实验六蛋黄总胆固醇的测定(邻苯二甲醛法)(精)
邻苯二甲醛(OPA)法快速测定蛋黄粉中的胆固醇含量
（ｃ ｏ ｏ Ｂ ｏａｄ ｏ ｄＴ ｃｎ ｌ ｙ Ｄａ ａ ｏ ｔ ｈ ｉ Ｕ ｉｅ ｉ ， ｌｎ１ ６３ ， 曲 ） Ｓ ｈ ｌ ｆ ｉ ｎ Ｆ ｏ ｅｈ ｏｏ ， ｌｎＰ ｌ ｅｎ ｃ ｎｖｍ ￣ Ｄａ ａ １０ ４ Ｃ 面ａ ｎ ｇ ｉ ｙｃ ｉ
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邻 苯 二 甲醛 （ Ｐ 法快 速 测 定 蛋黄 粉 中的胆 固醇 含量 Ｏ Ａ）
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实验六 血清总胆固醇的测定（邻苯二甲醛法）
实验六血清总胆固醇的测定（邻苯二甲醛法）实验六血清总胆固醇的测定（邻苯二甲醛法）一、实验目的掌握邻苯二甲醛法测定血清总胆固醇的原理和方法二、实验原理胆固醇是环戊烷多氢菲的衍生物，它不仅参与血浆蛋白的组成，而且也是细胞的必要结构成分，还可以转化成胆汁酸盐、肾上腺皮质激素和维生素D等。
胆固醇在体内以游离胆固醇及胆固醇酯两种形式存在，统称总胆固醇。
总胆固醇的测定有化学比色法和酶学方法两类。
本实验采用前一种方法。
胆固醇及其酯在硫酸作用下与邻苯二甲醛产生紫红色物质，此物质在550nm 波长处有最大吸收，可用比色法作总胆固醇的定量测定。
胆固醇含量在400mg/100ml内，与OD值呈良好线性关系。
本法不必离心，颜色产物也比较稳定，胆红素及一般溶血对结果影响不大，严重溶血者才使结果偏高。
本法在20～37℃条件下显色，显色后5分钟开始至半小时以上颜色基本稳定。
温度过低，显色剂强度减弱；加混合酸后振摇过激能使产热过高，也可使显色减弱。
三、实验仪器（器材）722可见分光光度计、试管、移液枪等。
四、实验试剂和材料试剂：①邻苯二甲醛试剂：称取邻苯二甲醛50mg，以无水乙醇溶至50ml冷藏，有效期为一个半月。
②醋酸（90％）：取冰醋酸90ml加入10ml蒸馏水中。
③混合酸：90％醋酸100ml与浓硫酸100ml混合。
④标准胆固醇贮液（1mg/ml）：准确称取胆固醇100mg，以冰乙酸溶至100ml。
⑤标准胆固醇应用液（0.1mg/ml）：将上述贮存液以冰乙酸稀释10倍: 即取10ml 用冰乙酸稀释至100ml。
材料：动物血清五、实验步骤1、制作标准曲线取5支试管编号后，按下表顺序加入试剂，加毕，温和混匀，20～37℃下静置10分钟，于550nm下比色测定，以总胆固醇量（mg%）为横坐标，OD值为纵坐标做出标准曲线。
2、样品测定取4支试管编号后，分别加入试剂，加毕，温和混匀，20～37℃下静置10分钟，于550nm下比色测定。
总胆固醇实验报告
实验名称：血清总胆固醇测定实验目的：通过本实验，掌握血清总胆固醇的测定方法，了解血清总胆固醇在临床诊断和预防治疗中的重要性。
实验原理：血清总胆固醇（Total Cholesterol，TC）是血液中所有胆固醇的总和，包括游离胆固醇和胆固醇酯。
血清总胆固醇的测定方法主要有酶法、比色法、沉淀法等。
本实验采用酶法测定血清总胆固醇，其原理是利用胆固醇酯酶（Cholesterol Esterase）将胆固醇酯水解为游离胆固醇，然后利用胆固醇氧化酶（Cholesterol Oxidase）将游离胆固醇氧化为胆汁酸，最后在碱性条件下与磷钼酸反应生成磷钼蓝，通过比色法测定其吸光度，从而计算出血清总胆固醇的浓度。
实验材料：1. 血清样品：取自健康志愿者，经离心分离后获得。
2. 胆固醇酯酶、胆固醇氧化酶、磷酸盐缓冲液、磷钼酸、抗坏血酸、硫酸铜、邻苯二甲酸氢钾、氯仿、无水乙醇等试剂。
3. 仪器：酶标仪、移液器、恒温水浴锅、离心机等。
实验步骤：1. 样品处理：取血清样品1.0ml，加入氯仿和无水乙醇（1:2，V/V）混合液5.0ml，涡旋混合，离心10分钟，取上清液待测。
2. 标准曲线绘制：将胆固醇标准品配制成一系列浓度梯度的标准溶液，分别加入胆固醇酯酶、胆固醇氧化酶、磷酸盐缓冲液、磷钼酸等试剂，按照实验步骤进行操作，测定吸光度。
以胆固醇浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。
3. 样品测定：取处理后的血清样品，按照标准曲线绘制步骤进行操作，测定吸光度。
根据标准曲线，计算样品中血清总胆固醇的浓度。
实验结果：1. 标准曲线绘制：以胆固醇浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。
结果显示，胆固醇浓度在0.5-10.0mg/dl范围内，吸光度与胆固醇浓度呈线性关系。
2. 样品测定：根据标准曲线，计算样品中血清总胆固醇的浓度为X mg/dl。
实验讨论：1. 血清总胆固醇是人体内重要的脂质成分，其浓度异常与心血管疾病、动脉粥样硬化等疾病密切相关。
鸡蛋胆固醇含量测定方法比较研究
鸡蛋胆固醇含量测定方法比较研究吴超;李润航;于中英;娄玉杰【摘要】试验随机选取了中华绿蛋鸡产的绿壳蛋和依莎褐蛋鸡产的褐壳鸡蛋各20枚,采用邻苯二甲醛分光光度计比色法和气相色谱法,测定鸡蛋中胆固醇的含量,比较两种方法在测定鸡蛋胆固醇含量上的差异.结果表明,用邻苯二甲醛比色法测得褐壳蛋蛋黄胆固醇含量176.79 mg/枚,浓度为13.35mg/g.用气相色谱法测得胆固醇含量142.74 mg/枚,浓度为9.69mg/g,二种方法测定的结果差异显著(P＜0.05).用邻苯二甲醛比色法测得绿壳蛋蛋黄胆固醇含量158.12mg/枚,浓度为10.65 mg/g.用气相色谱法测得胆固醇含量128.70 mg/枚,浓度为8.54 mg/g,二种方法测定的结果差异显著(P＜0.05).【期刊名称】《家畜生态学报》【年(卷),期】2013(034)011【总页数】4页(P57-60)【关键词】胆固醇;比色法;气相色谱;鸡蛋【作者】吴超;李润航;于中英;娄玉杰【作者单位】吉林农业大学动物科学技术学院,吉林长春130118;吉林农业大学动物科学技术学院,吉林长春130118;吉林农业大学动物科学技术学院,吉林长春130118;吉林农业大学动物科学技术学院,吉林长春130118【正文语种】中文【中图分类】S811.6在人们健康意识不断增强的今天，胆固醇往往片面的被认为是对人体有害的物质，但实际上，胆固醇是动物细胞各种膜结构及神经髓鞘的重要组成部分，可调节肠胃消化道中膳食脂肪的吸收，是胆汁酸、类固醇激素及维生素D3的前体，具有重要的生理功能[7]，但如果摄入量过多，可形成高血脂症，引起动脉粥样硬化，进而诱发冠心病、高血压等一系列心脑血管疾病[1-4]。
研究表明，来源于鸡蛋中的胆固醇与来源于其他原料的胆固醇相比更易导致人体血清胆固醇水平的提高[5-6]。
鸡蛋中的胆固醇总量在100～270 mg范围内变动[7]，为满足不同人群的需要，低胆固醇鸡蛋备受人们的关注，因而鸡蛋中胆固醇含量测定的方法及准确性是评定其营养价值的重要参数。
血清总胆固醇的测定实验报告
血清总胆固醇的测定实验报告胆固醇是人体内一种重要的脂质物质，它在维持细胞膜的完整性、合成激素和胆汁酸等方面发挥着重要作用。
然而，过高的血清总胆固醇水平会增加心脑血管疾病的风险。
因此，及时测定血清总胆固醇水平对于预防和治疗心脑血管疾病具有重要意义。
本实验旨在通过测定血清中总胆固醇的含量，掌握其测定方法，并了解不同因素对血清总胆固醇含量的影响，为临床诊断和研究提供参考。
1. 实验原理。
本实验采用酶法测定血清总胆固醇含量。
首先，将血清样本与试剂中的胆固醇酯酶和胆固醇氧化酶发生反应，将胆固醇酯水解成游离的胆固醇和脂肪酸，然后游离的胆固醇与试剂中的胆固醇氧化酶再次发生反应，生成过氧化物酶，最终生成带有颜色的化合物。
通过测定产生的有色产物的光密度，即可计算出血清中总胆固醇的含量。
2. 实验步骤。
（1）取适量血清样本，离心沉淀，取上清液备用。
（2）将标准品和上清液分别加入反应管中，加入试剂A和试剂B，混匀后放置37℃恒温水浴中反应一定时间。
（3）加入硫酸后，混匀放置10min，再加入试剂C混匀后放置2min。
（4）测定吸光度值，并根据标准曲线计算出血清总胆固醇的含量。
3. 实验结果。
通过实验测定，得出不同血清样本中总胆固醇的含量分别为X mg/dL、Ymg/dL和Z mg/dL。
根据实验结果，我们可以得出……（根据实验结果进行分析和讨论）。
4. 实验结论。
本实验通过酶法测定了血清中总胆固醇的含量，结果表明……（根据实验结果进行结论）。
5. 实验注意事项。
（1）在实验过程中，要注意血清样本的保存和处理，避免样本受到污染或变质。
（2）在试剂配制和使用过程中，要按照相关操作规程，严格控制试剂的质量和使用量。
（3）实验操作过程中，要注意实验室安全，避免发生意外。
6. 实验意义和应用。
本实验方法可以准确测定血清中总胆固醇的含量，为临床诊断和研究提供了重要的参考数据。
同时，也为进一步研究血清总胆固醇与心脑血管疾病的关系提供了实验基础。
蛋黄中胆固醇含量测定方法的研究
取 新 鲜 蛋 黄 稀 释 液 （ 度 为 ０１ ・ １ 浓 ．ｇ ｍＬ ） ．ｍＬ ０ 于 １ ０ ｍＬ离 心管 中 ，加 入 ９ ％乙 醇 １ ，用 漩 涡 ５ ．ｍＬ ０ 振 荡器 混匀 后 ，加 入 乙醚 ２５ｍ ． Ｌ，再 次 混匀 后加 入 石 油 醚 ２５ｍ ，震 荡 混 匀 ，３００ｒｍ离 心 ５ｍｉ， ． Ｌ ０ ｐ ｎ
１ 材料 与 方法 １１ 试验 材料 ．
样 品前 处 理 方 法 同 １ ．，根 据 试 剂 盒 说 明将 ．Ｉ ２
样 品与工作 液混合 ，３ ７℃保 温 ５ｒｎ ，在波 长 ｉ后 ｎ ５ ０ｎ ０ ｍ处 比色 测 定 吸 光 度值 ，并 根 据样 品 管 和 校
准 管 的吸光 度值 及校 准 品浓度 计算 胆 固醇含 量 ，计
１２３ 试 剂 盒 法 ．．
反应来分析的传统方法 ，色谱法是适用范 围较广 、 灵敏 度较 高 的分析 方 法 ，而高 效液相 色谱 不需 要 载 气 ，在使用上较气相色谱和液相色谱一 质谱联用的方 法简 便 １ 试验 对液 相色谱 法 、皂化 一 。本 比色法 和 试剂 盒法 测 定蛋 黄胆 固醇 的过 程 和结果 进行 研究 和 比较 ，为鸡 蛋胆 固醇含量测 定工作提供 方法指导 。
入 冰 乙酸 １ 溶 解 残余 物 ，再 加 入显 色 液 ３ｍＬ于 ｍＬ ６ ０℃ 水 浴 １ ｉ，在 ４０ｎ 用 ７２ 光 光 度 计 ５ｍｎ ９ ｍ下 ２分 进 行 比色分 析 ，同法 做空 白样 。将胆 固醇标准 品 用 甲醇 溶解 配 成 １ ・ Ｌ 液 ，取 不 同体 积 胆 固醇 ｍ－ ｍｇ 溶 标 准 品溶 液 与样 品做 同样处 理 ，以胆 固醇 浓度 为横 坐 标 ，吸光 度值 为纵 坐标制 作 工作 曲线 。根据 样 品 的吸光 度值 计算样 品 中胆 固醇 含量 。
血液总胆固醇含量的测定实验报告
血液总胆固醇含量的测定实验报告
简介
本实验旨在测定血液样本中的总胆固醇含量。
总胆固醇是一种与心脏疾病风险密切相关的指标，因此准确测量总胆固醇含量对于健康评估至关重要。
实验方法
1. 准备工作
- 收集实验所需材料，包括血液样本、试剂和实验装置。
- 保持实验环境清洁，并准备好相关的安全设施。
- 根据实验所需，对仪器进行校准和预热。
2. 样本处理
- 提取一份血液样本，确保样本无污染。
- 将样本转移到一个干净的试管中，避免氧气接触。
3. 试剂操作
- 按照试剂使用说明书的指导，将所需试剂加入血液样本中。
- 注意使用量和顺序，并确保充分混合。
4. 光度测量
- 使用光度计测量处理后的样本的光吸收值。
- 将光吸收值与标准曲线进行对比，确定总胆固醇含量。
实验结果
根据测量结果，我们得出了血液样本中的总胆固醇含量。
请见下表：
结论
实验测定的结果显示，这些血液样本中的总胆固醇含量在正常范围内。
然而，为了确切评估血液中的总胆固醇水平对身体健康的影响，需要进一步的研究和分析。
结束语
本次实验成功测定了血液样本中的总胆固醇含量，这是一个重要的健康指标。
我们鼓励进一步研究和实验，以便更好地理解总胆固醇与心脏健康之间的关系，并采取适当的预防措施。
以上是血液总胆固醇含量的测定实验报告。
血清总胆固醇的测定实验报告
血清总胆固醇的测定实验报告一、实验目的。
本实验旨在通过测定血清中的总胆固醇水平，了解被检测者的心血管健康状况，为预防和治疗心血管疾病提供参考依据。
二、实验原理。
血清总胆固醇是指血液中所有脂蛋白和游离胆固醇的总和，通常以毫摩尔/升（mmol/L）为单位进行测定。
在实验室中，我们采用酶法测定血清总胆固醇，即通过酶的催化作用将胆固醇氧化成酮醇，然后通过比色法测定产生的色素来确定总胆固醇的浓度。
三、实验步骤。
1. 采集被检测者的静脉血样本，放置于离心管中，离心10分钟后取上清液。
2. 将上清液放入试剂盒中，按照说明书的操作步骤进行样本处理和试剂添加。
3. 使用分光光度计测定样本吸光度，根据标准曲线计算出血清总胆固醇的浓度。
四、实验结果。
根据实验测定，被检测者的血清总胆固醇水平为X mmol/L。
五、实验分析。
根据血清总胆固醇的测定结果，结合被检测者的年龄、性别、生活方式等因素，可以初步判断其心血管健康状况。
若总胆固醇水平偏高，可能存在心血管疾病的风险，需要进一步进行相关检查和干预措施。
若总胆固醇水平正常，被检测者的心血管健康状况良好。
六、实验注意事项。
1. 在采集血样和进行实验操作时，要严格遵守无菌操作规范，确保实验结果的准确性和可靠性。
2. 实验过程中要注意化学试剂的使用安全，避免接触皮肤和吸入气体，必要时戴上防护手套和口罩。
3. 实验设备的使用和维护要符合相关规定，保证设备的正常运转和数据的准确性。
七、实验结论。
通过本次实验测定，我们成功得出了被检测者的血清总胆固醇水平，并对其心血管健康状况进行了初步分析。
实验结果对于预防和治疗心血管疾病具有一定的参考价值。
八、实验展望。
在今后的实验中，我们将进一步完善实验方法，提高测定精度和准确性，为更多人群的心血管健康提供更多的数据支持和科学依据。
以上就是本次血清总胆固醇的测定实验报告，希望对大家有所帮助。
蛋黄化学实验报告
实验名称：蛋黄中胆固醇的提取与测定实验目的：1. 学习从蛋黄中提取胆固醇。
2. 掌握薄层层析法分离混合物。
3. 了解胆固醇的定性分析方法。
实验原理：胆固醇是一种重要的生物活性物质，存在于动物组织中。
本实验采用有机溶剂提取蛋黄中的胆固醇，然后利用薄层层析法分离胆固醇与其他脂类成分，最后通过紫外灯下观察斑点的颜色和位置，对胆固醇进行定性分析。
实验仪器：1. 烧杯2. 玻璃棒3. 烘箱4. 薄层层析板5. 展开器6. 紫外灯7. 移液管8. 电子天平实验试剂：1. 蛋黄2. 氯仿3. 乙醇4. 硅胶5. 碘6. 碘化钾实验步骤：1. 称取一定量的蛋黄，加入适量的氯仿，用玻璃棒搅拌至蛋黄完全溶解。
2. 将溶液转移至烧杯中，用乙醇稀释，直至溶液澄清。
3. 将溶液过滤，收集滤液。
4. 取一张薄层层析板，用铅笔轻轻画出起始线。
5. 用移液管取少量滤液，滴加在起始线上，重复三次，每次间隔约1cm。
6. 将薄层层析板放入展开器中，用碘蒸气饱和展开器，使碘蒸气上升到层析板。
7. 展开一定时间后，取出薄层层析板，用紫外灯照射，观察胆固醇斑点的位置和颜色。
8. 记录胆固醇斑点的位置和颜色。
实验现象：在紫外灯下，胆固醇斑点呈现亮黄色，位于层析板的较下端。
实验数据记录与处理：1. 胆固醇斑点的位置：距离起始线约3cm。
2. 胆固醇斑点的颜色：亮黄色。
实验结果与讨论：根据实验结果，蛋黄中的胆固醇在薄层层析板上呈现亮黄色斑点，位于较下端。
这表明胆固醇在氯仿中溶解度较高，通过薄层层析法可以将其与其他脂类成分分离。
实验问题：1. 胆固醇在氯仿中的溶解度如何？2. 薄层层析法分离胆固醇的原理是什么？讨论与改进：1. 胆固醇在氯仿中的溶解度较高，因此可以使用氯仿作为提取剂。
2. 薄层层析法分离胆固醇的原理是利用不同成分在展开剂中的分配系数不同，从而实现分离。
为了提高实验结果的准确性，可以采取以下改进措施：1. 在提取过程中，确保蛋黄与氯仿充分混合，以提高胆固醇的提取率。
血清总胆固醇测定实验报告
血清总胆固醇测定实验报告一、实验目的血清总胆固醇（Total Cholesterol，TC）测定是临床生化检验中常见的项目之一。
本次实验的目的是掌握血清总胆固醇测定的基本原理、操作方法和结果分析，了解血清总胆固醇水平在健康评估和疾病诊断中的意义。
二、实验原理目前常用的血清总胆固醇测定方法为酶法。
胆固醇酯酶（CE）首先将胆固醇酯水解为游离胆固醇和脂肪酸，胆固醇氧化酶（COD）催化游离胆固醇氧化生成胆甾烯酮和过氧化氢，过氧化氢在过氧化物酶（POD）的作用下与 4-氨基安替比林（4-AAP）和酚反应生成红色醌亚胺化合物。
在 500nm 波长处测定吸光度，吸光度的高低与血清中总胆固醇的含量成正比，通过与标准品比较可计算出血清总胆固醇的浓度。
三、实验材料1、仪器分光光度计恒温水浴箱移液器离心机2、试剂胆固醇测定试剂盒（包括胆固醇酯酶、胆固醇氧化酶、过氧化物酶、4-氨基安替比林、酚等）标准胆固醇溶液（浓度已知）血清样本四、实验步骤1、试剂准备按照试剂盒说明书将试剂配制成工作液，置于 37℃恒温水浴箱中预温。
2、样本处理采集空腹静脉血，离心分离血清。
3、标准曲线绘制取 5 支试管，分别加入0μl、50μl、100μl、150μl、200μl 标准胆固醇溶液，用生理盐水补足至200μl。
各管中胆固醇的浓度分别为0mmol/L、25mmol/L、50mmol/L、75mmol/L、100mmol/L。
向各管中加入 20ml 工作液，充分混匀，37℃水浴 10 分钟。
以空白管调零，在 500nm 波长处测定各管吸光度。
以胆固醇浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。
4、样本测定取200μl 血清样本，加入 20ml 工作液，充分混匀，37℃水浴 10 分钟。
测定样本管的吸光度，根据标准曲线计算出血清总胆固醇的浓度。
五、实验结果1、标准曲线记录各标准管的胆固醇浓度和对应的吸光度值，绘制标准曲线。
标准曲线应呈线性关系，相关系数（r）应大于 098。
蛋黄总胆固醇的测定
• 一个成人平均一天摄取胆固醇量以50~300mg为 宜，大约一个鸡蛋。
二.实验原理
• 总胆固醇在体内以游离胆固醇及胆固醇酯两种形式 存在。我们测定的是它的含量，分为五类方法：1. 化学试剂比色法 2.酶分析法 3.荧光法 4.气相法 5.高 效液相法
• 本次试验采用化学试剂比色法中的胆固醇及其酯在 硫酸存在下与邻苯二甲醛作用产生紫红色产物。产 物在553nm处有最大吸收，可以用分光光度法测定 。胆固醇含量400mg/100ml之内与吸光度呈良好的 线性关系。鸡蛋黄总胆固醇含量约为292.5mg/50g 。
蛋黄总胆固醇的测定
第三军医大学学员旅二队 方案设计：梁恭博 汇报：张臣科 PPT制作：徐喆
• Ⅰ.Purpose
Determine CHO Of Egg Yolk
• Ⅱ.Principle
• Ⅲ.Instrument And Reagent • Ⅴ.Steps • Ⅵ.Data
一.实验目的
• 1.查阅相关资料，了解测定蛋黄总胆固醇的临床 意义和几类方法。 • 2.学习实验设计的基本方法和步骤，设计出用分 光光度法测定蛋黄总胆固醇的实验方案。 • 3.用分光光度法测量出蛋黄总胆固醇含量
1
0 0.5 0.5 4.0 0
2
0.1 0.4 0.5 4.0 20
3
0.2 0.3 0.5 4.0 40
鸡蛋中胆固醇的含量实验报告结果与分析
鸡蛋中胆固醇的含量实验报告结果与分析1鸡蛋中胆固醇的含量实验报告结果与分析1.1流动相的选择据文献报道据文献报道，测定胆固醇采用的流动相有乙腈/异丙醇(4/1，V/V)或(2/1，V/V)，也有人采用甲醇/水(95/5，V/V)。
本文以100%甲醇作流动相，避免了有机相与无机相混合对仪器稳定及样品测定结果的影响。
从理论上讲与使用乙腈相比，使用甲醇对操作者来说，挥发性与毒性小一些的，更利于健康与安全。
1.2波长的选择对新到的24对胆固醇标准溶液进行扫描后确定在205nm处有最大吸收峰，故选择205nm为测定波长。
有些文献报道考虑甲醇的截止波长为205nm，而选择208nm为测定波长时会造成了峰值的降低。
通过对大量样品的测定结果表明，选择205nm并没有很大影响。
1.3样品皂化液的选择试样如果含有较高的脂肪，则加入的氢氧化钾溶液的浓度要较高，加入无水乙醇的量也要适当增加。
这样能够保证样品被完全皂化，而目不会出现乳化的现象。
实验对氢氧化钾的用量进行了研究，当氢氧化钾的用量为10mL和15mL 能保证完全皂化，对结果无明显影响。
最后确定采用60%的氢氧化钾溶液的用量为10mL。
1.4样品萃取的选择使用前通常采用的萃取剂有乙醚、石油醚、正己烷等。
考虑到成本问题，采用乙醚、石油醚较为便宜。
但由于乙醚挥发性太大，且乙醚、石油醚萃取效果区别大，因此采用乙醚/石油醚(1/1，V/V)。
1.5标准回归方程用胆固醇标准储备液配成01mg/mL、0.2mg/mL、0.3mg/mL0.5mg/mL 系列使用液，分别取104L行色谱测定，以胆固醇浓度作为纵坐标y，峰面积x 为横坐标，绘制标准曲线，回归方程为y=0.00000026x-0.01693817，相关系数R2=0.9951,说明呈线性回归见(图3-5)，可以用于定量分析。
1.6 精密度实验精密度系指用该法测定同一匀质样品的一组测量值彼此符合的程度。
它们越接近就越精密。
蛋黄的测定 文档
蛋黄中胆固醇含量测定方法的研究胆固醇含量的分析方法有酶法、比色法、液相色谱法、气相色谱法、液相色谱-质谱联用法等试剂盒法是基于酶法测定胆固醇的原理进行的比色法一种依据显色反应来分析的传统方法色谱法是适用范围较广、灵敏度较高的分析方法而高效液相色谱不需要载气在使用上较气相色谱和液相色谱-质谱联用的方法简便[ 6-11 ]。
本试验对液相色谱法、皂化-比色法和试剂盒法测定蛋黄胆固醇的过程和结果进行研究和比较为鸡蛋胆固醇含量测定工作提供方法指导。
1材料与方法1.1试验材料蛋黄由市售新鲜鸡蛋中取出胆固醇标准品纯度≥99.7%由中国计量科学研究院提供总胆固醇试剂盒酶法由北京北化康泰临床试剂有限公司提供显色液为FeSO4-冰乙酸-浓硫酸 将Fe⁃SO4100 mg溶于1mL蒸馏水中 再加入100 mL冰乙酸混合溶解 然后与100 mL浓硫酸缓慢混匀冷却后使用。
1.2试验方法1.2.1 HPLC法取新鲜蛋黄稀释液浓度为0.1 g·mL-1 1.0 mL于10 mL离心管中加入95%乙醇1.0 mL用漩涡振荡器混匀后加入乙醚2.5 mL再次混匀后加入石油醚2.5 mL震荡混匀3 000 rpm离心5 min移出上层萃取液在低于45℃下用氮气吹干加无水乙醇溶解残余物2.0 mL用0.45μm有机微孔滤膜过滤后进样。
色谱条件为色谱柱ZORBAXEclipse XDB-C184.6 mm×150 mm5μm流动相乙腈-异丙醇(4:1)V/V流速0.8 mL·min-1柱温35℃检测波210 nm 进样量10μL。
取胆固醇标准品用色谱级无水乙醇溶解配成浓度为1 mg·mL-1的标准液取标准液稀释成不同浓度0~1 000μg·mL-1以胆固醇浓度为横坐标峰面积值为纵坐标制作标准曲线。
采用外标法定量分析样品中胆固醇含量。
1.2.2皂化比色法称取鲜蛋黄100 mg于25 mL试管中加入KOH-甲醇溶液5 mL200 g·L-1漩涡震荡混匀置于80℃水浴恒温振荡器中皂化10 min取出冷却至室温加入正己烷10 mL漩涡震荡混匀静置将上层液体移入10 mL离心管中3 000 rpm离心10 min 取出上清液60℃下用氮气吹干。
总胆固醇(TC)检测试剂盒(邻苯二甲醛比色法)
总胆固醇(TC)检测试剂盒(邻苯二甲醛比色法)简介：胆固醇(Cholesterol)又称胆甾醇，是一种环戊烷多氢菲的衍生物，分子式C 27H 46O，分子量为3860.65。
胆固醇广泛存在于动物体内，其中脑、神经组织最丰富，在肾、脾、皮肤、肝和胆汁中含量也较高。
Leagene 总胆固醇(TC)检测试剂盒(邻苯二甲醛比色法)检测原理是胆固醇及其脂，在强酸存在下与邻苯二甲醛反应，产生紫红色化合物。
本试剂盒用于人或动物的血清、血浆、脑脊液、细胞、组织等样本中的总胆固醇含量定量测定，其优点是：1、操作简便；2、灵敏；3、稳定；4、无需将胆固醇单独抽提出来或去除样品中的蛋白质。
本试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。
组成：操作步骤(仅供参考)：1、样本处理：①血清、血浆、脑脊液样本：从待测样本中分理出的血清或血浆不应有溶血，直接检测，如超过线性范围，用生理盐水稀释后检测。
②细胞样本：a、取适量的细胞(一般推荐>106以上)，1000g 离心，弃上清，留取沉淀。
b、用PBS 或生理盐水清洗1~2次，1000g 离心，弃上清，留取沉淀。
c、加入PBS 或生理盐水匀浆，冰浴条件下超声破碎细胞，功率300W，每次3~5s，间隔30s，重复3~5次。
亦可手动匀浆，制备好的匀浆液不可离心，待用。
亦可用1~2%Triton X-100冰浴，制备好的裂解液不可离心，待用。
③组织样本：准确称取适量组织样本，按质量(g)：生理盐水=1：4的比例，加入生理盐水，冰浴条件下手动或机械匀浆。
2500~3000g 离心，取上清待用。
2、配制胆固醇标准工作液：按胆固醇标准(1mg/ml)：TC assay buffer=1：9的比例准确混合，即为胆固醇标准工作液(0.1mg/ml)，然后按下表依次稀释胆固醇标准工作液。
加入试剂(ml)/管号1234编号名称TC122160T Storage试剂(A):胆固醇标准(1mg/ml)1ml 4℃避光试剂(B):TC assay buffer 100ml RT 试剂(C):邻苯二甲醛粉剂2×10mg 4℃避光试剂(D):邻苯二甲醛稀释液30mlRT 使用说明书1份胆固醇标准工作液(0.1mg/ml)00.060.120.180.24 TC assay buffer0.240.180.120.060总胆固醇浓度(mg/ml)012343、配制邻苯二甲醛工作液：取1瓶(10mg)邻苯二甲醛粉剂的准确加入邻苯二甲醛稀释液10ml，充分混匀，即为邻苯二甲醛工作液。
邻苯二甲醛(OPA)法快速测定蛋黄粉中的胆固醇含量
邻苯二甲醛(OPA)法快速测定蛋黄粉中的胆固醇含量
白利;王瑞雪;王际辉;钱方
【期刊名称】《中国酿造》
【年(卷),期】2010(000)005
【摘要】研究用邻苯二甲醛(OPA)法测定蛋黄粉中胆固醇含量.结果表明,OPA法变异系数为2.89%,精密度高,回收率较高,适于胆固醇含量的快速测定,具有操作简单、方法稳定等特点.同时,用甲醇氯仿法提取胆固醇,方法准确、简单易行.
【总页数】3页(P162-164)
【作者】白利;王瑞雪;王际辉;钱方
【作者单位】大连工业大学,生物与食品科学工程学院,辽宁,大连,116034;大连工业大学,生物与食品科学工程学院,辽宁,大连,116034;大连工业大学,生物与食品科学工程学院,辽宁,大连,116034;大连工业大学,生物与食品科学工程学院,辽宁,大
连,116034
【正文语种】中文
【中图分类】O656.3
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1.邻苯二甲醛法(OPA)与高效液相色谱法(HPLC)测定降胆固醇的双歧杆菌的对比[J], 张汝娇;何腊平;李翠芹;张玲;王猛;朱秋劲
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血清总胆固醇的测定实验报告
The experiment principleThe measurement of the S-Chol is an important indicator of the prevention and treatment，clinical diagnosis and nutrition investigation of the ASCD - atherosclerotic cardioascular disease.the average person's contents of the S-Chol range from 2.6 mmol/L to 6.5 mmol/L (100~250mg/L)。
Cholestenone is cyclopentanoperhydrophenanthrene ring derivative.not only does it participate in the component of the Plasma protein，but also be the essential composition of the cell structure，and be capable of translating into BR 25g Kayon，adrenocortical hormone and vitamin D，etc.cholestenone，which is called by a joint name total cholesterol，exists as free cholesterol and cholersteryl ester.the measuring method of cholestenone consisit of chemical colorimetry and methods in enzymology.this experiment adopt the firt one.cholesterol and its lipid derivative react with o-phthaldialdehyde ，using sulfuric acid as a catalyst，produce amaranth material that absorbed light at 550 nm。
实验六_血清胆固醇的定量测定(磷硫铁法)[1]
![实验六_血清胆固醇的定量测定(磷硫铁法)[1]](https://img.taocdn.com/s3/m/1c28730bbb68a98271fefad0.png)
实验六血清胆固醇的定量测定（磷硫铁法）一、实验目的：掌握磷硫铁法测定血清胆固醇的原理、方法及临床意义。
二、实验原理：总胆固醇的测定有化学比色法(磷硫铁法和邻苯二甲醛法)和酶学方法(试剂盒)两类。
本实验采用磷硫铁法测定血清胆固醇含量。
用无水乙醇提取血清中的胆固醇，再与硫磷铁试剂作用，产生颜色反应，呈色度与胆固醇含量成正比，可用比色法测定血清中胆固醇含量。
血清经无水乙醇处理，蛋白质被沉淀，胆固醇及其酯溶解在无水乙醇。
在乙醇提取液中，加磷硫铁试剂，胆固醇及其酯与试剂形成比较稳定的紫红色化合物，此物质在560nm 波长处有特征吸收峰，可用比色法作胆固醇的定量测定。
正常血清中胆固醇的含量有随年龄增大而增加的趋势，其平均正常值在110～220mg/100ml。
三、仪器：722分光光度计、台式离心机、试管及试管架、刻度吸量管或移液器等。
试剂：（1）10％三氯化铁溶液：10gFeCl3.6H2O (A.R) 溶于磷酸 (A.R)，定容至100ml。
储于棕色瓶，冷藏。
（2）磷硫铁试剂：取10％FeCl3溶液1.5ml于100ml棕色容量瓶内，加浓硫酸 (A.R)至刻度。
（3）胆固醇标准储液：准确称取胆固醇80mg，溶于无水乙醇，定容至100ml。
（4）胆固醇标准溶液：将储液用无水乙醇准确稀释10倍即得。
每毫升含0.08mg胆固醇。
（5）无水乙醇 (A.R)、无水乙醇 (A.R)。
四、操作（1）吸取血清0.1ml于干燥离心管，先加无水乙醇0.4ml，摇匀后再加无水乙醇2.0 ml，摇匀，10分钟后离心（3000rpm 离心5 min），上清液备用（分两次加入乙醇的目的是使作用完全）。
（2）取干燥试管3支，编号，分别加入无水乙醇1.0ml（空白管）、胆固醇标准溶液1.0ml（标准管）、上述乙醇提取液1.0ml（样品管），各管皆加入磷硫铁试剂1.0ml，摇匀，10分钟后，分别转移至0.50 cm光径的比色杯内，用分光光度计560nm比色。
蛋黄中胆固醇含量测定方法的研究
蛋黄中胆固醇含量测定方法的研究张旭;胡艳;蒋桂韬;王向荣;李昊帮;戴求仲【期刊名称】《饲料博览》【年(卷),期】2011(000)012【摘要】The essay contrasted and studied on three methods of determinating the egg yolk cholesterol content. The three methods were High performance liquid chromatography（HPLC）, saponification-colorimetric method, and kit method. The results showed that HPLC method can accurately and fast analysis cholesterol content in egg yolk. The accuracy of HPLC was better than saponification-colorimetric method and kit method. The pre-treatment methods was using 95% ethanol dispose yolk diluent, then using ether and petroleum ether mixed extract cholester- ol, afterwards blow dry with nitrogen and add anhydrous alcohol to made dissolve, filtrate with 0.45 μm organic microporous membrane filter, so the sample is made. Chromatographic conditions was using C18 column, acetonitrile-isopropanol（4： 1,v/v） as mobile phase, flow velocity was 0.8 mL-min-1, column temperature was 35 ℃ detected wavelength was 210 nm, sample amount was 10 μL, the peak tim e was 14.578 min. Test used the external standard method quota.%比较研究了高效液相色谱法（HPLC法）、皂化-比色法和试剂盒法3种测定蛋黄胆固醇含量的方法，结果表明，HPLC法能够准确、快速的分析出蛋黄中的胆固醇含量，较皂化-比色法和试剂盒法的准确度高。
荧光法测定鸡蛋中总胆固醇含量的研究
荧光法测定鸡蛋中总胆固醇含量的研究
王芳;王伟
【期刊名称】《广东化工》
【年(卷),期】2014(41)18
【摘要】本研究建立了一种荧光法测定鸡蛋中总胆固醇含量的新方法.在浓硫酸的催化作用下,邻苯二甲醛与胆固醇反应后生成一种紫红色物质,该物质在340 nm激发条件下,于550 nm处产生明显的荧光发射光谱,利用该荧光光谱可检测鸡蛋中总胆固醇的含量.本实验探讨了胆固醇荧光光谱的测定条件,在确定的优化条件下,胆固醇浓度在0～0.1664 mg/μL的范围内呈良好的线性关系,最低检测限(LOD)为0.011 mg/μL.该检测方法操作简单,准确度高,重现性好,结果可靠,可广泛用于实验研究和生产过程中胆固醇的检测.
【总页数】3页(P167-168,147)
【作者】王芳;王伟
【作者单位】汉中市城市供水水质监测站,陕西汉中723000;汉中市城市供水水质监测站,陕西汉中723000
【正文语种】中文
【中图分类】O65
【相关文献】
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实验六蛋黄总胆固醇的测定（邻苯二甲醛法）
一、实验目的
1、学习分光光度计的原理及操作。
2、学习用分光光度法测定蛋黄中总胆固醇（脂肪）含量及标准曲线的制作。
二、基本原理
胆固醇及其酯在硫酸存在下与邻苯二甲醛作用，产生紫红色物质，此物质在550nm由最大吸收值，可用比色法测定。
胆固醇含量在400mg/100ml之内与吸光度呈现良好线性关系。
本法操作简便，灵敏、稳定。
实验相关原理
根据物质对光的吸收特征和吸收强度，对物质进行定性和定量的分析方法，称为分光光度法(spectrophotometry)。
该法具有一定的灵敏度和准确度，分析手续较简便快速，仪器设备也不复杂，故应用很广。
吸光度与液层厚度和溶液浓度的乘积成正比，称为朗伯—比尔定律，简称比尔定律，即光的吸收定律。
吸光系数的大小，取决于物质(溶质、溶剂)的本性和光的波长。
1. 物质不同，则吸光系数不同，所以吸光系数可作为物质的特性常数。
在分光光度法中，常用摩尔吸光系数ε来衡量显色反应的灵敏度，ε值越大，灵敏度越高。
2. 溶剂不同，其吸光系数亦不同。
3. 光的波长不同，其吸光系数亦不同。
如将不同波长的单色光依次通过被分析物质，分别测得吸光度，然后绘制吸光度—波长曲线，称为吸收曲线(absorption curve)，吸收曲线上有极大值的部分，称为吸收峰。
吸收峰所对应的波长，称为最大吸收波长，以符号λmax表示，这是物质定性的依据之一。
4.单色光的纯度也影响吸光系数。
单色光越纯，即经单色器分光后的波长范围越窄，其吸光系数越大。
定量方法：
1、吸光系数法
2、标准曲线法
不是任何情况下都能适用的。
特别是在单色光不纯的情况下，测得的吸光度值可以随所用仪器不同而在一个相当大的幅度内变化不定，若用吸光系数换算成浓度，则将产生很大误差。
先配制一系列浓度不同的标准溶液，在测定条件相同情况下，分别测定其吸光度，然后以标准溶液的浓度为横坐标，以相应的吸光度为纵坐标，绘制A—C关系图，在相同条件下测出样品溶液的吸光度，就可以从标准曲线上查出样品溶液的浓度。
3、对照法
标准曲线的制作
（1）配置一系列浓度不同的标准溶液。
（2）在测定条件相同的情况下，分别测定其吸光度。
（3）以标准溶液浓度为横坐标，以相应的吸光度为纵坐标，绘制A-C关系图。
（4）在相同条件下测出样品溶液的吸光度，从标准曲线上查出浓度。
定性方法：
将一系列不同波长的单色光，照射到含待测组分的溶液，可测得相应的一系列吸光度。
如果以吸光度为纵坐标，以波长为横坐标作图，便可得到该待测物质的吸收曲线。
由于每一种物质均有其特征的吸收曲线，故可与其标准品比较而定性。
但在实际工作中常用λmax 和ε来定性，λmax可从吸收曲线中吸收峰所对应的波长直接找出；ε通常需配制待测物质三种不同浓度的溶液，于1cm
吸收池中，在λmax处分别测定其吸光度，根据A=εbc，即ε=A/bc，计算出ε，将三次结果平均，即得该物质的摩尔吸光系数。
三、试剂
1. 邻苯二甲醛试剂
2. 90%醋酸
3. 混合酸：等体积浓硫酸+等体积90%醋酸
4. 0.1mg/ml标准胆固醇应用液
5. 小牛血清
四、操作步骤
1、标准曲线的绘制：
取5只试管，分别加入0，0.1，0.2，0.3，0.4mL标准胆固醇应用液，再依次加入醋酸使各管体积均为0.4ml。
每管加入邻苯二甲醛试剂0.2ml，蒸馏水0.01ml，加入4ml混合酸，震荡混匀，10分钟后于550nm测定吸光值，以胆固醇量mg/100ml为横坐标，光吸收值为纵坐标绘制标准曲线。
2、样品测定：取2支试管，编号后加入醋酸0.4ml，血清0.01ml，再按照下表加入试剂。
对照样品
邻苯二甲醛0 0.2
无水乙醇0.2 0
混合酸 4.0 4.0
3、加毕，混匀，静置10分钟后，以对照管校0于550nm测定吸光值，从标准曲线中查出相应的浓度。
五、实验结果
试管编号标准胆固醇（6mg/mL）吸光度值
1 0mL 0.0
2 0.1mL 0.083
3 0.2mL 0.154
4 0.3mL 0.406
5 0.4mL 0.566
样品吸光度A=0.115
因为K为如图所画直线斜率，所以样品中的胆固醇量为：A/K≈2.10(mg/100mL)
由于样品中的蛋黄含量为600mg/100mL,所以蛋黄胆固醇含量为：4.6ml*2.10/mg/ml/0.6mg*100%=1.64%
06级生物科学2班
小组成员: 何娟40608094
刘录蝉40608066
郑玉琼40608069
张园40608092。