替硝唑葡萄糖注射液中5-羟甲基糠醛的测定

替硝唑葡萄糖注射液中5-羟甲基糠醛的测定

发表时间：2014-08-11T15:23:17.403Z 来源：《医药前沿》2014年第14期供稿作者：翟灵妍王正凤苟宏莉吴军

[导读] 替硝唑葡萄糖注射液制剂中含有葡萄糖，葡萄糖水溶液在弱酸时较稳定。

翟灵妍王正凤苟宏莉吴军

（重庆市西南药业股份有限公司 400038）

【摘要】目的检测替硝唑葡萄糖注射液中5-羟甲基糠醛。方法采用安捷伦公司C18色谱柱（4.6×150mm），色谱条件0.05mol/L磷酸二氢钾溶液-甲醇（90：10）测定替硝唑葡萄糖注射液中5-羟甲基糠醛。结果本方法能准确检测替硝唑葡萄糖注射液中5-羟甲基糠醛，5-羟甲基糠醛的量在加速试验及长期留样稳定性考察过程中均呈增加的趋势。

【关键词】替硝唑葡萄糖注射液 5-羟甲基糠醛

【中图分类号】R927.2 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2014）14-0145-02

5-羟甲基糠醛（5-Hydroxymethyl furfural简称5-HMF）是由葡萄糖或果糖等单糖化合物在高温、或弱酸等条件下经脱水后生成的具有呋喃环结构的糠醛化合物。5-HMF本身无色，其聚合物为有色物质，从而导致注射液变色。替硝唑葡萄糖注射液制剂中含有葡萄糖，葡萄糖水溶液在弱酸时较稳定，但在高温加热灭菌时，葡萄糖易分解产生5-羟甲基糠醛。因此在替硝唑葡萄糖注射液中5-羟甲基糠醛的量也反应了溶液中葡萄糖的分解情况。

研究表明5-羟甲基糠醛对人体有害，会导致药物不良反应的发生。5-羟甲基糠醛可导致结肠小囊异常生长，且有一定程度的基因毒性，对人体横纹肌及内脏均有损害。因而在含葡萄糖或其他单糖的制剂中5-HMF都作为重要的有关物质加以控制。在替硝唑葡萄糖注射液制剂中，我们参照《中国药典》2010年版二部替硝唑葡萄糖注射液质量标准进行5-羟甲基糠醛的检测及相关的研究。

1 仪器与试药

Agilent 1100型高效液相色谱仪，DAD检测器，Agilent色谱工作站。色谱柱：采用Agilent公司C18色谱柱（4.6×150mm） Mettler-

AB204-E型电子天平。5-羟甲基糠醛对照品来自中国药品生物制品检定所。替硝唑葡萄糖注射液为批号为20110101、20110102、20110103；甲醇色谱纯，其余试剂为分析纯。

2、方法与结果

2.1 波长的确定

取5-羟甲基糠醛对照品适量，加注射用水稀释定容后在波长190nm～400nm范围内进行UV扫描，5-羟甲基糠醛分子结构中具有共轭双烯结构，在284nm处有最大吸收。选用284nm波长，高效液相色谱法对5-羟甲基糠醛进行控制。

2.2 色谱条件及系统适用性试验摸索

取杂质Ⅰ对照品（2-甲基-5-硝基咪唑）与5-羟甲基糠醛对照品适量，加水溶解并稀释制成每1ml中各含10?g的溶液，作为系统适用性试验溶液。除检测波长为284nm外，照含量测定项下的色谱条件，取系统适用性试验溶液20μl，注入液相色谱仪，5-羟甲基糠醛峰与杂质Ⅰ峰的分离度应符合要求。

按《中国药典》2010版二部替硝唑葡萄糖注射液质量标准的要求，5-羟甲基糠醛测定采用含量测定项下的色谱条件：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以0.05mol/L磷酸二氢钾溶液（用磷酸调节pH值至3.5）-甲醇（80∶20）为流动相。

分别进行了0.05mol/L磷酸二氢钾溶液-甲醇（80∶20）、（85∶15）、（90∶10）的系统性试验。

图1 5-羟甲基糠醛系统适应性试验

图①（85∶15）图②（85∶15）图③（90∶10）

当0.05mol/L磷酸二氢钾溶液与甲醇的比例为（90∶10）时，5-羟甲基糠醛峰与杂质Ⅰ峰分离度合格（见图③）。各项系统适应性试验符合要求，5-羟甲基糠醛能被很好的检测。

2.3 方法学考察

2.3.1 空白辅料对5-羟甲基糠醛检查的影响。

替硝唑葡萄糖注射液除pH调节剂乳酸外未添加任何辅料，因此取pH调节剂乳酸适量，置100ml容量瓶中，加入注射用水稀释至刻度，摇匀。取替硝唑葡萄糖注射液，各取20?l进样，乳酸和溶剂峰在2分钟以前，均不干扰5-羟甲基糠醛的测定。

2.3.2重复性试验

取本品作为供试品溶液；取5-羟甲基糠醛对照品适量，精密称定，加水溶解并稀释制成10?g/ml的溶液，作为对照品溶液。按上述色谱条件与系统适用性要求，取供试品6份进样，记录峰面积和主峰的保留时间，计算RSD。结果表明该仪器重复性试验结果能满足本品中5-羟甲基糠醛的测定的要求。

2.3.3 5-羟甲基糠醛回收率

精密称定5-羟甲基糠醛对照品，用注射用水溶解并稀释成10mg/ml，摇匀作为储备液；分别精密移取储备液，移8ml、10ml、12ml至100ml容量瓶中，每种条件下各移3份，共9份，加注射用水稀释至刻度，摇匀。照5-羟甲基糠醛检测项下方法，计算5-羟甲基糠醛的回收率。

表2 5-羟甲基糠醛回收率

2.3.4 5-羟甲基糠醛定量限

称取5-羟甲基糠醛对照品置100ml容量瓶中，加注射用水稀释至刻度，摇匀，逐级稀释至一定浓度，按5-羟甲基糠醛检测条件，取20μl 注入液相色谱仪，以S/N=10为定量限，测得5-羟甲基糠醛的定量限为0.67ng。以S/N=3为检测限，测得5-羟甲基糠醛的定量限为0.20ng。

2.3.5线性关系

称取对照品5-羟甲基糠醛，精密称定，用注射用水溶解，并稀释至0.1mg/ml作为储备液；分别精密移取储备液0.7ml、0.9ml、1.0ml、1.1ml、1.3ml，置10ml量瓶中，加注射用水稀释至刻度，摇匀。按5-羟甲基糠醛测定的色谱条件，取上述溶液各20μl注入色谱仪，记录色谱图，以进样浓度C(?g/ml)为横坐标，峰面积A为纵坐标，进行线性回归。

表3 5-羟甲基糠醛测定线性关系

进样浓度C(?g/ml) 6.65 8.55 10.45 11.40 12.35

峰面积A 997.49 1282.81 1578.35 1719.3 1864.5

在6.65-12.35?g/ml的浓度范围内，峰面积与浓度呈良好的线性关系。

2.3.6 溶液稳定性

取本品作为供试品溶液；取5-羟甲基糠醛对照品适量，精密称定，加水溶解并稀释制成每1ml中约含10?g的溶液，作为对照品溶液。分别在0h、2h、4h、6h、8h测定杂峰面积和对照峰面积的变化情况。

表4 溶液稳定性（5-羟甲基糠醛）

放置时间（h） 0h 2h 4h 6h 8h 平均值

5-羟甲基糠醛% 0.0027 0.0028 0.0028 0.0028 0.0028 0.0028

替硝唑葡萄糖注射液检查溶液在8小时内，5-羟甲基糠醛量无明显变化，说明随放置时间的增加，5-羟甲基糠醛量变化不大。

2.4 结果

按照上述5-羟甲基糠醛的检测方法，对替硝唑葡萄糖注射液为批号为20110101、20110102、20110103批的样品进行检测并进行样品留样稳定性考察，替硝唑葡萄糖注射液中5-羟甲基糠醛的量在加速试验及长期留样稳定性考察过程中均呈增加的趋势。

表5 5-羟甲基糠醛检测结果

3 讨论

5-羟甲基糠醛是替硝唑葡萄糖注射液制备及放置过程中产生的降解产物，对人体有害，会导致药物不良反应的发生。因此必须控制替硝唑葡萄糖注射液中5-羟甲基糠醛的量。经样品检测，试验用三批替硝唑葡萄糖注射液5-羟甲基糠醛的量均符合规定。但在留样考察过程中5-羟甲基糠醛的量在加速试验及长期留样稳定性考察过程中均呈增加的趋势。因此存放过程中应严格按照说明书执行，存放在阴凉干燥处。

参考文献

[1]《中国药典》2010版二部替硝唑葡萄糖注射液质量标准

[2]李帼容、李少英、廖颂明等 HPLC检测替硝唑葡萄糖注射液中的降解产物5一羟甲基糠醛广东药学院学报 vol I5 No.2 Jun.1999

[3]曾令高高效液相色谱法测定替硝唑葡萄糖注射液中5一羟甲基糠醛含量药物鉴定 2010年第19卷第l9期