HPLC测定穿心莲内酯原料药的含量
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[ 1] [ 1]
穿心莲内 酯对照品 ( 批 号 110797 200307) 购 自中国药品生物制品检定所, 穿心莲内酯原料药样 品来源见表 1 。
表 1 穿心莲内酯原料药样品来源与批号
N o. 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 产地 四川什邡 四川什邡 四川什邡 四川什邡 四川什邡 四川绵阳 四川成都 四川广汉 广东茂名 广西桂林 广西柳州 湖南长沙 来源 什邡市巨邦植物原料有限公司 什邡市胜仁植物有限公司 什邡市植物原料有限公司 什邡市华贵植物化工有限公司 什邡市康源植物原料有限公司 绵阳东方源生物科技有限公司 成都兰贝植化科技有限公司 广汉市科伦植物化工有限公司 茂名市汇润化工有限公司 桂林市三棱生物制品有限公司 柳州市绿翔生物技术有限公司 长沙市惠瑞生物科技有限公司 批 号 090113 090220 080526 20081218 090310 090302 090212 090309 HR& 090203 090125 090210 090301
99. 50
0 . 37
100. 8
0 . 42
2 10 样品测定
取 12批各地不同厂家样品 , 依法
制备 2 份平行供试品溶液 , 进样测定, 结果见表 4 。 3 讨论 根据 中国药典 2005 年版 穿心莲 药材中穿 心莲内酯的检测波长
[ 2]
, 确定检测波长为 225 n m。
2 6 线性关系考察 2114
第 35 卷第 16期 2010 年 8月
V ol 35 , Issue 16 A ugust , 2010
HPLC 测定穿心莲内酯原料药的含量
徐嵬, 杨秀伟Baidu Nhomakorabea
*
( 北京大学 药学院 天然药物学系, 天然药物及仿生药物国家重点实验室 , 北京 100191)
[ 摘要 ] 目的 : 建立 HPLC 测 定穿 心莲内 酯原 料药含 量的 方法。 方 法 : 选用 D ia m onsil C 18 ( 2) 色谱 柱 ( 4 6 mm 250
%
酯峰计算应不低于 5 000 。根据 12 批不同厂家的 样品含量测定结果 ( 97 7 % ~ 102 8% ), 并参照 中 国药典 ( 1977 年版 ), 建 议标准限度为 本 品按干 燥品 计 算 , 含 穿 心 莲 内 酯 ( C 20 H 30 O5 ) 应 为 95 0 % ~ 103 0 % 。 本文采用高效液相色谱法测定穿心莲内酯原料 药的含量 , 方便、 准确、 易行, 为保证该产品质量及其 相关制剂的生产提供了科学方法。
杨 秀伟 , Te: l ( 010 ) 82805106 , E m ai: l xw yang@ b j
第 35 卷第 16期 2010 年 8月
V ol 35 , Issue 16 A ugust , 2010
(0 1g L
- 1
) 进样, 所得 H PLC 图见图 1 , 穿心莲内
量浓度梯度 0 4 , 0 3, 0 2 , 0 1 , 0 05 g
2 方法与结果 2 1 色谱条件 流动相为甲醇 水 ( 60 40) , 检测 m in , 进样
- 1
波长 225 n m, 柱温室温 , 流速 1 0 mL 体积 10 L。 2 2 对照品溶液的制备 即得。 2 3 供试品溶液的制备
精密称取穿心莲内酯对
甲醇为色谱纯 ( 天津西华特种试剂厂 ), 水为娃 哈哈纯净水 , 均经 0 45 m 微孔滤膜过滤。
[ 参考文献 ]
[ 1] [ 2] 中国药典 中国药典 一部 [ S ] 一部 [ S ] 1978: 439 2005: 190
A ssay of andrographolide bulk drug by HPLC
* XU W e,i YANG X iuw ei
( S tate K ey Laboratory of N atural and B iom i m etic D rugs , D epart m ent of N aturalM edicines , S chool of Pharmaceutical S ciences , P ek ing University, B eij ing 100191, China ) [ Ab stract] O bjective : To establish a m ethod for the deter m ination o f andrographo lide bu lk drug by H PLC M eth od : T he con 250 mm, 5 m ) w ith m ethano l wa ter ( 60 40) as a mob ile phase T he flow
L 的对照
- 1
酯色谱峰的保 留时间 为 6 028 m in , 理论 板数 为 7 640 , 分离度为 3 34 , 拖尾因子为 1 05 ; 取 No 6 样品 的供试品溶液进样 , 所得 H PLC 图见图 2, 穿心莲内 酯色 谱峰 的 保 留时 间 为 5 961 m in , 理 论 板数 为 7925 , 分离度为 11 6 , 拖尾因子为 1 05 。
使用 3 支不同来源的 C18色谱柱, 进样测定 , 计算穿 心莲内酯色谱峰的理论板数、 分离度和拖尾因子, 见 表 2。结果表明 , 本含量测定方法适应性较强, 在各 色谱柱上穿心莲内酯色谱峰的理论板数、 分离度和 拖尾因子均良好。为方便计 , 本文的其余试验均使 用 D ikm a D iam onsil C18 ( 2) 色谱柱。
精密称取穿心莲内酯对照品
- 1
根据测定结果 , 所有样品中穿心莲内酯色谱峰的理 论板数均在 7 000以上, 建议理论板数 按穿心莲内
25 m g , 加甲醇制成 0 5 g L 溶液并稀释成系列质
第 35 卷第 16期 2010 年 8月
V ol 35 , Issue 16 A ugust , 2010
[ 稿件编号 ] [ 基金项目 ] [ 通信作 者 ] mu edu cn 20100713006 中国药典 2010版一部标准研究项目 ( TS 07)
*
照品适量 , 加甲醇制成每 1 mL 含 0 1 m g 的储备液, 取本品约 25 m g, 精密称
定, 置 50 mL 量瓶中 , 加甲醇溶解并稀释至刻度, 摇 匀。精密量取 5 mL, 置 25 mL 量瓶中, 加甲醇稀释 至刻度, 摇匀, 即得。 2 4 系统适用性试验 取穿心莲内酯对照品溶液 2113
mm, 5 m ), 流动 相甲醇 水 ( 60 40 ) , 流速 1 0 mL m in- 1, 检测波长为 225 nm。 结果 : 穿心莲内酯在 0 5~ 5 0 g线性关系 良好 ( r = 1 000), 低、 中、 高 3 浓度的 平均加 样回收 率分别为 99 1 % , 99 5% , 100 8 % ( n = 3) 。 结 论 : 本方法 简便、 精确 且准 确 , 可用于穿心莲内酯原料药的质量控制。 [ 关键词 ] 穿心莲内酯 ; 质量控制 ; HPLC
穿心莲内酯 ( andrographolide) 系从 爵床科植 物穿心莲 A ndrographis pan iculata ( Bur m f ) Nees 的干燥地上部分提取精制所得, 具有清热解毒 , 抗菌 消炎之 功效 , 用于 上呼吸 道感染 , 细 菌性痢 疾 。 本原料药的生产以四川为多 , 重庆、 广西、 广东、 湖 南、 湖北等省份亦有生产。以本品为原料的制剂包 括穿心莲内酯片、 胶囊、 软胶囊和滴丸 , 以及穿琥宁、 炎琥宁、 莲必治、 喜炎平等水溶性衍生物注射剂 , 其 解热、 抗菌、 抗病毒等疗效显著 , 多年来已广泛应用 于临床。 本品首次收载于 中国药典 1977 年版一部 , 在 中国药典 标准提高行动计划中, 对其质量标准进 行修订和提高。在中国药典 1977 年版中, 本品的含 量测定采用比色法
品溶液, 分别精密吸取各 10 L 注入液相色谱仪 , 按 色谱条件测定 , 记录峰面积。以峰面积为纵坐标 Y, 以穿心莲内酯溶液质量浓度 ( g L
- 1
) 为横坐标 X ,
绘制 标 准 曲 线 , 计 算 回 归 方 程 Y = 2 028 4 7 3 10 X - 3 709 8 10 ( r = 1 000 ); 线 性范围 0 05~ 0 5g L
表 2 不同色谱柱对分离效果的影响
色谱柱 D ikm a D iamonsil C 18 ( 2 ) Ph enom enex G em in i C 18 110 W aters Symm etry C 18 注 : 拖尾因子皆为 1 05 。 理论板数 8 556 8 501 7 229 分离度 16 4 13 6 13 1
表 3 穿心莲内酯加样回收率 ( n = 3)
2 5 色谱柱考察
取 No 6 供试品溶液一份 , 分别
No 1 2 3 4 5 6 7 8 9
取样量 /m g 26 . 73 25 . 22 27 . 00 27 . 16 26 . 82 25 . 30 26 . 53 26 . 11 24 . 50
样品中量 /m g 26 . 48 24 . 98 26 . 75 26 . 90 26 . 57 25 . 06 26 . 28 25 . 86 24 . 27
加入量 /m g 22 . 59 21 . 44 22 . 90 26 . 65 26 . 97 27 . 27 33 . 88 32 . 27 33 . 33
。由于比色法 不能排除穿心
莲中其他内酯类物质的干扰, 特异性不佳 , 结果不准 确。该文采用特异性良好的高效液相色谱法替代比 色法作为含量测定法。 1 材料 T SP高效液相色谱仪 ( P2000 高压泵, UV3000 紫 外检测器, PC1000 色谱工作站 )。色谱柱: D ik m aD ia m onsil C18 ( 2) ( 4 6 mm ters Symm etry C18 ( 250 250 mm, 5 m ); Phenom e 250 mm, 5 m ); W a 4 6 mm, 5 m )。 nex Gem in i C 18 110 ( 4 6 mm
表 4 穿心莲内酯样品含量 ( n = 2)
No . 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 产地 四川什邡 四川什邡 四川什邡 四川什邡 四川什邡 四川绵阳 四川成都 四川广汉 广东茂名 广西桂林 广西柳州 湖南长沙 穿心莲内酯 102 .1 102 .8 99 . 50 99 . 60 100 .8 99 . 70 99 . 60 100 .1 98 . 50 98 . 80 100 .8 97 . 70
测定量 /m g 48. 68 46. 13 49. 76 53. 32 53. 38 52. 30 60. 56 58. 38 57. 72
回收率 /% 98. 3 98. 6 100. 5 99. 2 99. 4 99. 9 101. 2 100. 8 100. 4
平均值 R SD /% 99. 10 /% 1 . 2
-1
( 0 5~ 5 0
g) 。
2 7 精密度试验 取 N o 6 供 试品 溶 液一 份 , 精 密吸取供试品 溶液 10 L, 连 续进 样 6 次测 定重 复性 , 测得 穿 心 莲内 酯 峰 面 积 RSD 1 2% ; 在 连 续 3 d 内每 天进样 2 次测 定日间 精密度 , 测得穿 心莲内酯峰 面积 RSD 1 2 % 。 重复 性、 日间 精密 度皆良好。 2 8 稳定性试验 取 No 6 供试品溶液一份, 分别 在第 0 , 4 5 , 34 8 , 35 2 , 48 3 , 48 8 h 依法测定 , 测 得穿心莲内酯峰面积 RSD 1 3 % , 供试品溶液在 48 h 内稳定。 2 9 回收率试验 采取低中高 3 个浓度加样回收
法, 取样品 No 6 ( 批号 090302 ) 适量, 加入不同量 的对照品 , 按 2 3 项下方法制备供试品溶液。每个 浓度制备 3 份, 依法测定 , 计算回收率 , 结果见表 3 , 低、 中、 高 3 个浓度的 平均加样 回收率分 别为 99 1 % , 99 5 % , 100 8 % ( n = 3) 。
穿心莲内 酯对照品 ( 批 号 110797 200307) 购 自中国药品生物制品检定所, 穿心莲内酯原料药样 品来源见表 1 。
表 1 穿心莲内酯原料药样品来源与批号
N o. 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 产地 四川什邡 四川什邡 四川什邡 四川什邡 四川什邡 四川绵阳 四川成都 四川广汉 广东茂名 广西桂林 广西柳州 湖南长沙 来源 什邡市巨邦植物原料有限公司 什邡市胜仁植物有限公司 什邡市植物原料有限公司 什邡市华贵植物化工有限公司 什邡市康源植物原料有限公司 绵阳东方源生物科技有限公司 成都兰贝植化科技有限公司 广汉市科伦植物化工有限公司 茂名市汇润化工有限公司 桂林市三棱生物制品有限公司 柳州市绿翔生物技术有限公司 长沙市惠瑞生物科技有限公司 批 号 090113 090220 080526 20081218 090310 090302 090212 090309 HR& 090203 090125 090210 090301
99. 50
0 . 37
100. 8
0 . 42
2 10 样品测定
取 12批各地不同厂家样品 , 依法
制备 2 份平行供试品溶液 , 进样测定, 结果见表 4 。 3 讨论 根据 中国药典 2005 年版 穿心莲 药材中穿 心莲内酯的检测波长
[ 2]
, 确定检测波长为 225 n m。
2 6 线性关系考察 2114
第 35 卷第 16期 2010 年 8月
V ol 35 , Issue 16 A ugust , 2010
HPLC 测定穿心莲内酯原料药的含量
徐嵬, 杨秀伟Baidu Nhomakorabea
*
( 北京大学 药学院 天然药物学系, 天然药物及仿生药物国家重点实验室 , 北京 100191)
[ 摘要 ] 目的 : 建立 HPLC 测 定穿 心莲内 酯原 料药含 量的 方法。 方 法 : 选用 D ia m onsil C 18 ( 2) 色谱 柱 ( 4 6 mm 250
%
酯峰计算应不低于 5 000 。根据 12 批不同厂家的 样品含量测定结果 ( 97 7 % ~ 102 8% ), 并参照 中 国药典 ( 1977 年版 ), 建 议标准限度为 本 品按干 燥品 计 算 , 含 穿 心 莲 内 酯 ( C 20 H 30 O5 ) 应 为 95 0 % ~ 103 0 % 。 本文采用高效液相色谱法测定穿心莲内酯原料 药的含量 , 方便、 准确、 易行, 为保证该产品质量及其 相关制剂的生产提供了科学方法。
杨 秀伟 , Te: l ( 010 ) 82805106 , E m ai: l xw yang@ b j
第 35 卷第 16期 2010 年 8月
V ol 35 , Issue 16 A ugust , 2010
(0 1g L
- 1
) 进样, 所得 H PLC 图见图 1 , 穿心莲内
量浓度梯度 0 4 , 0 3, 0 2 , 0 1 , 0 05 g
2 方法与结果 2 1 色谱条件 流动相为甲醇 水 ( 60 40) , 检测 m in , 进样
- 1
波长 225 n m, 柱温室温 , 流速 1 0 mL 体积 10 L。 2 2 对照品溶液的制备 即得。 2 3 供试品溶液的制备
精密称取穿心莲内酯对
甲醇为色谱纯 ( 天津西华特种试剂厂 ), 水为娃 哈哈纯净水 , 均经 0 45 m 微孔滤膜过滤。
[ 参考文献 ]
[ 1] [ 2] 中国药典 中国药典 一部 [ S ] 一部 [ S ] 1978: 439 2005: 190
A ssay of andrographolide bulk drug by HPLC
* XU W e,i YANG X iuw ei
( S tate K ey Laboratory of N atural and B iom i m etic D rugs , D epart m ent of N aturalM edicines , S chool of Pharmaceutical S ciences , P ek ing University, B eij ing 100191, China ) [ Ab stract] O bjective : To establish a m ethod for the deter m ination o f andrographo lide bu lk drug by H PLC M eth od : T he con 250 mm, 5 m ) w ith m ethano l wa ter ( 60 40) as a mob ile phase T he flow
L 的对照
- 1
酯色谱峰的保 留时间 为 6 028 m in , 理论 板数 为 7 640 , 分离度为 3 34 , 拖尾因子为 1 05 ; 取 No 6 样品 的供试品溶液进样 , 所得 H PLC 图见图 2, 穿心莲内 酯色 谱峰 的 保 留时 间 为 5 961 m in , 理 论 板数 为 7925 , 分离度为 11 6 , 拖尾因子为 1 05 。
使用 3 支不同来源的 C18色谱柱, 进样测定 , 计算穿 心莲内酯色谱峰的理论板数、 分离度和拖尾因子, 见 表 2。结果表明 , 本含量测定方法适应性较强, 在各 色谱柱上穿心莲内酯色谱峰的理论板数、 分离度和 拖尾因子均良好。为方便计 , 本文的其余试验均使 用 D ikm a D iam onsil C18 ( 2) 色谱柱。
精密称取穿心莲内酯对照品
- 1
根据测定结果 , 所有样品中穿心莲内酯色谱峰的理 论板数均在 7 000以上, 建议理论板数 按穿心莲内
25 m g , 加甲醇制成 0 5 g L 溶液并稀释成系列质
第 35 卷第 16期 2010 年 8月
V ol 35 , Issue 16 A ugust , 2010
[ 稿件编号 ] [ 基金项目 ] [ 通信作 者 ] mu edu cn 20100713006 中国药典 2010版一部标准研究项目 ( TS 07)
*
照品适量 , 加甲醇制成每 1 mL 含 0 1 m g 的储备液, 取本品约 25 m g, 精密称
定, 置 50 mL 量瓶中 , 加甲醇溶解并稀释至刻度, 摇 匀。精密量取 5 mL, 置 25 mL 量瓶中, 加甲醇稀释 至刻度, 摇匀, 即得。 2 4 系统适用性试验 取穿心莲内酯对照品溶液 2113
mm, 5 m ), 流动 相甲醇 水 ( 60 40 ) , 流速 1 0 mL m in- 1, 检测波长为 225 nm。 结果 : 穿心莲内酯在 0 5~ 5 0 g线性关系 良好 ( r = 1 000), 低、 中、 高 3 浓度的 平均加 样回收 率分别为 99 1 % , 99 5% , 100 8 % ( n = 3) 。 结 论 : 本方法 简便、 精确 且准 确 , 可用于穿心莲内酯原料药的质量控制。 [ 关键词 ] 穿心莲内酯 ; 质量控制 ; HPLC
穿心莲内酯 ( andrographolide) 系从 爵床科植 物穿心莲 A ndrographis pan iculata ( Bur m f ) Nees 的干燥地上部分提取精制所得, 具有清热解毒 , 抗菌 消炎之 功效 , 用于 上呼吸 道感染 , 细 菌性痢 疾 。 本原料药的生产以四川为多 , 重庆、 广西、 广东、 湖 南、 湖北等省份亦有生产。以本品为原料的制剂包 括穿心莲内酯片、 胶囊、 软胶囊和滴丸 , 以及穿琥宁、 炎琥宁、 莲必治、 喜炎平等水溶性衍生物注射剂 , 其 解热、 抗菌、 抗病毒等疗效显著 , 多年来已广泛应用 于临床。 本品首次收载于 中国药典 1977 年版一部 , 在 中国药典 标准提高行动计划中, 对其质量标准进 行修订和提高。在中国药典 1977 年版中, 本品的含 量测定采用比色法
品溶液, 分别精密吸取各 10 L 注入液相色谱仪 , 按 色谱条件测定 , 记录峰面积。以峰面积为纵坐标 Y, 以穿心莲内酯溶液质量浓度 ( g L
- 1
) 为横坐标 X ,
绘制 标 准 曲 线 , 计 算 回 归 方 程 Y = 2 028 4 7 3 10 X - 3 709 8 10 ( r = 1 000 ); 线 性范围 0 05~ 0 5g L
表 2 不同色谱柱对分离效果的影响
色谱柱 D ikm a D iamonsil C 18 ( 2 ) Ph enom enex G em in i C 18 110 W aters Symm etry C 18 注 : 拖尾因子皆为 1 05 。 理论板数 8 556 8 501 7 229 分离度 16 4 13 6 13 1
表 3 穿心莲内酯加样回收率 ( n = 3)
2 5 色谱柱考察
取 No 6 供试品溶液一份 , 分别
No 1 2 3 4 5 6 7 8 9
取样量 /m g 26 . 73 25 . 22 27 . 00 27 . 16 26 . 82 25 . 30 26 . 53 26 . 11 24 . 50
样品中量 /m g 26 . 48 24 . 98 26 . 75 26 . 90 26 . 57 25 . 06 26 . 28 25 . 86 24 . 27
加入量 /m g 22 . 59 21 . 44 22 . 90 26 . 65 26 . 97 27 . 27 33 . 88 32 . 27 33 . 33
。由于比色法 不能排除穿心
莲中其他内酯类物质的干扰, 特异性不佳 , 结果不准 确。该文采用特异性良好的高效液相色谱法替代比 色法作为含量测定法。 1 材料 T SP高效液相色谱仪 ( P2000 高压泵, UV3000 紫 外检测器, PC1000 色谱工作站 )。色谱柱: D ik m aD ia m onsil C18 ( 2) ( 4 6 mm ters Symm etry C18 ( 250 250 mm, 5 m ); Phenom e 250 mm, 5 m ); W a 4 6 mm, 5 m )。 nex Gem in i C 18 110 ( 4 6 mm
表 4 穿心莲内酯样品含量 ( n = 2)
No . 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 产地 四川什邡 四川什邡 四川什邡 四川什邡 四川什邡 四川绵阳 四川成都 四川广汉 广东茂名 广西桂林 广西柳州 湖南长沙 穿心莲内酯 102 .1 102 .8 99 . 50 99 . 60 100 .8 99 . 70 99 . 60 100 .1 98 . 50 98 . 80 100 .8 97 . 70
测定量 /m g 48. 68 46. 13 49. 76 53. 32 53. 38 52. 30 60. 56 58. 38 57. 72
回收率 /% 98. 3 98. 6 100. 5 99. 2 99. 4 99. 9 101. 2 100. 8 100. 4
平均值 R SD /% 99. 10 /% 1 . 2
-1
( 0 5~ 5 0
g) 。
2 7 精密度试验 取 N o 6 供 试品 溶 液一 份 , 精 密吸取供试品 溶液 10 L, 连 续进 样 6 次测 定重 复性 , 测得 穿 心 莲内 酯 峰 面 积 RSD 1 2% ; 在 连 续 3 d 内每 天进样 2 次测 定日间 精密度 , 测得穿 心莲内酯峰 面积 RSD 1 2 % 。 重复 性、 日间 精密 度皆良好。 2 8 稳定性试验 取 No 6 供试品溶液一份, 分别 在第 0 , 4 5 , 34 8 , 35 2 , 48 3 , 48 8 h 依法测定 , 测 得穿心莲内酯峰面积 RSD 1 3 % , 供试品溶液在 48 h 内稳定。 2 9 回收率试验 采取低中高 3 个浓度加样回收
法, 取样品 No 6 ( 批号 090302 ) 适量, 加入不同量 的对照品 , 按 2 3 项下方法制备供试品溶液。每个 浓度制备 3 份, 依法测定 , 计算回收率 , 结果见表 3 , 低、 中、 高 3 个浓度的 平均加样 回收率分 别为 99 1 % , 99 5 % , 100 8 % ( n = 3) 。