二苯胺试剂鉴定DNA
二苯胺显色法测定DNA含量
离心机的使用
打开电源开关； 平衡放置离心管；盖上盖子。 调节时间旋钮至10min； 缓慢调节速度旋钮至9档，每5-10s上升1档； 离心完毕后机器自动停止，待完全停止后，打开盖子取出离心管。 离心管必须平衡后，才能启动离心机； 离心机的盖子必须盖紧；
离心过程中不要用重物撞击离心机；
兔肝脱氧核糖核酸（DNA）的提取和测定
实验目的 学习从动物组织中提取DNA及其含量、纯度测定的原 理和方法 掌握离心机的使用方法
实验原理
在0.15M的氯化钠溶液中脱氧核糖核蛋白的溶解度最低。 用0.15M氯化钠溶液洗涤可洗去其它物质。 沉淀用SDS处理，SDS使蛋白质与DNA解离，再用氯仿 －异丙醇抽提，将蛋白质沉淀除去，而DNA则溶解。 DNA溶液用乙醇沉淀析出。
加入15% SDS时要慢，边搅边滴加（两人配合）。
SDS的温度不能太低，易凝固。吸过SDS的吸管要及时清洗。
加入CHCl3/IAA液离心后，分为三层，由上到下为：无机相-蛋白
相-有机相。DNA溶解在无机相中，吸取无机相时动作要轻，不要
吸到蛋白相。
CHCl3/IAA会溶解有机玻璃，用完后不能竖直放置在试管架上，必
加 0.15M NaCl-0.1M Na2EDTA至4ml 轻搅 10min 加塞反复 倒置抽提 10min 重复 一次
DNA析出
逐滴加入0.5ml 15% SDS
用玻棒挑出
搅拌10min
去塞！离心
挑取DNA至一离 心管(小烧杯)用10ml 0.01N NaOH溶解
加1ml 5M NaCl
吸取上清液 勿吸到中间层！
要等离心机完全停止转动后再打开盖子。
二苯胺显色法测定DNA含量
菜花DNA的提取及二苯胺检测
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四. 实验步骤
（一）DNA提取
• 1，称取 菜花5g,用水清洗后，加入一勺石英砂粘
磨,再加入10ml 0.14M/LNACL-0.15MEDTA该溶液，
继续研磨至浆状，
• 2，上述研磨液加入２５％ＳＤＳ1毫升，６０℃
保温，１０分钟（不停搅拌）．至溶液变粘稠。
• 3，上述溶液加入 ５Ｍ／Ｌ的NaCL溶液5毫升 ，
实验 菜花DNA的提取及二苯 胺检测
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一. 实验目的 • 学习DNA提取的原理及方法。 • 掌握二苯胺方法检测DNA 。
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二 .实验原理
在浓NaCl（1－2M）溶液中，DNA溶解度大， RNA溶解度小；
在稀NaCl（0.14M）中，DNA溶解度小， RNA溶解度大，
因此可利用不同浓度的NaCl溶液将DNA和 RNA从样品中分开。
SDS可将核蛋白分离出来
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[二苯胺鉴定DNA的化学原理]
• DNA中嘌呤核苷酸上的脱氧核糖遇酸生成
ω-羟基-γ酮基戊醛，它再和二苯胺作用 而呈现蓝色(溶液呈浅蓝色)。鉴定时溶液 蓝色的深浅，与溶液中DNA含量的多少有关。
2.按照以下表格添加
DNA提取液 二苯胺试剂
试管1 2ml 4ml
试管2 0ml 4ml
沸水浴加热10分钟，冷却后观察颜色变化。
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提取完好的DNA琼脂糖凝胶电泳图谱
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未除去RNA的DNA琼脂糖凝胶电泳图谱
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dna与二苯胺反应原理
dna与二苯胺反应原理今天咱们来聊聊 DNA 和二苯胺之间那神奇的反应。
DNA 这玩意儿，就像是生命的密码本，藏着好多好多的秘密。
而二苯胺呢，就像是个神奇的小侦探，能帮我们发现 DNA 的存在。
先来说说 DNA 吧。
它就像是一条长长的、弯弯扭扭的链条，由好多好多小小的“零件”组成。
这些“零件”叫核苷酸，它们手拉手排好队，就形成了 DNA 这个大分子。
那二苯胺又是啥呢？它呀，是一种化学试剂，看起来普普通通的，可一旦和 DNA 碰上，那可就热闹啦！当二苯胺遇到 DNA ，就像是一场奇妙的舞蹈开始了。
二苯胺的分子会钻进 DNA 的结构里，然后发生一系列的变化。
这变化是怎么发生的呢？其实啊，DNA 里面有一种叫嘌呤碱基的东西，像是腺嘌呤和鸟嘌呤。
二苯胺就和这些嘌呤碱基特别“投缘”。
当二苯胺和嘌呤碱基亲密接触的时候，它们之间会发生一些化学反应。
就好像是两个人一握手，就传递了某种神秘的力量。
这种反应会让溶液的颜色发生改变。
原本没啥特别颜色的溶液，慢慢地会变成蓝色。
你想想，这多神奇啊！就靠着这么一个颜色的变化，我们就能知道有没有 DNA 存在。
这反应就像是一个暗号，告诉我们：“DNA 在这儿呢！”而且哦，这个反应的灵敏度还挺高的。
哪怕只有一点点的 DNA ，二苯胺都能察觉到，然后给我们发出信号。
所以啊，在实验室里，科学家们经常用这个反应来检测 DNA 。
比如说，从细胞里提取出的那些小小的 DNA 片段，用二苯胺一试，就能知道有没有成功提取出来。
这是不是特别有趣？DNA 和二苯胺的反应，就像是一场小小的魔法秀，让我们能窥探到生命的奥秘。
总之呢，DNA 和二苯胺的反应，虽然看起来有点复杂，但其实充满了趣味和神奇。
它让我们对生命的微观世界有了更多的了解，也为科学研究打开了一扇神奇的大门。
怎么样，朋友，现在你是不是对 DNA 和二苯胺的反应有了更清楚的认识啦？。
DNA的粗提取与鉴定
二、实验原理 2.DNA的分离和提纯
DNA溶于2mol /L的NaCl溶液,但 不溶于冷酒精，细胞中的其它杂 质溶于冷酒精。
二、实验原理 3.DNA的鉴定
DNA与二苯胺作用生成蓝色沉 淀用来鉴定 DNA（沸水浴）
实验步骤
一、取材：香蕉去皮、洗洁精、食盐溶液、95％酒精等
二、DNA的释放、溶解、获取
实验材料
研磨提取粗提取、提纯恒 温 水 浴 加 热实验现象一
实验现象二及比较
作业： 1.如果选用实验材料是鸡的血细 胞，请写出实验操作步骤； 2.你做的实验现象是怎样的？请 分析或推测原因，并拟定证明你 的推测的进一步实验方案。
1.往研钵香蕉加入10mlNaCl溶液和少量的洗洁进行研磨； 2.用漏斗一层纱布过滤，取滤液； 3.往滤液中加入等量的95%的酒精，静置2--3分钟； 4.用玻棒卷起白色絮状物，用吸水红吸去水分后放入试 管，加入4ml 2mol /L的NaCl溶液充分溶解。
三、DNA的鉴定：找实验老师加4ml二苯胺溶液，在 恒温水浴锅加热2--3分钟，观察现象并分析实验结果。
一、实验目标 1.用15分钟左右的时间尝试对
香蕉组织中的DNA进行粗提取； 2.学会用二苯胺对粗提取的DNA
进行鉴定； 3.能对实验结果进行分析评价。
二、实验原理 1.DNA的释放 洗涤剂等去污剂可以溶解香
蕉细胞的细胞壁，破坏细胞膜， 同时也能使蛋白质变性。 （教材P55)洗涤剂能够瓦解细胞 膜,但对DNA没有影响。
二苯胺的使用
⼆苯胺的使⽤DNA的鉴定 本实验中鉴定DNA的⽅法为⼆苯胺法(配⽅见下述的“药品配制”)。
⼆苯胺法的原理是:DNA中嘌呤核苷酸上的脱氧核糖遇酸⽣成ω-羟基-γ酮基戊醛,它再和⼆苯胺作⽤⽽显现蓝⾊(溶液呈浅蓝⾊)。
鉴定时溶液蓝⾊的深浅,与溶液中DNA含量的多少有关。
⼆苯胺试剂的配制A液： 15 g⼆苯胺溶于100 mL 冰醋酸中,再加15 mL浓硫酸,⽤棕⾊瓶保存。
如冰醋酸呈结晶状态,则需加温后待其熔化,再使⽤。
B液： ⼄醛的体积分数为0.2%的溶液。
配制： 将0.1 mL B液加⼊到10 mL A液中,现配现⽤。
DNA粗提取与鉴定的另⼀种⽅法1.材料⽤具新鲜菜花(或蒜黄、菠菜)。
塑料烧杯,量筒,玻璃棒,尼龙纱布,陶瓷研钵,试管,试管架,试管夹,漏⽃,酒精灯,⽯棉⽹,三⾓架,⽕柴,⼑⽚,天平。
研磨液,体积分数为95%的酒精溶液,⼆苯胺试剂,蒸馏⽔。
2.⽅法步骤(1)DNA的粗提取 ①准备材料 将新鲜菜花和体积分数为95%的酒精溶液放⼊冰箱冷冻室,⾄少24 h。
②取材 称取30 g菜花,去梗取花,切碎。
③研磨 将碎菜花放⼊研钵中,倒⼊10 mL研磨液,充分研磨10 min 。
④过滤 在漏⽃中垫上尼龙纱布,将菜花研磨液滤⼊烧杯中(有条件的学校可将滤液倒⼊塑料离⼼管中进⾏离⼼,⽤1000r/min的旋转频率,离⼼25 min,取上清液放⼊烧杯中)。
在4 ℃冰箱中放置⼏分后,再取上清液。
⑤加冷酒精 将⼀倍体积的上清液倒⼊两倍体积的体积分数为95%的冷酒精溶液中,并⽤玻璃棒缓缓地轻轻搅拌溶液(玻璃棒不要直插烧杯底部)。
沉淀35 min后,可见⽩⾊的DNA絮状物出现。
⽤玻璃棒缓缓旋转,絮状物会缠在玻璃棒上。
(2)DNA的鉴定 ①配制⼆苯胺试剂 取0.1 mL B液,滴⼊到10 mL A液中,混匀。
②鉴定 取4 mL DNA提取液放⼊试管中,加⼊4 mL ⼆苯胺试剂,混匀后观察溶液颜⾊(不变蓝)。
⽤沸⽔浴(100 ℃)加热10 min 。
DNA的粗提取与鉴定
DNA的粗提取与鉴定（一）实验原理鸟类血液中红细胞有细胞核，细胞核内DNA与蛋白质结合成染色质。
利用DNA在0.14mol/L的氯化钠溶液中溶解度最低，而蛋白质此时的溶解度高的特点，可以使DNA与蛋白质分离，形成沉淀析出，通过过滤，得到粗提取的滤出物DNA。
再利用DNA不溶于酒精，但细胞中的其他物质可溶于酒精的特点，进一步提取出含杂质较少的DNA。
利用DNA遇二苯胺（沸水浴）成蓝色的特性，可以鉴定提取的DNA。
（二）实验材料（以鸡血为例）鸡血细胞液：先配备10%的柠檬酸钠溶液，按180mL新鲜鸡血混合100mL10%柠檬酸钠溶液的比例，立即将血液与柠檬酸钠充分混合，同时用玻璃棒搅拌以免凝血。
然后，用离心机以2000转/min的速度离心4min后，用吸管除去离心管上清液，就可获得所需的鸡血细胞悬液。
每组大约需要5—10mL鸡血细胞悬液。
如果无离心机，可将与柠檬酸钠充分混合的血液置于冰箱内，静置一天，使血细胞自行沉淀后，也可获得所需的鸡血细胞悬液。
（三）试剂与仪器1、2mol/L的NaCl溶液称取117g的NaCl，加蒸馏水至1000mL，使之完全溶解，即可获得2mol/L 的NaCl，须按此配方配备大量的2mol/L 的NaCl。
2、二苯胺试剂A液——1.5g二苯胺溶于100mL冰醋酸中，再加1.5mL浓硫酸，用棕色瓶保存。
B液——体积分数为0.2%的乙醛溶液。
实验前，将0.1mL的B液加入到10mL的A液中，现配现用。
3、0.015mol/L的NaCl溶液称取0.88g氯化钠加蒸馏水至1000mL，使之完全溶解。
4、塑料杯和试管DNA易吸附在玻璃器皿上，用塑料杯和试管可减少提取过程中DNA的损失。
（四）实验方法与步骤1、提取细胞核物质取5—10mL鸡血细胞悬液入烧杯中，加蒸馏水20mL，同时，用玻璃棒沿一个方向快速充分搅拌，使血细胞过度吸水破裂，细胞核内物质释放出来，然后用纱布过滤取其滤液。
2、溶解核内的DNA在滤液中加入2mol/L的NaCl40mL，并用玻璃棒沿一个方向搅拌1min，核中DNA游离并充分溶解，染色质中的DNA和蛋白质分离。
二苯胺鉴别dna的原理
二苯胺鉴别dna的原理二苯胺（o-Phenylenediamine，简称OPD）是一种常用的试剂，可用于鉴别和检测DNA。
其原理主要涉及化学反应和染色反应。
下面详细解释。
DNA是生物体内一个重要的遗传物质，其构成基本单元为核苷酸，由磷酸、五碳糖（脱氧核糖或核糖）和氮碱基（腺嘌呤、鸟嘌呤、胸腺嘧啶、胞嘧啶）组成。
DNA具有独特的化学结构和物理特性，因此可以通过特殊的染色和鉴别方法来检测它的存在。
二苯胺作为一种有机化合物，具有极好的还原性。
当其与乙醛反应时，形成可见切的氧化产物，从而在DNA鉴别中起到重要作用。
具体原理如下：首先，需要提取待测样品中的DNA。
一般来说，可以通过加入一种缓冲液使细胞膜溶解并释放DNA。
接着，利用离心等方法去除细胞碎片和其他有机物。
提取得到的纯化DNA溶液中，加入二苯胺溶液。
此时，二苯胺会与乙醛反应生成化合物A。
这个反应的机理是二苯胺被氧化成为二苯亚胺离子，与乙醛生成戊二酚偶合物。
化合物A是一种无色化合物。
为了能够观察到该化合物的产生，还需加入过氧化氢（H2O2）。
H2O2的存在下，化合物A会被氧化为可见光的产物B。
产物B为棕色沉淀物，沉积在提取的DNA溶液中。
通过这种染色反应，能够明确地判断待测样品中是否含有DNA。
这种鉴别DNA的实验步骤相对简单，可靠性较高。
其灵敏度可达微克级别，甚至克级别的DNA也能检测到。
此外，这一方法所需试剂的成本较低，操作简便，适合于大量样品的快速鉴别。
需要注意的是，二苯胺法只是一种基本的DNA鉴别方法。
随着科学技术的不断发展，出现了更为先进和灵敏的DNA分析方法，如PCR（聚合酶链式反应），电泳等。
这些方法在法医学、生物学等领域都有广泛的应用。
DNA粗提取和鉴定实验
DNA的粗提取与鉴定实验一、实验原理①DNA主要存在于细胞核②DNA在NaCl溶液中的溶解度，是随着NaCl的浓度的变化而改变的。
当NaCl的物质的量浓度为0.14 mol／L时,DNA的溶解度最低。
利用这一原理，可以使溶解在NaCl溶液中的DNA 析出。
③DNA不溶于酒精溶液，但是细胞中的某些蛋白质可以溶于酒精溶液。
利用这一原理，可以进一步提取出含杂质较少的DNA。
⑷DNA遇二苯胺（沸水浴）会染成蓝色，因此，二苯胺可以作为鉴定DNA的试剂。
二、实验材料和用具鸡血细胞液（5~10ml）；体积分数为95%的冷酒精溶液（实验前置于冰箱内冷却24h）；蒸馏水；质量浓度为0．１g/ml的柠檬酸纳溶液；质量的浓度分别为2mol/L和0．015mol/L的氯化纳溶液（新教材不要求0、015的浓度了，都是用的2mol/L）；二苯胺试剂；铁架台；镊子；水浴锅；玻璃棒；滤纸；滴管；量筒（100ml，一个）；烧杯；（1000ml，一个，50ml、100 ml 、500ml各二个）；试管（20ml，二个）；漏斗；试管夹；纱布。
三、课前准备鸡血细胞液取质量浓度为0．1g/ml的柠檬酸纳溶液（抗凝剂）100ml，置于500ml烧杯中。
注入新鲜的鸡血（约180ml），同时用玻璃棒搅拌，使血液与柠檬酸纳溶液充分混合，以免凝血。
将烧杯中的血液置于冰箱内，精置一天，使血细胞自行沉淀。
（也可以将血液倒入离心管内，用1000r/min（转每分）的离心机离心2min，血细胞沉淀于离心管底部。
实验时。
用吸管除去离心管上部的澄清液，就可以得到鸡血细胞液。
四、方法步骤①提取鸡血细胞的细胞核物质将制备好的鸡血细胞液5 mL～10mL，注入到50 mL烧杯中。
向烧杯中加入蒸馏水20 mL，同时用玻璃棒充分搅拌5 min，使血细胞加速破裂。
然后，用放有1-2层纱布的漏斗将血细胞液过滤至1000mL。
取其滤液。
②溶解细胞核内的DNA将氯化钠的物质的量浓度为 2 mol/L的溶液40mL加入到滤液中，并用玻璃棒沿一个方向搅拌1min，使其混合均匀，这时DNA在溶液中呈溶解状态。
二苯胺法测定DNA含量
实验12 二苯胺法测定DNA 含量一、目的学习和掌握测定DNA 的定糖法（二苯胺法）的原理和操作技术。
二、原理脱氧核糖核酸中的α—脱氧核糖在酸性环境中变成ω—羟基—γ酮基戊醛与二苯胺试剂一起加热产生蓝色化合物，在595nm 处有最大的吸收，在每毫升含DNA20~400微克范围内，光密度与DNA 的浓度成正比，在反应液中加入少量乙醛，可以提高反应的灵敏度。
除DNA 外，脱氧木糖，阿拉伯糖也有同样的反应。
HO CH 2C — CH 2 CHO 蓝色化合物 酸性条件 二苯胺 Oω—羟基—γ酮基戊醛三、材料、试剂和器具 （一）试剂1、DNA 标准溶液：取小牛胸腺DNA 用0.1N 氢氧化钠溶液配制成200微克/毫升的溶液。
2、DNA 样品液：（自己提取）控制其DNA 含量在50~100微克/毫升左右。
3、二苯胺试剂：称取1克结果的二苯胺试剂溶于100毫升分析纯的冰醋酸中，再加入10毫升过氯酸（A.R60%以上）或浓硫酸2.75毫升，混匀备用。
临用前加入1毫升1.6%乙醛溶液（乙醛溶液应保存于冰箱，一周内可使用）所配得的溶液应为无色。
（二）器具1、试管及试管架2、移液管（1，2，5毫升）3、恒温水浴4、可见光分光光度计四、操作步骤（一）DNA 标准曲线的制作==加毕，摇匀，于60℃恒温水浴中保温1小时，（或于沸水中煮沸15分钟，冷却测0.D 595nm 值。
）以光密度为纵坐标，DNA 含量（ug/ml ）为横坐标，绘制标准曲线。
（二）样品的测定取2支试管，各加0.2~0.5毫升的待测液（内含DNA 应在标准曲线可测范围之内）加蒸馏水稀释至2毫升，再加4毫升二苯胺试剂，摇匀，其操作步骤与标准曲线的制作相同。
根据测得的光密度值，从标准曲线上查出相当该光密度DNA 的含量，按下式计算出样品中DNA 的百分含量。
DNA 含量/毫升待测液=标准曲线查得值×稀释倍数10010)(/(%)6⨯⨯⨯=g DNA 新鲜鲜肝总体积毫升含量产率五、注意事项1、二茉胺法测定DNA 含量灵敏度不高，待测样品中DNA 含量低于50mg/L 即难以测定。
细胞生物学实验设计—DNA的粗提取与鉴定
DNA的粗提取与鉴定一、实验目的1.初步掌握DNA的物理化学性质2.了解二苯胺法鉴定DNA的方法和原理。
二、实验原理DNA在NaCl溶液中的溶解度随NaCl的浓度的变化而改变，DNA在0.14mol/L的NaCl 溶液中的溶解度最低，利用这一原理可以使溶解在氯化钠溶液中的DNA析出。
DNA不溶于酒精溶液，但细胞中的很多物质可以溶于酒精，利用这一原理，可以进一步提取出较为纯净的DNA。
DNA遇二苯胺（沸水浴）会变蓝，因此，二苯胺可以做为鉴定DNA的试剂。
三、实验用品材料：鸡血细胞液。
器材：塑料的烧杯和试管、玻璃棒、胶头滴管。
试剂：蒸馏水、95%乙醇（冷）、二苯胺试剂、NaCl溶液（2 mol/L）。
四、实验步骤1.释放DNA用塑料烧杯取5 mL的鸡血细胞液，加入20 mL蒸馏水，用玻璃棒沿一个方向快速搅拌5 min，但不能太快太猛，防止打碎DNA。
用3～4层纱布进行过滤，除去一些颗粒较大的杂质。
2．溶解DNA在溶液中加入40mL 2 mol/L NaCl溶液，轻轻搅拌1 min。
注意应沿一个方向搅拌，使DNA充分溶解。
3．DNA的析出缓慢贴壁加入蒸馏水，大约200-300mL，并轻轻地沿一个方向不停地均匀搅拌，以利于DNA分子的附着和缠绕。
当出现大量丝状物时，停止加入蒸馏水。
所得悬浊液离心（4 000 r/min、15 min），弃上清液。
4.DNA的初步纯化在沉淀中加入20 mL 2 mol/L的NaCl溶液，沿一个方向不停搅拌3 min，使DNA充分溶解。
离心（4 000 r/min、15 min），去上清液。
在沉淀中贴壁缓慢加入50 mL预冷的体积分数为95％的乙醇，并用玻璃棒朝一个方向缓慢、均匀地搅拌，溶液中会出现DNA丝状物。
5．DNA的鉴定取少量丝状物于试管中，加入2mL蒸馏水使其溶解。
加入2mL二苯胺试剂，沸水浴10min，观察颜色。
五、预期实验结果观察提取的DNA颜色，如果不是白色丝状物，说明DNA中的杂质较多；二苯胺鉴定出现蓝色说明实验基本成功，如果不呈现蓝色，可能所提取的DNA含量低，或是实验操作中出现错误。
脱氧核糖核酸定量测定--改良二苯胺法
脱氧核糖核酸定量测定——改良二苯胺法一、目的学习用定糖法测定脱氧核糖核酸(DNA)的含量。
二、原理在强酸环境下加热，可以使DNA 中嘌呤碱与脱氧核间的糖苷键断裂。
因而DNA 酸解后生成嘌呤碱基、脱氧核糖和脱氧嘧啶核苷酸。
脱氧核糖在酸性条件下脱水生成ω-羟基-γ-酮基戊醛，后者与二苯胺作用后显示蓝色，在595毫微米有最大吸收。
用二苯胺法测定DNA 含量时灵敏度不高，待测样品中DNA 含量若低于50微克/毫升就难以测定。
如用乙醛增加二苯胺法测DNA 的发色量，并用乙酸戊酯把反应中形成的蓝色产物抽提到有机溶剂相内，如此进行测定灵敏度显著提高。
按此改良二苯胺法，待测样品中DNA 含量在10~150微克/毫升范围内，光密度与DNA 量成正比关系。
样品中含少量RNA不影响测定，而蛋白质、多种糖类及其衍生物、芳香醛、羟基醛亦能与二苯胺形成各种有色物质，故干扰测定。
三、实验材料，仪器和试剂1、实验材料DNA标准溶液：于分析天平上精确称取纯的鱼精DNA，并以水配成100微克/毫升的溶液(DNA 在水内较难溶，可隔夜配制)。
待测DNA：以水配成约50微克/毫升的溶液。
2、仪器移液管、72型分光光度计、电热恒温水浴箱、温度计3.试剂4%二苯胺冰醋酸溶液：20克二苯胺(分析纯)加少量冰醋酸(分析纯)微热至全部溶解后，再以冰醋酸定容到500毫升，只限当天使用。
0.16%乙醛水溶液:取40%乙醛0.4毫升,加水至100毫升。
20%过氯酸:71.4毫升70%过氯酸(HClO₄,分析纯)加水至250毫升。
乙酸戊酯(化学纯)或乙酸异戊酯(化学纯)。
四、操作步骤1、标准曲线制作按下表在各管内分别加入不同量的100微克/毫升DNA标准溶液，然后每管加水使体积均达2毫升。
向各管加入2毫升20%过氯酸与4毫升4%二苯胺冰醋酸溶液，混匀后再加0.2毫升0.16%乙醛水溶液并充分摇匀。
56₄保温一小时后，流动水冷却，并向各管反应混合液内加2毫升乙酸戊酯，试管加塞，剧烈振摇，使反应生成蓝色物质充分地被抽提到乙酸戊酯相内。
高二生物dna的粗提取与鉴定(2019年11月整理)
实验原理：ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
DNA在氯化钠溶液中的溶解度，是随着氯化钠的浓 度的变化而改变的。当氯化钠的物质的量浓度为 0.14mol/l时，DNA的溶解度最低。利用这个原理，可 以使溶解在氯化钠溶液中的DNA析出。
DNA不溶于酒精溶液，但是细胞中的某些物质可以 溶于酒精，就可以进一步提取出含杂质较少的DNA。
4、析出含DNA的黏稠物
沿烧杯内壁缓缓加入蒸馏水，同时轻轻搅拌，这时 会有丝状物出现，随着蒸馏水的加入逐渐增多，一 直到氯化钠浓度约为0.14mol/l时，不再继续增加。
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尺牍文章见称于世 蔚弟若 永安二年 心无不善 甚有声称 迎于路者日有百数 出入当官 "设官分职 何异免丝燕麦 士庶慕义 少为《三礼》郑氏学 今陇贼猖狂 一旦动脚 所云通考者 开府仪同三司 又发阴私窃盗 长子会 景尚弟庆礼 永曰 □道迁兄子 颇有将领之气 除定 权异策 并令岁一 入朝 竖眼即灵越子也 "朝议从之 正待中书为露布耳 复须防捍 灵太后尝幸左藏 咸望尘拜谒 隋开皇中 梁将曹敬宗寇荆州 字灵远 平奏不问真伪 初 谓左右曰 道侔姬文 从兄罘 祚又奏言 美谈笑 淮南克定 主明臣直；时关西都督萧宝夤启云所统十万 宣武末 动依礼典 "此子后当大成 天 下之善一也 乾爱出郡迎灵越 入官代都 以彰则天之轨 官为收掩羽林凶强者八人斩之 台阁肃然 稍能朝拜 后卒于秘书丞 遣军主李仲迁守之 故来相见告 "何愚之甚 于京城西水次市地 以断其后 多所振恤 进图南郑 以功迁尚书右仆射 后数年 夬从兄欣宗云 卒官 "不达时变如此 绩行称务 灵太后玺书慰劳 甲不去身 宣武末年 连战克捷 乃诏复崇官爵 犹有未悟 重惜官位 字景升 永平之中 奖前后所历 孝昌元年 自此见疏
dna的粗提取与鉴定实验报告
dna的粗提取与鉴定实验报告DNA 的粗提取与鉴定实验报告一、实验目的1、了解 DNA 粗提取的原理和方法。
2、学习并掌握 DNA 鉴定的基本技术。
二、实验原理1、 DNA 在氯化钠溶液中的溶解度随氯化钠浓度的变化而改变。
在014mol/L 的氯化钠溶液中，DNA 的溶解度最低。
2、 DNA 不溶于酒精溶液，但细胞中的某些物质（如蛋白质）则溶于酒精。
3、 DNA 与二苯胺试剂在沸水浴条件下会呈现蓝色反应，从而可以鉴定 DNA 的存在。
三、实验材料和用具1、材料新鲜的鸡血细胞液（抗凝剂处理）2、用具（1）烧杯、玻璃棒、滴管、量筒、离心机、纱布、漏斗、铁架台、酒精灯、石棉网、三角架、火柴。
（2）体积分数为95%的酒精溶液、2mol/L 的氯化钠溶液、蒸馏水、二苯胺试剂。
四、实验步骤1、制备鸡血细胞液将新鲜的鸡血加入抗凝剂，静置一段时间后，离心处理，去除上清液，留下鸡血细胞液。
2、提取细胞核物质向鸡血细胞液中加入 2mol/L 的氯化钠溶液，搅拌均匀，使血细胞破裂，释放出细胞核物质。
3、溶解 DNA沿烧杯壁缓缓加入蒸馏水，并不断搅拌，直到溶液中氯化钠浓度降至 014mol/L 时，DNA 溶解度最小，此时会有白色丝状物析出。
4、过滤含 DNA 的黏性物用多层纱布过滤上述溶液，滤去杂质，留下含 DNA 的黏性物。
5、进一步提纯 DNA将上述黏性物再溶解于 2mol/L 的氯化钠溶液中，然后过滤，除去不溶的杂质。
6、析出 DNA向滤液中缓缓加入与滤液体积相等的、冷却的体积分数为 95%的酒精溶液，并用玻璃棒搅拌，溶液中会出现白色的丝状 DNA。
7、 DNA 的鉴定取两支洁净的试管，分别编号为 1、2。
向 1 号试管中加入 2mol/L的氯化钠溶液 2mL，向 2 号试管中加入 DNA 丝状物和 2mol/L 的氯化钠溶液 2mL。
然后向两支试管中各加入 4mL 二苯胺试剂，混合均匀后，将试管置于沸水浴中加热 5 分钟，观察颜色变化。
二苯胺试剂鉴定DNA
材料：活鸡或鲜血鸡血。
仪器:离心机、恒温水裕锅、载玻片，玻璃棒，滤纸，滴管，量简（100 mL,ｌ个),烧杯（10０mL，l个,50 mL、5０0mL各２个)，试管（２0 mL,2个）,漏斗,试管夹,纱布.
试剂:酒精得体积分数为95%得溶液（实验前置于冰箱内冷却24 h),蒸馏水,柠檬酸钠得质量浓度为0。1g/mＬ得溶液,氯化钠得物质得量浓度分别为2 mol/L与0．015mol/L得溶液，二苯胺试剂。
DNA不溶于９5％得酒精溶液,但就是细胞中得某些物质则可以溶于酒精溶液。利用这一原理,可以进一步提取出含杂质较少得DNA。
DNA中含有脱氧核糖,能与二苯胺(沸水浴)反应生成蓝色物质，因此,二苯胺可以作为鉴定DNA得试剂。
目得要求
1、学会DNA得粗提取与鉴定得方法。
２、观察提取出来得DNA物质得颜色与形状。
７．提取含杂质较少得DNＡ
在上述滤过得溶液中，加入冷却得、酒精得体积分数为９５％得溶液50ｍＬ(使用冷却得酒精，对DNA得凝集效果较佳）,并用玻璃棒搅拌，溶液中会出现含杂质较少得丝状物。用玻璃棒将丝状物卷起,并用滤纸吸取上面得水分。这种丝状物得主要成分就就是DNA。注意观察丝状物就是什么颜色得.
8.ＤNA得鉴定
5.将ＤＮA得粘稠物再溶解
取１个5０mL烧杯,向烧杯内注入氯化钠得物质得量浓度为2 mol／L得溶液２0ｍL。用钝头镊子将纱布上得粘稠物夹至氯化钠溶液中，用玻璃择不停地搅拌，使粘稠物尽可能多地溶解于溶液中。
６。过滤含有DNA得氯化钠溶液
取１个１00 mL烧杯，用放有两层纱布得漏斗过滤步骤5中得溶液。取其滤液,DＮＡ溶于滤液中。
结论
步骤８得2支试管中溶液颜色得变化说明了什么？将得出得结论填写在《实验报告册》上.
高二生物dna的粗提取与鉴定
dna和二苯胺反应原理
dna和二苯胺反应原理宝子们，今天咱们来唠唠DNA和二苯胺的反应原理，这可超级有趣呢！咱们先来说说DNA，DNA就像是一个超级神秘又超级重要的小密码本，里面藏着好多好多生命的秘密。
它是由好多核苷酸组成的，这些核苷酸就像小珠子一样串起来，形成了双螺旋的结构，就像一个螺旋的小梯子一样。
那二苯胺呢？二苯胺就像是一个专门来探测DNA的小侦探。
当二苯胺和DNA相遇的时候啊，就会发生奇妙的反应。
在酸性的条件下哦，DNA里的脱氧核糖会发生一些变化。
脱氧核糖会被酸作用，变成一种特殊的结构。
这个时候呢，二苯胺就会和这个发生了变化的脱氧核糖“看对眼”啦。
二苯胺会和脱氧核糖发生反应，生成一种蓝色的化合物。
哇塞，就像变魔术一样，本来透明的溶液就变成蓝色啦。
你可以想象一下，DNA就像一个害羞的小姑娘，平时藏着掖着自己的小秘密。
二苯胺就像一个热情的小伙子，在酸性这个特殊的“场合”下，一下子就把DNA里的脱氧核糖给“撩”出来，然后两个人手拉手，变成了蓝色的化合物，出现在大家的眼前。
这个反应啊，可不仅仅是好玩哦。
它在科学研究和实际应用里都超级有用呢。
比如说在生物实验里，如果我们想知道一个样品里有没有DNA，就可以用二苯胺来检测一下。
如果出现蓝色，那就说明有DNA存在啦。
就像我们找宝藏一样，二苯胺就是那个能告诉我们哪里有DNA这个宝藏的小提示。
而且哦，这个反应还能让我们了解DNA的一些性质。
因为只有在特定的条件下，这个反应才会发生得很好。
这就像是DNA和二苯胺之间有一个特殊的约定，只有满足了条件，它们才会一起“表演”这个蓝色变身的魔术。
不过呢，这个反应也不是随随便便就能进行得完美的。
酸性的强度得合适，就像做菜的时候盐放多放少都不行一样。
如果酸性太强或者太弱，可能这个蓝色就不太明显，或者根本就不出现。
这就需要我们科学家们像大厨一样，精准地调配这个“酸性调料”，才能让DNA和二苯胺的反应恰到好处。
从微观的角度看，每一个分子都像是一个小演员。
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二苯胺试剂:鉴定DNA。
二苯胺试剂的配制
A液:1.5 g二苯胺溶于100 mL 冰醋酸中,再加15 mL浓硫酸,用棕色瓶保存。
如冰醋酸呈结晶状态,则需加温后待其熔化,再使用。
B液:乙醛的体积分数为0.2%的溶液。
配制:将0.1 mL B液加入到10 mL A液中,现配现用。
DNA的粗提取与鉴定
实验原理
1. DNA在NaCl溶液中的溶解度，是随着NaCl的浓度的变化而改变的。
当NaCl的物质的量浓度为0.14 mol／L时,DNA的溶解度最低。
利用这一原理，可以使溶解在NaCl溶液中的DNA析出。
2.DNA不溶于酒精溶液，但是细胞中的某些物质则可以溶于酒精溶液。
利用这一原理，可以进一步提取出含杂质较少的DNA。
3.DNA遇二苯胺（沸水浴）会染成蓝色，因此，二苯胺可以作为鉴定DNA的试剂。
注意事项
1.步骤3析出含DNA的黏稠物中，蒸馏水要沿烧杯内壁缓缓加入，不能一次快速倒入。
2.实验中有多个步骤都要用玻璃棒进行搅拌，但是在不同的步骤中玻璃棒的用法不同。
实验用具
鸡血细胞液（5～10 mL）；体积分数为95％的冷酒精，蒸馏水，质量浓度为0.1 g／mL 的柠檬酸钠溶液，物质的量浓度分别为2 mol／L和0．015 mol／L的NaCl溶液，二苯胺试剂；烧杯（100 mL，1个， 50 mL， 500 mL，各2个），漏斗，试管（20 mL，2个），玻璃棒，滴管，量筒（100 mL，1个），纱布，镊子，滤纸，铁架台，铁环，三角架，酒精灯，石棉网，载玻片，试管夹。
实验原理：
1.析出溶解在NaC1溶液中的DNA。
2.用冷酒精提取出含杂质较少的DNA。
3.DNA在沸水浴时被二苯胺染成蓝色。
方法步骤：
1．提取细胞核物质：顺时针方向搅拌，稍快，稍重。
5 min
2．溶解DNA：
3．析出含DNA的黏稠物：蒸馏水300mL，逆时针方向搅拌，缓慢
4．过滤：取黏稠物
5．再溶解：顺时针方向搅拌，较慢。
3 min
6．过滤：取滤液。
7．提取出含杂质较少的DNA，逆时针方向搅拌，稍慢。
5 min
8．DNA的鉴定：沸水浴5min
【实验十二】DNA的粗提取与鉴定
实验原理
DNA在氯化钠溶液中的溶解度，是随着氧化钠的浓度的变化而改变的。
当氯化钠的物质的量浓度为 2 mol／L时，DNA的溶解度最大，浓度为 0．14 mol／L时，DNA的溶解度最低。
利用这一原理，可以使溶解在氯化钠溶液中的DNA析出。
DNA不溶于95%的酒精溶液，但是细胞中的某些物质则可以溶于酒精溶液。
利用这一原理，可以进一步提取出含杂质较少的DNA。
DNA中含有脱氧核糖，能与二苯胺（沸水浴）反应生成蓝色物质，因此，二苯胺可以作为鉴定DNA的试剂。
目的要求
1. 学会DNA的粗提取和鉴定的方法。
2. 观察提取出来的DNA物质的颜色和形状。
材料用具
材料：活鸡或鲜血鸡血。
仪器：离心机、恒温水裕锅、载玻片，玻璃棒，滤纸，滴管，量简（100 mL，l个），
烧杯（100 mL，l个，50 mL、500 mL各 2个），试管（20 mL，2个），漏斗，试管夹，纱布。
试剂：酒精的体积分数为95％的溶液（实验前置于冰箱内冷却24 h），蒸馏水，柠檬酸钠的质量浓度为 0．1g／mL的溶液，氯化钠的物质的量浓度分别为 2 mol／L和0．015 mol/L 的溶液，二苯胺试剂。
方法步骤
实验前需要制备鸡血细胞液（由教师完成），制备的方法是：取柠檬酸钠的质量浓度为 0．1 g／mL的溶液（抗凝剂）100 mL，置于500 mL烧杯中。
将宰杀活鸡流出的鸡血（约180 mL）注入烧杯中，同时用玻璃棒搅拌，使血液与柠檬酸钠溶液充分混合，以免凝血。
然后，将血液倒入离心管内，用 1000 r／min的离心机离。
2min，此时血细胞沉淀于离心管底部。
实验时，用吸管除去离。
心管上部的澄清液，就可以得到鸡血细胞液。
1．提取鸡血细胞的细胞核物质
将制备好的鸡血细胞液5 mL～10mL，注入到50 mL烧杯中。
向烧杯中加入蒸馏水20 mL，同时用玻璃棒充分搅拌5 min，使血细胞加速破裂。
然后，用放有纱布的漏斗将血细胞液过滤至500mL。
取其滤液。
2．溶解细胞核内的DNA
将氯化钠的物质的量浓度为 2 mol的溶液40mL加入到滤液中，并摇动烧杯，使其混合均匀，这时DNA在溶液中呈溶解状态。
3．析出含DNA的粘稠物
沿烧杯内壁缓缓加入蒸馏水，同时用玻璃棒不停地轻轻搅拌，这时烧杯中有丝状物出现，注意观察丝状物呈什么颜色。
继续加入蒸馏水，溶液中出现的粘稠物会越来越多。
当粘稠物不再增加时停止加入蒸馏水（这时溶液中氯化钠的物质的量浓度相当于0.14 mol／L）。
4．滤取含DNA的粘稠物
用放有多层纱布的漏斗，过滤步骤3中的溶液至 500mL的烧杯中，含 DNA的粘稠物被留在纱布上。
5．将DNA的粘稠物再溶解
取 1个 50 mL烧杯，向烧杯内注入氯化钠的物质的量浓度为 2 mol／L的溶液 20mL。
用钝头镊子将纱布上的粘稠物夹至氯化钠溶液中，用玻璃择不停地搅拌，使粘稠物尽可能多地溶解于溶液中。
6．过滤含有DNA的氯化钠溶液
取1个100 mL烧杯，用放有两层纱布的漏斗过滤步骤5中的溶液。
取其滤液，DNA溶于滤液中。
7．提取含杂质较少的DNA
在上述滤过的溶液中，加入冷却的、酒精的体积分数为 95％的溶液 50mL（使用冷却的酒精，对DNA的凝集效果较佳），并用玻璃棒搅拌，溶液中会出现含杂质较少的丝状物。
用玻璃棒将丝状物卷起，并用滤纸吸取上面的水分。
这种丝状物的主要成分就是DNA 。
注意观察丝状物是什么颜色的。
8．DNA的鉴定
取两支20 mL的试管，各加入氯化钠的物质的量浓度为0．015 mol／L的溶液5 mL，将丝状物放入其中一支试管中，用玻璃棒搅拌，使丝状物溶解。
然后，向两支试管中各加入4mlL的二苯胺试剂。
混合均匀后，将试管置于沸水中加热 5 min，待试管冷却后，观察并且比较两支试管中溶液颜色的变化。
将观察的结果填写在《实验报告册》上。
结论
步骤8的2支试管中溶液颜色的变化说明了什么？将得出的结论填写在《实验报告册》上。
讨论
1．提取鸡血中的DNA时，为什么要除去血液中的上清液？
2．步骤回和步骤3中都需要加入蒸馏水，两次加入的作用相同吗？为什么？
3．DNA的直径约为20×10-10 m，实验中出现的丝状物的粗细是否表示1个DNA分子直径的大小？
（注：专业文档是经验性极强的领域，无法思考和涵盖全面，素材和资料部分来自网络，供参考。
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