免疫固定电泳操作SOP
免疫固定电泳操作规程
免疫固定电泳操作规程一．项目名称免疫固定电泳(ＨYDRAGEL ＩＭMＵNOＦＩXATＩＯN)二．检验方法名称琼脂糖凝胶免疫固定电泳三．方法学原理血清蛋白电泳中出现得异常条带主要存在于β-球蛋白与γ-球蛋白区域,通常疑为单克隆蛋白质并且提示丙球蛋白血症。
为鉴别异常条带,可运用免疫固定技术。
免疫固定电泳就是一种简单得技术,电泳后得蛋白质与相应抗体形成复合物与被固定在相应得位置上,通过下列四个步骤:１。
蛋白质在琼脂糖凝胶内进行电泳分离。
2.电泳后已分离得蛋白质被固定并产生免疫沉淀:应用固定剂与抗血清加于凝胶表面得泳道上,并让固定剂与抗血清在凝胶内渗透扩散。
3.使用吸水纸与清洗将未沉淀得蛋白质去除,已被沉淀得蛋白质贮留在凝胶内。
4、将蛋白质染色,并将这些免疫沉淀区带得位置与蛋白质经电泳后观察到得异常蛋白区带进行比较。
为了精确识别单克隆区带,样品同时在六条泳道上进行测试。
经电泳后,ＥLP作为参考泳道以显示电泳后得蛋白质。
其余五条泳道用于鉴定单克隆成分。
通过它(们)与抗血清,γ(IｇＧ)、α(IgＡ)、μ(IgM)重链与κ、λ轻链(游离与非游离)反应与否进行鉴别。
该技术简单、快速、图象清晰,易于解释结果、四．方法学溯源自１930年由Ｔiseｌius发现了移界电泳(moｖing bｏundaｒy eｅｃtrｏpｈoresis),而后,这种技术得各种局限性已逐渐被区带电泳(zoｎe ｅlecｒrｏｐhoresis)所克服,区带电泳得条件与支持介质得选择就是电泳成败得关键、通过免疫化学手段观察其电泳特性及抗原特性就是鉴定某一蛋白成分最好得方法,免疫固定电泳技术就是目前应用最广泛得方法之一。
五．仪器（一）型号:SEＢIA ＨYDＲASYＳ(ＰN1210)（二）分析与计算参数:1．处理量:约18个样本/小时2．所需样本量:１０ul3．检验时间:约55分钟4．重复性:有良好得批内与批间重复性5．电泳参数:电压0-30０V(可选至30０0V)电流0－500mＡ功率０－１00W六．试剂及配套品（一）试剂1．HYDＲＡGＥL 1 IF试剂盒ＨYＤＲAGEＬ２IF试剂盒HYDRAGEL 4 IF试剂盒HYDRAＧEL 9 IF试剂盒（1）商标:SEBIA（2）包装规格:1０测试／20测试/40测试/90测试（3）货号:PN43０1/ PＮ43０2/ PN４３0４/PN43０92．脱色液(1) 商标:SEBIA(2) 包装规格:Paｃｋfｏr 10×10０ｍl(3) 货号:PＮ454０(4) 成分:柠檬酸3。
免疫球蛋白固定电泳
免疫球蛋白固定电泳免疫球蛋白固定电泳是一种重要的实验技术，常用于研究免疫球蛋白的结构和功能。
通过将免疫球蛋白样品经过电泳分离，然后使用抗体与目标免疫球蛋白结合，形成免疫复合物，从而能够观察样品中的不同免疫球蛋白成分。
以下是对免疫球蛋白固定电泳相关内容的详细介绍。
1. 免疫球蛋白固定电泳的原理：免疫球蛋白固定电泳是一种将免疫球蛋白分离并检测的实验方法。
该方法在电泳基质（如琼脂糖凝胶）中添加抗体，然后将样品与该基质共同电泳，经过一定时间后，免疫球蛋白与抗体结合形成免疫复合物，从而实现对不同免疫球蛋白的分离和检测。
2. 免疫球蛋白固定电泳的步骤：（1）制备样品：将待测样品通过适当的方法进行预处理，如对血清样品进行预处理，使其蛋白质含量适宜进行电泳分离。
（2）制备电泳基质：制备适当的电泳基质，例如聚丙烯酰胺凝胶或琼脂糖凝胶。
（3）制备抗体：制备与目标免疫球蛋白特异性结合的抗体。
可以选择单克隆抗体或多克隆抗体。
（4）固定抗体：将抗体加入到电泳基质中，使其固定在基质上。
（5）电泳分离：将样品与固定抗体的电泳基质放入电泳槽内，通过施加电场使不同的免疫球蛋白在基质上发生分离。
（6）染色：用适当的染色方法将电泳分离后的免疫球蛋白可视化，如用共铁染色等方法。
（7）定量分析：使用分光光度计或其他适当的仪器对染色后的免疫球蛋白进行定量分析，以确定其浓度和相对含量。
3. 免疫球蛋白固定电泳的应用：（1）研究免疫球蛋白的结构：通过免疫球蛋白固定电泳技术，可以对免疫球蛋白的不同亚型、同工酶和变异体进行分离和检测，从而揭示其结构和功能的差异。
（2）免疫球蛋白疾病的诊断：免疫球蛋白固定电泳常用于诊断免疫球蛋白疾病，如多发性骨髓瘤、淋巴瘤等，通过观察样品中免疫球蛋白的异常成分可以对疾病进行判断和鉴定。
（3）血清蛋白质分析：免疫球蛋白固定电泳可用于血清蛋白质分析，通过对血清样品进行固定电泳，可以分离和定量不同的血清蛋白成分，为临床诊断提供重要信息。
SDS-PAGE电泳SOP
SDS-PAGE电泳标准操作规程1.目的：制定本规程以规范还原性SDS-PAGE和非还原性SDS-PAGE电泳方法分离蛋白的操作过程。
2.范围：抗原或是抗体的定性鉴定、纯度鉴定和相对定量比较。
3.责任：质量分析人员熟悉并遵守该标准操作规程。
4.定义：N/A5.设备、材料和试剂：5.1设备、材料设备名生产商型号/货号设备编号备注电泳仪伯乐PowerpacHC TM HV JS026垂直电泳槽伯乐Miniprotean JS025干式恒温浴K30 JS045离心机eppendorf F-45-12-11 JS020单道移液器（10ul,100ul）Eppendorf Research plus JH07931,GH15898冰箱TCL BCD-211KD3 N/A摇床QILIM BEIER N/APH仪梅特勒5.2试剂试剂名称生产商货号批号APS国药集团化学试剂F20111213甲醇国药集团化学试剂20130407 冰醋酸国药集团化学试剂130420考马斯亮蓝R-250 国药集团化学试剂20130322 Tris-HCl 国药集团化学试剂201300422 甘油国药集团化学试剂F201000115 溴酚蓝国药集团化学试剂20120929 无水乙醇国药集团化学试剂甘氨酸国药集团化学试剂SDSDTTProtein Marker盐酸国药集团化学试剂2×PAGE 7.5%凝胶制备试剂盒Promoton PG111 分离胶缓分离胶溶液4%浓缩胶Promoton 浓缩胶预混液6.溶液配制6.1分离胶以1mm板，配两块为例：取7.5%的分离胶缓冲液和分离胶各5ml混匀，再向其加入10%的APS溶液100μl混匀。
6.2 浓缩胶以1mm板，配两块为例：取浓缩胶的预混液4ml，向其加入10%的APS溶液40μl混匀。
6.3 上样缓冲液（loading buffer）：6.4 10%过硫酸铵称取1g APS，加入10ml纯水搅拌溶解（现配现用）也可储存4~8℃冰箱中保存，保存期为1-2周。
电泳试剂操作简要说明
Sebia电泳仪简要操作1．血清蛋白电泳：血清加样10μL --→保湿5分钟--→挂缓冲条--→电泳底版加20μ0 L蒸馏水--→吸去胶片表面水分--→放进电泳舱--→放下电极架--→放入加样梳--→关上电泳盖--→选电泳项目--→按确定键--→按开始键--→检查染脱色液--→胶片放入染脱色舱--→选染脱色项目--→按确定键--→按开始键加样梳：7人份\15人份－6号位，30人份－3号、9号位，54人份－2号、6号、10号位。
2. 免疫固定样品稀释:A液－1: 3 血清30μL + 稀释液60μL，B液－1: 6 血清20μL + 稀释液100μL1、2人份加8μl抗血清。
4人份加12μl抗血清加样10μL (1、8、15号位不加。
3、10号位加B液。
其余各孔加A液。
) --→保湿5分钟--→挂缓冲条电泳底版加200μL蒸馏水--→--→放进电泳舱--→放下电极架--→放入加样梳--→关上电泳盖--→电泳选项目--→按确定键--→按开始键--→取出电极架--→放入定位杆--→放入加样模板--→加抗血清各孔加8μL抗血清，依次为ELP、IgG、IgA、IgM、IgK、IgL）--→关上电泳盖--→按开始键--→打开电泳盖--→按开始键--→移去定位杆、加样模板--→放厚滤纸--→按开始键--→移去厚滤纸--→关上电泳盖--→按开始键检查染脱色液--→胶片放入染脱色舱--→选染脱色项目--→按确定键--→按开始键1、2人份加8μl抗血清。
4人份加12μl抗血清加样梳：1、2人份－6号位，4人份－3号、9号位。
3. 本周氏蛋白免疫固定样本处理：尿标本直接加样；血清须稀释—— A液：血清10μl + 生理盐水90μl（用于GAM、K、L）B液：血清10μl + 生理盐水20μl（用于KF、LF）加样10μl（1、8、15号孔不加，用血清时2 – 5及9 - 12号孔加A液、6 – 7及13 - 14号孔加B液）--→保湿5分钟--→挂缓冲条--→电泳底版加200μL蒸馏水--→吸去胶片表面水分--→放进电泳舱--→放下电极架--→放入加样梳--→关上电泳舱盖--→电泳选项目--→按确定键--→按开始键--→打开电泳舱盖--→取出电极架--→放入定位杆--→放入加样模板--→加抗血清（各孔加8μl抗血清，依次为EPL[黄]、GAM[紫]、K[绿]、L[蓝]、KF[橙]、LF[红]）--→关上电泳舱盖--→按开始键--→打开电泳舱盖--→开始键--→移出定位杆、加样模板--→放厚滤纸—→按开始键--→移去厚滤纸--→关上电泳舱盖--→按开始键检查脱色液--→胶片放入染脱色舱--→选脱色项目--→按确定键--→按开始键1、2人份加8μl抗血清。
免疫固定电泳操作规程
免疫固定电泳操作规程一．项目名称免疫固定电泳(ＨYＤRＡＧＥL IMMUＮＯFIXAＴION)二．检验方法名称琼脂糖凝胶免疫固定电泳三．方法学原理血清蛋白电泳中出现得异常条带主要存在于β—球蛋白与γ—球蛋白区域,通常疑为单克隆蛋白质并且提示丙球蛋白血症。
为鉴别异常条带,可运用免疫固定技术。
免疫固定电泳就是一种简单得技术,电泳后得蛋白质与相应抗体形成复合物与被固定在相应得位置上,通过下列四个步骤:1。
蛋白质在琼脂糖凝胶内进行电泳分离。
2。
电泳后已分离得蛋白质被固定并产生免疫沉淀:应用固定剂与抗血清加于凝胶表面得泳道上,并让固定剂与抗血清在凝胶内渗透扩散、３。
使用吸水纸与清洗将未沉淀得蛋白质去除,已被沉淀得蛋白质贮留在凝胶内。
4、将蛋白质染色,并将这些免疫沉淀区带得位置与蛋白质经电泳后观察到得异常蛋白区带进行比较。
为了精确识别单克隆区带,样品同时在六条泳道上进行测试。
经电泳后,ELP作为参考泳道以显示电泳后得蛋白质。
其余五条泳道用于鉴定单克隆成分。
通过它(们)与抗血清,γ(IｇG)、α(ＩｇA)、μ(IgM)重链与κ、λ轻链(游离与非游离)反应与否进行鉴别、该技术简单、快速、图象清晰,易于解释结果。
四．方法学溯源自1930年由Tｉｓｅlius发现了移界电泳(moviｎg bounｄａry ｅectrophoresis),而后,这种技术得各种局限性已逐渐被区带电泳(zoｎe eｌecrｒophoresiｓ)所克服,区带电泳得条件与支持介质得选择就是电泳成败得关键。
通过免疫化学手段观察其电泳特性及抗原特性就是鉴定某一蛋白成分最好得方法,免疫固定电泳技术就是目前应用最广泛得方法之一。
五．仪器（一）型号:ＳＥBIA HＹＤRASYＳ(PＮ12１0)（二）分析与计算参数:1．处理量:约18个样本/小时2．所需样本量:10ul3．检验时间:约55分钟4．重复性:有良好得批内与批间重复性5．电泳参数:电压0—30０V(可选至３０00V)电流0—500mＡ功率0-１00Ｗ六．试剂及配套品（一）试剂1．HＹDＲＡGEＬ1 IF试剂盒HＹDＲAＧＥL 2IF试剂盒HYDRＡGEL 4IF试剂盒HYＤＲAGＥL 9 ＩＦ试剂盒（1）商标:ＳＥBIA（2）包装规格:10测试/2０测试／40测试/90测试（3）货号:ＰN４301/ＰN４３0２／PN4３04/ＰN４３０９2．脱色液(1) 商标:SＥＢIA(2)包装规格:Ｐａcｋfｏr １０×100ml(3) 货号:PＮ4５40(４) 成分:柠檬酸3、洗涤液（1）商标:ＳEBＩA（2）包装规格:Paｃk foｒ10×80ｍl（3）货号:ＰＮ4541（4）成分:叠氮钠4.稀释剂（1）商标:SEＢIA（2）包装规格:Paｃｋfｏr1×５ml（3）货号:PN458７（二）配套品:ＩＦ试剂抗体(1) 商标:SEBIA(2 ) 包装规格:Pａcｋfor 5×1mｌ(３)PＮ4３15七．操作步骤㈠开机,启动电泳仪。
免疫固定电泳操作规程
免疫固定电泳操作规程项目名称免疫固定电泳( HYDRAGEL IMMUNOFIXATION)检验方法名称琼脂糖凝胶免疫固定电泳方法学原理血清蛋白电泳中岀现的异常条带主要存在于B -球蛋白和丫 -球蛋白区域，通常疑为单克隆蛋白质并且提示丙球蛋白血症。
为鉴别异常条带，可运用免疫固定技术。
免疫固定电泳是一种简单的技术，电泳后的蛋白质与相应抗体形成复合物和被固定在相应的位置上，通过下列四个步骤： 1．蛋白质在琼脂糖凝胶内进行电泳分离。
2．电泳后已分离的蛋白质被固定并产生免疫沉淀：应用固定剂和抗血清加于凝胶表面的泳道上，并让固定剂和抗血清在凝胶内渗透扩散。
3．使用吸水纸和清洗将未沉淀的蛋白质去除，已被沉淀的蛋白质贮留在凝胶内。
4．将蛋白质染色，并将这些免疫沉淀区带的位置与蛋白质经电泳后观察到的异常蛋白区带进行比较。
为了精确识别单克隆区带，样品同时在六条泳道上进行测试。
经电泳后，ELP作为参考泳道以显示电泳后的蛋白质。
其余五条泳道用于鉴定单克隆成分。
通过它(们)与抗血清，丫(IgG)、a (IgA)、卩(IgM)重链和K、入轻链(游离和非游离)反应与否进行鉴别。
该技术简单、快速、图象清晰，易于解释结果。
方法学溯源自 1930 年由 Tiselius 发现了移界电泳( moving boundary eectrophoresis )，而后，这种技术的各种局限性已逐渐被区带电泳( zone elecrrophoresis )所克服，区带电泳的条件和支持介质的选择是电泳成败的关键。
通过免疫化学手段观察其电泳特性及抗原特性是鉴定某一蛋白成分最好的方法，免疫固定电泳技术是目前应用最广泛的方法之一。
仪器型号： SEBIA HYDRASYS (PN1210)分析和计算参数：处理量：约 18 个样本 / 小时所需样本量： 10ul检验时间：约 55 分钟重复性：有良好的批内和批间重复性电泳参数：电压 0 — 300V (可选至 3000V)电流 0－ 500mA功率 0— 100W试剂及配套品试剂HYDRAGEL 1 IF式剂盒HYDRAGEL 2 IF式剂盒HYDRAGEL 4 IF式剂盒HYDRAGEL 9 IF式剂盒商标：SEBIA包装规格：10测试/20测试/40测试/90测试货号：PN4301/ PN4302/ PN4304/PN4309脱色液(1)商标：SEBIA(2)包装规格：Pack for 10 x 100ml(3)货号：PN4540(4)成分：柠檬酸3 •洗涤液商标：SEBIA包装规格：Pack for 10 x 80ml货号：PN4541成分：叠氮钠4 .稀释剂商标：SEBIA包装规格：Pack for 1 x 5ml货号：PN4587配套品：IF试剂抗体(1) 商标：SEBIA(2 ) 包装规格：Pack for 5 x 1ml(3) PN4315操作步骤㈠开机，启动电泳仪。
SPIFE 3000固定免疫电泳操作规程
SPIFE 3000固定免疫电泳操作规程一、方法学原理电泳法二、试剂美国HELENA公司IFE产品三、操作1．电泳：仪器型号：SPIFE 30001.1开机：打开仪器右侧电源开关。
1.2待仪器自检后，打开仪器右侧盖板。
1.3按u键，使加样架右移，放入样本盘，样本盘上按所选用的电泳膜加样，每份标本加样20μl。
1.4按t键，使加样架左移，按需要放入新加样梳，在加样梳上加上骑码。
1.5在电极铜板上加电极液，将电泳膜放置在铜板上，小心勿出气泡。
1.6在胶桥上放置炭棒。
1.7用C型滤纸吸干电泳膜表面1.8按u键选取IFE，按t键2次，开始电泳，仪器自动操作。
1.9电泳毕，取出炭棒。
1.10 用小铲铲去胶桥。
1.11 擦干铜板，丢弃加样梳，洗净样本盘。
2抗原抗体反应SPIFE 30002.1 在胶膜上加抗体模板2.2在抗体模板槽孔中加抗体40μl，按u键，仪器自动孵育。
2.3 在抗体模板槽孔中插入滤纸梳，吸去多余抗体，按u键，仪器自动操作。
2.4 取下抗体模板，用D型滤纸吸干电泳膜表面，按u键，仪器自动操作。
2.5 取下D型滤纸，干燥胶膜表面，按u键，仪器自动操作。
3染色：仪器型号：SPIFE 30003.1吹干电泳膜剩余水分，将电泳膜夹到染色架上。
3.2将染色架放回染色槽。
3.3按test select选取SPE，按start 2次，开始染色，仪器自动操作。
3.4待染色结束后，取出胶膜。
4扫描：仪器型号：REP4.1扫描，打开下方仪器开关。
REP4.2待仪器自检后，点击扫描，进入扫描菜单4.3选取SPE，及所用电泳膜型号。
4.4按当日操作情况编制参数。
4.5仪器自动扫描4.6结果观察。
四、临床意义：M蛋白病患者在相应的单克隆增殖株处可见异常浓集区带。
五、标本要求血清，可4℃保存，一周内完成测定，避免反复冻融。
六、操作注意事项1．每次开机测试前采用HELENA公司质控品作为室内质控。
2．在电极铜板上加电极液，将电泳膜放置在铜板上，小心勿出气泡。
免疫固定电泳报告解读
免疫固定电泳报告解读免疫固定电泳是一种重要的实验技术，广泛应用于生物医学研究和临床诊断领域。
通过将待检测的抗原与抗体结合后进行电泳分离，可以对蛋白质分子进行定量和定性分析。
本文将针对免疫固定电泳的原理、方法和报告解读进行详细介绍。
**一、免疫固定电泳的原理**免疫固定电泳是结合了免疫学和电泳技术的一种生物化学方法。
其原理基于抗原与抗体结合的特异性，在电泳条件下可以将待检测的蛋白质分子进行分离和检测。
具体步骤如下：1. 样品制备：待检测的蛋白质样品首先与特异性抗体结合，形成抗原-抗体复合物。
2. 电泳分离：将样品加载到电泳凝胶中，施加电场进行电泳分离。
抗原-抗体复合物根据大小和电荷的差异在电场作用下发生迁移，完成分离。
3. 免疫检测：电泳结束后，将凝胶转移到膜上，并进行免疫检测。
通过特异性的抗体标记，可以定量和定性检测抗原的存在。
**二、免疫固定电泳的方法**免疫固定电泳的方法主要包括样品制备、电泳分离和免疫检测三个步骤。
具体操作如下：1. 样品制备：将待检测的蛋白质样品与特异性抗体结合，形成抗原-抗体复合物。
通常采用预实验确定最佳的抗原-抗体比例，以保证实验的准确性。
2. 电泳分离：将样品加载到聚丙烯酰胺凝胶中，施加电场进行电泳分离。
根据抗原-抗体复合物的大小和电荷差异，进行分离。
通常采用双向电泳，以获得更好的分离效果。
3. 免疫检测：电泳结束后，将凝胶转移到膜上，进行免疫检测。
通常采用酶联免疫吸附试验（ELISA）或放射免疫沉淀分析（RIA）等方法，通过特异性抗体标记进行检测。
**三、免疫固定电泳报告解读**免疫固定电泳的报告通常包括电泳图谱和免疫检测结果，解读主要针对以下几个方面：1. 电泳图谱分析：通过电泳图谱可以观察到抗原-抗体复合物的分离情况，包括带电率、分子量等信息。
根据复合物的迁移位置和带电率，可以初步判断抗原的存在和性质。
2. 免疫检测结果：通过免疫检测可以定量和定性地检测抗原的存在。
免疫固定电泳报告解读
免疫固定电泳报告解读免疫固定电泳是一种用于检测特定蛋白质的方法，该方法结合了免疫学和电泳技术，通过将待检测样本中的蛋白质与特定抗体结合，然后通过电泳分离和检测这些蛋白质。
本文将对免疫固定电泳的原理、实验操作、结果解读及其在生物医学研究领域的应用进行详细解读。
一、原理免疫固定电泳的原理基于蛋白质与抗体的特异性结合。
待检样本中的蛋白质与特异性抗体结合，形成免疫复合物。
然后，将这些免疫复合物置于电泳缓冲液中，经过电泳过程，根据蛋白质的大小和电荷，使得不同种类的蛋白质被迁移至电泳胶中的不同位置。
最后通过染色或放射自显影等方法，可定量检测目标蛋白质的数量和结构。
二、实验操作免疫固定电泳的实验操作一般包括样本制备、免疫反应、电泳分离和结果检测等环节。
需要从样本中提取所需的蛋白质，并进行适当的稀释和处理。
然后将样品加入含有特异性抗体的免疫缓冲液中，进行免疫反应。
接下来，将免疫复合物加载至电泳缓冲液中，进行电泳分离。
根据需要选择适当的方法（如染色或放射自显影）来检测目标蛋白质，并进行定量分析。
三、结果解读免疫固定电泳的结果解读主要包括定性和定量两个方面。
在定性分析中，根据电泳结果的条带模式和分布情况，可以推测待检样本中特定蛋白质的存在与否。
而在定量分析中，可以通过测定条带的强度和密度等参数，来对目标蛋白质在样本中的含量进行定量分析，从而得出蛋白质在不同条件下的表达水平或变化情况。
四、在生物医学研究领域的应用免疫固定电泳在生物医学研究领域有着广泛的应用。
它可以用于检测生物标志物，如肿瘤标志物、炎症标志物等，从而帮助诊断疾病和监测疾病进展。
它还可以用于研究蛋白质的表达和修饰情况，揭示生物学过程中蛋白质的功能和调控机制。
在药物研发和临床监测中，免疫固定电泳也可以作为一种常用的生化分析手段，用于评估药物的效果和毒性。
免疫固定电泳作为一种重要的实验技术，在生物医学研究领域具有重要意义，它不仅可以帮助科研人员深入了解蛋白质的结构和功能，还可以为临床诊断和治疗提供重要依据。
084 免疫固定电泳技术---检验科作业指导书
检验科 作业指导书
免疫固定电泳技术
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1 实验原理
标本于琼脂糖凝胶介质上经电泳分离后，应用固定剂和各型免疫球蛋白及其轻链抗血清，通常选用 抗 IgG、A、M 和κ、λ轻链抗血清，加于凝胶表面的泳道上，参考泳道则加蛋白质固定剂，用于区带对 照。经孵育让固定剂和抗血清在凝胶内渗透并扩散后，若有对应的抗原存在，则在适当位置形成抗原抗 体复合物并沉淀下来。电泳凝胶在洗脱液中漂洗，以除去未结合的蛋白质，仅保留贮存在凝胶内的抗原 抗体复合物。经染色后蛋白质电泳参考泳道和抗原抗体沉淀区带被氨基黑着色，根据电泳移动距离分离 出单克隆组分，并可对各类免疫球蛋白及其轻链进行分型。已列入临床实验室的常规检测工作。
3 用途
免疫固定电泳是一种包括琼脂糖凝胶蛋白电泳和免疫沉淀两个过程的操作。检测标本可以是血清、 尿、脑脊液或其它体液。已在医学研究、法医学、基因诊断和临床实验室操作中得到了广泛的应用。 3.1 血清 M 蛋白的分型与鉴定实验。 3.1.1 存在单克隆成份 通过抗 IgG、A、M 重链和抗κ、抗λ轻链抗血清检出单克隆条带。 3.1.2 存在两种以上的单克隆成份 通过免疫固定电泳检出两种或两种以上的单克隆条带。可能是双克 隆丙种球蛋白血症，或是寡克隆丙种球蛋白血症（图 6- 21）。现已列入临床实验室的常规检测工作。 3.2 尿液本周蛋白的分型与鉴定 本周氏蛋白是没有与免疫球蛋白分子中重链结合的轻链，分为κ或λ 型两种轻链。本周氏蛋白存在于下例两种类型中：①伴随存在于典型的单克隆丙种球蛋白血症；②游离 轻链病。IFE 可用于血清和尿液标本κ和λ轻链型的鉴别。特别是对具肾脏病理改变者，从良性的肾小 管性蛋白尿发展为急性肾衰或淀粉样变性，进行性的肾脏损害影响了分解代谢的重吸收，导致游离轻链 出现在尿液和血清中，必须予以检测和鉴别。IFE 中，游离轻链往往与其中一型的抗血清起反应，在 β-γ 区附近形成一条致密的弓形沉淀线。有时轻链还含有其他蛋白，要注意识别。如多克隆免疫球蛋白常同 时与 κ 和 λ 两型抗轻链血清形成沉淀线，而单克隆免疫球蛋白（M 蛋白）虽只与其中一型抗轻链血清 反应，但也与某一型重链抗血清产生一位置相同的沉淀线，通过观察分析可作出正确判断（图 6- 22）。
免疫固定电泳操作SOP
免疫固定电泳操作规程一、项目名称免疫固定电泳（HYDRAGEL IMMUNOFIXATION）二、检验方法名称琼脂糖凝胶免疫固定电泳三、方法学原理血清蛋白电泳中出现的异常条带主要存在于β-球蛋白和γ-球蛋白区域，通常疑为单克隆蛋白质并且提示丙球蛋白血症。
为鉴别异常条带，可运用免疫固定技术。
免疫固定电泳是一种简单的技术，电泳后的蛋白质与相应抗体形成复合物和被固定在相应的位置上，通过下列四个步骤：1、蛋白质在琼脂糖凝胶内进行电泳分离。
2、电泳后已分离的蛋白质被固定并产生免疫沉淀：应用固定剂和抗血清加于凝胶表面的泳道上，并让固定剂和抗血清在凝胶内渗透扩散。
3、使用吸水纸和清洗将未沉淀的蛋白质去除，已被沉淀的蛋白质贮留在凝胶内。
4、将蛋白质染色，并将这些免疫沉淀区带的位置与蛋白质经电泳后观察到的异常蛋白区带进行比较。
为了精确识别单克隆区带，样品同时在六条泳道上进行测试。
经电泳后，ELP作为参考泳道以显示电泳后的蛋白质。
其余五条泳道用于鉴定单克隆成分。
通过它（们）与抗血清，γ(IgG)、α(IgA)、μ(IgM)重链和κ、λ轻链（游离和非游离）反应与否进行鉴别。
该技术简单、快速、图象清晰，易于解释结果。
四、方法学溯源自1930年由Tiselius发现了移界电泳（moving boundary eectrophoresis），而后，这种技术的各种局限性已逐渐被区带电泳（zone elecrrophoresis）所克服，区带电泳的条件和支持介质的选择是电泳成败的关键。
通过免疫化学手段观察其电泳特性及抗原特性是鉴定某一蛋白成分最好的方法，免疫固定电泳技术是目前应用最广泛的方法之一。
五、仪器（一）型号：SEBIA HYDRASYS (PN1210)（二）分析和计算参数：1、处理量：约18个样本/小时2、所需样本量：10ul3、检验时间：约55分钟4、重复性：有良好的批内和批间重复性5、电泳参数：电压0－300V（可选至3000V）电流0－500mA功率0－100W六、试剂及配套品（一）试剂1、HYDRAGEL 1 IF试剂盒HYDRAGEL 2 IF试剂盒HYDRAGEL 4 IF试剂盒HYDRAGEL 9 IF试剂盒（1）商标：SEBIA（2）包装规格：10测试/20测试/40测试/90测试（3）货号：PN4301/ PN4302/ PN4304/PN4309 2、脱色液（1）商标：SEBIA（2）包装规格：Pack for 10×100ml（3）货号：PN4540（4）成分：柠檬酸3、洗涤液（1）商标：SEBIA（2）包装规格：Pack for 10×80ml（3）货号：PN4541（4）成分：叠氮钠4、稀释剂（1）商标：SEBIA（2）包装规格：Pack for 1×5ml（3）货号：PN4587（二）配套品IF试剂抗体（1）商标：SEBIA（2）包装规格：Pack for 5×1ml（4）货号：PN4315七、操作步骤（一）开机，启动电泳仪。
免疫电泳详细教程
7.1.5其局限性及其重要性
经典的免疫沉淀的方法已经从实验室里逐渐的消 失了。简单免疫电泳基本被Western Blot方法所 替代，定量分析方法比如放射免疫扩散、火箭免 疫电泳越来越多的被更灵敏的方法如ELISA、RIA 所代替了。主要原因除了其灵敏性低，还有一个 原因就是其反应时间较长。 如果实验对敏感性没有特殊的要求，并且如果不 是要检测半抗原，可以考虑这些经典免疫沉淀方 法。它们操作简单，并且不会造成大量的物质消 耗，不需要昂贵的ELISA等仪器。
利用胶中连续的抗体浓度，峰的最大高度是和提 供的抗原的浓度呈比例的。根据已知浓度的各种 标准抗原，交叉免疫电泳可以定性和定量的分析 抗原。 除了可以进行定量分析，交叉免疫电泳相对于简 单免疫电泳仍有很多的优势：它提供了更好的解 决方案，并且可以明显的快速进行。第一向分离 抗原的电泳大约需要3小时，而接下来的扩散需要 30-90分钟就可以了。
和琼脂平板法相似，简单免疫电泳的各种 沉淀线也代表着抗原的同一性、部分同一 性和非同一性。如果电泳分离的两抗原其 沉淀线距离很远相互没有接触，那电泳的 时间就要减少一下了。 如果要验证一个已知抗原的话，可以将样 品和参考标准抗原平行加样进行电泳。然 后将抗血清加入到两者之间的加样槽中进 行免疫扩散即可。
Doolittle 等发明用两级免疫沉淀法，用SDS 来减少非特异性沉淀蛋白的干扰。在第一 次沉淀过程结束后，免疫沉淀物用SDS变 性。在加入新鲜沉淀基质之前SDS的作用 用Triton X-100来覆盖。这样的预处理是为 了将抗体和变性的抗原结合进行二次沉淀。 如果用多克隆抗血清的话一般不会有什么 问题了。尿素、氯化镁以及氢氧化钠都可 以用来减少非特异性沉淀蛋白的出现。
免疫固定电泳检查流程详解
免疫固定电泳检查流程详解下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。
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Sebia血清免疫固定SOP
Sebia血清蛋白免疫固定标准操作流程一、实验前的准备耗材：小炮弹管或生化小杯子、加样枪2把（5-50ul和20-200ul）、蒸馏水或去离子水500ml、二、操作流程：1、打开机器，选择电泳程序“IF”，选择染色程序“”，检查1、血清稀释并混匀1、加样梳点样（以4人份为例）其中1、8、15泳道不加样。
3、10泳道加各自的LgG。
剩下其余各泳道加样10μL。
加完样的加样梳放置保湿盒内，最后一个样品加完后放至保湿盒内（齿朝上，扩散5分钟）。
2、海绵条放置将海绵条挂在电极丝两端的金属钉上，海绵较凸起部分面向操作人员。
4、胶片处理（免疫固定专用胶片、薄滤纸）电泳模块的温控板下方三分之一处用加样枪加200μL蒸馏水；从黑色底框边开始放置胶片，使水层与温控板充分贴合，没有气泡；用薄滤纸迅速吸取胶片上多余的水分；放下黑色的运送器，将加样梳插至第6齿上，合上机盖。
5、电泳，选择免疫固定电泳程序，开始。
6、加抗血清（抗血清、基准色卡、抗体杯架、推动安装架）扔掉使用过的加样梳和海绵条，移除运送器。
将不锈钢固定架置于温控板底端；将抗体杯架装在推动安装架上，再放到胶片和固定架上；照基准色卡对应的孔加相应的抗血清（10μL）。
均匀地将抗血清推到各通道上。
7、孵育（按开始键继续）8、用厚滤纸（光滑面朝下）充分吸去多余的凝胶后，扔掉厚滤纸，继续至自动烘干。
9、染色、褪色、清洗、烘干取出胶片，用胶片固定架将其固定后插入染色槽，选择免疫固定染色程序，开始。
10、胶片扫描将上一步骤处理完的胶片和固定架插入扫描槽，从电脑操作界面选择扫描操作。
SPIFE 4000 全自动电泳仪标准操作程序
SPIFE 4000 全自动电泳仪标准操作程序1 目的建立规范标准的 SPIFE 4000 全自动电泳仪标准操作程序。
2 适用范围适用于免疫室经授权的检验专业技术人员操作使用。
3 职责经过培训合格后，经授权的检验专业技术人员操作，由免疫室组长负责技术指导和质量监督。
4 程序4.1 仪器简介SPIFE 40000 全自动电泳仪是美国 HELENA 公司推出的最快速的全自动蛋白分析仪它通过琼脂糖凝胶电泳从而分离并定量血清或尿中的蛋白。
仪器的整体结构示意图如图 1，图 2 和图 3。
图一仪器整体外观图二样本自动稀释图三自动加抗血清4.2 各配件说明(标本架，样品盘，点样梳，抗血清板)标本架：免疫固定项目和血清蛋白项目都是使用同一个标本架，标本架共有 28 个标本位。
放标本试管时都从第一号孔位开始放置！如图 4。
样品盘：分为免疫固定样品盘和蛋白样品盘免疫固定的样品盘为 4 人份有点样孔和稀释孔。
蛋白样品盘为 28 人份。
(如图5)点样梳：分为蛋白点样梳(SPE Sample Trays) 和免疫固定点样梳(IFE Sample Trays)在安装点样梳时装光面朝自己，以白线为基准一对对的安放。
(如图 6)图4 标本架：在放置试管时从第一号孔位开始，样本液面必须高过白色位置图5 蛋白点样梳(SPE Applicator Blades) 免疫固定点样梳(IFE Applicator Blades)图6 占样孔位，样本稀释孔位蛋白样品盘(SPE Sample Trays)(每张凝胶片使用一个样品盘)，IFE 项目每个样品盘可做 4 个样本，SPE 项目每个样品盘可以做 28 个样本。
4.3 SPE 和 IFE 项目操作步骤A 开机前的准备：1、检查各试剂桶中试剂是否足量：生理盐水(Saline Wash)1 桶、去离子水(DI Water Wash)1 桶、染色液(Stain) 1 桶、脱色液(Destain) 1桶和 Tris 缓冲盐溶液(TBS Wash) 1 桶；打开 SPIFE4000仪器前面板，确保机内去离子水瓶(DI Water Surfactant)中有足量的去离子水。
免疫固定电泳操作规程
免疫固定电泳操作规程项目名称免疫固定电泳（HYDRAGEL IMMUNOFIXATION）检验方法名称琼脂糖凝胶免疫固定电泳方法学原理血清蛋白电泳中出现的异常条带主要存在于β-球蛋白和γ-球蛋白区域，通常疑为单克隆蛋白质并且提示丙球蛋白血症。
为鉴别异常条带，可运用免疫固定技术。
免疫固定电泳是一种简单的技术，电泳后的蛋白质与相应抗体形成复合物和被固定在相应的位置上，通过下列四个步骤：1．蛋白质在琼脂糖凝胶内进行电泳分离。
2．电泳后已分离的蛋白质被固定并产生免疫沉淀：应用固定剂和抗血清加于凝胶表面的泳道上，并让固定剂和抗血清在凝胶内渗透扩散。
3．使用吸水纸和清洗将未沉淀的蛋白质去除，已被沉淀的蛋白质贮留在凝胶内。
4．将蛋白质染色，并将这些免疫沉淀区带的位置与蛋白质经电泳后观察到的异常蛋白区带进行比较。
为了精确识别单克隆区带，样品同时在六条泳道上进行测试。
经电泳后，ELP作为参考泳道以显示电泳后的蛋白质。
其余五条泳道用于鉴定单克隆成分。
通过它（们）与抗血清，γ(IgG)、α(IgA)、μ(IgM)重链和κ、λ轻链（游离和非游离）反应与否进行鉴别。
该技术简单、快速、图象清晰，易于解释结果。
方法学溯源自1930年由Tiselius发现了移界电泳（moving boundary eectrophoresis），而后，这种技术的各种局限性已逐渐被区带电泳（zone elecrrophoresis）所克服，区带电泳的条件和支持介质的选择是电泳成败的关键。
通过免疫化学手段观察其电泳特性及抗原特性是鉴定某一蛋白成分最好的方法，免疫固定电泳技术是目前应用最广泛的方法之一。
仪器型号：SEBIA HYDRASYS (PN1210)分析和计算参数：处理量：约18个样本/小时所需样本量：10ul检验时间：约55分钟重复性：有良好的批内和批间重复性电泳参数：电压0－300V（可选至3000V）电流0－500mA功率0－100W试剂及配套品试剂HYDRAGEL 1 IF试剂盒HYDRAGEL 2 IF试剂盒HYDRAGEL 4 IF试剂盒HYDRAGEL 9 IF试剂盒商标：SEBIA包装规格：10测试/20测试/40测试/90测试货号：PN4301/ PN4302/ PN4304/PN4309脱色液（1）商标：SEBIA（2）包装规格：Pack for 10×100ml（3）货号：PN4540（4）成分：柠檬酸3．洗涤液商标：SEBIA包装规格：Pack for 10×80ml货号：PN4541成分：叠氮钠4．稀释剂商标：SEBIA包装规格：Pack for 1×5ml货号：PN4587配套品：IF试剂抗体（1）商标：SEBIA(2 ) 包装规格：Pack for 5×1ml（3）PN4315操作步骤㈠开机，启动电泳仪。
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免疫固定电泳操作规程
一、项目名称
免疫固定电泳（HYDRAGEL IMMUNOFIXATION）
二、检验方法名称
琼脂糖凝胶免疫固定电泳
三、方法学原理
血清蛋白电泳中出现的异常条带主要存在于β-球蛋白和γ-球蛋白区域，通常疑为单克隆蛋白质并且提示丙球蛋白血症。
为鉴别异常条带，可运用免疫固定技术。
免疫固定电泳是一种简单的技术，电泳后的蛋白质与相应抗体形成复合物和被固定在相应的位置上，通过下列四个步骤：
1、蛋白质在琼脂糖凝胶内进行电泳分离。
2、电泳后已分离的蛋白质被固定并产生免疫沉淀：应用固定剂和抗血清加于凝胶表面的泳道上，并让固定剂和抗血清在凝胶内渗透扩散。
3、使用吸水纸和清洗将未沉淀的蛋白质去除，已被沉淀的蛋白质贮留在凝胶内。
4、将蛋白质染色，并将这些免疫沉淀区带的位置与蛋白质经电泳后观察到的异常蛋白区带进行比较。
为了精确识别单克隆区带，样品同时在六条泳道上进行测试。
经电泳后，ELP
作为参考泳道以显示电泳后的蛋白质。
其余五条泳道用于鉴定单克隆成分。
通过它（们）与抗血清，γ(IgG)、α(IgA)、μ(IgM)重链和κ、λ轻链（游离和非游离）反应与否进行鉴别。
该技术简单、快速、图象清晰，易于解释结果。
四、方法学溯源
自1930年由Tiselius发现了移界电泳（moving boundary eectrophoresis），而后，这种技术的各种局限性已逐渐被区带电泳（zone elecrrophoresis）所克服，区带电泳的条件和支持介质的选择是电泳成败的关键。
通过免疫化学手段观察其电泳特性及抗原特性是鉴定某一蛋白成分最好的方法，免疫固定电泳技术是目前应用最广泛的方法之一。
五、仪器
（一）型号：SEBIA HYDRASYS (PN1210)
（二）分析和计算参数：
1、处理量：约18个样本/小时
2、所需样本量：10ul
3、检验时间：约55分钟
4、重复性：有良好的批内和批间重复性
5、电泳参数：电压0－300V（可选至3000V）
电流0－500mA
功率0－100W
六、试剂及配套品
（一）试剂
1、HYDRAGEL 1 IF试剂盒
HYDRAGEL 2 IF试剂盒
HYDRAGEL 4 IF试剂盒
HYDRAGEL 9 IF试剂盒
（1）商标：SEBIA
（2）包装规格：10测试/20测试/40测试/90测试（3）货号：PN4301/ PN4302/ PN4304/PN4309 2、脱色液
（1）商标：SEBIA
（2）包装规格：Pack for 10×100ml
（3）货号：PN4540
（4）成分：柠檬酸
3、洗涤液
（1）商标：SEBIA
（2）包装规格：Pack for 10×80ml
（3）货号：PN4541
（4）成分：叠氮钠
4、稀释剂
（1）商标：SEBIA
（2）包装规格：Pack for 1×5ml
（3）货号：PN4587
（二）配套品
IF试剂抗体
（1）商标：SEBIA
（2）包装规格：Pack for 5×1ml
（4）货号：PN4315
七、操作步骤
（一）开机，启动电泳仪。
（二）将1只（用于1，2IF），2只（用于4IF）或3只(用于9IF)点样梳置于整表面，有数字的一端向上，在2分钟内完成每块加样梳的加样，每孔加10ul 样品，然后齿梳向上把加样梳放于湿盒内5分钟。
电泳/免疫固定泳道
孔号ELP GAM K L Kf Lf
Hydrasys 1 IF 1 2 3 4 5 6
Hydrasys 2/4 IF
1或3号样本2 3 4 5 6 7
2或4号样本9 10 11 12 13 14
Hydrasys 9 IF
1,4或7号样本1 2 3 4 5 6
2,5或8号样本7 8 9 10 11 12
3,6或9号样本13 14 15 16 17 18
（三）选择相应的“IF”电泳程序
（四）从包装袋内取出缓冲条，将其固定在电极支架背侧的钉上，再取出凝胶，用薄滤纸快速轻轻地吸去凝胶表面多余的液体，在温控板表面下1/3处加200ul 蒸馏水或去离子水，将凝胶片底边紧靠框架底边，边缘对齐边线，略弯曲凝胶片慢慢放平，注意凝胶片下面勿出现气泡。
（五）自然放下支架，从湿盒中取出加样梳并去除齿梳下的保护支架，1、2IF 的点样梳置于支架6号位，4IF的2只点样梳则分别置于3号和9号，9IF的3只点样梳则分别置于2，6号和10号，注意点样梳上的数字必须面对操作者，关上电泳舱盖，按下键盘左侧的绿色箭头“START”键，电泳开始，确保仪器右侧的空气通道不被堵塞。
（六）电泳仪自动发出蜂鸣声，提示电泳结束，进行免疫固定操作。
打开电泳盖，将加样梳和缓冲条丢弃，移走两支架，用湿纸巾擦拭电极丝，将抗体加样条装入抗体加样架上，按如下要求将动物血清抗体加入抗体加样条：
1、Hydrasys 1 IF用6孔抗体加样条：每孔加8μl抗体
2、Hydrasys 2/4IF用15孔抗体加样条：2人份每孔加8μl抗体，4人份每孔加12μl抗体
3、Hydrasys 9 IF用18孔抗体加样条：每孔加8μl抗体
4、固定好抗体加样架，将抗体加到凝胶片上。
然后关上电泳舱盖，按“Start”键开始免疫固定。
（七）10分钟后，电泳仪自动发出蜂鸣声，提示“PAPER BLOTTING” ，移走抗体加样架，弃去抗体加样条，放一厚滤纸光面向下盖于于凝胶表面，左手固定好滤纸，右手手指用力的摩擦滤纸表面，注意勿将滤纸移动，关闭电泳舱盖，按“Start”键开始凝胶表面多余抗体的吸收。
（八）3分钟后，电泳仪自动发出蜂鸣声，打开电泳舱盖，移去滤纸，关闭舱盖，按“Start”键开始凝胶片的干燥。
（九）6分钟后，电泳仪自动发出蜂鸣声，打开电泳舱盖，取出凝胶片，用湿纸巾擦拭温控板，将胶片固定于凝胶支架上放入染色空间中，在检查洗液瓶中是否有400ml洗液，染色液瓶内是否有300ml染色液，脱色液瓶内是否有1000ml
脱色液以及是否排空了废液瓶后，菜单上选择染色指令，按“Start”键开始染色。
（十）在染色、脱色以及干燥步骤完成后，电泳仪自动发出蜂鸣声，取出凝胶支架，将烘干的胶片取下。
八、临床意义
对多发性骨髓瘤、Waldenstrom巨球蛋白血症、分泌型骨髓瘤、轻链病、重链病等研究有重大意义。
九、标本要求
（一）取新鲜血清进行分析，根据临床实验室对各种试验所使用的操作程序进行血清样本的采集，样本置于冰箱内（2～8℃）可保存一周，若冰冻可延长保存时间至少一个月。
冰冻的血清样本加入0.02g/dl的叠氮钠可以增加其存放稳定性。
（二）为避免抗原过剩引起的带现象，血清于加样前应先作如下稀释，并混匀。
泳道血清(ul) 稀释剂(ul)
蛋白电泳(ELP)和其他免疫球蛋白固定泳道30 60
IgG免疫固定泳道20 100
（三）特殊情况
1、当总免疫球蛋白的水平＞20g/L，稀释剂量加倍（除了ELP泳道）
2、当总免疫球蛋白水平＜5g/L，稀释剂量减半（除了ELP泳道）
3、冷藏或冰冻后，某些样本（尤其是含有冷球蛋白或冷凝胶）可能变得粘稠或混浊。
这种样本可能由于扩散障碍而存在点样问题。
在这样情况下，加25ul液化剂于75ml血清中，混匀15秒。
然后按规定程序继续进行。
4、某些单克隆蛋白质可能因多聚体而导致所有的免疫固定泳道上均出现单克隆片段。
在这样情况下（i）准备1％β－巯基乙醇（这种还原剂可在室温于未封闭微管内保存1周）（ii）加25ul还原剂于75ul血清中（iii）混匀并令其反应至少15分钟（至多3小时）后按规定程序继续进行。
（四）避免使用血浆标本。
十一、操作注意事项
（一）为达到最佳检测效果，同一试剂盒内的所有组分必须一并使用。
（二）用薄滤纸吸去凝胶表面多余液体时，接触时间不能太长，应快速移去，以免凝胶脱水。