黄籽甘蓝型油菜核心种质的 标记分析

/ / GH ２ １ ０ ７Y ６ ０ ８
１ ������ ２㊀ 核心种质品质性状的测定 , ) 利用近红外光谱仪 ( 测定核心种质种子含油量 ㊁蛋白质 ㊁硫苷 ㊁芥酸和油酸含量 ,每份 F o s s T R Ｇ ３ ７ ０ ０ 材料重复测定 ３ 次 ,取平均值 ． １ ������ ３㊀ 基因组 D N A 提取 [１ ] ,按照 D 每株系随机选取 ３~５ 株幼嫩叶片混合样１g 的C o l e等 ２ T A B 方法提取基因组 D NA,用 T E y 溶解于 －２ 冰箱保存备用 ０ħ ． １ ������ ４㊀S S R 分子标记分析 : / / ) 本研究涉及的 S 数 据 库 下 载 ;② P S R 引物来 源 包 括 :① B r a s s i c a D B( h t t www ������ u k c r o ������ n e t i u e Ｇ p p q [２ ] 于２ m a l等 ２ ０ ０ ５ 年公开发表的序列 ;③ 日本蔬 菜 茶 叶 研 究 所 S a t o r uM a t s u m o t o 教 授 提 供 的 序 列 ;④ 加 拿大 NA 源于 B F F 公开发表的序列 ． r a s s i c a D B和 P i u e m a l等文献中涉及序列由上海生物工程技 术 有 限 公 q 司合成 ,日本蔬菜茶叶研究所和加拿大 NA 采用本实验室优化后 F F 提供的序列为上海英俊生物公司合成 ． ２＋ , , 的P 含１ C R 扩增反应体系 ( １ ０μ L) D NA 模板为 ２ ０n １ ０ˑP C Rb u f f e r( ５ mM M １ ������ ２μ L, ０ ������ ２μ L g g ) / / １ ０ mm o l Ld NT P, ０ ������ ５U T a NA 聚合酶 ,引物 ０ ������ ５μ m o l L,加 d d H２O 至总体积 １ ０μ L． P C R 反应程 qD ; , , ) , , 序 为９ ４ ʎ C 预变性 ５m i n ３ ５ 个循环 ( ９ ４ ħ 变性４ ５s ５ ５ ħ 退火４ ５s ７ ２ ħ 延伸１m i n ７ ２ ħ 延伸１ ０m i n 扩增反应产物通过聚丙烯酰胺凝胶检测 ,银染观察并照相 ． １ ６ ħ 保存 ． １ ������ ５㊀ 数据统计分析 ) ,然后 分别以 ０, 有带赋值为 １,无带赋值为 ０,缺失为 ９ １和９对 S S R 扩增产物进行统计建立数据库 ( [ ] ２ ３ ,简 参照 S e n i o r 等 方法计算获得单个 S S R 标记位点的多态性信息量 ( P o l m o r h i cI n f o r m a t i o nC o n t e n t y p ,即 称P I C)
第３ 自然科学版 ) ７ 卷第 １ 期 ㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀ 西 南 大 学 学 报 ( ㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀２ ０ １ ５年１月 ) V o l ������ ３ ７㊀N o ������ １ J o u r n a l o fS o u t h w e s tU n i v e r s i t N a t u r a lS c i e n c eE d i t i o n J a n ������㊀２ ０ １ ５ y(
( ) ;国家科技 支 撑 计 划 项 目 ( ;中 央 高 校 基 本 科 研 业 务 费 专 项 资 金 ( , C S T C ２ ０ １ ２ G G B ８ ０ ０ ０ ８ ２ ０ １ ３ B A D ０ １ B ０ ３ １ ２) X D J K ２ ０ １ ３ C ０ ３ １
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: / / 西南大学学报 ( 自然科学版 ) ㊀㊀㊀㊀㊀h t t x b b b ������ s w u ������ c n ㊀㊀㊀㊀㊀ 第 ３ ７卷 p j
可以代表其亲本种质材料间背景差异的核心种质 ２ 因此 ,本研究 以 获 得 的 ２ ０份． ０份黄籽甘蓝型油菜核心 , , 种质为材料 分析其品质性状并利用 S S R 标记技术检测其分子水平上的多态性 从而确定育种可以充分利 用的杂种优势亲本群 ,为选配黄籽甘蓝型油菜杂交种提供稳定亲本 ,对于今后杂交Leabharlann Baidu种和优势组合的选配 具有重要意义 ．
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收稿日期 :２ ０ １ ３ ０ ５ １ ３ ;国 家 自 然 科 学 基 金 ( ,３ ;重 庆 市 主 要 农 作 物 良 种 创 新 工 程 项 目 基金项目 :８ ６ ３重点项目( ２ ０ １ １ A A １ ０ A １ ０ ４) U １ ３ ０ ２ ２ ６ ６ １ ４ ０ １ ４ １ ２) ) ;西南大学博士基金 ( ) X D J K ２ ０ １ ２ A ０ ０ ９ S WU １ １ ２ ０ ３ ６ ． ,男 ,山东潍坊人 ,讲师 ,主要从事作物分子育种研究 ． 作者简介 : 曲存民 ( １ ９ ８ ３ ) 通信作者 :李加纳 ,教授 ．
种质资源蕴藏丰富的遗传多样性 ,是作物新品种培育及育种研 究 的 重 要 物 质 基 础 ． 在世界范围内巨大 的种质资源数量使得育种工作者很难对其进行深入研究并加以有效利用 ． 因此 ,核心种质的概念于 １ ９ ８ ４年 [ ] １ 首次被提出 ,表示尽可能以种质资源的最小数量来最大限度地代表整个种质资源多样性 ,有效促进了种
[４ ] ,简 称 M 其中 fi 表示i 位点的基因频率 ;参照 S 方法计 算 标 记 索 引 系 数 ( 聚类 m i t h等 ２ M a r k e r i n d e x I) ． 分析按非加权组平均法 ( 进行 ,所有数据分析采用软件 S U P GMA) P S S１ ３ ������ ０和E x c e l ２ ０ ０ ３ 完成 ． 核心种质的评价参数计算 １ ������ ６㊀ 在原始种质群体和核心种质间 ,同一品质性状方差与平均数的差异显著性分别用 F 检验和t 检验进行 检测 ,核心种质主要特性用平均数 ㊁方差 ㊁极值 ㊁变异系数 ㊁偏度和峰度等 ６ 个主要评价参数进行评价 ． ２ P I C ＝１－ ðfi
] ] ２] ３－ ４] ５ ６－１ ０ １ １－１ ２] ,且在小麦 [ ㊁大豆 [ ㊁水稻 [ 质资源评价 ㊁利用及发掘重要基因效率 [ 及玉米 [ 等主要作物中已 [ ] １ ３－１ ８ 建立了相应的核心种质资源库 ,并用 S 标记对其进行了遗传分析 S R ．
油菜不仅是我国重要的油料作物 ,且种质资源十分丰富 ,与其他作 物 相 同 ,种 质 资 源 的 创 新 与 利 用 也 作为油菜育种工作中主要组成部分而备受关 注 ． 在 生 产 中 ,甘 蓝 型 黄 籽 油 菜 以 其 含 油 量 和 蛋 白 含 量 高 ,纤 维素和多酚等有害物质含量低 ,油质清澈透明 ,饼粕饲用价值高等一系列优 点 ,引 起 国 内 外 育 种 家 的 高 度 重视 ． 但由于甘蓝型油菜在自然界中缺乏天然 的 种 质 资 源 ,大 部 分 黄 籽 均 是 通 过 人 工 合 成 或 诱 变 获 得 ,因
] １ ９ 此针对黄籽甘蓝型油菜核心种质资源筛选利用方面的研究相对较少 ,但在白菜型油菜中有相关报道 [ ． ２ ０] 本研究根据刘晓兰等 [ 对重庆市油菜 工 程 技 术 研 究 中 心 提 供 的 １ ８ ０份黄籽甘蓝型油菜骨干亲本材料 , 的研究结果 ,采用 U 法对其进行了遗传背景的差异分析 并综合比较了 P GMA ５ 个主要品质性状 ,共获得
编㊀号 １ ２ ３ ４ ５ ６ ７ ８ １ ０ ９ / GH ０ １ ８ ５ １ [ ( ) /品 ９ ] / ( / ) 埃斯佩德/ ７ ４ Ｇ ３ １ ７ ３ Ｇ ４ ９ ６ GH ０ １ ９ ９ A ２ ２ ７ 系㊀谱㊀来㊀源 表 １㊀ 黄籽甘蓝型油菜核心种质系谱来源 编㊀号 １ １ １ ２ １ ３ １ ４ １ ５ １ ６ １ ７ １ ８ １ ９ ２ ０ / GH ０ １ ８ ５ １ / Q ２ GH ０ ６ 系㊀谱㊀来㊀源
１ ㊀ 材料与方法
１ ������ １㊀ 试验材料 １ ７] 根据刘晓兰等[ 对本研究室１ ８ ０ 份 黄 籽 甘 蓝 型 油 菜 的 研 究 结 果 ,选 取 了 ２ ０份具有遗传多样性及种 ㊁ ( ) , 质特 性 差 异 明 显 遗 传 距 离 较 大 的 甘 蓝 型 油 菜 黄 籽 为 核 心 种 质 表 １ 均 由 西 南 大 学 重 庆 市 油 菜 工 程 技 术 研 究 中 心 多 年 培 育 可 供 利 用 的 亲 本 育 种 品 系 ,且 在 全 国 冬 油 菜 产 区 经 这 些 品 系 选 育 的 多 个 高 产 优 质 杂交油菜品种被广泛种植． 田 间 试 验 在 重 庆 市 北 碚 西 南 大 学 歇 马 试 验 基 地 播 种 ,单 株 移 栽 种 植 ,每 份 材 , , 料２ 株 次 重 复 田 间 管 理按常规生产方式进行． 成 熟 后 分 小 区 收 获 种 子 ,用 于 品 质 性 状 的 分 析 ． ０ ２
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１ ������ 西南大学 农学与生物科技学院 ,重庆 ４ ０ ０ ７ １ ６; ２ ������ 南方山地农业教育部工程研究中心 ,重庆 ４ ０ ０ ７ １ ６; ( ) , 西南大学 荣昌校区 动物医学系 重庆 荣昌 ３ ������ ４ ０ ２ ４ ６ ０ 摘要 : 核心种质筛选是植物遗传资源研究和利用的便捷途径 ,利于种质资源杂种优势利用 ． 遗传多样性分析有利于 最优亲本组合的鉴定 ,以期能够产生遗传变异最大的后代群体和促进不同资源的有利基因渗透到栽培品种 ． 该研究 通过表型数据分析表明 ,初选核心种质能够有效地代表 参 试 群 体 的 遗 传 多 样 性 ,利 用 ２ ０对 S S R 标记对２ ０份黄籽 数 在 ４~１ １ 之间 ,平均位点为 ６ ������ ４ ０ 个 ,多态信息量 P I C 值在 ０ ������ ８ １~０ ������ ９ ２ 之间 ,通过 U P GMA 法 ,核心种质的遗传 相似系数介于 ０ 该研究为甘蓝型黄籽油 ������ １ ７~０ ������ ６ １ 之间 ,说明黄籽甘蓝型油菜核心种 质 具 有 较 丰 富 的 遗 传 多 样 性 ． 菜基因资源的挖掘和黄籽杂交育种的利用提供了理论基础 ． 关 ㊀ 键 ㊀ 词 : 甘蓝型油菜 ;黄籽 ; S S R;种质资源 ;遗传多样性 ( ) 中图分类号 :S ６ ３ ４ ������ ３㊀㊀㊀㊀ 文献标志码 :A㊀㊀㊀㊀ 文章编号 :１ ６ ７ ３ ９ ８ ６ ８ ２ ０ １ ５ ０ １ ０ ０ ０ １ ０ ６ 甘蓝型油菜的核心种质进行了遗传多样性分析 ,共 检 测 出 １ ２ ８ 个 等 位 基 因 ,每 对 引 物 在 不 同 材 料 之 间 的 等 位 基 因
: / D O I １ ０ ������ １ ３ ７ １ ８ ������ c n k i ������ x d z k ������ ２ ０ １ ５ ������ ０ １ ������ ０ ０ １ j
黄籽甘蓝型油菜核心种质的 S S R 标记分析
２ ２ ２ , ㊀ 卜海东１, , ㊀ 刘晓兰３, ㊀ 王 ㊀ 敏１, , 曲存民１, ２ ２ ２ ２ , ㊀ 刘水燕１, , ㊀ 杨绍锋１, , ㊀ 王 ㊀ 瑞１, , 卢 ㊀ 坤１, , , , 徐新福１ ２, ㊀ 谌 ㊀ 利１ ２, ㊀ 李加纳１ ２
/ 中双 ９ 号 ２ ０ ６ R ８ / ０ ７ H ５ ５ X ３ / ０ ７ R ２ ４ X １ ３ / ０ ６ P ４ ２ ２ P ７ １ / S C ９ ４ ０ ０ ５ GH １ ６ / ０ ６ P ４ ２ ２P ７ １ R ６ ９ Ｇ ３ 中双 ９ 号/板
/ / /川油 １ S o h i a GH １ ６ ８ p / Y ５ ２ ０ L １ ２ ０ ０ ５ E ２ ６ Ｇ ２ / S C ９ ４ ０ ０ ５ GH １ ６ / Y ５ ３ ９ L １ ２ １