第十章：微生物生化试验

糖（醇、苷）类发酵试验方法
方法
将纯种细菌以无菌操作接种到含有指示 剂的培养基中，置35℃温箱培养数小时至 两周，观察结果。
↗
伤寒沙门菌
↖
甲型副伤寒
糖（醇、苷）类发酵试验结果
注意：表示的方法
应用：
主要用于肠杆菌科的鉴定。
葡萄糖氧化/发酵试验
细菌分解葡萄糖对O2需求不同， 氧化型：细菌只在有氧环境中分解葡萄糖; 发酵型：细菌可在有氧、无氧环境中分解G; 产碱型： 细菌在有氧、无氧环境中都不 分解葡萄糖;
硝酸盐还原试验结果
+ 无色+锌粉→无色： 阳性 无色+锌粉→红色： 阴性
-
氧化酶试验
原理：
某些细菌具有细胞色素氧化酶， 能将二甲基对苯二胺或四甲基对 苯 二胺试剂氧化成紫红色醌类化合 物
氧化酶试验方法
方法：



滤纸法：用洁净滤纸蘸取菌落，加一 滴试剂，观察结果 菌落法：直接在菌落上加试剂，观察 结果 纸片法：使用试剂浸泡制成的试剂纸 片，取足够的菌落，观察结果。
硝酸盐还原试验方法
方法：
取一环待检菌接种到硝酸盐琼脂斜
面 上，35℃培养18~24小时，然后依次加入 含 α -萘氨和对氨基苯磺酸的试剂各1mL， 30s后 观察结果。
应用：
有助于鉴别肠杆菌科、嗜血杆菌属、奈 瑟菌属、布兰汉菌属、假单胞菌属等
硝酸盐还原试验结果
红色为阳性 无色为阴性
-
+
尿素分解试验结果
对 照
阳 性
阴 性
枸橼酸盐利用试验
原理：
能利用枸橼酸盐的细菌，也能利用 铵盐 作为唯一的碳源，分解后生成碳酸钠和 氨， 使培养基变为碱性，使指示剂溴麝香草 酚蓝 由浅绿色变为深蓝色。
枸橼酸盐利用试验方法
方法：
将待检菌接种于含有枸橼酸盐和 铵盐 的西蒙和柯氏培养基培养18～24h后， 观 察结果。





糖（醇、苷）类发酵试验 葡萄糖氧化／发酵试验（O/F试验） β-半乳糖苷酶试验（ONPG试验） 七叶苷水解试验 甲基红试验 V-P试验
蛋白质类代谢试验
靛基质试验 硫化氢试验 苯丙氨酸脱氨酶试验 尿素酶试验

阳 性
对 照
阳 性
阴 性
有机盐类试验

枸橼酸盐利用试验 硝酸盐还原试验
甲基红试验结果
空白对照
阴性
阳性
V-P试验
原理
：
某些细菌分解糖类→丙酮 酸→ 继续脱羧→乙酰甲基甲醇（碱性） → 空气氧化→双乙酰+α-萘酚、肌 酸→ 红色化合物。
V-P试验方法
方法：
将待检菌种接种于葡萄糖蛋白胨水 培养基中，35℃培养48h后按每毫升培养 基加入0.1ml含2％肌酸或肌酐的40％ KOH溶液,数分钟或数小时后观察结果。
应用：
肠杆菌科的属间鉴定。
硫化氢试验结果
苯丙氨酸脱氨酶试验
原理：
有苯丙氨酸脱氨酶的细菌，可以使 苯丙 氨酸脱氨形成苯丙酮酸，苯丙铜酸与三 氯化 铁作用形成绿色化合物。
苯丙氨酸脱氨酶试验方法
方法：


琼脂斜面法：将待检细菌接种到苯丙 氨酸琼脂斜面上， 35℃培养24～48h， 取出，将三氯化铁试剂4～5滴滴于斜 面上，观察结果。 快速纸片法：将待检菌涂于苯丙氨酸 纸片上，孵育15min，取出，滴加三氯 化铁试剂，立即观察结果。
原理：
葡萄糖氧化/发酵试验方法
方法：
取2支HL葡萄糖培养管煮沸，待冷后接 种菌种。一管管口敞开，一管用液体石蜡封 管，培养18~24h观察结果。
大肠杆菌
铜绿假单胞菌
粪产碱杆菌
葡萄糖氧化/发酵试验结果
两管均分解葡萄糖 发酵型
大肠杆菌
葡萄糖氧化/发酵试验结果
氧化型开管分解葡 萄糖，液 体石蜡封闭管不分 解葡萄糖。
微生物生化检验
检验系 刘涛
细菌的鉴定
细菌
↓
→
学习目标
掌握细菌鉴定常用的生化试验原理，细
菌鉴定常用的生化试验方法，能正确判 断常用生化试验结果。 掌握组合试验KIA，MIU，IMViC的试 验原理、试验方法、试验结果。 熟悉其他生化试验的原理、方法、实验 结果。
碳水化合物代谢试验
应用：
主要用于肠杆菌科中产气肠杆菌 与大肠埃希菌的鉴别，常与MR试验 联用。
吲哚（靛基质）试验结果
硫化氢试验
原理：
有些细菌能分解含硫氨基酸，产生
H2S与培养基中的铅盐或铁盐发生反应，
生成黑色的硫化铅或硫化亚铁沉淀。
硫化氢试验方法
方法：
将细菌穿刺接种到醋酸铅培养基中， 35℃、24～48h，观察结果。
应用：
用于鉴定B群链球菌。
CAMቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ试验结果
说出糖发酵试验的原理及应用。
说出VP试验原理及应用。
说出硝酸盐试验原理及应用。
说出触酶试验原理及应用。
说出氧化酶试验原理及应用。 归纳细菌生化试验的类型。
谢谢
七叶苷水解试验
甲基红试验
原理：
细菌分解培养基中的葡萄糖→ 丙酮 酸→大量混合酸→培养基pH↓4.4 以下→ 甲基红试剂→培养基变红。
甲基红试验方法
方法：
将待检菌种接种于葡萄糖蛋白胨 水中,35℃培养6～18小时后,往培养 基中加入甲基红指示剂少许,观察结 果。
应用
：
主要用于大肠和产气肠杆菌鉴
β -半乳糖苷酶试验（ONPG）
原理：
有β -半乳糖苷酶的细菌，可以分解 邻硝基酚β -半乳糖苷(ONPG),而释放 黄色的邻硝基酚。
β-半乳糖苷酶试验方法

方法： 取新鲜细菌一环，加人到0.25ml的 无菌生理盐水中，加甲苯一滴充分振动， 37℃、5min，再加入无色ONPG溶液 0.25ml，置37℃水浴，悬液变黄则为阳 性。
应用：
苯丙氨酸脱氨酶试验结果
+ -
绿色阳性 黄色阴性
尿素分解试验
原理：
产生尿素酶的细菌,能分解尿素产 生氨 和CO2,氨在溶液中形成碳酸铵，使培 养基 变碱，酚红指示剂变红。
尿素分解试验
方法：
将待检菌接种于尿素培养基 中， 35℃培养18～24h取出观察。
应用：
肠杆菌科属间鉴别。
应用：
触酶试验结果
血浆凝固酶试验
原理：
有些细菌能产生血浆凝固酶，
可 以使人和动物血浆中的纤维蛋白 原转 化成纤维蛋白，从而使血浆凝固。
血浆凝固酶试验方法
方法： 玻片法：取洁净玻片一张，加生理盐水两 小滴于玻片两端，用接种环挑取待检菌落 和对照菌均匀涂于盐水中，制成浓菌液， 加兔或人血浆一滴于菌液中，观察结果。 试管法：于3支试管中分别加入1:4稀释的 血浆0.5ml，1支管加入待检菌肉汤培养 物0.5ml,另两支分别加阴阳性对照菌肉 汤培养物0.5ml，35℃培养3～4h后观察 结果。 应用：
应用：
主要用于鉴别大肠和产气肠杆菌。
V-P试验结果
空白对照
阴性
阳性
吲哚（靛基质）试验
原理：
含有色氨酸酶的细菌，能分解 色氨 酸产生吲哚，吲哚能与对二甲氨基 苯甲 醛作用，形成红色玫瑰吲哚。
吲哚（靛基质）试验方法
方法：
将待检菌接种于胰蛋白胨水中， 35℃培养24～48h，取出后沿试管壁 缓慢加入靛基质试剂数滴，在两液面 观察结果。
应用：
氧化酶试验结果
纸片法：阳性、阴性结果
滤纸法：阳性结果
触酶试验
原理：
有触酶的细菌能催化过氧化氢 生成水和初生态氧，继而形成氧 分 子出现气泡。
触酶试验方法
方法：


用接种环取备检菌少许，置于洁净的 玻片上，滴加3%的过氧化氢1～2滴， 观察结果。 试管法：用洁净的玻棒蘸取待检菌少 许，置于装有3%过氧化氢的试管内， 观察结果。 用于革兰阳性球菌初步分属。

酶类试验

细胞色素氧化酶试验
过氧化氢酶试验 凝固酶试验


其他生化试验

胆汁溶菌试验 CAMP试验 氢氧化钾拉丝试验


糖（醇、苷）类发酵试验
原理：
多糖－→单糖－→丙酮酸－→酸性产物(或 产酸产气)－→pH↓ －→指示剂呈酸性变色(若产 气者有气泡出现)。
培养基 指示剂
酚红（PH：6.8~8.4） 色泽变化（酸~碱：黄~红）
应用：
胆汁溶菌试验结果
CAMP试验
原理：
B群链球菌能产生一种胞外因子— — CAMP,它能增强金黄色葡萄球菌β -溶 血毒 素的活性，因此，在两菌交界处出现箭 头样 的溶血增强区。
CAMP试验方法
方法：
取血平板一块，用产生β -溶血毒素 的金葡菌在中央划一道线，将待检菌据此 线0.5cm处垂直划线。35℃18~24小时培养， 观察结果。
铜绿假单胞菌
葡萄糖氧化/发酵试验结果
产碱型 开管、封管均不 分解葡萄糖
粪产杆菌
葡萄糖氧化发酵试验（O/F）
O/F培养基 （半固体高层）
O/F：O
O/F：F
指示剂：溴麝香草酚蓝 培养基pH：7.0
葡萄糖氧化发酵试验（O/F）
O/F：O O/F：F O/F：－
应用：
主要用于革兰阴性杆菌的鉴别。
应用：
主要用于肠杆菌科属间的鉴别。
枸橼酸盐利用试验结果
+ 蓝色为阳性 绿色为阴性
-
硝酸盐还原试验
原理：
使硝酸盐还原的细菌能从硝酸盐中 获得 氧，使其成为亚硝酸盐或其它还原物。 培养 基中的亚硝酸基能与α -萘氨和苯磺酸 形成红 色的N-α -萘氨偶氮苯磺酸。若出现红 色现象 则说明该菌还原硝酸盐。

血浆凝固酶试验结果
血浆凝固酶试验结果
胆汁溶菌试验
原理：
胆盐、取氧胆酸钠和硫磺胆酸 钠能 选择性地溶解肺炎链球菌，其它链 球菌 则能耐受这些试剂。
胆汁溶菌试验方法
方法：


平板法：取胆酸钠溶液一环，放在 平板的菌落上，35℃30min观察结 果。 试管法：于0.9ml培养了18～24小 时的菌液中，加入取氧胆酸钠试剂 0.1ml或牛胆盐0.2ml混匀，37℃水 浴10～30min，观察结果。 主要用于肺炎链球菌与甲型链球 菌。

应用： 常用于迟缓发酵乳糖的细菌的快速 鉴定。
β-半乳糖苷酶试验结果
阴性
阳性
七叶苷水解试验
原理：
七叶苷可以被细菌分解为葡萄糖和七叶 素，七叶素与培养基中的Fe2+反应，形成黑 色化合物，使培养基变黑。
七叶苷水解试验方法
方法：
将待检菌接种于七叶苷培养基 上，培养后观察结果。
应用：
主要用于D群链球菌与其他链球 菌的鉴别。