第六章疫苗制造基本程序新

（三）灭 活
灭活菌苗通常根据细菌的特性加入最有效的灭活剂，采取最适当的灭 活条件进行，几种灭活菌苗的灭活方法如表6-1所示。
表6-1 几种灭活菌苗的灭活方法
菌 苗 菌或毒素 猪丹毒杆菌 气肿疽梭菌 破伤风梭菌 灭 活 方 法 菌液加入甲醛至0.2%-0.5%，37C杀菌18-24h。 菌液加甲醛至0.5%，37-38C杀菌72-96h。 菌液上清加甲醛至0.4%，37-38C脱毒21-30d。 猪丹毒氢氧化铝菌苗 气肿疽甲醛菌苗 破伤风类毒素 肉毒梭菌C型菌苗 （菌体毒素苗）
（五）配苗与分装
由于灭活菌苗所用的佐剂不同，所以配苗方法也不相同。 猪肺疫氢氧化铝菌苗：可在加入甲醛灭活的同时，按比例加入氢氧 化铝胶配制；也可在菌液经甲醛灭活后再按比例加入氢氧化铝胶配苗。 有的厂家禽霍乱油佐剂菌苗的配制程序为：于灭菌的油乳剂 135m110号白油、 11.4m1Span-85、3.6ml Tween80混合液中，在边搅拌 下加入等量甲醛灭活菌液配制。 配苗和分装：应充分混匀，及时塞塞、贴签或印字。
（二）菌液培养
按1%～3%量将种子液接种于培养基，然后依不同菌苗要求进行培养。 如猪丹毒弱毒菌须在在深层通气培养中加入适当植物油作消泡剂，通入过 滤除菌的热空气进行培养制造菌液；又加布氏杆菌猪 2号与羊5号弱毒菌经 固体表面培养完成后须按规定要求将菌苔洗下制成菌液。 菌液于0～4C暗处保存，待抽样经纯粹、活菌数等检查合格后使用。
流程图1——细菌疫苗和类毒素制造工艺流程
细菌分离 鉴定 菌种 蛋白质、肉浸液等原料 配置、灭菌 培养基 活化 种子 培养 菌 液 原 料 滤过 毒素 脱毒 类毒素 纯化 原 料 配制 灭菌 佐剂
减毒 弱毒菌种
纯化类毒素
配制 灭菌 保护剂 检验 加吸附 剂吸附
灭活菌液
灭活
菌苗原液
配苗 分装、冻干
精制类毒素
C型肉毒梭菌 菌液加加入甲醛至0.8%，37C杀菌脱毒18d。
（四）浓 缩
为提高某些灭活菌苗的免疫力，在培养过程中采取提高菌数的基础 上，再通过浓缩方法达到目的。 常用的浓缩方法：氧化铝胶吸附沉淀法 离心沉降法 羧甲基纤维沉淀法 以上方法可使菌液浓缩一倍以上。
此外，有些细菌在生长过程中产生分子量小的可溶性抗原（如猪丹 毒杆菌产生的糖蛋白）也可经氢氧化铝吸附浓缩；将破伤风脱毒液按盐 酸—食盐法处理，以作进一步精制成提纯破伤风类毒素。
配苗、乳化
分装 检验
灭活疫苗
检验
活疫苗
三、病毒性动物组织疫苗制造
病毒在易感动物体内可大量增殖，但在各器官组织、部位中增殖病 毒的量却有很大的差异，利用病毒增殖迅速、含毒量高的组织制造的疫苗 称为组织疫苗(tissue vaccine)。 动物组织疫苗包括动物组织灭活疫苗和动物组织弱毒活苗两类，前者 多数由强毒株制造，如猪瘟结晶紫疫苗、狂犬病羊脑组织疫苗；后者均以 弱毒株生产，如猪瘟兔化弱毒乳兔组织疫苗、牛瘟兔化弱毒组织疫苗等。
（一）动物选择
动物质量直接影响到组织疫苗的质量，特别是对疫苗的安全性和效力 有着决定性的作用，动物必须符合下列标准： (1)应该是清洁级(二级)以上的等级实验动物，即无规定的人兽共患性 病原体动物； (2) 应是对所接种病毒易感性高的动物，即在品种、年龄和体重方面 合乎要求的实验动物。
二、细菌性活疫苗制造
细菌性活疫苗多指弱毒菌苗，尽管种类与苗型甚多，但基本制造程 序相同。
（一）菌种与种子
弱毒菌种多系冻干品，由中国兽药监察所传代、鉴定、保存与分发， 少数由国家指定单位鉴定、保存与供给。 菌种使用前应按规程规定进行复壮、挑选，并作形态、特性、抗原 性和免疫原性鉴定，符合标准后方可用于制苗。 将检定合格的菌种接种子于规定的培养基，按规定的条件增殖培养， 经纯粹检查及有关的检查合格者即可作为种子液。种子液通常在0～4C 可保存2个月，在保存期内可作为菌苗生产的批量种子使用。
将经鉴定符合标准的菌种接种于菌苗生产规程中所规定的培养基进 行增殖培养，经纯粹检查、活菌计数达到标准后即为种子液，用于菌苗 生产。 种子液通常保存于2-8C冷暗处，不得超过规程规定的使用期限。
（二）菌液培养
大量生产的细菌培养方法甚多，既有手工式的，也有机械化或自动 化的培养方式。 机械化或自动化的培养方式通称为反应缸培养法，可供选择的菌液 培养法有：液体静臵培养法、液体深层通气培养法、透析培养法及连续 培养法等。 菌液培养也可采用固体培养法，该方法易获得高浓度的细菌悬液， 易稀释成不同浓度，且含培养基的成分较少，所以比较适用于制备诊断 用的抗原。
第六章 疫苗制造基本程序
规疫苗主要是细菌性的菌苗、病毒性的疫苗和寄生虫疫 苗三类，其制造程序、疫苗性质和免疫程序各不相同。 获得质量优良、安全的产品，关键环节如下： 1. 选择优良的菌种和毒种，并保持其稳定性； 2. 选用适当的培养繁殖细菌与病毒等微生物的方法，包 括优良的培养基、合乎要求的最好是标准化的实验动物、禽 胚及细胞； 3. 熟练掌握制品的生产工艺； 4. 准确掌握产品的检验方法和判定标准，严格按标准进 行质量检定。
（三）浓缩
为提高某些弱毒菌苗的免疫效果，可进行浓缩，以提高单位活菌数，常 用的依缩方法有吸附剂吸附沉降法、离心沉降法等，如于猪丹毒菌液内加入 0.2% ～0.25%羧甲基纤维素(CMC)进行浓缩，也可用离心沉淀浓缩。浓缩 菌液应抽样作纯粹、活菌数等检查。
Hale Waihona Puke Baidu四）配苗与冻干
经检验合格的菌液，按规定比例加入保护剂配苗，充分摇匀后随即 进行分装，分装量必须准确。 分装好的菌苗迅速送入冻干柜进行预冻、真空干燥，冻于完毕后立 即加塞、抽空、封口，移入冷库保存，并由质检部门抽样检验。
一、细菌性灭活疫苗制造
细菌性灭活疫苗简称灭活菌苗，种类、苗型甚多，但制造的基本程 序差别不大。
（一）菌种与种子
1.菌种 制苗用菌种多数为毒力强、免疫原性优良的菌株，通常使用1-3个品 系，均由中国兽药监察所传代、鉴定、冻干保存和供应。 各种用于制造菌苗的菌种应按规定定期复壮，并进行形态、培养特 性、菌型、抗原性和免疫原性鉴定，合格菌种准许用于制苗。 2.种子培养