高效液相色谱的特点与仪器

➢ 储液罐的材料应耐腐蚀 ：常用玻璃、氟塑料或 PEEK塑料 ，容积约为0.5~2.0L。
➢ 储液罐放置位置要高于泵体：以保持一定的输液 静压差。
➢ 使用过程储液罐应密闭：防溶剂蒸发引起流动相 组成变化，还可防止空气中O2、CO2重新溶于已 脱气的流动相中。
2020/10/6
2．流动相脱气 流动相在使用前必须进行脱气处理
2020/10/6
5.应用范围广 制 的品，天分适然H析4HP.P于 物仅分LL分 及C需C析析 各法几载速生 种不分液度物高受钟流快大分样到速分子品几可子化沸十达、合点分1~离物、钟10子。挥。m型原发l/m化则度in合上和，物相热完、对稳成不分定一稳子性个定量限样
大于400 的有机物都可用 HPLC 法分析。
3．梯度洗脱装置 梯度洗提：在分离过程中按一定的程序连续改
变载液中溶剂的配比和极性。
通过载液极性改变来改变分离因素，改善分离 效果、缩短分析时间、改善峰形，提高分析精度。
➢ 高压梯度（内梯度） 两台高压泵，将两种
不同极性溶剂按一定比例 送入梯度混合室，混合后 进入色谱柱。
2020/10/20/10/6
二、高压输液泵
1. 高压泵性能
• 有足够的输出压力：压力范围250~400kg/cm2。
• 输出流量恒定：流量精密度应在1%，无脉动。 • 流量范围宽：分析仪器应在0.1 ~10.0ml/min。
制备仪器1~100ml/min。
• 抗溶剂的腐蚀：常用不锈钢和PEEK塑料。
2020/10/6
HPLC的局限性
➢ 分析成本高，宜引起污染。 ➢ 缺少高灵敏度的通用型检测器。 ➢ 不能替代GC完成沸程范围宽的石油产品的分
析。
2020/10/6
➢ 操作较GC复杂。
HPLC与GC比较
气相色谱 只能分析挥发性物质 不能用于热不稳定物质的分析
高效液相色谱 几乎可分析各种物质 可用于热不稳定物质的分析
➢ 除去其中溶解气体，防止流动相由柱流至检测器 时，因压力降低而产生气泡，而增加基线噪声。
➢ 使用荧光检测器，溶解在流动相中的氧气，会造 成荧光猝灭。
➢ 还会导致样品中某些组分被氧化或会使柱中固定 相发生降解而改变柱的分离性能。
2020/10/6
常用的脱气方法
➢ 吹氦脱气法，在0.1MPa下，以约60mL/min流 速通入流动相10~15min。此法适用于所有的溶剂 ，脱气效果较好，但价格较贵。
➢ 加热回流法，此法的脱气效果较好 。 ➢ 抽真空脱气法，用微型真空泵除去溶解气体， 降压至0.05~0.70MPa。 ➢ 超声波脱气法，流动相置放于超声波清洗器中 ，用超声波振荡10~15min。脱气效果最差。 ➢ 在线真空脱气法，真空脱气装置串接到储液系 统中，使流动相进入输液泵前连续真空脱气。此 法脱气效果最好，适于多元溶剂体系 。
➢ 低压梯度（外梯度）: 一台高压泵, 通过比例调节阀,将两种或多种
不同极性的溶剂按一定的比例抽入高压泵中混合。
2020/10/6
2020/10/6
三、进样装置
➢ 流路中为高压力工作状态； ➢ 通常使用耐高压的六通阀进样装置；
特点：耐高压，进样的重现性好，易于自动化， 易造成色谱峰柱前扩宽。
2020/10/6
HPLC的优点
123. 分选检离择测效性灵能 高 敏高 度高
GHCPL分C离广柱效泛效能采高较用，高流，灵动n敏相=度1可0检3以塔测控板器制/米，和，如改HU善PVL分（C离1可0的-9 达 选 g/m到择L性5）×。，10荧3~光3×检1测04器塔（板1/0米-11，g/m可L使）用。较短的柱子。
2020/10/6
(2) 恒压泵：常用气动泵 根据压力传导原理设计的，即 P1.SA=P2.SB P1 低压，推动大面积 SA，则在小面积 SB 活塞
输出大压力P2 。
特点：压力恒定，无脉动，液腔体积较大，更 换流动相不方便。当泵的负荷阻力小时可提供大的 输出流量，适于匀桨法填装柱子。
2020/10/6
general process and main assembly of HPLC
2020/10/6
一、液相色谱仪器（ high performance
liquid chromatograph）
2020/10/6
Waters LC 2695
2020/10/6
IC 4500i
2020/10/6
二、高效液相色谱法的特点
三、进样装置
装入状态
采样环
进色谱柱 泵入溶剂 出口
2020/10/6
进样状态
四、柱高材：效一分般离采柱用不锈钢管和 PEEK 塑料。
柱型及尺寸：一般采用管内径1～6 mm，柱长 5～40 cm直型柱，标准柱型φ3.9 或 4.6mm ，L 15、
• 泵死体积要小；以便迅速更换溶剂和梯度洗提。
2020/10/6
2. 高压泵分类： 恒流泵：输出流量恒定，与柱引起阻力无关。 恒压泵：输出压力恒定，与柱引起阻力无关。
(1) 恒流泵：常用往复式柱塞泵和注射泵。
特点：流量恒定，液腔体积小（0.1ml），更换 溶剂和梯度洗提方便，但有脉动，应用广泛。
2020/10/6
第二章 高效液相色谱法
high performance liquid chromatograph
第一节 高效液相色谱的
特点与仪器
feature and instrument of HPLC
一、高效液相色谱仪
instrument of HPLC
二、高效液相色谱法的 特点
feature of HPLC
三、流程及主要部件
毛细管色谱可得到很高的柱效
色谱柱不能很长、柱效不会 很高
有很灵敏检测器和较灵敏的通用检测器 没有较灵敏的通用检测器
流动相为气体，无毒、易于处理
流动相有毒、费用较高
运行和操作容易 仪器制造难度较小
运行和操作较气相难 仪器制造难度较大
实际应用中，凡是能用GC分析的样品一般不
用HPLC，因为GC更快，更灵敏，更方便，且耗费
较低 。
2020/10/6
三、流程及主要部件
高效液相色谱仪的主要部件： 储液罐、高压输液泵、进样装置、色谱柱、检 测器、记录仪和数据处理装置。 工作流程
2020/10/6
一、储液罐及流动相的脱气
1. 储液罐 ➢ 溶剂在放人储液罐之前必须经过0.45μm滤膜过
滤：除去溶剂中的机械杂质，以防输液管道或进 样阀产生阻塞现象。