挥发性盐基氮检测作业指导书

挥发性盐基氮检测作业指导书

【微量扩散法】

1.目的

为规范肉类新鲜度检测岗位操作和确保检测结果的准确性和一致性。

2.适用范围

本手册适用于化验员对肉类TVB-N的测定。

3.职责

检验人员负责对肉类TVB-N的检测，并根据检验结果进行判定。

4.工作程序

4.1.原理

肉类TVB—N原理：挥发性盐基氮是指动物性食品由于酶和细菌的作用，在腐败过程中，使蛋白质分解而产生氨以及胺类等碱性含氮物质。挥发性含氮物质可在 37 ℃碱性溶液（饱和碳酸钾溶液）中释出，挥发后吸收于吸收液（2%硼酸）中，用标准酸滴定，计算含量。

4.2.使用试剂

4.2.1.饱和碳酸钾溶液

称取50g碳酸钾，加 50mL 水，搅拌助溶、过滤，使用上清液。

4.2.2.水溶性胶

称取 10g 阿拉伯胶，加 10mL 水，再加 5mL 甘油及 5g无水碳酸钠（或无水碳酸钾），研匀。

4.2.3.硼酸吸收液

硼酸(20g/L)溶液。用精确到0.01g的电子天平准确称取1.00g的硼酸,用50 mL的移液管准确移取50 mL的蒸馏水,配制成20g/L的硼酸溶液.

4.2.4.盐酸 [c(HCL)=0.001mol/L] 的标准滴定溶液。

参照GB/T601-2002

A. 基准试剂（无水Na 2CO 3）

称取在270～300℃高温炉中灼烧至恒重的工作基准试剂无水Na 2CO 3: 5.4g 加入500 mol 的容量瓶中,加入蒸馏水定容,配成0.1 mol/L 的Na 2CO 3溶液;再取10 ml 浓度为0.1 mol/L Na 2CO 3溶液至1000 ml 的容量瓶中, 加入蒸馏水定容,配制成0.001 mol/L 碳酸钠溶液,待用. B. 0.001 mol/L 的盐酸溶液的配制

取36%的盐酸8.4mL 至100mL 的容量瓶中,加入蒸馏水定容,配成约0.1 mol/L 的盐酸。再取10ml 浓度为0.1 mol/L mol 的盐酸至1000 ml 的容量瓶，加入蒸馏水定容，配制成约0.001 mol/L 的盐酸溶液。

C. 溴甲酚绿-二甲基红的配制:

即3体积0.1%的溴甲酚绿乙醇溶液与1体积0.2%的甲基红乙醇溶液混合。 a.0.1%的溴甲酚绿乙醇溶液配制称

取0.10g 溴甲酚绿，溶于乙醇，用乙醇稀释至100ml 即可。 b.0.2%的甲基红乙醇溶液配制

称取0.20g 甲基红，溶于乙醇，用乙醇稀释至100ml 即可。 c.溴甲酚绿-二甲基红

将0.1%的溴甲酚绿乙醇溶液与0.2%的甲基红乙醇溶液按3：1的体积比混合摇匀即得溴甲酚绿—甲基红混合指示剂。(GB/T 603－2002)

D. 0.001 mol/盐酸的标定

用10ml 移液管吸取10ml0.001 mol/L 碳酸钠溶液,加入10滴溴甲酚绿-二甲基红,用0.001 mol/L 的盐酸溶液滴定至溶液颜色由绿色变成暗红色,煮沸2min 冷却后继续滴定至溶液成暗红色,读出所用0.001 mol/L 的盐酸的体积数.计算出盐酸的mol 浓度.

4.2.

5.2g/l

称取0.2克甲基红，加入100ml分析纯乙醇，震荡均匀。

4.2.6.1g/l.次甲基蓝溶液

称取0.1克次甲基蓝，加入100ml蒸馏水，震荡均匀。

注:将4.2.5与4.2.6两种指示剂等量混合为混合指示剂。

4.3.仪器设备

微量扩散皿

微量滴定管：最小分度 0.01ml 。

恒温培养箱

4.4.检验流程

操作步骤：

4.4.1. 肉类品取样，暂存

用洁净的刀取肉类表层2cm 处，去皮和肉筋，用小胶袋包装好暂存在0～5℃冰箱内暂存。 4.4.2. 样品处理，搅碎

将肉取出，用刀或剪刀除去脂肪、骨、肌腱，绞碎搅匀, 用绞肉机碎肉时注意安全。

4.4.3. 称取10g 样品放入250ml 三角瓶：用镊子将绞

好的肉准确镊取10g ，放入三角瓶。

4.4.4. 将100ml 蒸馏水放入三角瓶内摇匀：用量筒准确量取100ml 蒸馏水，先倒入约15ml 蒸馏水

入三角瓶，震荡，用玻璃棒搅拌，再放入剩余的蒸馏水后用锡箔纸封存好。

4.4.

5. 将三角瓶放入震荡器振荡：震荡30min 。

4.4.6. 将均质液过滤：用滤纸将均质液过滤。待用。

4.4.7. 水溶性胶配制

4.4.7.1. 称取阿拉伯树胶和无水碳酸钠：按一个样品需用三个扩散皿，每皿需用1克树胶、

0.5克碳酸钠的量来称取阿拉伯树胶和无水碳酸钠.并记录药品使用记录表.

4.4.7.2. 加蒸馏水水和甘油研磨搅匀:按一个样品需用三个扩散皿,每皿需用0.5ml 甘油和 1ml 蒸馏水的量来用移液管移取蒸馏水和甘油,并和阿拉伯树胶、无水碳酸钠一起研磨搅匀

.

称量好的阿拉伯树胶、无水碳酸钠 无水碳酸钠与蒸馏水混合

加入阿拉伯树胶混合 加入甘油

4.4.7.3. 在微量扩散皿外缘涂抹胶:用玻璃棒或药匙在微量扩散皿外边缘涂抹，注意手不能 碰到微量扩散皿的内壁。

4.4.8. 样品处理

4.4.8.1. 用1 ml 吸管吸取1ml 饱合K 2CO 3，放入扩散皿的外圈内

.

4.4.8.2.

3相反的另一边。注意

两液不能混合。

4.4.8.3. 用1 ml 吸管吸取

1ml2%硼酸溶液。加入扩散皿的内圈中。

4.4.8.4. 用1 ml 吸管吸取1ml2%甲基红乙醇溶液，放入一个小广口瓶内。

4.4.8.

5. 用1 ml 吸管吸取1ml1%次甲基蓝溶液，与甲基红液同一小广口瓶内。