常见生物检材的提取

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应用自动化工作站批量提取生物检材DNA

应用自动化工作站批量提取生物检材DNA
污染 。
( 感谢 澳斯 邦 生物科 技有 限公 司技 术 人 员在 本研
究过 程 中给 予 的 大力 支持 !)
参考文献 :
『1严 江 伟 , 顺 霞 , 贺 , .应 用 自动 化 工 作 站 提 取 常 见 1 王 任 等
检材 裂 解 是 否 充分 也 是 实 验 成 功 的关 键 因素 之
文章 编 号 :1 0 — 6 9 2 1 ) l 0 5 — 2 0 4 5 1 ( 0 0 一 0 4 0 1
在 刑 事 侦 查 的 法 医 学 实践 中 . 物 检 材 种 类 繁 生 多 . 以较快 的速 度 增长 . 并 以往 手工 操 作 分别 提取 各 种 检材 D A 的方法 已不 能适 应 当前工作 的需 要 建 N
表 1 采用 自动 化 工 作 站 提取 生物 检 材 DN 的检 验 结 果 A
9 6深孔板 、6方孔废 液槽 ( 9 瑞士 澳斯邦 公 司 ) 。
13 方法 .
13 1检 材 处 理 ..
() 1 血痕 、 口腔 拭 子 、 蒂 、 烟 软骨 、 织 检材 : 取 组 剪 或切 取适 量检 材分 别 置人 1 L离心 管 中 :2 混合 .m 5 ()
法 医遗传 学 法 医毒理 学
法 医 牙 科 学 法 医 弹 道 学 法 医 护 理 学 司 法 精 神 病 学
法 医毒 理 学 牙科 学 . 医/ 医 牙科 学 法 法
法 医 弹 道 学
fr n i e t ty o e sc d ni r s
f r n i a lsi s o e sc b l t i c
斑 : 取 检 材 适 量 . 差 异 裂 解 法 去 除 女 性 物 质 , 沉 剪 用 将 渣 用 5 L纯 水 混 匀 后 取 2 L转 移 至 I L 离 心 0 5 .m 5

法医学物证检材的提取保存与送检

法医学物证检材的提取保存与送检

5 法医学物证检材的提取方法
5.1 血液及血痕的提取 5.1.1 各种纺织物品上的遗留血痕,小件的可以整件提取;如不便 整件提取或血痕附在较大件的物品上可以将血痕剪下送检并记录其所在 部位,同时剪取血痕附近的空白织物一并送检。 5.1.2 树叶、草叶、禾杆等小件载体上附着的血痕均可以整件(应有 空白处)提取送检。较大的木质类载体上的血痕,可根据载体的情况采 取切削薄片状部分或锯掉端、角处等方法提取有血部位的检材。 5.1.3 光滑水泥地面、铁木器具、漆面上、玻璃上、陶瓷、塑料、 光洁的金属物品等质地致密的载体上的血痕检材除附在较小、易于提取 的物品上可以整件包装送检,否则均需要擦拭或刮取。擦拭方法是根据 血量的多少,准备适当大小的纱布块或纱线,用蒸馏水浸润(不要留多 余水分)后仔细擦拭血痕,将血痕全部转移至纱布块(线)上,阴凉处晾 干。记录提取部位后包装送检,并同时在血痕附近的空白载体上用同样 的方法提取空白检材一并送检。
5.3 唾液斑提取 5.3.1 新鲜唾液的提取:让提供唾液者清水漱口后目视酸性果品, 待唾液自然流出1~2mL,收集在洁净的试管或小烧杯内,置冰冻保存, 做好标记。 5.3.2 唾液斑提取,按5.3.1法将提取的唾液用纱布吸敷后自然晾干。 唾液供者清水漱口后取5×5cm2纱布块放入口中待其浸湿后取出晾干, 装入物证袋。 5.3.3 烟蒂唾液斑提取:发现可疑、与案件有关的烟蒂均应用镊子 提取,按不同提取部位分别装入物证袋,做好标记。 5.3.4 对可疑的用于堵嘴的手帕或衣物等均应整件提取,如有湿润 部位应用彩色笔标出部位,晾干后包装。大件衣物可以剪下可疑部位并 取附近处空白,做好标记。
5 法医学物证检材的提取方法
5.1.4 质地松软的载体如沙灰墙、泥土中的血痕的提取:将血痕尽 量全部提取并尽可能少混带载体物质。如沙灰墙上的血痕只能刮下送 检,刮下的时候应尽量将全部血痕刮下不混或少混沙灰;同时需在附 近提取空白沙灰检材一并送检。泥土上血痕尽量挖出带血的完整土块, 勿使土块破碎,包装勿挤压冲撞。 5.1.5 凶器上血痕的提取一般尽量整件提取,如凶器较大可按在较 硬载体上的血痕提取法提取血痕,记录提取部位并提取空白检材一并 送检。 5.1.6 身体上附着的血痕的提取,在皮肤表面的血痕可以用纱线转 移提取;如在指甲缝中的血痕可将指甲小心剪下送检并同时将无血的 指甲剪下做空白对照;附着在头皮上的血痕可连同头发剪下。

DNA提取

DNA提取

二氧化硅(硅胶膜)法
二氧化硅(SiO2)可以特异性吸附DNA,与 DNA结构及片段大小无关。在高盐以及低pH值 溶液中,二氧化硅可以吸附DNA;在低盐高pH 值溶液中可把DNA洗脱下来,从而达到提取纯 化的目的。
OMEGA公司:E.Z.N.A.® Forensic DNA Kit
优点:提取的DNA纯度高,不涉及使用有毒 试剂。 缺点:操作中需要多次离心,使得操作繁琐, 很难实现DNA的自动化提取。
H6.8),50 mmol/L EDTA,1% β-巯基乙醇;
4 mol/L异硫氰酸胍,0.5%十二烷基肌氨酸钠,0.1 mmol/L β-巯基乙醇,25 mmol/L柠檬酸钠;

苯酚:蛋白变性剂,同时抑制DNase的降解作用。 用苯酚处理匀浆液时,破坏蛋白质胶体溶液的稳定 性,使蛋白质变性沉淀。离心后,有机溶剂于试管 底层(有机相),DNA存在于上层水相,蛋白质沉淀 存在于两相之间。 氯仿:加速有机相与液相分层,去除水相中的迹量 酚(酚易溶于氯仿中)。
Chelex-100法
Chelex-100是一种化学鳌合树脂,由苯乙烯、二乙烯苯 共聚体组成。含有成对的亚氨基二乙酸盐离子,鳌合 多价金属离子,尤其是选择性整合二价离子,防止 DNA降解。
在高温低离子强度下可催化DNA释放,并能结合许多 可能影响PCR反应的抑制剂和杂质。 通过离心除去Chelex-100颗粒,使这些与Chelex-100结 合的物质与DNA分离。
提取过程复杂,耗时,多管,检材易污染 及有机试剂污染环境、伤害人体。
盐析法
不适宜提取微量检材。
法医DNA提取纯化技术发展趋势和方向
快速和简单化,减少交叉污染; 高效; 环保; 自动化; 解决微量、疑难生物检材DNA的提取和富集

硅珠法提取生物检材DNA的影响因素

硅珠法提取生物检材DNA的影响因素

硅珠法提取生物检材DNA的影响因素郑小婷;徐念来【期刊名称】《法医学杂志》【年(卷),期】2016(032)001【总页数】2页(P63-64)【关键词】法医遗传学;DNA;硅珠法;生物检材【作者】郑小婷;徐念来【作者单位】浙江省公安厅物证鉴定中心,浙江杭州310009;杭州市公安局萧山分局,浙江杭州311200【正文语种】中文【中图分类】DF795.2在酚-氯仿有机法、Chelex-100法、磁珠法及硅珠法几种DNA提取方法中,硅珠法在脱落细胞等微量生物检材以及骨骼、牙齿等疑难生物检材中的成功应用得到了很多学者的认可[1-3]。

随着硅珠法的不断推广应用,有学者对传统的硅珠法进行了改良以提高其提取模板DNA的灵敏度[4],也有人通过实验证实加大检材量能够提高硅珠法在脱落细胞DNA中的提取浓度[5]。

本研究系统地比较了硅珠量、硅珠悬浮时间以及悬浮方式对提取模板DNA质量的影响,以期用最佳的组合提取方法来提高硅珠法的提取回收量。

1.1主要试剂及仪器7500荧光实时定量PCR仪(美国AB公司),金属加热混匀仪(德国Eppendorf公司),Quantifiler®Duo DNA Quantification试剂盒(美国AB 公司),DNA标准品9947A(10ng/μL,美国AB公司),15%硅珠悬液;裂解缓冲液(lysis buffer,美国Promega公司),70%冷乙醇溶液。

1.2样品制备将对照品9947A(10 ng/μL)用无核酸酶水稀释为1ng/μL,采用1.5 mL离心管分装,每份100μL,共84份。

并于每份稀释液内加入裂解缓冲液200μL,涡旋数秒混匀备用。

1.3方法1.3.1硅珠量与悬浮时间的比较取样本稀释液16份,编为A组、B组、C组和D组,每组4份,每份分别加入20、40、60、80μL硅珠悬液,然后涡旋数秒混匀,室温条件下分别置于金属加热混匀仪上连续振荡(900r/min),以保证硅珠微粒始终处于悬浮状态。

各种检材DNA的提取

各种检材DNA的提取




酚-氯仿法——注意事项

酚-氯仿法是目前最常用、最可靠的方法之一,无论 是血液还是血痕标本均适用 所提取的DNA纯度高,可满足各种分子生物学检测技 术的需要
但该法操作较为繁琐、耗时长,影响了其在实践工作 中的广泛应用。


(三)碱性裂解法

碱性裂解法是指在强碱作用下,使构成细胞的蛋白质 成分谷氨酸、天冬氨酸、半胱氨酸、酪氨酸残基等迅 速发生电离,从而快速破坏蛋白质的一级结构。 检材在强碱性pH条件及一定温度状况下能迅速破碎细 胞膜及核膜,使核酸酶变性及DNA释放。

Chelex-100法——步骤


取适量血痕检材置1.5ml EP管中,加入1ml 灭菌无菌 水浸泡20min,>10000rpm离心3min,用1000ul进样器 小心地吸去上清液。 加5%chelex-100 200u1,于水浴锅中56℃水浴30min, 振荡混匀。 沸水中煮10min,取出后立即置于冰上3min,>10000 rpm离心1min。上清液即为DNA提取液,可在2-6℃保 存1个月,在-20℃长期保存。

酚-氯仿法——步骤

取适量血痕检材置于1.5ml EP管中,加入1ml 无菌水 浸泡20min,>10000rpm离心3min,弃去上清。 加入500μ l STE液悬浮沉淀物,加入20μ l 10 % SDS 及10 mg/ ml 蛋白酶K 4 μ l ,54℃水浴消化3小时
离心取上清液至另一EP管中,加入500μ l苯酚/氯仿/ 异戊醇混合物,振荡到出现絮状物,>10000rpm离心 3min。
各种检材DNA的提取



一、DNA的提取方法

生物物证提取和保存中存在的问题及对策

生物物证提取和保存中存在的问题及对策

河北公安警察职业学院学报Journal of Hebei Vocational College of Public Security Police2019年9月Sept.2019第19卷第3期Vol.19No.3生物物证是指遗留在案发现场中,能够揭露和证实案件真实情况的各类可进行法医遗传学检验的生物样品[1]。

由于犯罪手段的多样化和犯罪分子反侦查能力的提高,传统的痕迹物证如指纹、足迹等常常被隐藏、破坏甚至是伪装。

生物检材因其肉眼不易看见而易被犯罪分子忽略,从而在作案过程中留下蛛丝马迹。

生物物证具有特有的反映性和客观性,是了解犯罪事实真相,获取犯罪证据的重要来源[2],为侦查人员确定案件性质、寻找侦查方向提供重要线索。

生物物证的检出对于案件的进展有着至关重要的作用,而现场勘查中生物物证的正确提取和保存是成功检出DNA 的前提。

然而在实际工作中,生物物证在现场的提取和保管等环节中被损毁甚至丢失的情况仍然时有发生,导致一些重要的生物物证无法成功提取DNA ,使得关键证据缺失。

这些都严重损害了我国司法体系的权威性,为侦查破案带来了很多不必要的麻烦。

基层公安机关的刑事技术人员是首先进入原始现场进行现场勘查的人员,是许多重要生物物证的发现者和第一接触者,是能否正确提取和保存生物物证的关键。

但是在实际的公安工作中,刑事技术人员在提取、保存和送检过程中存在诸多问题,因此查摆梳理这一环节中易于出现的问题,加强生物物证的发现和提取技术以及保存方法的研究,对于提高各类案件侦破具有至关重要的意义,这项工作的重要性无论怎样强调都不过分。

笔者结合基层工作实际情况,全面分析原因并提出对策。

一、生物物证的种类及特点生物物证在各类案件中都可以提取到,比如盗窃案件、强奸案件、杀人案件等,常见的生物物证有唾液、血液、血斑、毛发、组织、精液(斑)、烟蒂,以及一切可能沾附有人体脱落细胞的物质载体等,均可作为DNA 检验的生物检材。

传统意义上把生物物证分为血痕、精斑、唾液斑、皮肤及其他脏器组织碎块、毛发、植物斑痕、脱落细胞等。

样品前处理常用技术

样品前处理常用技术

Two-Step Liquid-Liquid-Liquid Microextraction

Conventional liquid-liquid extraction (LLE) requires large amounts of toxic organic solvents and is tedious and time-consuming. Solid-phase extraction (SPE) is relatively expensive and the enrichment factors obtained are relatively low without solvent evaporation
除草剂
杀虫剂 有机磷农药 有机磷农药
有机氯农药
管内固相微萃取(in-tube-SPME)
将萃取涂层涂在毛细管的内表 面,可采用气相色谱毛细管
优点:毛细管柱方便易得,使
用寿命长,内径小涂层薄,样品 扩散快,平衡时间短。
In-tube-SPME-GC联用方式
热解析:用注射器将样品溶液注入毛细管柱,萃 取平衡后将水吹出,然后用石英压接头将萃取柱与分 析柱连接,放入气相色谱仪炉箱中热解吸。这种方法
不适于日常分析。
溶剂解吸:水样用氮气以极缓慢的流速吹入毛细
管萃取柱中,再将水吹出萃取柱,将适当溶剂注入萃
取柱中解吸,收集解吸溶液注入气相色谱中分析。
说明:1)萃取毛细管柱为长33cm,内径0.53mm,膜厚3.5µm的OV-1
毛细管柱; 2)在11处与GC冷柱头进样器相连,实现柱上进样。 将管内固相微萃取与GC法结合,采用溶剂解吸,通过两个六通阀
2)微孔膜液液萃取
微孔膜液液萃取装置与液膜萃取装置基本一样。它

常见生物检材的提取教案资料

常见生物检材的提取教案资料

常见生物检材的提取(一)血液及血痕的提取1.各种纺织物品上的遗留血痕,小件上的可以整件提取。

如不便整件提取或血痕附在较大件的纺织物品上,可以将血痕剪下送检,并记录其所在部位。

2.树叶、草叶、禾杆等小件载体上附着的血痕均可以整件提取送检。

较大的木质类载体上的血痕,可根据载体的情况采取切削薄片状部分或锯掉端、角处等方法提取有血部位的检材。

3.光滑水泥地面、铁木器具、漆面上、玻璃上、陶瓷、塑料、光洁的金属物品等质地致密的载体上的血痕检材,除附在较小、易于提取的物品上可以整件包装送检,否则均需要擦拭或刮取。

擦拭方法是根据血量的多少,准备适量的纱线或棉签,用蒸馏水浸润(不要留多余水分)后仔细擦拭血痕,将血痕全部转移,阴凉处晾干。

记录提取部位后包装送检。

4.质地松软的载体如沙灰墙、泥土中的血痕的提取:将血痕尽量全部提取并尽可能少混带载体物质。

如果沙灰墙上的血痕只能刮下送检,刮下的时候应尽量将全部血痕刮下不混或少混沙灰。

泥土上血痕尽量挖出带血的完整土块,勿使土块破碎,包装勿挤压冲撞。

5.较小凶器上血痕应整件送检或分段提取,较大凶器上血痕可按在较硬载体上的血痕提取法提取血痕,分段提取,并记录提取部位。

6.身体上附着血痕的提取:在皮肤表面的血痕可以用纱线转移提取;在指甲缝中的血痕、组织提取送检时,可将指甲小心剪下,分别包装送检。

7.有关人员的对照血样的提取:可从耳垂、指尖或静脉取血,直接涂于干净纱布、滤纸或其它认可采血材料上,阴凉处晾干,做好标签后送检。

8.在尸检时提取尸体血样,未腐败尸体取心腔血,腐败尸体取末梢静脉血,涂在纱布上制成血斑。

9.通过血液检验鉴定亲子关系,取未稍血制成血斑即可。

10.在发生案件现场留有尚未干固的血迹,用纱布直接提取,阴干。

(二)精斑的提取1.衣物、被褥等各种织物及卫生纸上遗留的可疑精斑提取的方法与相同载体上血痕的提取相一致,注意做好记录。

2.被害人阴道内、外的精斑的提取一般用纱布块、棉球擦取。

刑事案件现场保护和勘查

刑事案件现场保护和勘查

现场生物检材的提取主要从以下几 个方面进行:
从被害人身上寻找 从现场血迹中寻找 从犯罪分子在现场吃剩的物品上寻找 从犯罪分子在现场遗留的物品上寻找
6、电信资料的勘查
对被害人的手机及家庭成员的手机通话 资料及手机号码、电子串号、机型等进行提取 对现场上空案发期间空中信息进行提取出租车 GPS定位资料和计价器资料的提取
3、尸体外表的勘验
检查尸体衣服上有无泥块、尘土、血迹、粪 便、衣袋是否被翻动,衣袋内有什么东西。检 查尸体牙齿、毛发有无脱落,哪颗牙脱落;尸 体身上有无东西;是否被捆绑,用什么材料捆 绑。检查尸体位于现场何处,是否被移动过, 尸体姿态。检验尸体现象。
4、外围现场(包括关联现场)的勘查
外围现场(包括关联现场)是指犯罪分子 作案前在中心现场以外同实施犯罪行为有关联 的一切场所。对外围现场勘查的总体要求与中 心现场相同。

(四)、现场勘验检查的组织与指挥



现场勘验检查的指挥人员应当由负责办理案件的公安机 关具有现场勘验检查专业知识和组织指挥能力的人员担 任。 现场勘验检查指挥人员的职责包括:决定和实施现场勘 验检查的紧急措施;组织制定和实施现场勘验检查方案; 对参加现场勘验检查人员进行分工;指挥、协调现场勘 验检查人员,掌握现场勘验检查进度;审定现场勘验检 查的见证人;审核现场勘验检查笔录;组织现场分析; 决定对现场的处理等 。 现场勘验检查人员的职责包括:开展现场调查访问;实 地勘验现场;记录现场原始情况和现场勘验检查过程; 实施现场处置的紧急措施;参与现场分析;提出处理现 场的意见;协助填写和呈报现场勘验检查信息资料等 。
(二)、现场勘验检查的任务



运用科学技术手段查明刑事案件现场的情况,发现和收集 与犯罪有关的痕迹、物品及其他信息,为侦查破案提供线 索和证据 。 制作现场勘验检查笔录,拍摄现场照片、录相,记录现场 情况。 访问与刑事案件现场有关的人员,制作现场证人证言。 利用现场信息资料再现犯罪过程,研究分析案情,判断案 件性质,确定侦查方向和范围

检材的提取要注意事项

检材的提取要注意事项

检材的提取要注意事项
常规生物检材提取方法
血痕采集方法:
用针轻刺皮肤表面(手指尖、脚后跟以及身体表面任何部位),待血流出时,用准备好的滤纸或纱布(药店均有出售)轻轻擦拭,在其表面留下5—6个如同黄豆大小的血印即可。

注意不要用手触碰,要阴凉干燥保存,避免潮湿霉变及阳光照射,防止血痕发生霉变或阳光照射后影响检测。

将其用白纸或者信封包好,在信封表面标记上样本所属人的身份、姓名和性别,尽快送检。

口腔拭子采样方法:
1.先用清水漱口,保证口腔内无食物残渣;
2.拿起一根棉签伸进口腔脸颊内侧的黏膜壁上来回刮擦,让棉头充分湿润,刮拭约20下,共取至少三根。

将其用白纸包好或装入信封,在信封表面标记上样本所属人的身份、姓名和性别,尽快送检。

注意事项:
1.要保证棉签是新开封的,而且要购买标示无荧光的棉签,不能用手触摸采集过口腔拭子的棉签头,以免污染;
2.提取的口腔拭子要阴凉干燥保存,避免潮湿霉变及阳光照射,防止口腔拭子发生霉变或阳光照射后影响检测;
3.不同人的口腔拭子需要单独存放并做好身份标识。

毛发样本采样方法
洗净双手;用手抓住距离毛发根部4厘米左右的地方,用力拔下5根头发(头发末端可看到清晰的毛囊,即毛发根部白色物质) 注意事项:
1.刚拔下的毛发要放在干净的白纸上干燥几分钟后再装入袋内;
2.脱落、剪下的毛发不能用;不要邮寄拔下来放置很久的毛发或未看到明显毛囊的毛发。

3.不同人的毛发要单独存放并做好标识。

其他特殊生物检材提取方法:
其他样本比如烟蒂、口香糖、羊水、骨骼、肋软骨、肌肉等,请来电咨询工作人员。

常见生物检材的提取

常见生物检材的提取

常见生物检材的提取work Information Technology Company.2020YEAR常见生物检材的提取(一)血液及血痕的提取1.各种纺织物品上的遗留血痕,小件上的可以整件提取。

如不便整件提取或血痕附在较大件的纺织物品上,可以将血痕剪下送检,并记录其所在部位。

2.树叶、草叶、禾杆等小件载体上附着的血痕均可以整件提取送检。

较大的木质类载体上的血痕,可根据载体的情况采取切削薄片状部分或锯掉端、角处等方法提取有血部位的检材。

3.光滑水泥地面、铁木器具、漆面上、玻璃上、陶瓷、塑料、光洁的金属物品等质地致密的载体上的血痕检材,除附在较小、易于提取的物品上可以整件包装送检,否则均需要擦拭或刮取。

擦拭方法是根据血量的多少,准备适量的纱线或棉签,用蒸馏水浸润(不要留多余水分)后仔细擦拭血痕,将血痕全部转移,阴凉处晾干。

记录提取部位后包装送检。

4.质地松软的载体如沙灰墙、泥土中的血痕的提取:将血痕尽量全部提取并尽可能少混带载体物质。

如果沙灰墙上的血痕只能刮下送检,刮下的时候应尽量将全部血痕刮下不混或少混沙灰。

泥土上血痕尽量挖出带血的完整土块,勿使土块破碎,包装勿挤压冲撞。

5.较小凶器上血痕应整件送检或分段提取,较大凶器上血痕可按在较硬载体上的血痕提取法提取血痕,分段提取,并记录提取部位。

6.身体上附着血痕的提取:在皮肤表面的血痕可以用纱线转移提取;在指甲缝中的血痕、组织提取送检时,可将指甲小心剪下,分别包装送检。

7.有关人员的对照血样的提取:可从耳垂、指尖或静脉取血,直接涂于干净纱布、滤纸或其它认可采血材料上,阴凉处晾干,做好标签后送检。

8.在尸检时提取尸体血样,未腐败尸体取心腔血,腐败尸体取末梢静脉血,涂在纱布上制成血斑。

9.通过血液检验鉴定亲子关系,取未稍血制成血斑即可。

10.在发生案件现场留有尚未干固的血迹,用纱布直接提取,阴干。

(二)精斑的提取1.衣物、被褥等各种织物及卫生纸上遗留的可疑精斑提取的方法与相同载体上血痕的提取相一致,注意做好记录。

现场提取有价值生物检材对案件侦破中作用

现场提取有价值生物检材对案件侦破中作用

现场提取有价值的生物检材对案件侦破中的作用dna检验鉴定在刑事案件的侦查和诉讼中,发挥着越来越重要的作用,特别是它“同一性”的认定结果,往往在法庭审判阶段被法官优先采用。

近年来,在基层公安机关的案件的现场勘查中,把是否能提取到有价值的生物检材作为案件是否侦破的关键。

2010年12月13日,邯郸市某县发生一起人室抢劫案,犯罪嫌疑人气焰嚣张、作案手段残忍,受害人赵某和其妻子康某被人发现后送医院抢救。

1现场情况受害人家街门为双扇铁制门,门朝西开,在此街门口的地面上有一280×235cm的滴状血迹,从此滴状血迹向北2.3米有一3×1.2cm 的滴状血迹,从此血迹向北40cm有一1.0×1.2cm的滴状血迹,从此血迹向北40米南北过道内有一1.0×0.8cm的血迹,从此血迹向北41米至张姓邻居家门南垛墙角上有一0.8×0.7cm的血迹,此血迹距地面113cm。

在赵富华家街门北侧西屋外墙上有一双扇窗,在此窗户下沿有一12×8cm的蹬踩痕迹,此痕迹距地面190cm,从此窗户下沿向上130cm为西屋房顶边沿,在此房顶边沿有一堆缸碎片,在此水缸碎片上有一0.9×0.8cm的可疑斑迹。

在受害人家街门内的地面上有一245×32cm的滴状血迹。

赵某家院内有东屋一间、南屋一间、西屋一间、北屋五间。

东屋和南屋相连接,东屋为卧室、南屋为厨房。

从赵某家街门内侧地面上的滴状血迹向东北4.8米至院中央的地面上有一纸箱片,在此地面上有一宽55×47cm的滴状血迹,从院中央纸箱片处向东南2.7米至南屋门口,在此地面上有一50×38cm的滴状血迹,在南屋门内侧地面上有一饭盆和一口罩,在饭盆和口罩上有血迹,从南屋门口向东南有一单扇塑钢门,此门通向东屋卧室,此门上的玻璃破碎面积为70×60cm,在此门口地面上有散落玻璃碎片,玻璃碎片上有血迹。

Chelex-100法提取生物检材中的DNA

Chelex-100法提取生物检材中的DNA

Chelex-100法提取生物检材中的DNA一、原理当检材较少时或者基因分型只需要少量的DNA时,可以用Chelex-100提取方法提取DNA。

Chelex-100是一种化学整合树脂,由苯乙烯、二乙烯苯共聚体组成。

含有成对的亚氨基二乙酸盐离子,整合多价金属离子,尤其是选择性整合二价离子,比普通离子交换剂具有更高的金属离子选择性和较强的结合力.能结合许多可能影响一步分析的其他外源物质。

通过离心除去Chelex-100颗粒,使这些与Chelex-100结合的物质与DNA分离,防止结合到Chelex中的抑制剂或杂质带到PCR反应中,影响下一步的DNA分析,并通过结合金属离子,防止DNA降解。

二、实验目的掌握各种法医学生物检材DNA提取方法。

三、仪器设备干热器、恒温水浴箱、高速离心机、离心管四、试剂Chelex-100法提取生物检材所需试剂的配制1.5%Chelex-100(w/v)称取5克Chelex-100,加100ml灭菌纯水,放4℃保存。

2.10%SDS称取10克优级纯的SDS,加纯水到100ml溶解,室温保存。

3.5mg/ml PK酶(蛋白酶K)称取5mg PK酶,溶于1ml灭菌纯水中,-20℃保存。

4.1M DTT (二硫苏糖醇)称取154.3mg DTT加1ml灭菌纯水溶解,-20℃保存。

五、实验方法---Chelex-100法1.全血1)取3~10μl全血加到0.5ml离心管中,加人500μl纯水,剧烈振荡,室温下放置15分钟。

2)13,000rpm离心3分钟,去上清,收集沉淀。

(必要时可用蒸馏水反复洗沉淀物,直至无色或血色素很少)。

3)沉淀中加入200μl 5%Chelex-100溶液(5%Chelex-100为悬浊液,使用前要充分振摇,使Chelex-100颗粒悬浮),在振荡器上反复振荡,放入56℃保温30分钟以上。

4)取出后振荡,100℃保温8分钟,振荡后,13,000rpm离心3分钟,上清用于PCR扩增,或放4℃保存备用。

试论现场DNA生物检材的提取及注意事项

试论现场DNA生物检材的提取及注意事项

试论现场DNA生物检材的提取及注意事项作者:秦峰贾大鹏吴江峰霍俊杨晓蒋来源:《学习与科普》2019年第20期摘要:自新《刑诉法》落实之后,在刑事案件诉讼证据方面出现了一定变化,难度更大。

现场准确提取到有用的DNA生物物证至关重要。

一般而言,案件现场DNA生物检材繁杂无章,为了将有效的DNA生物检材变成破案的重要证据,加强开展现场DNA生物检材的提取工作,并且确定其中需要注意的事项不可或缺。

关键词:现场;DNA;生物检材;提取方式;注意事项前言:信息时代的来临,促使整个社会获得不断进步的同时,也导致各类犯罪刑事案件频发,严重危害到社会的安全和稳定。

而随着法医DNA检验技术的不断发展进步,现场DNA 生物检材的证据作用不断加强。

为此,系统分析和思考现场DNA生物检材的提取及注意事项显得尤为必要,拥有一定的研究意义与实施价值。

一、现场DNA生物检材提取方法的分析(一)科学提取毛发与新鲜肌肉组织及其脏器官对于现场中存在可疑性的动物毛发,需要使用镊子进行夹取处理,保持较轻的提取动作,放到纸袋当中加以存储。

而在鉴别物种中发挥出重要作用的毛发,不论其毛囊存在与否,都能进行送检。

如果是进行亲子鉴定,亦或者得到认定之后的毛发,则需选择存在毛囊的毛发当作检材进行送检。

进行脏器官与新鲜肌肉组织的提取过程中,首先借助干净的剪刀,切割大概2.5cm3的肌肉组织与脏器,并进行冷冻存储。

鉴于肝脏组织当中包含了类型多样的酶类物质,易于导致离体组织细胞产生自溶,促使DNA出现降解的情况。

(二)做好血液和血痕的提取工作针对现场发现的新鲜血液,通过运用干净的滤纸、脱脂的棉球,亦或者采用医用消毒纱布进行擦拭,等到血液被吸附之后,便可以进行晾干,完成血痕的制备。

由于尸体的血液易于受到细菌的感染,导致血液难以进行保存,此时应该选择肌肉组织进行及时送检。

笔者通过查阅大量的相关研究资料以后,不难看出,针对那些附着的很小物品,亦或者便于搬运、包装以及送检的物品中的血痕而言,需要把血痕及其附着物进行科学采取处理。

DNA提取与包装规范

DNA提取与包装规范

生物检材承载物的种类:
1、无 2、FTA卡 3、滤纸 4、纱布 5、凶器/刀具/工具 6、卫生纸 7、内裤 8、床单 9、衣物 10、棉签/拭子 11、护垫 12、鞋、袜、手套 13、瓶口/杯口 14、口香糖 15、尸体/活体 16、邮票 17、水果/果核 18、其他(如植物叶等)
各类承载物上物证的种类及提取方法
一、无承载物的 1、血液、精液、唾液——用容器承装,并标注 详细。 2、毛发、指甲、牙齿——用物证袋承装,每枚 指甲单独分装,毛发须有毛囊。 3、骨骼——陈旧性的,除去表面污物,据取骨 密质最厚处约10厘米左右;新鲜的,带表面有组 织的,可直接取10厘米左右。 4、肌肉组织及软骨——取1*1厘米,用75%的 乙醇浸泡保存。 以上检材须用物证包装袋分装送检,并在物证 袋上标注详尽
二、 FTA卡 一般用于采集血样,进行建库使用。FTA卡上所填 信息量有限,须用专用物证袋包装,并标注详尽。 三、滤纸、纱布 1、现场血迹或尸体血,一般待血迹干后再装入物 证袋。 2、精斑,可用纱布提取女性尸体上的斑迹。 四、凶器/刀具/工具 1、血迹,可用棉签或纱布转移。 2、指纹,用脱落细胞粘取器提取。 3、常规脱落细胞,可用棉签擦拭提取。 注意提取顺序:先指纹,再常规脱落细胞,后血迹
九、棉签/拭子 1、血迹,用于不能移动或大型物体表面血迹的提 取。未凝固的,可直接粘取;已凝固的,用湿润棉签 擦拭(两步滚擦法)。 2、精斑,提取后分装入袋。 3、口腔拭子,分装入袋。 4、脱落细胞,如使用过的化妆棉,分装入袋。 十、护垫 精斑,分装入袋。 十一、鞋/袜子/手套 1、脱落细胞,单独分装入袋。 2、血迹,鞋面/边缘/鞋底的可用棉签转移分装入 袋。 十二、瓶口/杯口 脱落细胞,可用棉签转移,分装入袋。
DNA生物检材 提取与包装规范

DNA实验室常用的DNA提取方法有哪些?

DNA实验室常用的DNA提取方法有哪些?

DNA实验室常用的DNA提取方法有哪些?DNA实验室常用的DNA提取方法有Chelex100法、有机法、磁珠法、盐析法、NaOH法等,本文详细介绍这些方法。

(一)Chelex100法原理:Chelex100是一种螯合树脂,由苯乙烯、二乙烯苯共聚体组成,含有成对的亚氨基二乙酸盐离子,起着螯合基团作用,对多价金属离子有极强亲和力。

在低离子强度、碱性及100℃煮沸条件下,可以使细胞膜裂解,并使与DNA结合的蛋白质变性,DNA游离。

检材基质中一般含有大量金属离子,在低离子强度及加热条件下,金属离子可以辅助脱氧核糖核酸酶降解DNA,也可以抑制PCR 反应,所以在提取DNA时,加入Chelex100,螯合了金属离子,防止了DNA降解,提高了PCR扩增成功率。

方法:剪取适量血斑、精斑、汗斑、鼻涕斑、指甲、毛根、软组织等等生物检材,置于0.5ml离心管内,加入适量纯水,室温浸泡,13,000rpm离心5min,上清丢弃,管底留约20μl左右液体及检材基质,加入100-200μl 5%Chelex100(有时需加适量PK)56℃15min至数10小时不等,100℃8min,13,000rpm离心5mim,上清备用。

(二)有机法原理:有机法提取DNA一般是指用平衡酚(又叫饱和酚)、氯仿等按不同比例混合,采用不同方法提取DNA。

DNA易溶于水,不溶于有机溶剂,蛋白质分子表面带有亲水性基因,很容易进行水合作用,并在表面形成一层水化层,使蛋白质分子能够顺利地进入到水溶液中,形成稳定的胶体溶液。

在有机溶剂存在的情况下,破坏了蛋白质胶体溶液的稳定性,使蛋白质变性沉淀,离心后,有机溶剂于试管底层(有机相),DNA继续稳定的存在于上层水相,蛋白质沉淀存在于两相之间。

水相中的DNA在大量冷无水乙醇及单价阳离子存在的情况下,水会溶于乙醇中,而DNA从水相中析出,沉淀,通过离心回收。

方法:剪取适量检材,置于0.5ml离心管内,清洗方法同用Chelex100法提取DNA,加入适量纯水及终浓度为100μg/ml PK,37℃-56℃孵育15min至数10小时,有时间隔一段时间补加适量PK →13,000rpm 5min → 吸上清于另一管 → 加入等体积平衡酚 → 振荡或颠倒彻底混匀 → 13,000rpm5min →吸上清水相于另一管,加入等体积1:1混合平衡酚:氯仿 → 振荡或颠倒彻底混匀 →13,000rpm 5min → 吸上清水相于另一管 →加入等体积氯仿 → 振荡或颠倒彻底混匀 →13,000rpm 5min → 吸上清水相于另一管 →加入2.5倍体积冷无水乙醇冷冻保存10min以上 →13,000rpm 5-10min → 弃上清 → 室温凉干或100℃ 5min烤干 → 加入10-20μl纯水 → 室温溶解或100℃5min帮助溶解 → 离心上清备用(三)磁珠法原理:(异)硫氰酸胍(GuSCN)是强烈蛋白变性剂,不破坏蛋白质一级结构,能破坏细胞膜及核膜蛋白,并使核酸酶失活,释放DNA。

毒品检验

毒品检验

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03
从腐败的动物组织中,通过微波 萃取技术检测吗啡等成分。样品 的浸取、灰化、干燥、溶解等阶 段中,都能采用微波萃取技术。 此种技术有着快速、高效、简单 的仪器设备,能同时对许多样品 进行检测,所以,在生物检材提 取技术中,该种萃取技术对样品的 预处理和制备起着重要作用
03 毒品检验方法比较
量分析。
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毛细管电泳是近些年来发展起来的分析方法,
广泛应用于生命科学、药物分析等领域。其
突出特点是高效、快速、微量、经济以及分
离模式多样化,可根据需要选择不同的分离
07
模式和检测器,分析对象广泛,可以作为一
一种标准的分析方法,为毒品的定性定量提
供依据。技术方法主要可分为:毛细管区带
克。该种检验原理大部分都是运用显色反应,
常用的往往都有亚硝基铁氰化钠、碳酸钠试
01
剂、马改氏试剂、快兰B试剂、硫氰酸钻试
剂、硝酸钻、异丙胺试剂等甲。运用该类型
方法的关键原因是给可疑毒品划分种类,在
Hale Waihona Puke 减小范围的同时做相关确证性检验,该种方
法耗费的生物检材量较大。
单击此处添加文字标题
02
薄层色谱法实际上是微量、快速的分析检验方法,将吸 附剂均匀地铺在玻璃板或是塑料板上,待其形成一种薄 层状态的时候,在此种薄层的基础上进行色层分离工 作。该类型方法具有实际操作简便、快速,特别是高 效薄层色谱法的产生,极大限度地增强了检测的灵敏 度。对比于气相色谱法、高效液相色谱法、紫外光谱 法等,薄层色谱法有着简便、经济实用等优势,特别是在 基层的公安机关应用上,极其合适。尤其是通过对薄 层扫描法的运用做相关定量分析,深层次地研究出不同 种类毒品所含不同组分的质量分数、掺杂剂和中间产 物的比例,给毒品种类、来源提供关键理论证据。
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常见生物检材的提取(一)血液及血痕的提取1.各种纺织物品上的遗留血痕,小件上的可以整件提取。

如不便整件提取或血痕附在较大件的纺织物品上,可以将血痕剪下送检,并记录其所在部位。

2.树叶、草叶、禾杆等小件载体上附着的血痕均可以整件提取送检。

较大的木质类载体上的血痕,可根据载体的情况采取切削薄片状部分或锯掉端、角处等方法提取有血部位的检材。

3.光滑水泥地面、铁木器具、漆面上、玻璃上、陶瓷、塑料、光洁的金属物品等质地致密的载体上的血痕检材,除附在较小、易于提取的物品上可以整件包装送检,否则均需要擦拭或刮取。

擦拭方法是根据血量的多少,准备适量的纱线或棉签,用蒸馏水浸润(不要留多余水分)后仔细擦拭血痕,将血痕全部转移,阴凉处晾干。

记录提取部位后包装送检。

4.质地松软的载体如沙灰墙、泥土中的血痕的提取:将血痕尽量全部提取并尽可能少混带载体物质。

如果沙灰墙上的血痕只能刮下送检,刮下的时候应尽量将全部血痕刮下不混或少混沙灰。

泥土上血痕尽量挖出带血的完整土块,勿使土块破碎,包装勿挤压冲撞。

5.较小凶器上血痕应整件送检或分段提取,较大凶器上血痕可按在较硬载体上的血痕提取法提取血痕,分段提取,并记录提取部位。

6.身体上附着血痕的提取:在皮肤表面的血痕可以用纱线转移提取;在指甲缝中的血痕、组织提取送检时,可将指甲小心剪下,分别包装送检。

7.有关人员的对照血样的提取:可从耳垂、指尖或静脉取血,直接涂于干净纱布、滤纸或其它认可采血材料上,阴凉处晾干,做好标签后送检。

8.在尸检时提取尸体血样,未腐败尸体取心腔血,腐败尸体取末梢静脉血,涂在纱布上制成血斑。

9.通过血液检验鉴定亲子关系,取未稍血制成血斑即可。

10.在发生案件现场留有尚未干固的血迹,用纱布直接提取,阴干。

(二)精斑的提取1.衣物、被褥等各种织物及卫生纸上遗留的可疑精斑提取的方法与相同载体上血痕的提取相一致,注意做好记录。

2.被害人阴道内、外的精斑的提取一般用纱布块、棉球擦取。

纱布块不要太大,提取时需注意先外后内,分段提取。

检材提取后于阴凉处晾干,做好记录后送检。

3.野外强奸现场的精斑常遗留在树枝、草、禾杆等植物或土地上。

在植物上的取整件或取精斑遗留处的枝段送检,遗留在土地上的按遗留在土地上的血痕的提取方法提取。

4.遗留在较硬载体上的精斑提取法与血痕提取法相同。

5.涉嫌强奸的案件在送检精斑时需提取被害人、嫌疑人及有关人员(丈夫)等的血斑一并送检。

6.可疑口交或鸡奸案件的活体和尸体均用纱布块擦拭口腔或直肠提取,阴凉处晾干,装入标准的物证袋内。

7.对强奸案的犯罪嫌疑人可以用湿润纱布或棉拭子擦拭阴茎或提取犯罪嫌疑人的内裤等。

8.留有精斑的衣物已浸泡在水中,尚未清洗的,亦应提取晾干送检。

(三)唾液斑提取1.新鲜唾液的提取:让提供唾液者清水漱口后目视酸性果品,待唾液自然流出1~2mL,收集在洁净的试管或小烧杯内,置冰冻保存,做好标记。

2.唾液斑提取:或按前述方法将提取的唾液用纱布吸敷后自然晾干,或唾液供者清水漱口后取5×5平方厘米纱布块放入口中,待其浸湿后取出晾干,装入物证袋。

3.烟蒂提取:发现可疑烟蒂均应用镊子提取,按不同提取部位分别装入物证袋,做好标记。

4.对可疑的用于堵嘴的手帕或衣物等均应整件提取,如有湿润部位,应晾干后包装送检。

5.对尸体或活体皮肤等留有咬痕或可疑被舔吻部位,可先用湿的棉拭子或纱布擦拭,再用干棉拭子或纱布擦拭相同部位,晾干,该两份提取物应装入同一物证袋,这是典型的两步擦拭法。

6.犯罪分子用过的可疑口杯、茶具等均可用两步擦拭法擦拭其边缘部位,或直接送检。

7.信封口或邮票背面可疑遗留唾液斑时,对该信封和邮票整件提取,装物证袋,送检。

(四) 尿斑的提取1.遗留在衣物、被褥等各种织物上的可疑尿斑的提取法与遗留在相同载体上血痕的提取法相同,同时也需要提取空白检材。

2.遗留在土地上的尿斑的提取是将被尿液浸透的泥土挖下装入瓶内,做好标签并同时提取空白泥土检材一并送检。

未干的泥土检材需在冷环境送检。

3.遗留在容器中的尿液的提取是将尿液装入干净玻璃瓶中,并需在冷环境下送检。

(五)毛发的提取不管是遗留在何处的毛发(身上、地上、衣物上、凶器上等等)一经发现分别提取,装入纸袋同时做好记录。

严禁不同部位毛发混在一起。

提取时应注意细心查找,提取动作轻柔,避免将粘附在载体上的毛发拉断,也防止将毛发上的附着物擦掉。

如果毛发在载体上粘附较紧,有可能时将载体一同提取。

(六)软、硬组织提取1.离体的人体小块内脏或肌肉皮肤等均应整块提取,分别装入洁净的试管或瓶内,冷冻存放做好标记。

干燥的小块组织可装入纸袋,低温存放;大块组织可切下30g重的检材送检,其余部分冻存。

2.粘附有灰、土、油迹等小块软组织应同时提取粘附的空白物做对照检验用。

3.附有软组织的小骨片可连同软组织一并提取,冷冻存放。

4.对发现较多的白骨化骨骼,可全部提取,装入洁净的塑料袋或木箱内,喷洒消毒防腐剂。

取其中长骨、牙齿等根据案情需要分别送检不同部位骨骼。

(七)鼻涕(斑)、痰液(斑)提取1.留在卫生纸上或手帕上的鼻涕斑及痰液斑可整件提取,做好标记,纸袋包装送检。

2.留在现场地面上的鼻涕斑迹或痰液斑迹,在湿润时可以用纱布擦拭提取;如斑迹干燥可以刮取,包装送检。

3.留在衣物上的鼻涕斑或痰液斑,可以剪下斑迹,晾干后送检。

(八)呕吐物提取提取现场上留下的呕吐物50g装入洁净瓶内,冷冻存放备检。

尸检时取相同量的胃内容物冷冻存放备检。

(九)脱落上皮细胞、接触DNA提取主要指指印、皮肤脱落上皮细胞提取。

皮肤占人体重量15%,是人体最大的器官。

人皮肤1月更换1次,每天大约脱落400,000个细胞。

皮肤每平方厘米含有100个湿腺,10个油腺,腺液分泌时也同时含有较多量代谢细胞。

指印提取前应制定提取计划,防止提取时吹走指印内细胞。

指印提取时先用湿棉签轻擦,再用干棉签轻擦,阴干保存。

用力擦取同时可以提取到指印附着基质内不必要抑制剂。

脱落上细胞提取及接触DNA提取原则:1.防止污染是首要任务,尤其是现场指挥人员、现场勘查人员及实验室检验人员的污染。

2.分别包装,细心保存,及时送检。

(十)对照样本提取及注意事项1.口腔擦试物用棉签擦拭口腔粘膜,优点是无创性。

一般2个棉签即可。

口腔擦拭提取时一定要用清水先行嗽口。

2.血斑最好抽取未稍静脉血涂于滤纸上,优点是易于定量,也可涂于纱布上。

抗凝剂与血的比例关系:0.5M EDTA pH8.0:血=15μl:1ml,2.5%枸橼酸纳:血=1:4。

肝素可抑制PCR反应,一般不用肝素抗凝。

刺取耳血及手指血涂于滤纸或纱布上也可。

涂制血斑大小为4平方厘米。

用血斑做为样本,采血时千万应采用一次性针头、针管、采血针等,防止传染疾病。

3.对照样本还可提取毛囊、毛干、肌肉组织、指甲、骨胳等人体组织,视案件情况而定。

4.一般提取直接当事人上述检材做为对照样本,有时在直接当事人缺失的情况下,也采取直接当事人的直系亲属——父母、子女、舅姨、姑叔等的检材做为对照样本。

5.不管是对照样本或者现场生物检材,在提取后一定应阴干,阴干是检材提取之后最最重要的一个环节。

不应未阴干就置于塑料等不透气包装袋盒内!不应烤干或晒干!不应相互污染!(十一)流产、引产胎儿亲子鉴定检材提取1.有关胎儿的几个概念①二月龄胎儿长1.5-2.0cm三月龄胎儿长6.0cm②胎盘构成羊膜→与胎儿DNA完全相同(包括羊膜细胞)绒毛膜底蜕膜与母亲的DNA完全相同。

满月胎盘长15-20cm,重0.5kg。

胎盘胎儿面光滑,灰兰色。

胎盘母体面粗糙,暗红色。

③脐血与羊水细胞:与胎儿DNA完全相同。

2.为了进行亲子鉴定,应用洁净器皿收集人流门诊的亲子鉴定流产物,最好全部冷冻后全部送检,因为二月龄胎儿长仅1.5-2.0cm,在人流过程中还有损坏,与人流组织混在一起,很难区分,所以应全部冷冻后全部送检。

绝不允许用福尔马林固定后送检。

3.亲子鉴定送检检材①(嫌疑)母血斑②子、女血斑或组织③(嫌疑)父血斑(十二)癌症、骨髓移殖及输血患者样本提取癌变影响DNA图谱,所以癌症患者有关检材进行DNA检验时应慎重。

患有口腔癌的个体其口腔擦拭物不能用作标准对照样本。

输血患者血液DNA图谱变化与一次输血量及采血时间有关,为了慎重起见,可分阶段重复抽血检验。

骨髓移殖后患者口腔擦拭物等一般表现为移植前DNA图谱,血液则表现为供体DNA图谱或者供受体混合图谱,有时会有额外等位基因。

骨髓移植提取生物检材包括供受体末梢血、口腔擦拭物、毛根等,应综合分析检验结果。

(十三)腐败尸体生物检材提取尸体腐败后不同组织Amel及STR位点检验成功率不同,成功率由高到低顺序依次为软骨(肋软骨)→指甲近端→指甲远端→肌肉→头皮→血纱。

实际案件中提取尸体腐败组织的顺序为血纱→肌肉→指甲→软骨,原则是尸体解剖的难易程度及对尸体腐败程度的判断。

如果实在难于判断提取何种组织为好,则应全提上述尸体组织。

在不影响以后的解剖学、组织学、损伤学、颅像重合、面貌复原检验分析的前提下,在理顺各种关系后,必要时应提取骨骼及牙齿,因为骨骼及牙齿保存DNA时间较所有组织均长。

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