3细胞工程(安利国)第三章考试重点

细胞培养的基本方法

1、无菌操作技术：是细胞培养的基本技术，包括实验器具和材料的准备、培养室和超净工

作台的消毒、洗手和着装、无菌培养操作等。

2、无菌培养室每天都要用0.1%新洁尔灭拖洗地面一次，紫外线照射消毒30~50min，超净

工作台台面每次实验前要用75%酒精擦洗，然后紫外线消毒30min。

3、已吸过培养液的吸管不能再用火焰灼烧。

4、无菌操作要求：动作准确敏捷；不用手触及已消毒品；操作面布局合理；操作保持一定

顺序；培养用瓶和吸管的放置；防止各种用液的交叉污染；不向操作者讲话或咳嗽。

5、超净工作台使用注意事项：P25

6、光波在折射率打的物体中比在折射率小的物体中前进的距离较短，此距离差异叫光程差

7、将普通光学显微镜的物镜、聚光器和光源的位置倒置过来的显微镜称倒置显微镜。特点：

光源和聚光器安装在载物台上方，物镜在载物台下方，载物台上可以放置培养皿，便于观察贴附在培养瓶皿底壁上的活细胞。

8、细胞计数法：是用血细胞计数板计数细胞悬液中的细胞数目，以测定细胞增殖和调整细

胞浓度的一种方法。

9、细胞生长曲线：是观察细胞在一代生存期内的增生过程的重要指标，以培养时间为横坐

标，细胞密度为纵坐标作坐标图。

10、细胞分裂指数：是指分裂期细胞在全部细胞中所占的百分率，用以表示细胞的增殖

旺盛程度。

11、细胞贴壁率：又称接种存活率，用于观察贴壁附着生长细胞，主要反映细胞的生存

能力和部分底物材料的生物相容性。血细胞不贴壁，塑料材料贴壁率较高。

12、倍增时间是指在对数生长期细胞数量增加一倍所用的时间。

13、细胞周期是时间测定有两种方法：

（1）同位素标记测定法

（2）流式细胞仪测定法。

14、MTT比色法测定细胞活力：（原理）活细胞的线粒体脱氢酶能将染料MTT还原为

难溶性的蓝紫色结晶物并沉积在细胞中，经酸性异丙醇溶解后呈现的色度可反映出活细胞的代谢水平，死细胞无此酶活性。

15、体外活体染色：就是在体外条件下用某种染色剂对活的组织或细胞进行染色，而不

影响活细胞的生命活动的一种方法。活体染料可分为碱性活体染料和酸性活体染料两类16、酸性活性染料主要有：台盼蓝、刚果红、吡咯蓝。体外活体染色一般使用碱性活体

染料。碱性染料有：次甲基蓝、甲苯胶蓝、亮焦油蓝、亮焦油紫、中性红、甲基紫、维克多利亚蓝。

17、活体染色方法：台盼蓝染色、吖啶橙AO荧光染色法。AO+DNA=绿色、AO+RNA=

火红色。

18、污染途径：空气、器材、操作、血清、组织样本。空气是微生物及尘埃颗粒传播的

最主要途径。

19、常见的真菌有：烟曲霉、黑曲霉、毛霉菌、孢子霉、白念珠菌、酵母菌。

20、常用的支原体检测方法有：相差显微镜检测法、DNA荧光处理法、电镜检测法、

低张处理地衣红染色观察、免疫学方法、支原体培养法及PCR法。对病毒进行检测主要有细胞直接观察法、动物接种检查法、电子显微镜检查法、免疫学及PCR法。

21、培养操作前的准备有：P32 培养操作时的注意事项P32

22、污染的排除方法有：

（1）抗生素的应用；（2）加温处理；（3）动物体内接种除菌法；巨噬细胞吞噬法。