蛋白质两性性质及等电点的测定

注意事项
在测定等电点的实验中，要求各种试剂的浓
度和加入量相当准确。
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阳离子两性离子阴离子
pH<pIpH=pIpHpI 电场中：移向阴极不移动移向阳极调节溶液 的 pH 使蛋白质分子的酸性解离与碱性解离相等， 即所带正负电荷相等，净电荷为零，此时溶液的 pH 值称为蛋白质的等电点。在等电点时，蛋白质 溶解度最小，溶液的混浊度最大，配制不同 pH 的缓冲液，观察蛋白质在这些缓冲液中的溶解情
那是给天生一对的人的，自己，怎么会拥有像袁慕野那样的美好的人儿呢？木
1mol/LHCl10mL，加水至 50mL，配成 0.2mol/LHCl。
0.01%溴甲酚绿指示 剂：称取溴 甲酚绿
0.005g，加 0.29mL1mol/LNaOH，然后加水至 50mL。
二、测试样品
0.5%酪蛋白溶液：称取酪蛋白 0.25g 放入
50mL 容量瓶中，加入约 20mL 水，再准确加入 1mol/LNaOH5mL，当酪蛋白溶解后，准确加入
1mol/L 乙酸 5mL，最后加水稀释定容至 50mL，充
分摇匀。
三、器材
试管 1.5×15cm；移液管 1mL，2mL， 10mL；胶头滴管。 操作方法
一、蛋白质的两性反应
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滴加 0.2mol/LNaOH 进行中和，沉淀又出现。
继续滴加 0.2mol/LNaOH，沉淀又逐渐消失。观察 溶液颜色的变化。
二、酪蛋白等电点的测定
取同样规格的试管 7 支，按下表精确地加入 下列试剂：试剂管号 12345671.0mol/L 乙酸 1.60.8000000.1mol/L乙酸00410000.01mol/L乙 酸 00002.51.250.62H2O2.43.2031.52.753.38溶
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况即可确定蛋白质的等电点。
试剂和器材 一、试剂
1mol/L 乙酸：吸取 99.5%乙酸 2.875mL，加 水至 50mL。
0.1mol/L 乙酸：吸取 1mol/L 乙酸 5mL，加
水至 50mL。
0.01mol/L 乙酸：吸取 0.1mol/L 乙酸 5mL，
取一支试管，加 0.5%酪蛋白 1mL，再加溴甲
酚绿指示剂 4 滴，摇匀。此时溶液呈蓝色，无沉 淀生成。
用胶头滴管慢慢加入 0.2mol/LHCl，边加边
摇知道有大量的沉淀生成。此时溶液的 pH 值接 近酪蛋白的等电点。观察溶液颜色的变化。 继续滴加 0.2mol/LHCl，沉淀会逐渐减少以
至消失。观察此时溶液颜色的变化。
1cg0f5c7aa 易博
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液的 pH3.53.84.14.75.35.65.9 混浊度
充分摇匀，然后向以上各试管依次加入 0.5% 酪蛋白 1mL，边加边摇，摇匀后静置 5min，观察
各管的混浊度。
用-、+、++、+++等符号表示各管的混浊度。 根据混浊度判断酪蛋白的等电点。最混浊的一管 的 pH 值即为酪蛋白的等电点。
aOH2.000g，加水至
50mL ， 配 成 1mol/LNaOH 。 然 后 量 取 1mol/LNaOH10mL ， 加 水 至 50mL, 配 成 0.2mol/LNaOH。
0.2mol/LHCl：吸取 37.2%HCl4.17mL，加水 至 50mL ， 配 成 1mol/LHCl 。 然 后 吸 取
关键词：蛋白质蛋白质两性性质等电点两性
电解质带电基团酚基巯基胍基咪唑基两性反应 实验原理蛋白质是两性电解质。蛋白质分子中可
以解离的基团除 N 端α―氨基与 C 端
α―羧基外，还有肽链上某些氨基酸残基 的侧链基团，如酚基、巯基、胍基、咪唑基等基 团，它们都能解离为带电基团。因此，在蛋白质 溶液中存在着下列平衡：