胆固醇测定2.

三、实验器材与试剂
（一）实验器材
（1）试管 （2）水浴箱 （3）试管架 （4）洗耳球 3支 1台 1个 1个
（5）微量五档可调移液器 2支
（6）刻度吸量管（5ml） 1支
（7）72-1型分光光度计 1台
微量五档可 调移液器 使用方法：
1.将吸嘴套在移液器头上轻轻转动，以保证密封。
2.使用前应先将移液器吸液和排液几次，润洗吸嘴和保持 腔内外气压一致。
实验项目
血清胆固醇的测定-CHO 2学时
临床意义
【参考值】：3.10mmol/L～5.70mmol/L
血清胆固醇浓度增高见于动脉粥样硬化，肾 病综合症，胆总管阻塞，黏液性水肿和糖尿病。 其他如肥大性骨关节炎、老年性白内障及牛皮 癣等血清胆固醇有增高。 血清胆固醇浓度降低常见于恶性贫血、溶血 性贫血及甲状腺功能亢进时，血清胆固醇降低， 其他如感染和营养不良等情况。
一、实验目的
掌握：血清胆固醇测定的原理、操作方法 和临床意义。
二、实验原理
1、
2、
胆固醇酯
胆固醇酯酶
胆固醇 +脂肪酸
胆固醇 + O2 胆固醇氧化酶 胆固醇-4-烯-酮 + H 2O2
3、 H2O2
+ 4-氨基安替比林 + 苯酚
过氧化物酶
醌亚胺 + H 2O
4.生成的醌类化合物颜色的深浅与胆固醇的含量成正比， 用72-1型分光光度计分别测定标准管和测定管的吸光度值， 计算胆固醇的含量。
浓度为3.10mmol/L～5.70mmol/L ）。
72-1型分光光度计
工作原理
物质对光的吸收具有选择性，不同的物质都有各 自的吸收波长。在一定波长下，某物质的溶液对光的 吸收强弱（吸光度A）与溶液的浓度C和液层的厚度L 的乘积成正比，即遵循朗伯-比尔定律：
A=K· C· L
(K为吸收系数，对同一物质来说为一常数)
使用方法：
1.检查 ：指针位于“0”。 2.打开电源，打开比色皿暗箱盖，预热20分钟。
然后按下表加入试剂：
加入物 血清（ml） 标准液（ml） 工作液（ml） 1.5 测定管T 15 15 1.5 标准管S
2 、 将 样 品 混 匀 后 ， 置 于 37℃ 水 浴 箱 中 水 浴 10min。 3、用分光光度计在波长510nm处，以空白管O
调零，分别读取两管吸光度值，记录测定管T、标
3.加样：夹毛面，擦干。
4.放置好比色皿，选择波长、调灵敏度。
5.反复调0、调100至稳定。 6.合盖，读数，记录，取样，清洗，关闭仪器。
（Leabharlann Baidu）实验试剂
1、血清（样本） 2、工作液 3、胆固醇标准液（标本）：5.17 mmol/L
四、实验内容和操作过程
1. 取2支干燥试管，分别标明测定管（T）、标准管（S）
3.选择量程。
4.垂直地握住移液器，将按钮按到第一停止点，然后把吸 嘴浸入到液面下2～3mm，再缓慢放松按钮，使之复位，等 待1～2秒后，从液体中取出，并避免碰撞任何物体。 5.将吸液嘴移至加样容器壁上，缓慢地把按钮按到第一停 止点，等待1～2秒，再把按钮全部按下去，排尽液体后，吸液
嘴应沿容器壁上滑动取出，再放松按钮，使之复位，即完成。 6.最后，打掉用过的吸液嘴，调回最大量程，仪器放置好保存。
准管S的吸光度值AT、AS 。
五、实验结果计算及分析
计算公式：
胆固醇（mmol/L）=
×标准液浓度（5.17 mmol/L）
测定管吸光度AT 标准管吸光度AS
【结果分析】
【参考值】：3.10mmol/L～5.70mmol/L 经过计算得到的血清中胆固醇浓度为多
少，是否在人体的正常范围内（空腹胆固醇