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实验三血清总胆固醇的测定

目的要求

了解并掌握胆固醇测定的原理和方法。

实验原理

血清胆固醇(chol)测定是动脉粥样硬化性疾病防治、临床诊断和营养研究的重要指标。正常人血清胆固醇含量范围为100 ~ 250mg/mL。

胆固醇是环戊烷多氢菲的衍生物，它不仅参与血浆蛋白的组成，而且也是细胞的必要结构成分，还可以转化成胆汁酸盐、肾上腺皮质激素和维生素D等。胆固醇在体内以游离胆固醇及胆固醇酯两种形式存在，统称总胆固醇。总胆固醇的测定有化学比色法和酶学方法两类。本实验采用前一种方法。

胆固醇及其酯在硫酸作用下与邻苯二甲醛产生紫红色物质，此物质在550nm波长处有最大吸收。因此，可用比色法作总胆固醇的定量测定。胆固醇含量在400mg/100mL以内时，与光吸收值呈良好线性关系。

本法不必离心，颜色产物也比较稳定。

试剂和器材

一、试剂

邻苯二甲醛试剂：称取邻苯二甲醛50mg，以无水乙醇溶至50mL冷藏，有效期为一个半月。

混合酸：冰乙酸100mL与浓硫酸100mL混合。

标准胆固醇贮存液（1mg/mL）：准确称取胆固醇100mg，溶于冰乙酸中，定溶至100mL。

标准胆固醇工作液（0.1mg/mL）：将上述贮存液以冰乙酸稀释10倍，即取10mL用冰乙酸稀释至100mL。

二、测试样品

0.1mL人血清以冰乙酸稀释至4.00mL。

三、器材

试管1.5×15cm（×11）；移液枪，量筒50mL分光光度计。

操作方法

一、制作标准曲线

取9支试管编号后，按下表顺序加入试剂：

加毕，温和混匀，20～37℃下静置10分钟，在550nm波长处测定光吸收值。以总胆固醇量（mg%）为横坐标，光吸收值为纵坐标做出标准曲线。

二、样品测定

取3支试管编号后，分别加入试剂，与标准曲线同时作比色测定：

加毕，温和混匀，20～37℃下静置10分钟，在550nm下测定光吸收值。然后，从标准曲线上可查出样品中总胆固醇的含量。

注意事项

1.本法在20～37℃条件下显色。

2.混合酸粘度比较大，颜色容易分层，比色前一定要混匀。

思考题

1. 本实验操作中特别需要注意些什么？为什么？

2. 酯类难溶于水，将它们均匀分散在水中则形成乳浊液，为什么正常人血浆和血清中含有酯类虽多，但却清澈透明？