利用基因芯片检测转基因作物
转基因植物的检测方法及其原理
转基因植物的检测方法及其原理说到转基因植物的检测方法，哎呀，别看它名字高大上，其实要搞清楚这些植物到底“基因里”藏了什么东西，可真不是一件容易的事儿！你想想，现在的科技这么发达，想查一个小小的基因变动，得靠一堆复杂的工具和技巧。
咱们生活中吃的很多食物，都可能是转基因的，然而那些转基因植物到底长啥样，它们和普通植物有啥区别，很多人其实还摸不着头脑。
今天咱们就来聊聊，转基因植物是怎么被“抓包”的。
首先得说，转基因植物其实就是经过基因工程改造过的植物，某些基因被“调皮地”加进去，目的是为了让这些植物有点特别的功能，比如抗虫、抗病，或者是让它们在干旱的环境下也能生长得好。
就像给植物做了个“基因升级版”，有点像人类做整容手术一样。
但这可不是随便改改就行的，它得在植物的DNA里留下“痕迹”，就像在你手机里安装了一个APP一样，有了它，植物就能干些别人做不到的事。
可问题是，转基因植物和普通植物怎么看上去差不多，不仔细看，还真分不出来。
就像是同一个班级里的两个人，外貌差不多，可其中一个却可能偷偷带了个高科技的手机。
所以呀，怎么知道一个植物是不是转基因的，得靠一堆高端的检测技术了。
现在，最常用的检测方法就是PCR（聚合酶链式反应）技术。
听着是不是挺复杂？其实也不难理解。
就像你拍照的时候，不管是景色还是人像，照片总是会有一定的“特征”对吧？PCR技术就相当于是放大镜，它能够把植物基因里的某些特征“放大”，让你看得清清楚楚。
科学家用PCR方法，把基因里那点儿“特殊”的转基因成分从大海捞针一样给找出来。
一旦找到了那些特定的基因序列，那就能证明，这个植物不单纯，里面有转基因。
但这个方法也有个小缺点。
它需要比较高精度的设备，检测过程比较费时，得小心翼翼地操作。
想象一下，就像你去餐厅吃饭，老板端上来的每道菜都需要经过精细的制作一样，检测转基因植物也得经历一番“精雕细琢”。
如果在操作过程中，稍有不慎，那结果可能就大不如前了。
除了PCR，还有一种叫做ELISA（酶联免疫吸附测定）的技术。
基因芯片技术的应用
基因芯片技术的应用随着生物技术和基因研究的不断进展，基因芯片技术已经广泛应用于生物医学、农业、动植物繁殖、环境保护等领域。
本文将从基因芯片技术的原理、应用场景和前景展开阐述，探讨该技术的研究热点和发展趋势。
一、基因芯片技术的原理基因芯片是一种利用高通量技术同时检测成千上万个基因表达的工具。
它通过利用DNA技术将成千上万的基因DNA序列固定在玻璃芯片上，并可检测目标样本中RNA或cDNA的水平。
基因芯片技术主要包括以下步骤：1. 设计芯片：确定目标基因序列，利用计算机技术进行芯片设计，制备出针对目标基因甚至全基因组的芯片。
2. 样本制备：提取RNA或cDNA，并借助反转录技术将RNA 转化成cDNA，再对其进行扩增。
3. 杂交：采用特殊设备将目标样本中的cDNA标记为不同颜色的探针，与芯片表面的DNA序列杂交。
4. 扫描和分析：利用激光扫描装置对芯片表面进行扫描，测量复合体的强度，并进行统计和分析。
这样，我们就能够在一张小芯片上探测到成千上万个基因，分析并比较样本之间的差异，从而揭示出基因调控、信号传递和代谢途径等生物学特征。
二、基因芯片技术的应用场景基因芯片技术的应用范围极广，以下列举几种典型场景：1. 生物医学基因芯片技术在生物医学领域中主要用于诊断和治疗基因相关疾病。
例如，我们能够将基因芯片应用于肿瘤分型和分级、遗传性疾病的基因筛查、药物研发等方面。
此外，基因芯片技术还可以为个体化医学提供技术支持，为临床医生制定精准个体化治疗方案提供重要依据。
2. 农业基因芯片技术的应用在土地的病虫害监测、作物品种鉴定、转基因食品检测等方面具有重要意义。
例如，在生产实践中，农民们经常遭受由于病虫害带来的经济损失，而基因芯片技术能够帮助他们快速诊断设备，确定病虫害的种类和数量，从而更好地进行管理和防范。
3. 环境保护环境污染问题已经成为全球性的挑战，而基因芯片技术则为环境保护带来了新的手段。
例如，通过检测微生物的基因组DNA，我们可以了解大气、水环境以及土壤中的微生物种类组成状况，协助我们了解生态系统的状况和进行环境监测。
基因芯片的技术原理及在动植物研究上的应用
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河北农业科学
２００８ 年
方法不同。常规的基因分离、扩增和标记技术完全可以 采用，如以 ＤＮＡ、ＲＮＡ 为模板进行 ＰＣＲ 扩增反应或克 隆或逆转录 （ｍＲＮＡ）［７］，获取其中的 ＤＮＡ、ＲＮＡ 等信息 分子并以放射性同位素如 ３２Ｐ／３３Ｐ 或荧光素标记，但操作 烦琐费时。高度集成的微型样品处理系统如细胞分离芯 片及基因扩增芯片是实现上述目的的有效手段和发展方 向［８］。目前采用最普遍的荧光标记方法与传统方法如体 外转录、ＰＣＲ、逆转录等原理上无多大差异，只是采用 多种荧光标记，以满足不同来源样品的平行分析。
基因芯片是基于核酸探针杂交技术原理而研发的。 根据碱基互补原理，利用核酸探针到基因混合物中识别 特定基因。基因芯片技术主要包括 ４ 个技术环节：ＤＮＡ 微阵列制备、样品制备、生物分子反应和信号的检测及 分析［１～２］。 １．１ ＤＮＡ 微阵列制备
芯片制备之前要对载体进行修饰，使其表面有可进 行化学反应的活性集团，以便与生物分子进行偶联，并 使载体具有良好的稳定性和生物兼容性［２］。早期的微阵 列有许多采用尼龙膜或硝酸纤维素膜做固相载体，由于
ＤＮＡ 阵列的集成有 ２ 种不同的技术路线： （１）利 用半导体激光光刻技术和照相平板印刷技术，在固相支 持物表面原位合成寡核苷酸探针［４～５］。探针的固相合成类 似于 “搭积木”，每 １ 个探针都是由 Ａ、Ｔ、Ｇ 和 Ｃ 自下 而上堆积而成。每 １ 层合成都需要相应的掩盖物 （ｍａｓｋ）。在合成碱基单体的 ５＇ 羟基末端连上 １ 个光敏 保护基，利用汞灯发出的光束照射载体表面特定合成区 域，激活这个区域，使羟基端脱保护产生自由羟基，然 后 １ 个 ５，端保护的核苷酸的 ３，端通过化学键连接上 去。这个过 程 反 复 进 行 直 至 合 成 １ 整 套 探 针 ； （２） ＤＮＡ 微集阵列技术 （ＤＮＡ ｍｉｃｒｏａｒｒｙ），又叫点样法，是 将合成好的探针、ｃＤＮＡ 或基因组 ＤＮＡ 通过特定的高速 点样机器人直接点在芯片上，然后经过紫外线照射交联 固定［６］。采用的机器人由计算机控制，有多个打印／喷印 针头，将探针打印或喷印于芯片上。打印法的优点是探 针密度高，通常 １ ｃｍ２ 可打印 ２ ５００ 个探针；缺点是定 量准确性及重现性不好，打印针易堵塞且使用寿命有 限。喷印法的优点是定量准确，重现性好，使用寿命 长。缺点是喷印斑点大，因此探针密度低，通常 １ ｃｍ２ 只有 ４００ 点。 １．２ 样品制备和生物分子反应
转基因作物快速检测技术进展与展望
转基因作物快速检测技术进展与展望1. 引言1.1 转基因作物的定义转基因作物是指通过人为干预，将外源DNA或RNA基因导入植物细胞中，以实现目标基因的转导和表达，从而赋予植物新的性状或功能。
转基因技术的应用使得农作物具有抗虫、抗病、耐逆、提高产量等优点，极大地促进了农业生产的发展。
转基因作物的开发贯穿了整个农业生产领域，涉及粮食作物、经济作物、蔬菜等多个品种。
通过转基因技术改良的作物，能够更好地适应不利的生长环境，提高产量和品质，有效解决人类粮食安全和农业可持续发展的问题。
在转基因作物的相关研究中，基因检测是至关重要的一步。
通过检测和验证转基因作物中的外源基因，可以确保作物的品质和安全性，防止转基因作物对环境和人类健康造成潜在风险。
快速准确地检测转基因作物中的外源基因具有重要的意义，也成为转基因作物生产与监管的基础。
1.2 快速检测技术的重要性快速检测技术在转基因作物领域具有极其重要的意义。
随着转基因作物种类的增多和应用范围的扩大，需要对市场上的食品和农产品进行快速、准确的检测，以保障消费者的健康和权益。
快速检测技术能够在短时间内对样品进行高效筛查，确保产品的质量和安全性。
转基因作物的快速检测技术也对监管部门具有重要意义。
监管部门需要对市场上的转基因产品进行监测和管理，以确保产品符合法规标准。
快速检测技术能够帮助监管部门快速准确地对样品进行检测，为监管工作提供有力支持。
转基因作物的快速检测技术也在科研领域具有重要意义。
科研工作者需要对转基因作物进行研究和开发，快速检测技术可以帮助他们快速准确地对转基因作物进行鉴定和分析，推动科研工作的进展。
快速检测技术在转基因作物领域的重要性不言而喻，其应用将为消费者、监管部门和科研工作者带来诸多好处和便利。
2. 正文2.1 转基因作物快速检测技术的现状目前，转基因作物的快速检测技术已经取得了重要进展，使得检测的速度和准确性得到了显著提高。
传统的转基因作物检测方法主要依靠生物学特性和蛋白质检测，这些方法虽然准确，但耗时较长且操作复杂。
鉴别小米转基因的方法
鉴别小米转基因的方法
首先，我们可以通过外观特征进行初步鉴别。
转基因小米可能会在外观上有所不同，例如颜色、大小、形状等方面与传统小米存在差异。
然而，外观特征并不是鉴别转基因的唯一标准，因为转基因小米与非转基因小米在外观上可能没有明显的区别。
其次，我们可以借助科学技术手段进行鉴别。
例如，利用分子生物学技术对小米中的基因进行检测，可以鉴别其中是否存在外源基因。
PCR扩增、基因芯片检测等技术可以帮助我们快速、准确地鉴别小米中的转基因成分。
这些技术需要在实验室条件下进行，需要专业人员操作和分析。
另外，我们还可以通过检测小米中的抗性或毒性物质来鉴别其是否为转基因产品。
转基因小米可能会具有抗虫、抗草药等特性，因此可以通过检测这些物质的含量来进行初步鉴别。
然而，这种方法也需要借助专业机构和设备进行检测，对于普通消费者来说并不实用。
除了以上方法，我们还可以通过了解小米的种植和生产过程来鉴别其是否为转基因产品。
转基因小米通常需要经过特殊的种植和
处理过程，因此可以通过了解小米的生产源头和流程来进行鉴别。
然而，这也需要对小米生产的相关知识有一定的了解和认识。
总的来说，鉴别小米是否为转基因产品需要借助科学技术手段和专业知识。
对于普通消费者来说，最好选择有信誉的品牌和渠道购买小米产品，以确保食品安全和质量。
同时，政府部门和监管机构也应加强对小米产品的监管和检测，保障消费者的权益和食品安全。
希望通过大家的共同努力，可以更好地保护食品安全和生态环境，促进食品产业的健康发展。
基因芯片特点
基因芯片特点随着生物技术的飞速发展，基因芯片技术作为现代生物技术的核心之一，已经在生命科学研究、医学诊断、药物研发、农业生物技术等领域发挥着越来越重要的作用。
基因芯片，又称为DNA微阵列，是一种高通量的生物技术工具，能够在一次实验中同时检测和分析大量基因的表达水平或基因突变情况。
本文旨在深入探讨基因芯片的特点，并概述其在不同领域的应用现状和发展前景。
一、基因芯片的主要特点1.高通量性基因芯片最显著的特点是其高通量性。
传统的基因表达或突变检测方法，如PCR、测序等，通常只能对单个或少量基因进行分析，而基因芯片则能够在同一时间内对成千上万个基因进行平行检测。
这种高通量的特性使得研究者能够快速获得大量基因的信息，从而加速科学研究的进程。
2.微型化基因芯片的另一个显著特点是其微型化。
基因芯片通常是在一块微小的固体支持物（如玻璃片、硅片或尼龙膜）上制作而成的，其上面密集地点阵排列着大量的DNA 探针。
这种微型化的特点不仅使得基因芯片的制作成本相对较低，而且还方便了实验操作和数据的获取。
3.高灵敏度基因芯片技术具有高灵敏度，能够检测到低丰度的基因表达和微小的基因突变。
这得益于芯片上高密度的探针排列和高效的杂交反应。
高灵敏度使得基因芯片在疾病早期诊断、病原体检测等领域具有广阔的应用前景。
4.特异性基因芯片的特异性是指其能够准确地区分目标基因和非目标基因的能力。
这主要归功于芯片上特异性设计的DNA探针。
这些探针能够与目标基因序列发生特异性杂交，而对非目标基因序列则不发生反应或反应极弱。
这种特异性确保了基因芯片检测结果的准确性和可靠性。
5.可重复性基因芯片实验具有良好的可重复性。
在相同的实验条件下，使用相同的基因芯片和操作方法，可以得到相似的实验结果。
这种可重复性使得基因芯片技术成为一种可靠的研究工具，其数据可以用于不同实验室之间的比较和交流。
二、基因芯片的应用领域1.生命科学研究在生命科学研究领域，基因芯片被广泛应用于基因表达谱分析、基因功能研究、基因组学研究等方面。
转基因玉米最简单的辨别方法
转基因玉米最简单的辨别方法什么是转基因玉米？转基因玉米是经过基因工程技术改变了其基因组的玉米品种。
通过引入外源基因，转基因玉米可以表现出与传统玉米不同的特点。
转基因技术的引入旨在改善玉米的耐虫性、耐草药性、抗病性等，以增加产量和改善农作物的质量。
转基因玉米的辨别方法由于转基因玉米与传统玉米的性状非常相似，传统的肉眼观察往往无法直接区分。
然而，科学家们通过不断的研究和发展，已经开发出一些有效的方法来鉴定转基因玉米。
以下是一些可以用于辨别转基因玉米的简单方法。
DNA检测方法通过检测玉米中的DNA序列，可以准确地判断玉米是否为转基因品种。
以下是一些常用的DNA检测方法：1.PCR（聚合酶链反应）：PCR是一种扩增DNA序列的技术，可以通过特定引物扩增转基因DNA的片段。
通过检测扩增产物的大小和特征，可以判断玉米是否为转基因品种。
2.实时荧光PCR：实时荧光PCR结合了PCR技术和荧光检测技术，可以在扩增过程中实时监测DNA的数量和特征。
通过比较样本和参考样品的荧光信号，可以判断玉米是否为转基因品种。
3.基因芯片技术：基因芯片技术利用微阵列芯片上固定的DNA探针，可以同时检测多个基因。
通过比较样本和参考样品的信号强度和特征，可以判断玉米是否为转基因品种。
蛋白质检测方法转基因玉米通常会在其基因组中表达外源基因，并产生相应的蛋白质。
通过检测玉米中的特定蛋白质，可以判断玉米是否为转基因品种。
以下是一些常用的蛋白质检测方法：1.ELISA（酶联免疫吸附试验）：ELISA是一种常用的免疫检测方法，可以通过特定的抗体检测目标蛋白质。
通过比较样本和参考样品的吸光度值，可以判断玉米是否含有转基因蛋白质。
2.质谱法：质谱法是一种分析样品中蛋白质的方法，通过测量蛋白质的质量和带电量，可以确定蛋白质的特征。
通过比较样品和参考样品的质谱图谱，可以判断玉米是否含有转基因蛋白质。
生理学和形态学特征除了分子方法外，还可以通过观察玉米的生理学和形态学特征来推测其是否为转基因品种。
基因芯片技术在生命科学中的应用
基因芯片技术在生命科学中的应用生命科学是一个广泛的领域，包括生物学、医学、药学、农业等多个领域。
随着科技的不断进步，生命科学领域也在不断的发展与壮大。
而基因芯片技术作为一个重要的生命科学技术，已经在生命科学领域中起着越来越大的作用。
基因芯片技术是一种高通量的基因检测技术，可以同时检测上千个基因。
它主要由两个部分组成：探针和芯片。
探针是一种DNA或RNA片段，可以特异性地结合到目标DNA或RNA分子上。
芯片则是由数千个小小光点组成的小片，每个光点上都含有数千个探针。
通过将待测样品与芯片上的探针反应，就可以同时检测上千个基因的表达水平。
基因芯片技术可以用于生命科学领域的多个方面，下面分别介绍一下。
1. 基因组学基因芯片技术在基因组学研究中有着重要的应用。
通过基因芯片技术，可以检测出某些疾病的基因变化，以及基因表达的差异，从而研究这些基因的功能和对生命活动的影响。
例如，基因芯片技术可以用于对肿瘤基因进行检测，从而为肿瘤的治疗提供重要的依据。
除此之外，基因芯片技术还可以用于全基因组的测序和重测序，为基因组学研究提供更多方法和手段。
同时，基因芯片技术还可以用于分析基因在不同组织、不同时间点的表达差异，为揭示基因功能提供帮助。
2. 农业生物技术基因芯片技术同样可以在农业生物技术领域中发挥重要作用。
例如，基因芯片技术可以用于检测农作物的基因差异和基因表达水平，从而揭示农作物的抗病性、耐旱性、耐寒性等特性。
通过这些研究，可以为培育具有更好的生物特性的新品种提供理论基础和实践指导。
另外，基因芯片技术还可以用于检测农作物中的转基因成分，从而保障食品安全。
通过对进入市场的转基因食品进行检测，可以及时发现、排除问题食品，避免不必要的食品安全事故。
3. 药学研究基因芯片技术在药学研究中也有着广泛应用。
例如，通过基因芯片技术可以检测不同人群之间的基因表达差异，为研究不同人群的药物反应提供依据。
此外，基因芯片技术还可以用于筛选具有特定作用机制的药物，从而提高新药开发的效率和成功率。
基因组学技术在农业领域的应用案例
基因组学技术在农业领域的应用案例随着现代科技的不断进步，基因组学技术在农业领域开始发挥着越来越重要的作用。
从物种选育到疾病防治，基因组学技术为农业领域带来了许多创新和机遇。
本文将介绍几个基因组学技术在农业领域的具体应用案例。
1. 作物基因组测序技术作物基因组测序技术是将作物的基因组进行测序，找到作物身上影响生长发育和产量的基因，通过对这些基因进行调控和编辑，来提高作物的品质和产量。
该技术已经在不同的作物上得到了应用，如水稻、小麦、番茄、玉米、黄瓜、甜菜等。
以水稻为例，由于水稻的基因组非常复杂，传统的人工选育方法很难实现。
但是，通过对水稻基因组的测序，科学家已经找到了影响产量、抗病性、适应性等方面的多个关键基因。
通过对这些关键基因的编辑和调控，科学家们已经成功地培育出了多个高产、耐病和适应性强的水稻品种。
这些品种不仅可以为粮食生产贡献更多，还可以为发展农业生产带来新的希望。
2. 基因编辑技术基因编辑技术是一种新型的基因组学技术，它可以实现对作物、家畜等生物的基因进行精确编辑，从而达到改善品质、提高产量、增强抗病性等目的。
具体来说，基因编辑技术可以通过人工干预某个基因的具体序列，来改变该基因所扮演的角色。
如近年来，基因编辑技术已经成功地被应用于小麦、木瓜、香蕉等作物的育种过程中。
通过改变这些作物关键基因的序列，科学家们已经成功地实现了提高产量、改善品质、减轻对环境的依赖性以及增强抗病性等目的。
这为农业生产提供了新的思路和解决方案。
3. 基因芯片技术基因芯片技术是一种基于DNA或RNA序列信息的高通量生物学实验技术。
该技术主要通过对某个生物体内所有基因进行快速检测和测量，从而分析出这些基因对生物体生长、发育、繁殖等方面的影响。
以家禽行为为例，选育需要考虑到多个行为特征因素，如觅食、繁殖、生存等。
而通过使用基因芯片技术，则可以对某些家禽品种的基因组进行高通量筛查，从而找到影响家禽行为的多个关键基因。
这样一来，家禽的习性就能够得到得到更精准的研究和调控了。
基因芯片技术及其在植物基因功能研究中的应用
基因芯片技术及其在植物基因功能研究中的应用摘要：基因芯片技术即dna微列阵技术，作为一种高通量快速分析技术，已广泛地应用于植物基因组研究。
本文简要综述了基因芯片的制备及分类、实验设计和数据分析，以及基因芯片在植物胁迫应答基因功能研究中的应用。
关键词：基因工程；基因芯片；植物胁迫应答中图分类号：q789文献标识码：a基因芯片是伴随人类基因组计划而发展起来的一种高新生物技术，具有快速、高效、大规模、高容量、高度并行性等特点，已成为目前国际上生命科学研究的热点之一。
随着植物基因序列数据库迅速增长，基因芯片已成为植物基因组学的主要手段之一。
近几年，采用基因芯片技术进行转基因植物表达谱分析的研究越来越广泛，通过对差异基因生物信息学分析，筛选与植物胁迫应答相关基因，从而深入研究其在植物胁迫应答过程中调控机理。
1基因芯片的概念及分类基因芯片是利用核酸杂交测序（sequencing by hybridization，sbh）原理，在载体表面建立可寻址的高密度dna分子微阵列，通过与标记过的样品核酸序列互补匹配，进行测序与大规模平行检测生物未知基因分子的有关信息。
通过基因芯片技术可大规模、高通量地对成千上万条基因同时进行研究，从而大大加快了基因研究的效率。
基因芯片的种类较多，根据dna微阵列上的核酸序列长度，基因芯片可分为两类：一类是cdna 微阵列；另一类是寡聚核苷酸微阵列。
根据基因芯片所用的载体材料不同，可分为玻璃芯片、硅芯片、膜芯片、陶瓷芯片等；根据基因芯片制备方式不同，可分为原位合成芯片、直接点样芯片、电定位芯片和三维芯片等。
2基因芯片实验设计实验设计是基因芯片实验研究中重要的部分，是芯片数据可靠的前提。
由于基因芯片实验成本昂贵，在进行实验时需严格设计和认真操作。
实验设计中探针筛选、芯片选择、生物学重复次数对试验数据质量都有影响。
基因芯片中荧光实验是利用标记了红色荧光cy5和绿色荧光cy3的两个样品同时与基因芯片进行杂交，基因芯片上每一个点包括了这两种样品中相应mrna的荧光信息，通过比较两者的荧光信号强度计算相对表达量。
生物芯片技术简介
政策法规支持与行业标准制定
政策扶持
政府加大对生物芯片技术的投入，设立专项资金，支持相关研发和 产业化项目，推动技术创新和成果转化。
法规保障
制定和完善生物芯片技术相关法规和标准体系，确保技术应用的安 全性和有效性，保护知识产权，促进产业健康发展。
行业协作
加强产学研用合作，建立行业协作机制，共同制定技术标准和规范， 推动生物芯片技术的标准化和规范化发展。
生物芯片技术简介
• 生物芯片技术概述 • 生物芯片类型及特点 • 生物芯片制备技术 • 生物芯片在医学领域应用 • 生物芯片在农业领域应用
• 生物芯片在食品安全领域应用 • 生物芯片技术发展挑战与趋势
01
生物芯片技术概述
定义与发展历程
定义
生物芯片技术是一种将生物分子（如DNA、蛋白质等）固定在微型芯片表面， 利用微电子技术进行检测和分析的技术。
发展，为患者提供更加个性化、高效的治疗方案。
05
生物芯片在农业领域应用
农作物品种鉴定与选育
农作物基因型鉴定
利用生物芯片技术对农作物基因型进行快速、准 确的鉴定，为品种选育提供重要依据。
分子标记辅助育种
结合生物芯片技术与分子标记技术，实现农作物 性状的精准选择与改良，提高育种效率。
转基因作物检测
利用生物芯片技术检测转基因作物中的外源基因， 确保转基因作物的安全性。
前景
随着技术的不断进步和应用需求的拓展，生物芯片技术将朝着更高通量、更高灵敏度、更低成本的方 向发展。同时，其在精准医疗、个性化治疗等新兴领域的应用潜力巨大，有望为未来的医学诊断和治 疗提供更加高效、便捷的技术手段。
02
生物芯片类型及特点
基因芯片
01
转基因植物的分子检测与鉴定方法及进展
转基因植物的分子检测与鉴定方法及进展随着分子生物学和植物基因工程的不断发展，越来越多的育种工作者开始利用转基因技术获得常规育种技术难以得到的新种质和新品种。
植物转基因技术最大的好处在于可以打破自然界物种间原有的生殖隔离，促进基因在不同物种间的交流，极大地丰富变异类型，增大遗传多样性，为植物新品种的培育提供丰富的育种资源。
通过对基因功能的研究，筛选m目的基因，还可实现植物性状的定向改良。
因此该技术自1983年首次获得转基因植物以来，便深受育种工作者青睐，得到了蓬勃地发展。
至今已有30多科约200多种植物转基因成功；国际上相继有30多个国家批准3 000多例转基因植物进入田间试验，并且在美国、加拿大、中国等20多个国家成功进行了商品化生产…。
到2006年止，全球转基因作物的商业种植面积达1．02亿hm2，比2005年增长13％，是1996年的62倍。
转基因作物品种在农业生产中日益显现出巨大潜力。
植物转基因操作中，除利用抗生素抗性和除草剂抗性等选择基因排除非转化细胞而留存转化细胞，以及利用Gus和CFP等报告基因显示转基因成功外，更重要的是从分子水平鉴别出阳性转化体，明确目的基因在转基因植株中的拷贝数和转录与表达情况。
本文就常用的转基因植株检测与鉴定方法作一概述，并对近期发展起来的新方法做简要介绍。
1 外源基因整合与否及其整合拷贝数的鉴定1．1 PCR(p01 ymera se chain reaction)检测1．1．1 常规PCRPCR技术对目的片段的快速扩增实际上是一种在模板DNA、引物和4种脱氧核糖核苷酸存在的条件下利用DNA聚合酶的酶促反应，通过3个温度依赖性步骤(即变性、退火和延伸)完成的反复循环。
经PCR扩增所得目的片段的特异性取决于引物与模板DNA间结合的特异性。
根据外源基因序列设计出一对引物，通过PCR反应便可特异性地扩增出转化植株基因组内外源基因的片段，而非转化植株不被扩增，从而筛选出可能被转化的植株。
转基因黑豆辨别方法
转基因黑豆辨别方法转基因黑豆是通过转基因技术将外源基因导入黑豆中，使其获得特定的性状或者改变其生物学特性的一种黑豆品种。
由于转基因黑豆具有特殊的基因组结构，因此需要采用一些特殊的方法来进行鉴别。
下面将介绍一些常用的转基因黑豆辨别方法。
1. PCR法：PCR是在转基因黑豆中检测外源基因常用的方法之一。
PCR通过扩增靶标基因的特定DNA序列，来判断种子或者植株中是否存在特定的外源基因。
具体操作包括：提取植物DNA，设计引物，进行PCR反应，通过电泳分析PCR 产物。
对于转基因黑豆，可以设计特定引物来扩增外源基因，从而进行鉴别。
2. 蛋白质电泳法：转基因黑豆中的外源基因通常会编码特定的蛋白质，可以通过蛋白质电泳来鉴别转基因黑豆。
蛋白质电泳是通过将转基因黑豆和非转基因黑豆的蛋白质提取并分离，然后通过染色或者Western blot等方式观察分离后的蛋白质条带，从而判断是否存在特定的外源蛋白质。
3. DNA杂交法：DNA杂交是通过将黑豆DNA与特定的探针（可能是具有标记的DNA片段）杂交，来判断是否存在特定的外源基因。
在黑豆DNA与探针杂交后，观察是否发生特定的杂交信号，可以确定是否存在外源基因。
4. 基因芯片鉴定法：基因芯片是一种高通量的分子生物学技术，可以同时检测上千个基因。
通过将黑豆DNA与基因芯片进行杂交，通过探针与DNA的结合情况，来判断是否存在特定的外源基因。
需要注意的是，以上方法需要在专业实验室环境下进行，需要具备一定的实验技能和设备。
此外，市场上也有商业化的转基因生物鉴别检测产品，可以购买专业的检测试剂盒进行转基因黑豆的鉴别。
总之，转基因黑豆的辨别主要依赖于DNA和蛋白质的检测和鉴定。
随着科技的发展，转基因鉴别方法也在不断更新和改进，以提高检测的准确性和效率。
基因芯片技术在育种中的应用
基因芯片技术在育种中的应用随着科技进步，种植业和畜牧业开始借助现代技术进行育种，以提高种植物和畜禽的产量、品质和抗病能力。
而基因芯片技术作为一种科技创新手段，正被越来越多的育种学家所应用。
接下来，将讨论基因芯片技术在育种中的应用。
一、基因芯片技术简介基因芯片技术是一种能够同时检测大量基因的技术，它利用特定的基因芯片，并采用高通量分析平台，以快速筛选出感兴趣的基因或基因表达。
基因芯片技术在生物学、医学、环境科学等领域有着广泛的应用。
它通常由三个步骤组成，即样品制备、芯片杂交和数据分析。
二、2.1. 利用基因芯片技术筛选优良品种传统的育种方法需要进行多年的筛选和繁殖，而利用基因芯片技术可以更快速、准确地筛选出具有抗病性、生长性状或品质上佳的优良品种。
举个例子，在橙子光合作用过程中，所含的光合作用酶会受到多种环境因素的调节，从而会影响橙子的生长速度和品质。
若能通过基因芯片技术筛选出含有有效光合作用酶的橙树，那么将会大大提高橙子的品质和产量。
2.2. 利用基因芯片技术探究基因调控网络基因芯片技术还可以用于研究基因的调控网络，进一步了解生物体内复杂的生物过程和信号网络。
例如，在家禽的研究过程中，通过构建家禽基因芯片，可以研究家禽在发育、营养摄入及代谢等重要生理过程中相关的基因表达差异，从而获得家禽的生物信息及基因网络调控机制。
2.3. 基因检测与集种基因芯片技术在育种中的一个重要应用就是进行基因检测和集种。
在畜牧业中，育种者已经开始采用基因芯片技术来检测动物个体基因信息，并根据结果选择最为适合进行繁殖的个体。
这样一来，育种者就可以更加精确地进行种畜业的繁殖和选育，以达到提高产量和改良品质的目的。
三、基因芯片技术在育种中面临的挑战基因芯片技术在育种中面临的一个重要挑战是如何准确解读芯片数据。
目前，芯片数据的分析和解读是一个持续的挑战，因为芯片检测出来的指标与生物学过程之间的关系十分复杂。
此外，由于生物体内许多的基因交互作用，表达差异和调控，基因芯片技术只能检测核酸水平，很难对蛋白质和代谢产物水平进行测定。
转基因大豆检测技术研究进展
转基因大豆检测技术研究进展[摘要]大豆的转基因研究是国内外植物分子生物学研究的热点之一。
转基因大豆已成为世界大豆主产国大豆产业发展的主要动力。
由于转基因产品的安全性在世界范围内引起广泛关注，对转基因检测技术的要求也越来越高，因此,对转基因大豆检测技术的研究成为近年来研究的热点。
重点介绍以蛋白质和核酸为目标的检测技术，如EI。
ISA、PCR和基因芯片技术的最新进展，并对不同方法的优缺点进行比较，为转基因大豆快速检测方法的选择、改进和后续研究提供参考。
[关键词]转基因大豆；检测技术；蛋白质；核酸Abstract：Soybean transformation research is a/hot spot0in the area of plant molecular genetics. Transgenic soybean has become the important power of soybeans industry development in the worlds' major producers of soybean. The different points on potential ecological risks and the impact of transgenic products on human health attracted worldwide attention． With the increase of transgenic products， the transgenic detection technology requirements should be established and perfected． The advance in detection techniques of transgenic soybean were summarized focusing on the protein and nucleic acid for target detection technology，such as new research on ELISA，PCR and gene chip techn0109y，and their characteristic were compared to provide references for transgenic soybean fast detection selection，improvement and subsequent research．Key words：transgenosis soybean；detection technology；protein；nucleic acid.转基因大豆，是指利用转基因技术，通过基因工程方法导入外源基因所培育的具有特定性状的大豆品种。
基因芯片的发展
基因芯片的发展1. 引言基因芯片是一种高通量的生物技术工具，用于检测和分析基因组中的数千个基因。
随着基因芯片技术的不断发展，它已经成为生物学、医学和农业领域中不可或缺的研究工具之一。
本文将探讨基因芯片的发展历程、应用领域以及未来的发展趋势。
2. 基因芯片的起源基因芯片最早可以追溯到1990年代初期，当时科学家们开始尝试将DNA序列固定在玻璃片或硅片上，以便进行高通量的基因表达分析。
这些早期的基因芯片只能同时检测几个基因，且制备过程复杂且昂贵。
随着生物技术和微电子技术的快速发展，基因芯片逐渐实现了规模化生产和高通量检测。
现代基因芯片可以同时检测上万个基因，并且制备过程更加简单和经济。
3. 基因芯片的工作原理基因芯片主要由两部分组成：探针和芯片。
探针是一段短的DNA序列，用于特异性地与待测基因的DNA序列杂交。
芯片上固定了成千上万个不同的探针，可以同时检测多个基因。
基因芯片的工作原理如下： - 提取待测样品中的RNA或DNA。
- 通过反转录酶将RNA转录为互补的DNA（cDNA）。
- 将标记有荧光染料的cDNA与芯片上的探针杂交。
- 利用激光扫描芯片，检测探针与cDNA杂交的信号强度。
- 分析信号强度数据，得出基因在样品中的表达水平。
4. 基因芯片的应用领域基因芯片在生物学、医学和农业领域有着广泛的应用。
以下是一些主要应用领域的介绍：4.1 基因表达分析基因芯片可以帮助科学家们研究不同条件下基因表达的变化。
通过比较不同组织、不同时间点或不同实验条件下的基因表达谱，可以揭示基因调控网络和生物过程中重要基因的功能。
4.2 疾病诊断与预测基因芯片可以用于检测和诊断多种疾病，如癌症、心血管疾病和遗传性疾病等。
通过比较患者和正常人群的基因表达谱，可以发现与特定疾病相关的基因表达模式，并且可以预测患者的治疗反应和预后。
4.3 药物筛选与个体化治疗基因芯片可以帮助科学家们筛选出对特定药物敏感或耐药的患者。
转基因作物检测识别方法
种 子2010.426转基因作物，是指利用分子生物学技术将某些生物的基因转移到其他物种中，使遗传物质得到改造的生物，兼具高产优质、多抗等诸多优点。
由于目前尚缺乏科学依据证明转基因作物及产品的安全性，对人类健康和环境潜在的风险已引起广泛关注和忧虑。
如何准确检测和识别转基因作物及其产品，也成为人们关注的热点。
1.生物表型检测法 将待检测识别的种子样品在特定的培养基上培养成幼苗，观察幼苗是否具有转基因的特定性状，以此区分转基因和非转基因幼苗。
如耐除草剂的转基因幼苗在除草剂处理的培养基上可以正常生长，而非转基因幼苗则受伤害或死亡，从而区分出耐除草剂的转基因幼苗。
该方法的优点是可利用实验室现有的设备和条件，成本低廉，不仅可以测定识别转基因产物，而且可判断其活性。
但其缺点是只能测定活的发芽种子，不同的转基因性状需单独测定，且需要的时间较长。
2. PCR 检测法定性PCR 测定法：迄今，最好的定性转基因种子分析方法是利用P C R 测定导入作物植株基因的特定D N A 序列是否存在。
PCR 可对插入两个已知DNA序列之间的特定DNA 序列进行特别和灵敏的扩增(多重)。
通常，导入的基因结构（基因卡盒）由3部分构成：启动子、结构基因、终止子。
在测定前，至少应该知道这3种中的任何1种，PCR就能用于测定其中任何一种基因，或者来自启动子和终止子D NA 标记。
PCR 基本测定主要包括3个步骤：①D N A 提取和纯化。
②插入DNA 的PCR 扩增。
③PCR 扩增产物存在的电泳确认。
每个步骤均会影响测定结果的可靠性和灵敏度，因此全部3个程序都应在最佳状态下操作。
定量PCR 测定法：定量PCR 测定有几种方法。
主要有：①竞争PCR ，根据目的序列合成一种突变的DNA 序列作为竞争模板，竞争模板与目的序列十分相似，可共用一套引物，根据扩增后这两种DNA 的含量和已知的竞争模板起始DNA 浓度，确定目的模板的起始DNA 浓度。
农作物病虫害的基因检测技术
包括RFLP、RAPD、SSR、SNP等，每种标 记都有其特点和适用范围。
基因测序技术
基因测序定义
基因测序是指通过测定DNA或RNA的序列来分析生物的遗传信息。
基因测序在农作物病虫害检测中的应用
基因测序可以直接测定病虫害的基因序列，从而快速、准确地鉴定其种类、亚种或品系 ，有助于早期预警和防治。
基因检测技术基于分子生物学原理， 利用现代生物技术手段，对生物体的 遗传物质进行分析，以揭示其遗传信 息的差异和变异。
基因检测技术的应用领域
医学领域
基因检测技术在医学领域的应用包括疾病诊断、预防、治疗和药物研发等。通过对人类基 因组的检测和分析，可以预测和诊断遗传性疾病、癌症、感染性疾病等多种疾病。
基因测序技术的发展
随着二代、三代测序技术的出现和发展，基因测序的速度和准确性得到了极大的提高， 为农作物病虫害的基因检测提供了有力支持。
生物信息学分析
生物信息学定义
生物信息学是一门研究生物信息获取、处理、存储、分析和解释的学科。
生物信息学在农作物病虫害检测中的应用
生物信息学可以对农作物病虫害的基因组、分子标记和基因序列等数据进行系统分析和挖掘，发现其中的规律和意义 ，为监测和防治提供科学依据。
1990年，人类基因组计划启动，旨在测 定人类基因组的全部DNA序列，解读其 中包含的遗传信息。
02
农作物病虫害基因检测技术原理
基因组学基础
01
基因组学定义
基因组学是一门研究生物体基因组的 学科，包括基因的组成、结构和功能 。
02
基因组学在农作物病 虫害检测中的应用
基因组学为农作物病虫害的检测提供 了基础，通过对病虫害基因组的深入 研究，可以发现与抗病、抗虫等性状 相关的基因，进而用于监测和防治。
用引物延伸芯片法实现对转基因水稻中质粒pCAMBIA1301的检测
用引物延伸芯片法实现对转基因水稻中质粒pCAMBIA1301的检测高秀丽;杨剑波;景奉香;赵建龙【期刊名称】《遗传》【年(卷),期】2005(27)2【摘要】生物芯片技术是生物技术和微制造技术的融合,已广泛用于生命科学的研究及实践、医学科研及临床、药物设计、环境保护、农业、军事等各个领域.而基因芯片是生物芯片中的一种,是指将大量基因探针分子固定于支持物上,然后与标记的样品进行杂交,所以一次可对大量核酸分子进行检测分析,从而解决了传统核酸印迹杂交技术操作复杂、自动化程度低、检测目的分子数量少、效率低等不足.文章探讨了用基因芯片这一新的检测手段对转基因植物的步检测,采用一种新的反应机制-引物延伸芯片法(arrayed primer extension),实现了样品扩增和杂交的一步化,而在传统的基因芯片检测中要需要两步来完成,从而为目前基因芯片中大片段样品的检测提供了一种可能性.【总页数】8页(P271-278)【作者】高秀丽;杨剑波;景奉香;赵建龙【作者单位】中国科学院上海微系统与信息技术研究所,上海,200050;安徽省农业科学院,合肥,230031;中国科学院上海微系统与信息技术研究所,上海,200050;中国科学院上海微系统与信息技术研究所,上海,200050【正文语种】中文【中图分类】Q78【相关文献】1.寡核苷酸阵列引物延伸技术在p53基因突变检测中的应用 [J], 吴清华;马文丽;张宝;郭秋野;李凌;郑文岭2.液相芯片技术联合等位基因特异性引物延伸反应检测结核分枝杆菌耐多药突变[J], 李婧婵;姜春来;于源华;宋海鹏3.以特异性引物延伸为基础的非综合征唇腭裂易感基因芯片技术 [J], 胥威;卢永平;韩维田;宋方田4.两种聚合酶在等位基因特异性引物延伸法检测SNP中的应用比较 [J], 陈载鑫; 何丹; 谢岭平; 李柳燕; 许红丽; 方佩荣; 尹沃河; 付文金5.纳米金基因芯片结合通用引物1次PCR法同时检测多个病原菌的研究 [J], 顾大勇;鲁卫平;王华;周元国因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
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array map of transgenic crop detection gene chip
A1~ 4, L1~ 4: negative control; B1~ 4: Gus probe;
C1~ 4: Gf p probe, D1~ 4: Hgy probe; E1~ 4: K an probe; F1~ 4: nos t erminator probe; G1~ 4: CaMV 35S t erninator probe; H1~ 4: CaMV 35S cis- promoter probe; I1~ 4: CaMV 35S trans- promoter probe.
Detection of Transgenic Crop with Gene Chip
HUANG Ying - Chun, SUN Chun - Yun, FENG Hong, HU Xiao - Dong, YIN Hai Bin
( Chengdu Bioinf ormation Technique Incorporati on, Dongsheng Rood N o. 8, Chengdu 610015, China)
Abstract: Some selected available sequences of reporter genes, resistant genes, promoters and terminators are amplified by PCR for the probes of transgenic crop detection gene chip. These probes are arrayed at definite density and printed on the surface of amino - slides by bioRobot MicroGrid maize and soybean were applied. Key words: gene chip; transgenic crop; detection . Results showed that gene chip worked quickly and correctly , when transgenic rice, pawpaw,
[ 5]
验将扫描强度为 50% ~ 60% 时的信号 CUT- OFF 值 定为 10。
2
2. 1
结果与分析
转基因作物检测型基因芯片的矩阵图 利用 MicroGrid 型基因芯片全自动点样仪点
样 , 设计成 4 5 4 阵列 , 包含 8 条检测目标探针, 2 条阴性对照, 每种探针重复 4 个点。其矩阵图见图 1。芯片设一段与检测探针几乎没有同源性的人类 基因为阴性对照, 以作为信号参照, 排除杂交过程中 非特异杂交的干扰。调整探针溶液浓度 , 使芯片上 探针量为 400~ 600pg 。
用 MicroGrid
用该芯片对 4 种转基因水稻、 木瓜、 大豆、 玉米进行检测 , 结果 表明 , 该芯片能对转基因作物做出快速、 准确的检测。 关键词 : 基因芯片 ; 转基因作物 ; 检测 中图分类号 : Q785 文献标识码 : A 文章编号 : 0253- 9772( 2003) 03- 0307- 04
50 60s, 72 60s, 30 个循环 ; 72 后延伸 5min 。扩 增产物加入 5 g 鲑鱼精 DNA, 经酒精共沉淀后再溶 解于 15 L 杂交液 ( 3. 4 SSC, 0. 3% SDS) 中。 1. 4 杂交和洗涤 标记探针于 95 水浴变性后, 取 15 L 铺 在芯 22mm 的盖玻片覆盖 杂交 4~ 6 h; 依 SSC 水溶
片微点阵表面, 用一片 22mm
其上 , 然后放置在杂交盒中, 于 60
次用 1 SSC+ 0. 03% SDS 水溶液、 0. 2 液、 0. 05 SSC 水溶液洗涤芯片, 晾干。 1. 5 杂交结果的检测
ห้องสมุดไป่ตู้TM
2. 2
新鲜材料与干种子总 DNA 提取的比较
采用 CTAB 方法从新鲜材料中 提取水稻、 木瓜 样品的总 DNA 质量很好, 以 0. 7% 琼脂糖凝胶电泳, 结果显示 DNA 完整无降解, 大小在 23kb 以上。玉 米、 大豆的干种子为不新鲜的材料, 并且含有较多的 淀粉等糖类物质 , 对 DNA 的提取有很大的干扰, 因 此 , 提取的总 DNA 出现降解现象, 如图 2。
1
1. 1
材料和方法
转基因作物检测基因芯片的制备 选用目前常用的 - 葡糖 醛酸糖苷酶报 告基因
( Gus) 、 绿色荧光蛋白报告基因 ( Gf p ) 、 卡那霉素抗性 基因( Kan) 、 潮霉素抗性基因 ( Hgy ) 、 花椰菜花叶病
收稿日期 : 2002- 05- 17; 修回日期 : 2002- 10- 21 作者简介 : 黄迎春 ( 1972- ) , 女 , 成都人 , 硕士 , 从事基因芯片研究开发工作。Tel: 028- 86260468- 232, E -mail: ychuang72@ yahoo. com. cn 通讯作者 : 尹海滨 ( 1964- ) , 男 , 专业 : 病毒学。地址 : 成都市东胜街 8 号庄森大厦 10 楼 , E -mail: hmikeyin@ hotmail. com
Fig. 2 Electrophoresis analysis of template DNA of samples
1: DNA marker, DNA - H ind ; 2~ 3: templat e DNA isolated from leaf of rice and pawpaw with CTA B extraction; 4: templat e DNA isolated form seeds of maize and soybean.
Fig. 1 图 1 转基因作物检测型 基因芯片的矩阵图
A1~ 4, L1~ 4: 负对照 ; B1~ 4: Gus 探针 ; C1~ 4: Gfp 探针 ; D1~ 4: Hgy 探针 ; E1~ 4: K an 探针 ; F1~ 4: nos 终止子探针 ; G1~ 4: CaMV 35S 终止子探针 ; H1~ 4: CaMV 35S 顺式 启动子探针 ; I1~ 4: CaMV 35S 反式启动子探针。
[ 1]
寡核苷酸探针密集排列的矩阵, 其基本原理为通过 杂交检测信号 [ 3, 4] 。利用基因芯片可实现对 DNA 的 准确、 快速、 大信息量的检测。我们的转基因作物检 测型基因芯片以基因芯片为平台, 同时对转基因作 物中常用的共 7 种报告基因、 抗性基因、 启动子和终 止子序列进行检测分析 , 从而方便、 快速地对大量待 检测转基因作物进行灵敏、 准确的检测。
物 DNA 样品进行扩增和 Cy5 或 Cy3 标记。反应体 系为: 1 PCR 缓冲液, 0 2 mmol/ L dATP, 0 2 mmol/ L dGTP, 0 2 mmol/ L dTTP, 0 1 mmol/ L dCTP, 20 mol/ L Cy3 - dCTP( 或 Cy5 - dCTP) , 500nmol/ L 混合引物 , 2 5 U Taq DNA 聚合酶 , 适量 DNA 模板, 双蒸水加到总体 积 50 L。反应程序为: 94 预变性 4min; 94 60s,
图 2 样品模板 DNA 的电泳分析
1: DNA 标准分子质量 , DNA - H in d ; 2~ 3: CTA B 法提取水稻和木瓜果叶片模板 DNA; 4: 提取的玉米和大豆种子的模板 DNA 。
基因和 CaMV 35S 终止子; 大豆中检测到 Nos 终止子 和 CaMV 35S 顺式启动子( 见图 3) 。 2. 4 待检样品的 PCR 结果分析 分别用单对引 物对已 检样 品 DNA 进行 扩增。 电泳分析结果表明: 在经该芯片检测为转基因作物 的样品 DNA 中 , 阳性片 段能扩增 出预计大 小的片 段 , 而阴性片段则没有扩增出来 ( 见图 4) 。这个结 果表明 , 芯片检测过程中多重 PCR体系能准确地扩
遗
传 HEREDITAS( Beij ing) 25( 3) : 307~ 310, 2003
研究报告
利用基因芯片检测转基因作物
黄迎春, 孙春昀, 冯
摘
红, 胡晓东, 尹海滨
( 成都百奥生物信息科技有限公司 , 成都东胜街 8 号 610015)
要 : 选用常用的两种报告基因、 两种抗性基因、 两种启 动子序列 和两种终 止子序列 为探针 , 将 其 PCR 扩增产 物 型全自动点样仪按矩阵排列点样于包 埋有氨基的载玻片上 , 制备成转基因作物检测型基因 芯片。利
308
遗
传 HEREDITAS ( Beijing ) 2003
25 卷
毒 CaMV 35S 启动子、 CaMV 35S 终止子和胭脂碱合 成酶基因 ( Nos ) 终止子作为检测片段, 分别设计扩增 引物, PCR 扩增得到探针。纯化、 浓缩、 95 水浴变 性后利用 MicroGrid 型基因芯片全自动点样仪将 探针和阴性对照点样于包埋有氨基的载玻片上。玻 片经 水 合、 干 燥、 UV 交 联 后 用 0. 2% SDS 洗 涤 10min, H 2O 洗涤 10min, 晾干备用。 1. 2 转基因作物 DNA 的提取 转基因作 物木瓜 果、 水 稻叶为 新鲜 材料, DNA 提取选用 CTAB 法 ; 转基因作物大豆、 玉米选用颗 粒饱满 的 种子 , 浸泡 过 夜 后加 入 20ml 溶液 I ( 10 mmol/ L MgCl2 , 10mmol/ L Tris Cl, pH7. 5, 0. 2 mol/ L NaCl) , 捣 碎 后 加 入 0. 5ml 20% Triton - 100, 搅 拌 45min 后过滤。中速离心去上 清, 沉淀中 加入 20ml 溶液 ( 10mmol/ L MgCl2 , 10mmol/ L Tris Cl, pH7. 5, 0. 5% Trixon- 100) , 混匀后中速离心去上清。沉淀 中加入 5ml 1% SDS 混匀后中速离心 5min, 将上清转 移到 10ml 的离 心管 中。加 入 10% 体积 的 3mol/ L NaAc, 2 体积无水乙醇沉淀 , 70% 乙醇清洗后烘干 , 溶于适量 TE 中。 1. 3 目的片段的扩增和标记 采用多重 PCR 方法对提取的被检测转基因作