgc tctctcatcg tgtggctatg tgagcacaga ccaactgaac aaaatcatgc
1931 cttagccttt ctttgggaat tc// cttagccttt ctttggta 图3-7 GHR cDNA的PCR产物核苷酸测序结果同源性对比图
0d 3d 12
¨pmol/l) È £ ¨¶ Å
10 8 6 4 2 0
21d 35d
FT3
FT4
¼ Í 6£ º ² » Í ¬ È Õ Á ä Ð ×Ö í Ñ ª Ò º ¼ ×× ´ Ï Ù ¼ ¤Ë Ø µ Ä ä » ± ¯
结果
3) IGF-1
蓝塘仔猪血液中IGF—1浓度变化
日龄 1d（初生期） 3d（初乳期） 21d（常乳期） 35d（断乳期） 血液 IGF-1 浓度 ng/ml 356.5±13.3a（8） 143.5±26.7b（8） 156.6±17.6b（7） 151.6±10.3b（8）
167tcaacaagcc cacagggtac ggctccagca gtcggagggc gccacagacg caggggtt ggctccagca gtcggagggc gccacagacg 211 ggcatcgtgg atgagtgctg cttccggagc tgtgatctga ggaggctgga ggcatcgtgg atgagtgctg cttccggagc tgtgatctga ggaggctgga

1781 ctgagatgcc tgtcccagac tatacctcca ttcatatagt acagtctcca ctgagatgcc tgtcccagac tatacctcca ttcatatagt acagtccca 1831 cagggcctcg tactgaatgc cacagccctg cccttgcctg acaaagagtt cagggcctcg tactgaatgc cacagccctg cccttgcctg acaaagagtt

图3-3
IGF-ⅠcDNA的PCR产物测序结果同源性对比图
图3-4 IGF-ⅠcDNA的PCR产物正向、反向测序图谱
A B C D E N M
2000bp
500bp
166bp
250bp
100bp
图3-6 GHR cDNA的PCR产物的凝胶电泳图
注: M为DNA marker；N为阴性对照组；A、 B 、E为肝脏样品；C 、 D为肌肉样品
血液TNF浓度
1.9 1.8 1.7 1.6 1.5 1.4 2
y = 0.2518x + 0.9061 R2 = 0.8536
3d 21d 35d
2.5
3
3.5
4
图：血液Leptin与TNF浓度
血液Leptin与TNF浓度的相关性
结果
5) IL-2、IL-6
蓝塘仔猪血液IL-2、IL-6浓度变化

图3-3
IGF-ⅠcDNA的PCR产物测序结果同源性对比图
图3-4 IGF-ⅠcDNA的PCR产物正向、反向测序图谱
A B C D E N M
2000bp
500bp
166bp
250bp
100bp
图3-6 GHR cDNA的PCR产物的凝胶电泳图
注: M为DNA marker；N为阴性对照组；A、 B 、E为肝脏样品；C 、 D为肌肉样品
IL-2浓度（ng/ml)
8
IL-6浓度（pg/ml)
250 200 150 100 50 0 1d 3d 21d 35d
6 4 2 0 1d 3d 21d 35d
图：不同日龄仔猪血清IL-2浓度变化
*
图：不同日龄仔猪血液IL-6含量变化
结果

6) 皮质醇
100
血清皮质醇浓度在 出生的当天很高， 3日龄时几乎下降 了1倍，21日龄几 乎下降了9倍，35 日龄时又有所升高。
材料与方法—受体结合活性测定
肝脏、肌肉细胞膜GHR结合活性的测定
–制备膜蛋白
1.5g组织→加入3mL冰冻的匀浆缓冲液匀浆→转移匀浆液至 50mL塑料离心管→冰浴状态下超声波匀浆2min→4℃1000g离 心10min→取上清液在4℃，10,000g离心60min→取上清液 4℃，100,000g再离心30min→最终的沉淀颗粒用1mL稀释缓 冲液重悬→测膜蛋白含量→-20℃保存待用。

TRH、GnRH
下丘脑
CRH
GHRH SS
TSH、FSH、LH
垂体
ACTH
GH
靶器官 T 3 T4 甲状腺
cortisol
IGFs 肝脏
T、P、E
性腺
肾上腺
材料和方法
1) , 动物 蓝塘猪,大白猪和长白猪

一一 一
2), 方法 饲养试验,离体细胞培养,分子生 物学等实验方法
蓝塘猪品种特点
试验猪群
1 蓝塘仔猪生长与相关激素、受体及 基因表达

材料与方法
对32头不同日龄（0d、3d、21d、35d）蓝塘仔 猪称重、剖杀,分别取样 用RIA法测定血液及组织液中IGF-1、FT3、FT4、 Leptin、IL-2、IL-6、皮质醇水平 用放射受体分析法检测肌肉、肝脏细胞膜GHR 特异结合活性 用实时荧光定量PCR（real-time PCR）检测肝 脏和肌肉组织中IGF-1mRNA、GHRmRNA表达水平
IGF-1浓度(ng/ml)
400 300 200 100 0 1d 3d 21d 35d
图：不同日龄仔猪血清IGF-1的变化
结果
肝脏IGF-1含量在 不同日龄差异 不大,但肌肉组 织存在日龄差 异 肌肉组织中IGF-1 水平显著高于 肝脏(p<0.01)
¨ng/mg protein) IGF-1£
80 60 40 20 0 1d 3d 21d 35d
图：不同日龄仔猪血液皮质醇浓度的变化
结果
7) GHRmRNA 初生时，肝脏、肌 肉GHRmRNA的表达 量均高于其它日 龄 肝脏中GHRmRNA的表 达在仔猪不同时 期均明显高于肌 肉组织
–用放射受体分析法测定肝脏、肌肉细胞膜GHR
结合活性
材料与方法—基因表达的实时荧光定量PCR检测
组织样品
总RNA 定量PCR cDNA
产物DNA 梯度稀释
常规PCR
产物回收、纯化
产物含量 测定
产物测序
28sRNA 18sRNA 5sRNA
图3-1 组织总RNA凝胶电泳图



1881 tctctcatcg tgtggctatg tgagcacaga ccaactgaac aaaatcatgc tctctcatcg tgtggctatg tgagcacaga ccaactgaac aaaatcatgc
1931 cttagccttt ctttgggaat tc// cttagccttt ctttggta 图3-7 GHR cDNA的PCR产物核苷酸测序结果同源性对比图
261 gatgtactgt gcacccctca agcctgccaa gtcggcccgc tccgtccgtg gatgtactgt gcacccctca agcctgccaa gtcggcccgc tccgtccgtg
311 cccagcgcca cacggacatg cccaaggctc agaaggaagt acatttgaag cccagcgcca cacggacatg ccaaagggtc agaaga

1781 ctgagatgcc tgtcccagac tatacctcca ttcatatagt acagtctcca ctgagatgcc tgtcccagac tatacctcca ttcatatagt acagtccca 1831 cagggcctcg tactgaatgc cacagccctg cccttgcctg acaaagagtt cagggcctcg tactgaatgc cacagccctg cccttgcctg acaaagagtt
猪生长轴的发育规律 及其营养调节
华南农业大学动物科学 学院 广州 510642 傅伟龙
研究工作进展

1)
蓝塘仔猪生长与相关激素、受体及基因表达
2) 谷胱甘肽（GSH）对断奶蓝塘仔猪、大白猪生长的 调节 3) 甘氨酰谷氨酰胺对断奶大白,长白仔猪生长的调节 4) 赖氨酸螯合铜对断奶大白猪生长的调节

167tcaacaagcc cacagggtac ggctccagca gtcggagggc gccacagacg caggggtt ggctccagca gtcggagggc gccacagacg 211 ggcatcgtgg atgagtgctg cttccggagc tgtgatctga ggaggctgga ggcatcgtgg atgagtgctg cttccggagc tgtgatctga ggaggctgga