谷氨酸生产菌及扩大培养

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第四节 利用生物工程新技术选育谷氨酸生 产菌
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二、谷氨酸发酵不同阶段的菌体形态
从谷氨酸发酵中菌体形态的变化来 看,大致可以分为长菌型细胞、转移期细 胞和产酸型细胞3种不同时期的细胞形态。
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三、谷氨酸发酵感染噬菌体后的菌体 形态
发酵前期感染噬菌体后，菌体细胞明显减少, 细胞不规则，发圆、发胖，缺乏“Ｖ”字形排列， 有明显的细胞碎片，严重时出现拉丝、拉网， 互相堆在一起，几乎找不到完整的菌体细胞,类 似蛛网或鱼翅状。
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第三节 谷氨酸生产菌的育种
2，选育耐高渗透压的菌株
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第三节 谷氨酸生产菌的育种
3，选育不分解利用谷氨酸的突变株：即选育以谷氨酸为 唯一碳源菌体不长或生长微弱的突变株。
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第三节 谷氨酸生产菌的育种
4，选育细胞膜渗透性好的突变株
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第三节 谷氨酸生产菌的育种
• 人们发现，谷氨酸生产菌在发酵过程中会发生明显 的菌体形态的变化。实践证明，在发酵过程中发现 菌体形态有明显的变化时，正是产谷氨酸的激增时 间。但在发酵培养基含有过剩生物素的培养条件下， 菌体形态则没有明显变化，却呈现耗糖、长菌、不 产谷氨酸的异常发酵。
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一、种子的菌体形态
斜面和一、二级种子培养在不同培养条件下, 细胞形态基本相似。斜面培养的菌体较细小,一、 二级种子比斜面菌体大而粗壮，革兰氏染色深。多 为短杆至棒杆状，有的微呈弯曲状，两端钝圆，无 分枝；细胞排列呈单个、成对及“V”字形，有栅状 或不规则聚块；分裂的细胞大小为0.7～0.9*1.0～ 3.4um。由于生物素充足，繁殖的菌体细胞均为谷 氨酸非积累型细胞。
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二，现有谷氨酸生产菌的菌学性质：
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三，现有谷氨酸生产菌的主要特征：
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三，现有谷氨酸生产菌的主要特征：
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三、现有谷氨酸生产菌的主要特征 （总结）
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第二节 谷氨酸生产菌在发酵过 程中的形态变化
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前言：
2，谷氨酸生 产菌抗噬菌 株的选育
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前言：
3 ，采用遗传 工程新技 术选育谷 氨酸优良 菌种
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前言：
二，谷氨 酸生产 菌保存 方法
1，几种 斜面培 养基
保存方 法
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前言：
二，谷氨 酸生产 菌保存 方法
2．磷酸 盐缓冲 液保存 方法的 改进
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前言：
二，谷氨 酸生产 菌保存 方法
3．试管 熔封法 保存谷 氨酸菌 种的研 究
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前言：
二，谷氨 酸生产 菌保存 方法
4．液氮 超低 温保
存谷氨 酸菌种
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第一节 谷氨酸生产菌的主要特征和菌学性质
一，现有谷氨酸生产菌的分类：
现有谷氨酸生产菌主要是棒状杆菌属、短 杆菌属、小杆菌属及节杆菌属中的细菌。这四 个属在细菌的分类系统中彼此比较接近。短杆 菌属隶属于短杆菌科(Brevibacteriaceace)，而 棒状杆菌属、小杆菌属及节杆菌属则都隶属于 棒状杆菌科(corynebacteriaceae)。短杆菌科和 棒状杆菌科均属于真细菌目中的革兰氏染色阳 性、无芽抱杆菌及有芽抱杆菌的一大类。
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第三节 谷氨酸生产菌的育种
9，选育强化能量代谢的突变株
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第三节 谷氨酸生产菌的育种
10，选育减弱HMP途径后段酶活性的突变株
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第四节 利用生物工程新技术选育谷氨酸生 产菌
一、应用原生质体融合新技术选育谷氨酸生产菌
1)标记菌株的筛选； 2)原生质体的制备； 3)原生质体的再生； 4)原生质体的融合； 5)融合子的选择； 6)实用性菌株的筛选。
5，选育强化CO2固定反应的突变株
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第三节 谷氨酸生产菌的育种
6，选育减弱乙醛酸循环的突变株
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第三节 谷氨酸生产菌的育种
7，选育强化三羧酸循环中从柠檬酸到a-酮戊二酸代谢的 突变株
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第三节 谷氨酸生产菌的育种
8，选育解除谷氨酸对谷氨酸脱氢酶反馈调节的突变株
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第四节 利用生物工程新技术选育谷氨酸生 产菌
二，应用转化法选育谷氨酸生产菌
所谓转化，是指受体细胞直接吸收了来自供 体细胞的DNA片段，并将它整合到自己的基因 组中，从而获得了供体细胞部分遗传性状的现象。 转化作用需要受体菌和转化DNA。转化既是进 行细菌遗传分析的有效工具，亦是微生物育种的 有效方法。
在发酵中、后期感染噬菌体后，菌体细胞
形态不规则，边缘不整齐，有的边缘似乎有许 多毛刺状的东西，有细胞碎片 。
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第三节 谷氨酸生产菌的育种
1，日常菌种工作
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第三节 谷氨酸生产菌的育种
育种思路
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第三节 谷氨酸生产菌的育种
育种思路
1.切断或减弱支路代谢 2.解除自身的反馈抑制 3.增加前体物的合成 4.提高细胞膜的渗透性 5.强化能量代谢 6.利用基因工程技术构建谷氨酸工程菌株
三 谷氨酸生产菌及扩大培养
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教学内容
1，了解谷氨酸生产菌的主要特征、特点。 2，掌握菌种的扩大培养方法。 3，了解影响生产菌生长的主要因素。
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2
教学目的与要求
学时：4
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3
作业安排
小论文
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4
前言：
一，谷氨酸菌种的选育进 展：
1，应用常规育种技术及 其所选育的谷氨酸高产 新菌种
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第四节 利用生物工程新技术选育谷氨酸生 产菌
三，应用转导法选育谷氨酸生产菌
所谓转导，是指通过温和型噬菌体为媒介，将供体细脑中的 DNA片段携带到受体细胞中，从而使受体细胞获得了供体细胞 部分遗传性状的现象。转导作用需要三个组成部分，即供体菌， 转导噬菌体，受体菌。由于绝大多数细菌(包括谷氨酸生产菌在 内)都有噬菌体，所以转导远较转化作用普遍。又因为转导DN A位于噬菌体蛋白质外壳内，所以不会像转化DNA那样容易被 外界的DNA分解酶所破坏，因此比较稳定。转导同转化一样， 也是微生物育种的有效方法。