四氯化碳诱发大鼠肝脏蛋白质表达变化的分析

四 氯 化 碳 （ Ｃ 是 工 业 实 验 室 常 用 的 溶 剂 ， 具 Ｃ １） 有 很 强 的 毒 性 作 用 ，可 引起 中枢 神 经 系 统 、 肝 、 肾
Ｗ ｉ ａ 大 鼠 为 研 究 对 象 ，运 用 蛋 白 质 组 学 技 术 比 ｓ ｒ ｔ
较分析 了 Ｃ １ 伤 大 鼠的肝 细 胞蛋 白质 表达 谱 的 Ｃ 损 变化 ，对差 异 蛋 白进 行 质谱 鉴 定 ，为 寻 找 Ｃ １ Ｃ 致 肝纤维 化早 期生 物效应 的相关 蛋 白提供实 验基础 。
［ ｓｒｃ］Ｏｂｅｔｖ Ｔｏ ａ ａｙ ｅｔｅｅｆｃｓｏ ａ ｂ ｎｔｔａ ｈｏ ｉｅ（ ４ ｏ ｈ ｘ ｒｓ ｉｎｏ ｒ ｔｉｓ Ａｂ ｔａ ｔ ｊｃｉｅ ｎ ｌｚ ｈ ｆ ｔ ｆ ｒ ｏ ｅｒｃ ｌｒ ｅ ｃ ｄ ＣＣＩ） ｎ ｔｅｅ ｐ ｅ ｓｏ ｆ ｏｅｎ ｐ
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１ １ 试剂 与仪器 ．
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徐 乃 玉 ，等 ． 四氯 化 碳 诱 发 大 鼠肝 脏 蛋 白质 表 达 变 化 的 分 析
１ ｃ 、 Ｉ Ｇ Ｂ ｆ ｒ ｐ ～ １ ） 于 Ａｍｅｓ ａ 公 ｍ） Ｐ ｕｆ （ Ｈ３ ０ 购 １ ｅ ｒｈ ｍ 司 ；Ｔ ｉ、十 二 烷 基 磺 酸 钠 （ Ｄ ） 丙 烯 酰 胺 、 甲 ｒ ｓ Ｓ Ｓ、
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徐 乃 玉 张 素 萍 聂继华 ， ，丁 建松 ，童建
，
（ ．苏 州大 学 药 学 院 ，江 苏 苏 州 ２ ５ ２ ；２ 苏 州 大 学 放 射 医 学 与 公 共 卫 生学 院 ， 江苏 苏 州 ２ １ ３ １ １１ ３ ． １ ２） ５
Fra Baidu bibliotek【 要 】 目的 摘
分 析 四氯 化 碳 （ Ｃ 诱 发肝 纤维 化 大 鼠 肝 脏 细 胞 蛋 白 表 达 的 变 化 ，为 寻 找 Ｃ Ｉ 肝 纤 Ｃ Ｉ） Ｃ 致 采 用 皮 下 注 射 Ｃ Ｉ 发 实 验性 大 鼠肝 损 伤 模 型 ，测 定 Ｃ 诱
损 害 ，严重 者可引 发肝硬 化甚 至肝癌 。蛋 白质组学 研 究方 法对疾 病发病 机制研 究及 发现疾 病标 志物 和
药物 靶 点 的 确 证 等 方 面 有 着 重 要 意 义 。我 们 以
１ 材 料 和 方 法
［ 金 项 目］ 苏省 研 究 生 创 新工 程 项 目资 助 （ Ｙ３ ０ ０ ） 基 江 Ｚ ２５５。 ［ 者 简 介 ］ 乃 玉 （９ １ ） 女 ， 师 ， 士 研 究 生 。 作 徐 １７一 ， 讲 博 ［ 讯作者］ 通 童建 ， 士 生 导 师 。 博
又 双 丙 烯 酰 胺 、苯 甲 基磺 酰 氟 （ ＭＳ 、超 纯 尿 Ｐ Ｆ）
素 、过 硫 酸 铵 、Ｎ，Ｎ，Ｎ 四 甲基 乙 二 胺 ，Ｎ 一 （ ＭＥ 、二硫 苏糖醇 （ ＴＴ） ＴＥ Ｄ） Ｄ 、甘 氨 酸 、甘 油 均 购 于 Ｂ Ｉ 司 ；３ ［ 一 （ 酰 胺 基 丙 基 ） 甲 氨 Ｂ 公 ～－ ３ 胆 二
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工 业 卫 生 与 职 业 病 ２０ ０ ８年 第 ３ ４卷 第 ３ 期
Ｉ ｄＨ ｌ ＆ Ｏｃ ｕ ｓ ２ ０８， Ｖｏ１ ３ ，Ｎｏ．３ ｎ ｔ ． ｃ ｐ Ｄｉ ｈ ０ ． ４
【论 著 】
四氯 化碳 诱发 大 鼠肝脏 蛋 白质 表达 变 化的 分析
Ａｍｅｓｏ 司 ；低 分 子 量 标 准 蛋 白质 购 于 上 海 生 化 ｒｃ 公
１ ３ ４ 胶 内酶切及 质 谱 分析 用 解 剖 刀 片沿 染 色 ．． 边缘 切下 选定 的蛋 白点 ，乙腈 、碳酸 氢铵 混合液 振 荡脱 包至蓝 色褪尽 ，乙腈 脱水 ２次 ，加入 １ ｇ ｍｌ ０ｔ ／ ￣ 胰 蛋 白酶 ，４ ￣ 置 ３ ｉ ，３ ℃ 保 温 过夜 ，取 上 Ｃ放 ０ｒ ｎ ７ ａ 清 液 ，再 用三 氟 乙酸和 乙腈 混 合液提 取 ２次 ，合并 上 清液 ，浓缩 至 ４ １ ～５ｔ ，获得 肽 混 合 物 样 品 ，进 Ｌ 行 基质辅 助激 光解 吸飞 行 时 间质 谱 （ ＭＡＬ Ｉ ＯＦ Ｄ— Ｔ — ＭＳ 分析 ，获得 的 图谱在 ＮＣ Ｉ ） Ｂ 数据 库 中搜 索 。
ｓ ｅ ｔｏｍ ｅｒ （ Ａ ＩＤＩＴＯＦ— Ｓ） Ｒｅｕｌｓ Ｃｏ ｐ ｒ ｄ ｗｉｈ ｔ ｅ ｃ ｐ ｃｒ ｔｙ Ｍ — Ｍ ． ｓ ｔ ｍ ａ ｅ ｔ ｈ ｏｎｔｏ ， ｔ ｐ ｔｃ ａ ｈｏ ｏ ｃ ｎ ｃ ｏ ｉ ｒ ｌ ｈｅ ｈｅ ａ ｉ ｐ ｔ ｌ ｇｉａｌ ｅ ｒ ｓｓ ｏｆ ＣＣＩ ｇｒ ４ ｏｕｐ ｗａ ｏ ｉ ａ ＡＳＴ ｄ Ａ ＩＴ ｉ ｒ ａ ｅ ｒ ｍ ａ ｋ ｂｌ ｓ ｂｖｏｕｓ ｎｄ ａｎ ｎｃ ｅ ｓ ｄ ｅ ｒ ａ ｙ． ２ Ｄ Ｅ － ｐｒ ｆｌｓ ｅ ｗ ｅ ｎ ｏｒ ａ ｄ ＣＣＩ ｏ ｉ ｂ ｔ ｅ ｎ ｍ ｌａｎ ｅ ４ ｇ ｏｕｐ ｒ ｗｅ ｅ ｌｅ ｅ ． Ａｆ ｅ ａ ｙ ｅｄ ｙ ｒ ａ ｔ ｒ ｄ ｔ ｒ ａｎ ｌ ｚ ｂ Ｍ ＡＬＤＩＴＯ Ｆ－ Ｓ ａ ｄ ｔ ｂａ ｅ ｅ ｒ ｈ ｏｒ ｉｆ ｒ ｎ ｉ ｌｙ ｘｐ ｅ ｓ ｄ － Ｍ ｎｄ ａ ａ ｓ ｓ ａ ｃ ｆ ｄ ｆｅ ｅ ｔａｌ ｅ ｒ ｓ ｅ ｐ ｏｅｎ ｒ ｔ ｉ ｓ， ｆ ｅ ｅ ｅ ｋ ｏｗ ｎ ｐｒ ｅｎ ｅ ｅ ｉ ｎ ｉｉ ｄ Ｃｏ ｃ ｕ ｉｎｓ Ｔ ｈ ｔｌ ａ ｉ ｏｔｏｍ ｅ ｔ ｃ ｎｏｏｇｙ ｏｕｒｓ ｑｕ ｎｃ — ｎ ｏｔｉ ｓ ｗ ｒ ｄｅ ｔｆｅ ． ｎ ｌｓｏ ｅ ｕ ｉｉ ｔｏｎ ｏｆｐｒ ｅ ｚ ｅ ｈ ｌ ｉ ｆｅ ｔｖ ｉ ｉ ｎ ｉｙ ｎ ｔ ｈｅ ａｔｃ ｉ ｒ ｉ— ｅａ ｅ ｐ ｏｔ ｉ ｓ ｅ ｆｃ ｉ ｅ ｎ ｄｅ ｔｆ ｉ ｇ ｈｅ ｐ ｉ ｆｂ ｏｓｓ ｒ ｌｔ ｄ ｒ ｅｎｓ； ｔ ｒ ｆ ｅ ｈｉ ｓ ｕ ｍ ａ ｐ ｏ ｉ ｅ ｃ ｕ ｔ ｈｅ ｅ ｏｒ ｔ ｓ ｔ ｄｙ ｙ ｒ ｖ ｄ ａ ｌ ｅ Ｏ ｉ ｅ ｔｇ ｔ ｈｅ ｏ ｃ ｒ ｅ ｃ ｆｈｅ ｔｃ ｆｂｒ ｓｓ ｎｖ ｓ ｉａ ｅ ｔ ｃ ｕ ｒ ｎ ｅ ｏ ｐａ ｉ ｉ ｏ ｉ．
维 化早 期 生 物 效 应 的 相 关 蛋 白 提 供 实验 基 础 。方 法
大 鼠血 清生 化 指 标 和 观 察 肝 组 织病 理学 的变 化 ，提 取 大 鼠肝 细 胞 总 蛋 白 并 采 用 二 维 凝 胶 电 泳 （ － Ｅ 进 行 分 ２Ｄ ） 离 ，Ｉ ｇ ｓｅ Ｄ Ｐａｉｕ 软 件 分 析 电 泳 图谱 ，选 择 表 达 有 显 著 差 异 的 蛋 白 点进 行 基 质 辅 助 激 光 解 吸 电 ｍａ ｅ Ｍａｔｒ ｌ ｎ ｍ ２ ｔ 离 飞行 时间 质 谱 （ Ａ Ｉ Ｏ — ） 定 。结 果 大 鼠血 清 生 化 指 标 和病 理 学 结 果 提 示 肝 纤 维 化 造 模 成 功 ， Ｍ Ｉ — Ｆ ＭＳ 测 Ｄ Ｔ Ｃ Ｉ 伤 组 肝 细 胞 蛋 白 质 ２Ｄ Ｃ 损 － Ｅ图 谱 表 达 发 生 改 变 ， 差 异 点 经 ＭＡＬ Ｉ ＯＦＭＳ分 析 和 数 据 库 搜 索 ，鉴 定 Ｄ— Ｔ — 出 ４个 已知 序 列 蛋 白 。 结论 应 用 蛋 白质 组 学 技 术 筛 选 和 鉴 定 出 的 蛋 白 可 能 与 肝 纤 维 化 的 发 生 发 展 有 关 ，
ｍｏ ｅ ｗａ ｎ ｕ ｅ ｂ ｕ ｃ ｔｎ ｏ ｓ ｉｊｃｉｎ ｏ Ｉ ｎ ｅｕ ｂｏ ｈ ｍｉａ ｒ ｅ ｓｗｅｅ ｄ ｔｒ ｎ ｄ ａ ｄ ｄ ｌ ｓ ｉｄ ｃ ｄ ｙ ｓ ｂ ｕａ ｅ ｕ ｎｅ ｔ ｆＣＣ ｛ａ ｄ ｓ ｒ ｍ ｉｃ ｅ ｃｌｍａ ｋ ｒ ｒ ｅｅ ｍｉｅ ｎ ｏ
色按 照 Ａｍｅｓ ａ ｈ ｒ ｃ 公 司推 荐 的方 法进 行 ｒｈ ｍ Ｐ ａｍａｉ ａ 考染 和银 染 。用 Ｉ ｇ ｃｎ ｅ ｍａ ｅＳ ａ ｎ ｒⅡ光 学扫 描仪 扫 描 凝 胶 ，利 用分 析软 件 Ｉ ｇ ｓｅ ２ ｌｔ ｕ ｍａ ｅ Ｍａｔｒ Ｄ Ｐａｉ ｍ进 ｎ
为进 一 步 研 究 Ｃ Ｉ 发 肝 纤 维化 机 制 提 供 依 据 。 Ｃ 诱 【 关键 词 】 肝 纤 维 化 ；四 氯化 碳 ；二 维 凝 胶 电泳 ；蛋 白质 组
［ 图分 类 号 ］ Ｒ １ ５ １ 中 ３ ，
［ 献 标识 码］ Ａ 文
［ 章 编 号］ １０ —１４ ２ ０ ）３０ ４—３ 文 ０ ０７ ６ （０ ８ ０ —１６０
行点 的检 测 、背 景 消 减 、分 子 量 和 等 电 点 校 正 、
归 一化 处理 分析 蛋 白 图谱 ， 当不 同胶 匹 配 点 的相 对 含量 比值 ＞ ２或 者 ＜ ０ ５时 ，可 认 为 匹 配 点 间 ．
存 在差 异 。
基］ 丙磺 酸 盐 （ ＣＨＡＰ ） ｓ 、碘 代 乙 酰 胺 、硫 脲 购 于