活性筛选

第二节 活性筛选

生物活性的筛选方法各式各样，筛选效率直接与实验的设计有关，靶标越明确，越有可能获得特定活性的产物。因此，如果对病理和药理的方面有越深入越具体的了解，就越有利于筛选。

一、常用的筛选方法
1抗菌活性筛选择
最简单的方法称为生长抑制法，多数抗生素都是这样筛选的。样
品置无菌滤纸上，滤纸放在接种有卡标的固体培养基表面，培养后观察和测量生长抑制圈的大小。
2对动物的影响活性
（1）对动物幼体的定殖或变态的抑制 环节动物、鲍鱼以及咸水虾的幼体可用于检测样品对动物的毒性或其它影响。通常把多个幼体置于样品液中，然后观察对致死性或对变态过程、定殖效果、虫室形成等方面的影响。
（2）对无脊椎动物运动的影响 在加有样品的溶液中，放有水媳或其它的动物一直保持收缩状态，认为该溶液内有有毒的代谢物。
（3）金鱼互性试验 样品对小金鱼的影响，可表现为致死或失去平衡等。
（4）通过器官和生理系统检测 可检测对心脏、血压、肌肉等的作用活性。
3细胞水平的筛选
样品可通过对各种细胞株的影响而得到评价。对某些肿瘤细胞株的抑制活性是最常用的评价内容。
4酶抑制剂筛选法
应用酶抑制剂筛选法可获得具有抗肿瘤、抗血栓、抗糖尿病、抗病毒、抗炎以及降血脂、降血压等活性的代谢物。
抗肿瘤活性筛选的靶标酶有DNA拓朴异构酶、芳香酶、法尼基转移酶、蛋白激酶等。抗血栓形成活性筛选的靶标酶有凝血酶、血小板活化因子酰基转移酶等。抗病毒活性筛选的靶标酶有蛋白酶、复制有关的酶等。抗糖尿病活性筛选的靶标酶有醛糖还原酶等。抗炎活性筛选的靶标酶有溶磷脂酶、磷酸酯酶A2、脂氨酶等。抗神经退化活性筛选的靶标酶有乙酰胆碱酯酶（需要同时筛选对丁酰胆碱酯酶不抑制止的活性）。降血脂活性筛选的靶标酶有鲨烯合成酶、脂酰辅酶A转移酶（A-CAT）、β-羟基-β甲基戊二酰辅酶A(HMG-CoA)等。降血压活性筛选靶标酶有肾上腺素合成酶、内皮质素转换酶等。
5免疫调节活性代谢物的筛选法
免疫调节分为免疫活性增强和免疫活性抑制，在医学上分为有其重要作用。可通过皮肤注射反应来观察样品对抗原免疫反应的增强或抑制作用，也可在体外应用淋巴细胞进行免疫试验。
6受体拮抗活性筛选
每一生化反应系统需要受到严密的机制进行调控，信号分子往往需要与受体分子结合而启动生理生化过程。如果样品能与受体亲合和结合，即会与正常信号分子产生竞争从而抑制该生化过程
用于抗肿瘤活性筛选的受体有非甾体类雌性激素受体或雄性受体等。用于抗

血栓活性筛选的受体有纤维蛋白原受体。用于降血压的活性筛选的受体有内皮素受体、血管紧张素Ⅱ受体。
7高通量筛选
高通量筛选（high throughput screening,HTS） 又称大规模集群式筛选，主要包括五个子系统：高容量的样品库，自动化的操作系统，高灵敏度的检测系统，高效率的数据处理系统以及高特异性的药物筛选系统。
现代应用的高通量筛选是一些有特定靶点的微量生物筛选方法，自动化/机器人技术和完整数据处理技术的有机结合，其筛选能力是每年对100万化合物以上的样品或化合物进行生物活性的筛选。