脂肪来源干细胞的生物学特性及细胞表型
脂肪干细胞的提取及鉴定
一、脂肪干细胞（ASCs）的提取及鉴定1、实验技术及原理：运用细胞培养技术、流式细胞术（体外扩增后A C Ss的表型会发生改变，主要体现在细胞表面蛋白和细胞因子表达的变化），差异离心术（可将基质血管细胞沉淀与悬浮的成熟脂肪细胞分离，沉淀中除AS Cs，还包括血细胞、成纤维细胞和内皮细胞，基质血管细胞沉淀可以接种到孰料培养瓶中，基质细胞可贴壁，造血和其他杂质细胞不贴壁，在随后的传代过程中被出去，最终得到的ASCs可再很长时间内保持摸分化状态）。
取C57BL／6 WT小鼠2只，常规麻醉消毒，取腹股沟脂肪组织剪碎至糊状，PBS液冲洗去麻药及血液，0.075%II型胶原酶消化（37℃，30分钟）以去除外基质，生理盐水终止胶原酶的消化，离心（1200g,10分钟），去上清液及未消化的脂肪，10%FBS的DM EM重悬细胞沉淀，0.16mol/L氯化氨溶解剩余红细胞，离心洗涤，过200目铜网，得到单个核细胞。
镜下计数，按10⒋个细胞/ml种植在培养瓶中，37℃5%CO2孵箱培养，24小时后第一次换液，以后3天换液一次，80%融合后0.25% Trypsi n,0.02%EDTA消化传代。
细胞镜下作形态学观察及取第三代细胞用流式细胞仪作细胞周期及细胞免疫表型（C D29/CD44）的鉴定。
2、实验用品：2.1 材料：C57BL／6 WT小鼠2.2 试剂：PBS液，0.075%II型胶原酶消化，10%FBS，低糖DMEM2.3 仪器设备：超净工作台、恒温培养箱、普通显微镜、倒置显微镜、离心机、离心管、解剖剪、眼科剪、镊子（尖头、平头和有沟镊）、小烧杯，200目铜网过滤器，低糖DMEM、血球计数板、橡皮瓶塞、酒精灯、换药碗3、细胞培养的方法与步骤：3.1无菌操作的要领和要求。
脂肪间充质干细胞的免疫学特性及其在组织工程中的应用
多 向分化潜能 ， 且来源广泛 、 取材方便 、 损伤小 、 增殖 迅速 、 表型稳定 ， 尤其是具有低免疫原性 ， 其在
异 源性 组织 工程 中 的研 究 已得 到人们 的广 泛关 注 。
激分子为 Ｔ细胞活化提供第二信号 。
ＭＨ Ｃ是 编码 主要 组织 相 容性抗 原 的基 因组 ， 这 些基 因彼 此连锁 在 一起 ， 具 有 控制 异 体 移 植 排斥 反 应、 免 疫应 答 和某 些 补体 组 分生 成等 功 能 ， 因 而
分化 的 多能干 细胞 ， 它可 以从 多个 部 位 获得 ，如 ： 骨
及神经细胞等多种细胞分化。例如 ， 在Ａ Ｄ Ｓ Ｃ ｓ 的基 础培养基 中加入胰 岛素 、 转化生长 因子一 Ｂ （ ｔ ｒ ａ ｎ ｓ ｆ ｏ ｒ ．
ｕ ｒ ｉ ｎ ｇ ｇ ｒ ｏ ｗ ｔ ｈ ｆ ａ ｃ ｔ ｏ ｒ － Ｂ， Ｔ Ｇ Ｆ — ｐ） 、 干 扰 素 和抗 坏 血 酸 ， 可 以诱 导其 向软 骨细胞 分化 。
以大 鼠 Ａ Ｄ Ｓ Ｃ ｓ为例 介 绍 其 分 离 培 养 和 分 化 如
原性 的重要因素。江丽 等 对大鼠 Ａ Ｄ Ｓ Ｃ ｓ 进行表
２ ０ １ ２—０ ９— ０ ６接收
面标 志检 测 时 发 现 ＭＨ Ｃ — Ｉ类 分 子 和 ＭＨＣ ． Ⅱ类 分
作者单位 ： 安徽 医科大学 口腔医学院 ， 安徽医科大学附属 １ ５ 腔医院牙 周黏膜 科 ， 安徽 省 Ｅ ｌ 腔 疾 病 研 究 中心 实 验 室 ， 合 肥
ＭＨ Ｃ成 为移植 排斥 反应 的关键 基 因 。与 ＭＨＣ抗原 递呈 功 能 密 切 相 关 的 主 要 是 Ｍ ＨＣ ． Ｉ类 分 子 和
目前 ， 由于异体细胞移植可能产生移植物抗宿 主病 ， 使得干细胞移植 、 组织工程仅局限于个体化治
人脂肪间充质干细胞向表皮细胞表型转化的研究
人脂肪间充质干细胞向表皮细胞表型转化的研究赵周婷;胡大海;陶克;刘佳琦;张战凤;白晓智【摘要】目的:探索人脂肪间充质干细胞(adipose derived mesenchymal stem cells,ADSCs)向表皮细胞表型转化的方法.方法:以手术中剩余的人皮下脂肪组织为材料来源,利用胶原酶消化法分离ADSCs,流式细胞仪检测细胞表面标记CD29、CD90、CD105的表达,成脂诱导后油红0染色鉴定.实验组利用第四军医大学西京医院烧伤与皮肤外科实验室已成功构建的pcDNA3.1 (+)/SP+EGF质粒经脂质体介导转染的HaCat细胞,与ADSCs在Transwell小室中共培养,对照组为ADSCs 加入10％ FBS培养基,14天后Realtime-PCR检测两组ADSCs中CK19、integrin-β的mRNA表达量.结果:实验组ADSCs中CK19、integrin-β的mRNA 表达量较对照组明显升高,且差别有统计学意义.结论:转染EGF的HaCat细胞可诱导ADSCs向表皮细胞表型分化,从而为其成为组织工程理想的种子细胞提供了进一步的支持.【期刊名称】《中国美容医学》【年(卷),期】2014(023)022【总页数】5页(P1899-1903)【关键词】脂肪间充质干细胞;HaCat细胞;表皮细胞;组织工程【作者】赵周婷;胡大海;陶克;刘佳琦;张战凤;白晓智【作者单位】解放军第211医院五官科黑龙江哈尔滨150080;第四军医大学西京医院烧伤与皮肤外科全军烧伤中心陕西西安710032;第四军医大学西京医院烧伤与皮肤外科全军烧伤中心陕西西安710032;第四军医大学西京医院烧伤与皮肤外科全军烧伤中心陕西西安710032;第四军医大学西京医院烧伤与皮肤外科全军烧伤中心陕西西安710032;第四军医大学西京医院烧伤与皮肤外科全军烧伤中心陕西西安710032【正文语种】中文【中图分类】R751;R64皮肤缺损是外科领域的常见问题，尽早封闭创面，减少机体消耗和内环境紊乱是治疗皮肤缺损的关键。
黄芪对脂肪源性干细胞成骨作用的初步探讨
黄芪对脂肪源性干细胞成骨作用的初步探讨王君;魏义勇【摘要】目的探索黄芪对脂肪源性干细胞(ASCs)成骨能力的影响,为诱导ASCs 向成骨分化提供一个更好的体外环境.方法复苏人ASCs细胞,当细胞生长至融合时传代,取第3代人ASCs用成骨诱导液进行培养,取第4代用于实验.实验共分为三组:空白组（完全培养基干预ASCs）、诱导组（成骨诱导液干预ASCs）和黄芪组（黄芪注射液与成骨诱导液按体积1.5:8.5配制干预ASCs）.采用MTT检测细胞增殖情况；RT - PCR检测成骨相关指标碱性磷酸酶(ALP)和Ⅰ型胶原(Collagen Ⅰ)mRNA的表达.结果 MTT表明在早期(3d)诱导组和黄芪组均促进了细胞增殖,与空白组相比差异有统计学意义(P＜0.05)；随着干预时间的延长,诱导组和黄芪组细胞增殖速度反低于空白组,空白组增殖情况明显优于诱导组和黄芪组（P＜0.05）.RT - PCR表明诱导组和黄芪组均可促进ALP(0.42±0.02)、（0.61±0.01）和Collagen Ⅰ (0.39±0.09)、(0.56±0.18)的表达,与空白组(0.23±0.06)、(0.11±0.03)相比差异有明显的统计学意义(P＜0.05)；黄芪组与诱导组相比差异也有明显的统计学意义(P＜0.05).结论黄芪具有明显的促进干细胞向成骨细胞分化的作用,为黄芪参与骨缺损修复提供了一定的实验资料.%Objective To explore the effect of Huangqi on the differentiation of adipose - derived stem cells ( ASCs) into osteoblasts which will provide a comfortable environment to induced the differentiation into osteo-blasts. Methods ASCs were recovered and passaged. The third passage of ASCs was used for this experiment. The whole experiment was divided into the following groups: the control group, the induction group and the huangqi group. MTT was used to test the proliferation of ASCs and RT - PCR was used to test themRNA expression of ALP and Collagen I. Results MTT showed that the proliferation of ASCs was significantly promoted by both the induction and the Huangqi groups, compared with the control group (P <0.05) in the first time point and it was the contrary in the late period ( P <0.05 ). RT - PCR showed that the expression of ALP (0.42 ±0.02, 0.61 ±0.01) and Collagen I (0.39 ±0.09, 0.56 ±0. 18) increased significantly in the induction and the Huangqi groups, compared to the control groups (0.23 ±0.06, 0. 11 ±0.03) (P <0.05). And the Huangqi group significantly increased the expression of ALP and Collagen I compared to the induction group (P>0.05). Conclusion Huangqi may increase the osteoblastic ability of ASCs, which will provide a basis of theory by using the Chinese Medicine to repair bone defect.【期刊名称】《宁夏医科大学学报》【年(卷),期】2011(033)008【总页数】4页(P726-728,731)【关键词】黄芪;脂肪源性干细胞;成骨【作者】王君;魏义勇【作者单位】上海交通大学医学院附属瑞金医院伤骨科研究所,上海210000;上海交通大学医学院附属瑞金医院伤骨科研究所,上海210000【正文语种】中文【中图分类】R961Zuk等学者从人脂肪组织中分离出多能干细胞，并在体外特定诱导条件下成功实现其向骨、软骨和脂肪等方向的分化，之后这些多能干细胞被命名为脂肪源性干细胞(adipose-derived stem cells，ASCs) [1]。
脂肪源性基质细胞特性及其向神经细胞分化的研究进展
１７ ・ ３０
Ｐ Ｃ Ｐ Ｓ ｐｅ ｅ ０ ０， Ｖｏ ， １ Ｎｏ ９ Ｊ Ｃ ＶＤ ｅ ｔｍｂ ｒ １ ２ ｌ ８ ．
・
综 述 ・
脂 肪 源 性 基 质 细胞 特 性及 其 向神 经 细 胞 分 化 的研 究进 展
刘 辉 ，元 小冬
【 关键词 】 脂肪源性基质 细胞 ；分化 ； 经细胞 神 【 中图分类号 ＪＲ３９５ 【 ２．４ 文献标识码】Ａ 【 文章编号 】１０ — ９１ （００ ９ １ ０ ０ ０８ ５７ ２１ ）０ — ３ — ３ ７
或者浓度过高会导致 Ａ Ｓ Ｄ Ｃ的贴壁性差 ；如果消化时间过短或 者浓度过低会 导致 Ａ Ｓ Ｄ Ｃ和脂肪组织中的 Ｉ 型胶原成 分没有充 分分离出来。不同厂家 的胶原酶活力会有 明显不同。红细胞是 另一个影响细 胞贴壁 的重要 因素 ，Ｈ ｒ ｅ ｎ等 实 验表 明使 ａｍ ｌ ｅ 用红细胞裂解液 可以消除红细胞对 Ａ Ｓ Ｄ Ｃ细胞的影响 ，同时其
３ ＡＳ Ｄ Ｃ的免疫原性 脂肪组 织 经过 消化 、离 心 弃 上 清后 获 得 的基 质 血 管层
（Ｖ ）表 达 造 血 干 细胞 相 关 表 型 （ Ｄ ｌ、Ｃ １、Ｃ ４ 、 ＳＦ Ｃ １ａ Ｄ ４ Ｄ ５
研究机构成功地应 用于成人 Ａ Ｓ Ｄ Ｃ的分离、培养
。此时成
人Ａ Ｓ Ｄ Ｃ可混有内皮细胞 、平滑肌细胞、血管周细胞 、周皮细 胞 、成纤维细胞 等 ，但是这些细胞的量是相 当少的 ，而且在换 液和传代过程 中可 以起到纯化细胞的作用 ，传代到第 ３代 的成
干细胞移植治疗 中枢神经系统损伤和变性疾病 已成为研究 热点 ，广 泛应用于基础研究及 临床治疗 。其中研究较多的是骨
髓 基 质 细 胞 （ ｏｅ ａ —ｒｗ ｓ ｏ ｌ ｅ ｓ Ｍ Ｃ ，但 骨 髓 基 ｂ ｎｍ ｒ ｏ ｔ ｍａ ｃｌ ，Ｂ Ｓ ） ｒ ｌ 质 细 胞 的获 取 给 病 人 带 来 一定 的痛 苦 ，且 数量 有 限 ，不 利 于 大
脂肪组织干细胞的研究进展
脂肪组织干细胞的研究进展杨立业;黄天华【摘要】脂肪组织中存在多能的干细胞,在体外可以长期增殖,在一定的条件下能够分化为脂肪细胞、软骨细胞、成骨细胞、成肌细胞、内皮细胞、神经细胞、心肌细胞和平滑肌细胞,是一种新的组织工程和细胞移植的干细胞来源.本文综述了脂肪组织干细胞的培养、向多种方向分化和动物实验的研究进展.【期刊名称】《癌变·畸变·突变》【年(卷),期】2007(019)002【总页数】3页(P162-164)【关键词】干细胞;脂肪;分化【作者】杨立业;黄天华【作者单位】汕头大学医学院生物学教研室,广东,汕头,515041;汕头大学医学院生物学教研室,广东,汕头,515041【正文语种】中文【中图分类】R338.1组织工程的一个研究重点是种子细胞的来源问题，自体的多能干细胞应用到临床能够治疗疾病，造血干细胞是最早应用到临床的干细胞。
组织工程的一种细胞来源是骨髓基质，骨髓腔中含有几种细胞成分，包括间充质干细胞（mesenchyml stem cells，MSCs），它能分化为脂肪细胞、软骨细胞、成骨细胞和成肌细胞，是目前骨和软骨组织工程的主要细胞来源[1]。
然而它的自体获得也受到一些条件的限制，并且一次骨穿获得的细胞数量有限。
另外一种潜在的自体干细胞来源是脂肪组织，它的获取可在局麻下进行，对病人的损伤较小。
脂肪来源的干细胞目前可称为脂肪来源的基质细胞（adipose tissue-derived stromal cells，ADSCs），能分化为脂肪细胞、软骨细胞、成骨细胞、成肌细胞、内皮细胞、神经细胞和平滑肌细胞[2-6]。
人类、大鼠和小鼠的ADSCs细胞培养方法相同[1，4，6]。
首先，获取的脂肪组织用缓冲液反复冲洗，剪刀剪碎，0.075%的胶原酶37℃消化30～50 min，800 g离心10 min，沉淀成分为基质血管层（stromal vascular fraction，SVF），DMEM培养基重悬细胞，筛网过滤离心，弃上清。
脂肪组织来源的干细胞提取、制备及储存质量管理专家共识
脂肪组织来源的干细胞提取、制备及储存质量管理专家共识脂肪组织来源的干细胞(adipose tissue-derived stromal/stem cells，ASCs)是从脂肪组织中分离提取得到的，具有取材容易、对机体损伤小、体内储备量大、体外可大规模培养、可多向分化等优点。
ASCs在人体修复重建、免疫调节及组织再生等方面的应用成为近年来干细胞研究的重要内容，也是组织工程及再生医学的研究热点。
大量研究表明，自体脂肪组织移植到软组织缺损部位后，其中40%~60%会被吸收，自体脂肪组织结合ASCs移植，能明显减少自体脂肪组织移植的吸收、液化、坏死及纤维化等情况发生，有利于构建具有生物学结构和功能的脂肪组织。
同时，利用脂肪组织可以进行大规模的ASCs提取、制备、储存，为再生医学提供种子细胞。
目前，国内外尚缺乏ASCs提取、分离、制备及储存的标准和质量管理规范，导致各制备机构或研究应用机构之间无法进行统一评估和交流，严重制约了ASCs在皮肤软组织修复重建等相关领域的发展。
为了建立安全、规范、稳定、可追溯的行业共识、指南及标准，从源头保证ASCs的提取、制备、储存的高质性和安全性，中国医药生物技术协会皮肤软组织修复与重建技术分会联合从事细胞制备和存储、皮肤软组织修复重建、分子生物学及整形和美容外科等多学科的专家，参照中国医药生物技术协会《细胞库质量管理规范》及《干细胞制剂制备质量管理自律规范》，组织起草脂肪组织采集及ASCs制备、检测、储存的标准和质量管理专家共识，旨在促进ASCs在皮肤软组织修复重建技术等领域研究成果的转化，进一步促进多学科的交流和发展。
1 脂肪组织采集1.1 脂肪组织采集机构要求脂肪组织的采集工作应在取得《医疗机构执业许可证》的医疗机构中实施。
采集人员应持医师或者护士执业证书，经过相应的专业技术培训。
采集机构应具有完整的标准化操作规程(standard operation procedure，SOP)，并备有采集过程中的应急预案。
脂肪干细胞的体外培养PPT讲稿
脂肪干细胞成脂分化
ASC在特定促进因素下可分化为脂肪细胞，长期培养仍可维持此种分化能力。 脂肪细胞分化过程大致如下：
（1）脂肪干细胞向脂肪细胞定向分化，形成脂肪母细胞（一种尚未出现脂滴的 梭形细胞）；（2）脂肪母细胞经过生长抑制、克隆性增殖，形成前体脂肪细胞 （此时细胞刚开始出现脂滴）；（3）前体脂肪细胞经过生长抑制、克隆性增殖 和一系列基因表达的变化，形成不成熟脂肪细胞或多室脂肪细胞（内含大量小脂 滴）；（4）多室脂肪细胞随着脂肪在细胞中的沉积，小脂滴逐渐汇集成一个大 脂滴充满脂肪细胞的大部分，形成成熟脂肪细胞或单室脂肪细胞，成为成熟的脂 肪细胞。
Zuk等认为，ASC可能由多种异源性细胞构成，其中包括内皮细胞、成纤维细
胞、平滑肌细胞以及前体脂肪细胞等。现有ASC主要由成纤维细胞以及来自间 叶组织的细胞构成，仅伴有少量内皮细胞与平滑肌细胞。上述细胞在ASC中的 含量甚低，不可能定向培养分化为其他组织细胞，但进一步确认和识别真正的 ASC的表面蛋白及其基因仍是必要的。
间充质干细胞没有特异的表面标志已得到公认。免疫组化染色和流式细胞仪检
测等免疫表型的结果对确认脂肪干细胞有辅助作用，但鉴定脂肪干细胞的最好 方法是进行多系定向诱导，并进行相应检测以确定诱导成功。
脂肪干细胞的表面标记
a)粘附分子：ADAS细胞始终表达tetraspan蛋白(CD9)、整合素β1(CD29)和 α4(CD49 d)；细胞间粘附分子1(ICAM 1，CD54)、endoglin(cd102)、血管细胞 粘附分子(VCAM，CD106)及活化的淋巴细胞粘附分子(ALCAM，CD166)。但不表 达神经细胞粘附分子(NCAM，CD56)、细胞间粘附分子3(ICAM-3，CD50)、整合 素αb(CD11b)和β2(CD18)及内皮选择蛋白(E selectin，CD62)； b)分子受体：可表达透明质酸盐(CD44)和转铁蛋白(CD71)的受体； c)细胞外基质蛋白和糖蛋白：ADAS细胞能生成Ⅰ和型胶原、骨桥蛋白、ostenectin、 Thy-1(CD90)和MUC-18(CD146)； d)肌蛋白：能表达平滑肌细胞内的肌动蛋白和波形蛋白；e)造血细胞标记：不表达 造血细胞标志物CD14、CD31或CD45； f)补体调节蛋白：确定能表达衰变加速因子(CD55)和补体蛋白； g)组织相容性抗原：表达类组织相容性蛋白HLA-ABC，而不表达类蛋白HLA-DR。
脂肪源性基质细胞特性及其向神经细胞分化的研究进展
ｃｅｌｌｓ，ＡＤＳＣ）。由于ＡＤＳＣ具有来源丰
富、体外扩增容易及低免疫原性等优点。同时，可避免胚胎 干、神经干细胞等应用产生的伦理及严重移植物排斥反应的问 题，因此，更有利于神经移植研究。本文就ＡＤＳＣ的生物学特 性、电生理特性、免疫原性及向神经细胞分化进展进行综述。
万方数据
・１３７２・
植后１４ｄ发现２％ＡＤＳＣ迁徙到同侧皮质损伤区域，以梗死周 边区为主，动物缺失的躯体感觉、运动功能有所恢复，而经脑 源性神经营养因子（ＢＤＮＦ）转染ＡＤＳＣ后神经恢复更明显。 由于表达成熟神经元及星形胶质细胞标志的ＡＤＳＣ仅占１０％。 且移植细胞的电生理情况亦不明确，故症状改善可能并非细胞 转化及细胞融合的直接结果。此外，仅仅依靠少量存活尚且功 能不明确的ＡＤＳＣ替代脑损伤的脑组织亦远远不够。
干细胞移植治疗中枢神经系统损伤和变性疾病已成为研究 热点，广泛应用于基础研究及临床治疗。其中研究较多的是骨 髓基质细胞（ｂｏｎｅｍａｒ—ｌｏｗ
ｓｔｌｏｍａｌ
ｃｅｉｌｓ，ＢＭＳＣ），但骨髓基
质细胞的获取给病人带来一定的痛苦，且数量有限，不利于大 规模的实验研究及临床应用。近年来发现脂肪组织中存在一些 类似于骨髓基质细胞的细胞，此类细胞具有干细胞特征，可自 我复制，高度增殖，并具备多向分化潜能。在特定培养条件 下，可向不同胚层分化，称之为脂肪组织源性干细胞（ａｉｄｐｏ－
ＡＤＳＣ及其诱导分化的神经样细胞在脑缺血疾病的临床应
用前景 随着对ＡＤＳＣ体外神经分化的研究进展，人们设想将ＡＤ－ Ｓｃ植入中枢神经系统进行脑缺血疾病的治疗，然而这些植入 细胞能否存活并发挥功能，许多学者对其作用机制进行了大量 研究。 ７．１细胞移植后能在宿主体内存活、迁移，并向神经元样细 胞分化Ｓａｆｆｏｒｄ等¨＂将ＡＤＳＣ及其诱导分化的神经细胞分别 定向注入鼠脑海马ＣＡｌ区，发现诱导后植入的ＡＤＳＣ沿胼胝 体和纹状体嘴尾轴迁徙，最远可达２ｍｍ，并至少可存活１２ 周。存活的ＡＤＳＣ类似神经细胞形态，表达早期神经元标记神 经元特异性烯醇化酶（ＮＳＥ）、ＮｅｕＮ，而未经体外神经诱导的 ＡＤＳＣ则无上述现象发生，提示体外神经诱导为ＡＤＳＣ移植后 能否在神经微环境中生存所必需。然而，移植后ＡＤＳＣ能否表 达神经元及神经胶质细胞的全部标记，其最终表型在移植前就 已决定还是因局部神经微环境而改变，它们能否替代缺失神经 元发挥神经功能，包括神经电位诱发、神经突触建立、递质合 成传递等功能目前尚无相关文献报道。Ｋａｎｇ等口１将成人ＡＤＳＣ 以腺病毒标记，经侧脑室立体定向移植入鼠ＭＡＣＯ模型，移
人脂肪间充质干细胞质量检定标准
人脂肪间充质干细胞质量检定标准文档下载说明Download tips: This document is carefully compiled by this editor. I hope that after you download it, it can help you solve practical problems. The document 人脂肪间充质干细胞质量检定标准can be customized and modified after downloading, please adjust and use it according to actual needs, thank you! In addition, this shop provides you with various types of practical materials, such as educational essays, diary appreciation, sentence excerpts, ancient poems, classic articles, topic composition, work summary, word parsing, copy excerpts, other materials and so on, want to know different data formats and writing methods, please pay attention!人脂肪间充质干细胞（ADSCs）作为一种重要的多功能细胞类型，在再生医学、组织工程和干细胞治疗等领域展示出了巨大的潜力。
为了确保其在临床应用和科研中的质量和安全，制定了一系列的质量检定标准。
下面将介绍的相关内容。
1. 细胞来源和提取。
细胞来源鉴定。
确保细胞来源的准确性和可追溯性，包括供体的信息、采集过程的规范性等。
提取和分离方法。
脂肪与骨髓来源间充质干细胞生物学特性的比较
脂肪与骨髓来源间充质干细胞生物学特性的比较朱希山;施薇;台卫平;安广宇【摘要】背景:近几年来脂肪来源的间充质干细胞因其取材容易也被广泛研究.目的:比较脂肪来源和骨髓来源间充质干细胞的生物学特性.方法:分离及体外培养人骨髓源间充质干细胞和脂肪源间充质干细胞,比较它们的表型、细胞倍增时间及分泌因子水平等.结果与结论:脂肪来源和骨髓来源的间充质干细胞在细胞表型上类似,只有CD106的表达有差异.脂肪来源间充质干细胞增殖速率比骨髓来源的间充质干细胞快.在相同体积的脂肪组织中能够得到的干细胞前体细胞的数量是骨髓的10倍以上.提示脂肪来源和骨髓来源的间充质干细胞具有相同功能,但脂肪组织是一个更有应用前景的干细胞来源.%BACKGROUND: Recently, adipose tissue derived mesenchymal stem cells due to easy to be harvested have been widely studied. OBJECTIVE: To compare the biological characteristics of adipose tissue derived mesenchymal stem cells and bone marrow mesenchymal stem cells. METHODS: Adipose tissue derived mesenchymal stem cells and bone marrow mesenchymal stem cells were isolated and cultured in vitro to compare their phenotype, cell doubling time and the level of secreted factors. RESULTS AND CONCLUSION: Adipose tissue derived mesenchymal stem cells have similar phenotype and differentiation ability as bone marrow mesenchymal stem cells except CD106 expression. The frequency of mesenchymal stem cells in bone marrow and adipose tissue was also calculated and found that mesenchymal stem cells frequency in adipose tissue was 10 times higher than bone marrow. This result can be an instruction for mesenchymal stem cells clinical use.【期刊名称】《中国组织工程研究》【年(卷),期】2011(015)032【总页数】5页(P5936-5940)【关键词】脂肪间充质干细胞;骨髓间充质干细胞;生物学特性;表型;周期【作者】朱希山;施薇;台卫平;安广宇【作者单位】首都医科大学附属北京世纪坛医院(北京大学第九临床医学院)肿瘤内科,北京市,100038;首都医科大学附属北京世纪坛医院(北京大学第九临床医学院)肿瘤内科,北京市,100038;首都医科大学附属北京世纪坛医院(北京大学第九临床医学院)肿瘤内科,北京市,100038;首都医科大学附属北京世纪坛医院(北京大学第九临床医学院)肿瘤内科,北京市,100038【正文语种】中文【中图分类】R394.20 引言间充质干细胞是一群存在于身体各个组织内具有贴壁能力的多潜能干细胞，具有成骨、成脂肪、成软骨和成肌等分化能力。
小鼠脂肪间充质干细胞的分离培养及生物学特性分析
小鼠脂肪间充质干细胞的分离培养及生物学特性分析刘寿生;雷俊霞;黎阳;项鹏;周敦华【摘要】[Objective] To establish an effective way for isolation and expansion of mouse adipose-derived stromal cells (ADSC), and to observe the biological characteristics of mouse ADSC. [Methods] ADSC were obtained from adipose of BALB/C mouse, isolated and purified in vitro to determine cell morphology, immunophenotype, differentiation potentiality, clone formation ability, growth kinetics and immunoloregulation characteristics in the lymphocyte proliferation inhibition test; T lymphocytes (1 ?105) were cultured in the presence of ConA (ConA was 20 μg/mL), and ADSC of different number interacted with activated T lymphocytes respectively. Experiment was divided into 8 groups by the different number of ADSC: A group as positive control (ConA+T lymphocytes), B group (ADSC 1× 103+ConA+T lymphocytes), C group (ADSC× 1 04+ConA+T lymphocytes), D group (ADSC 2 × 104+ConA+T lymphocytes), E group as negative control (T lymphocytes), F group (ADSC1 ×103), G group (ADSC1 × 104), H group (ADSC 2 × 104), F, G, H were reference groups. The ability of T lymphocyte proliferation was measured by cck-8 method. [Results] ADSC showed plastic-adherent, fibroblastic-like morphologic characteristics, cell proliferation was inadequate and cell morphology changed to flat, enlarged shapes with the passage increasing. ADSC at passage 3 highly expressed CD29 and CD44, moderately expressed Sca-1, weakly expressed CD34, CD45, and CDllb.Three passaged ADSC could be induced to differentiate into osteoblasts and adipocytes, and had strong ability to shape colony forming unit-fibroblasts (CFU-Fs). Doubling time of three,five, and eight passaged ADSC was (22 ?3)h, (24 ?3)h, and (30 ?3)h, respectively. The proliferation rate after passage 5 slowed down gradually. ADSC could suppress T lymphocyte proliferation, the inhibition ratios of B, C, and D group were 20. 78%, 47. 94%, and 60.70%, respectively, which was similar to bone marrow mesenchymal stem cells (BMSC). [Conclusion] ADSC can be isolated and expanded effectively by using adherent culture, they possess general characteristics of mesenchymal stem cells, in addition, they are easier to be purified and their proliferation rate is faster compared with BMSC,so ADSC may be a good multipotential cell candidate for the future cell replacement therapy.%[目的]建立一种有效的分离、培养小鼠脂肪间充质干细胞(ADSC)的方法,从而为小鼠间充质干细胞(MSC)的来源提供更广阔的选择,以利于MSC在小鼠模型中的研究.[方法]体外分离、纯化BALB/C小鼠ADSC,进行细胞形态、表面标志、成脂及成骨分化潜能鉴定、克隆形成能力、生长动力学等方面的研究,并通过淋巴细胞增殖抑制试验研究其免疫调节特性:用终浓度为20μg/mL的ConA作用于T淋巴细胞(1×105个),以不同数量的ADSC分别与活化T淋巴细胞作用,根据ADSC数量不同实验分为A组(ConA+T细胞)、B组(ADSC 1×103/孔+ConA+T细胞)、C组(ADSC 1×104/孔+ConA+T细胞)、D组(ADSC 2×104/孔+ConA+T细胞),同时E组(单纯T细胞)作为阴性对照组,F组(ADSC 1×103孔)、G组(ADSC 1×104/孔 )、H组(ADSC 2×104/孔)作为参照组.用CCK-8法检测作用前后T细胞功能.[结果]ADSC镜下形态呈贴壁、梭型,且随着代数的增加,细胞逐渐增大；第3代ADSC高表达CD29和CD44,中表达Sca-1,低表达或不表达CD34、CD45、CD1 1b;第3代ADSC可诱导分化为成骨细胞和脂肪细胞;第3代ADSC有很强的集落形成能力；第3代ADSC倍增时间为(22±3)h,第5代ADSC 倍增时间为(24±3)h,第8代ADSC倍增时间为(30±3)h,第5代后的ADSC增殖速度随着代数的增加逐渐减慢;ADSC可以抑制T淋巴细胞的增殖,B、C、D组的抑制率分别为20.78％、47.94％、60.70％,抑制能力和骨髓间充质于细胞(BMSC)相似.[结论]通过贴壁培养可以从小鼠脂肪中分离培养出高纯度ADSC,该方法效率高,培养出的ADSC具有BMSC的一般特性,且与BMSC相比更易纯化,具有更快的增殖速度,有望作为小鼠MSC的有效来源.【期刊名称】《中山大学学报（医学科学版）》【年(卷),期】2012(033)003【总页数】6页(P299-304)【关键词】间充质干细胞;小鼠;骨髓;脂肪组织;免疫调节【作者】刘寿生;雷俊霞;黎阳;项鹏;周敦华【作者单位】中山大学附属第二医院儿科,广东广州510120;中山大学中山医学院,广东广州510080;中山大学附属第二医院儿科,广东广州510120;中山大学中山医学院,广东广州510080;中山大学附属第二医院儿科,广东广州510120【正文语种】中文【中图分类】R725.5;R329.4间充质干细胞（mesenchymal stem cells，MSC）最初是在骨髓中分离出来的，但后来在脂肪组织、肌肉组织、牙根、胎盘、羊水及脐带血中均分离出MSC［1］。
脂肪干细胞(ASCs)在急性肾损伤(AKI)动物模型治疗中的作用研究进展
脂肪干细胞(ASCs)在急性肾损伤(AKI)动物模型治疗中的作用研究进展刘少鹏【摘要】近年来干细胞移植已成为损伤组织更新、再生和修复研究的重点.来源于脂肪组织的干细胞群较其他干细胞系有独特的优势.首先,脂肪组织分布广泛,容易获取,对患者创伤小,患者易于接受;其次,干细胞群易于分离,增殖速度快,能够快速应用于治疗.急性肾损伤(acute kidney injury,AKI)作为内科常见急症,发病率高,治疗手段相对较局限,治疗效果不理想,亟需新的治疗方法,其中细胞疗法被认为是非常有前景的治疗手段.本文就脂肪干细胞(adipose derived stem cells,ASCs)在AKI动物模型治疗中的应用进行综述和展望,以期为今后的研究奠定基础.【期刊名称】《复旦学报（医学版）》【年(卷),期】2014(041)003【总页数】5页(P400-404)【关键词】脂肪干细胞(ASCs);急性肾损伤(AKI);间充质干细胞;保护;修复【作者】刘少鹏【作者单位】复旦大学附属中山医院肾内科上海200032【正文语种】中文【中图分类】R329.21964年，Rodbell［1］最先陈述了从大鼠脂肪组织中分离成熟的脂肪细胞和脂肪祖细胞的方法。
即将分离的大鼠脂肪组织捣碎，I型胶原酶37℃消化，离心后除去上清，得到含有脂肪祖细胞的基质血管成分（stromal vascular fraction，SVE）沉淀。
而后，Zuk等［2］证明来源于人脂肪组织的SVE中含有多向分化潜能的细胞群，后被统一命名为脂肪干细胞（adipose derived stem cells，ASCs）［3］。
急性肾损伤（acute kidney injury，AKI）是内科常见急症，发病率高，治疗效果差，亟需新的治疗方法。
间充质干细胞（mesenchymal stem cells，MSCs）治疗 AKI成为近年来细胞疗法的一个新方向［4］。
目前ASCs治疗AKI的具体作用机制尚未完全阐明，本文就ASCs的生物学特性、用于AKI治疗的作用及可能机制作一综述。
综述——脂肪干细胞与脂肪移植
王岩斐自从美国加州大学洛杉矶分校（University of California, Los Angeles, UCLA）的研究人员在《细胞分子生物学》（Molecular Biology of the Cell）杂志介绍了这种新型成体干细胞群以后，脂肪干细胞（the adipose-derived stem cells, ADSCs）逐渐成为普遍应用于干细胞领域中的最受欢迎的干细胞群[1]。
由于其自身存在的多向分化潜能，和获取ADSCs的简单实用性，ADSCs将成为多能胚胎干细胞（pluripotent ES cells）的替代物，无论是在实验室仍是在临床应用中。
长期以来，对于各类原发的和继发的软组织缺损的医治一直是困扰整形外科医生的难题之一。
引发软组织缺损的原因有严重烧伤、感染、体表肿瘤切除术后、各类外伤和先本性疾病等[2]。
自体脂肪作为一种软组织填充物，由于其诸多的并发症曾一度被人们放弃，但随着组织工程技术及细胞生物学的发展，自体脂肪移植又逐渐被人们认可。
现将脂肪干细胞在脂肪移植中的作用及其临床应用现状综述如下。
1 脂肪移植的发展概况20世纪初，自体脂肪颗粒作为一种软组织填充材料开始应用于临床。
但是，由于其吸收率高、存活率低，且并发症较多，限制了其在临床中的普遍应用[3]。
21世纪初，通过改良脂肪获取技术，加速了脂肪血管化，提高了脂肪颗粒移植的成活率。
可是，坏死、吸收仍然是颗粒脂肪移植的主要并发症。
直到Zuk等[1]第一次从自体脂肪组织中分离取得具有多向分化潜能的细胞——ADSCs，脂肪移植的研究愈来愈深切，原因就是ADSCs来源丰硕，取材方便，且组织中干细胞含量丰硕（ADSCs在皮下白色脂肪组织中约占细胞总量的10%-20%[4]），不会引发伦理学争议等。
最近几年来，随着组织工程技术的迅速发展，为克服常规注射颗粒脂肪移植的问题，如吸收、囊肿、硬结等，Yoshimura等[5]又发明了细胞辅助的脂肪移植术（cell-assisted lipotransfer, CAL），该技术是将ADSCs与脂肪细胞混合，联合注射移植。
人体脂肪干细胞培养及成骨诱导分化
人体脂肪干细胞培养及成骨诱导分化人体脂肪干细胞培养及成骨诱导分化引言干细胞是一类具有自我更新和多能性的细胞，可以不断分化生成各种不同类型的细胞。
人体脂肪组织中存在一种特殊类型的干细胞，即人体脂肪干细胞（human adipose-derived stem cells，hADSCs）。
与其他干细胞相比，hADSCs具有较高的抽取和培养效率，而且可以从自身脂肪组织中获得，不需要侵入性手术。
因此，hADSCs成为研究人体再生医学和组织工程领域的热门课题之一。
本文将介绍人体脂肪干细胞的培养方法以及成骨诱导分化的研究进展。
人体脂肪干细胞培养1. 来源和提取人体脂肪组织富含脂肪干细胞，因此从脂肪组织中提取hADSCs是最常用的方式之一。
提取过程通常通过脂肪抽吸或手术操作完成。
在脂肪抽吸中，通过低压吸引脂肪组织，并用特殊工具将其收集。
手术操作则需要进行小切口，直接收集脂肪组织。
提取得到的脂肪组织需要经过一系列处理，如洗涤、消化、离心等，以获得单个细胞悬浮液。
2. 培养条件提取得到的hADSCs需要在适宜的培养条件下进行扩增。
通常，使用营养丰富的培养基，如DMEM/F12，加入适量的胎牛血清和抗生素，以提供必需的生长因子和营养物质。
细胞培养的环境需要保持在37℃，5% CO2的恒温恒湿条件下。
培养过程中，需要定期更换培养基以保持细胞的生长和代谢活性。
3. 鉴定和鉴定为了确认提取得到的细胞为hADSCs，需要进行鉴定和鉴定。
常用的方法包括油红O染色、免疫细胞化学染色和流式细胞术分析。
油红O染色可用于检测细胞中脂滴的积累情况，免疫细胞化学染色可检测特定表面标记物的表达水平，流式细胞术则可对细胞表型进行全面的分析。
人体脂肪干细胞成骨诱导分化人体脂肪干细胞具有向多个细胞系分化的潜力，其中包括成骨细胞。
为了将hADSCs诱导分化为成骨细胞，需要在体外提供特定的诱导因子。
1. 前处理在进行成骨诱导前，需要对hADSCs进行适当的前处理。
脂肪干细胞的研究及应用进展
脂肪干细胞的研究及应用进展王贤;张培华【期刊名称】《海南医学》【年(卷),期】2016(027)006【摘要】Stem cells have a great potential to treat various kinds of diseases. For these cell-based therapies, adi-pose-derived stem cells (ADSCs) areone of the most promising seed cells, with others including embryonic stem cells (ESCs) and induced pluripotent stem cells (iPSCs). ESCs and iPSCs play important roles due to their pluripotency. How-ever, ESCs and iPSCs have limitations in ethical issues and in identification of cell phenotypes, respectively. Unlike ESCs and iPSCs, ADSCs do not have such limitations, which are not only easily obtained but also uniquely expandable. ADSCs can differentiate into adipocytes, osteoblasts, chondrocytes, myocytes, endotheliocytes and neurons under differ-ent differentiation conditions, and these kinds of differentiation potential of ADSCs could be applied in regenerative med-icine e.g., skin reconstruction, bone and cartilage repair. In this review, the current status of ADSC isolation, differentia-tion and their therapeutic applications are discussed.%干细胞在治疗各种疾病方面拥有巨大的潜能。
小鼠脂肪源干细胞的生物学特性及增殖特点
关键词 ： Ｃ ５ ７ Ｂ Ｉ ／ ６小 鼠 ；脂 肪 源 干 细 胞 ；细 胞 增殖
中图分类号 ： Ｒ３ ２ ９ 文献标识码 ： Ａ 文章编号 ： １ ０ ０ ９ — ５ ５ ５ ｌ （ ２ ０ １ ３ ） ０ ４ — ０ ４ ７ ９ — ０ ５
免疫表 型 ； 测 定 脂 肪 源 干 细 胞 的细 胞 周 期 及 其 生 长 方式 ； Ｃ Ｃ Ｋ ８法 测 脂 肪 源 干 细 胞 增 殖 情 况 。 结 果 小 鼠脂 肪 来 源 的细 胞 在 体 外 呈 梭 形 生 长 ， 且能稳定传代 ； 细胞在加入 成骨 及成脂诱 导液后 可定 向分化成 成骨细胞 、 成脂 细胞 ； 流式指 标检测示 ： Ｃ Ｄ ２ ９高 表 达 （ ９ １ ． ４ ±０ ． ９ ５ ） ， Ｃ Ｄ ３ ４ 低 表达 （ ３ ８ ． ７ ±０ ． ４ ） ； 细胞增殖 结果显 示 ： 细胞增殖 旺盛 ， 具有典 型的对数期、 平 台期 。 结 论 小 鼠脂 肪 组织 来 源 的 细 胞 是 间 充 质 ｆ 细 胞 ； 脂肪源 间充质干细胞是 具有多 向
Ｉ ｎ ｓ ｔ ｉ ｔ ｕ ｔ ｅ Ｘｉ ｎ ｊ ｉ ａ ｎ ｇ Ｍｅ ｄ ｉ ｃ ａ ｌ Ｕｎ ｉ ｖ ｅ ｒ ｓ ｉ ｔ ｙ ；Ｕｒ ｕ ｍｑ ｉ ８ ３ ０ ０ ５ ４，Ｃｈ ｉ ｎ ａ）
Ａｂ ｓ ｔ ｒ ａ ｃ ｔ ：Ｏｂ ｊ ｅ ｃ ｔ ｉ ｖ ｅ Ｔｏ ｉ ｎ ｖ ｅ ｓ ｔ ｉ ｇ ａ ｔ ｅ ｔ ｈ ｅ ｂ ｉ ｏ ｌ ｏ ｇ ｉ ｃ ａ ｌ ｆ ｅ ａ ｔ ｕ ｒ ｅ ｓ ａ ｎ ｄ ｐ ｒ ｏ ｌ ｉ ｆ ｅ ｒ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｃ ｈ ａ ｒ ａ ｃ ｔ ｅ ｒ ｉ ｓ ｔ ｉ ｃ ｓ ｏ ｆ Ａｄ ｉ ｐ ｏ ｓ ｅ ｄ ｅ — ｒ ｉ ｖ ｅ ｄ Ｓ ｔ ｅ ｍ Ｃｅ ｌ ｌ ｓ ｉ ｎ ｍｏ ｕ ｓ ｅ ．Ｍｅ ｔ ｈ ｏ ｄ ｓ ｗｅ ｉ ｓ ｏ ｌ ａ ｔ ｅ ｄ Ｃ５ ７ Ｂ Ｉ ／ ６ ｍｏ ｕ ｓ ｅ ｆ ａ ｔ ｐ ａ ｄ ｓ ｕ ｎ ｄ ｅ ｒ ｓ ｔ ｅ ｒ ｉ ｌ ｅ ｃ ｏ ｎ ｄ ｉ ｔ ｉ ｏ ｎ ，ｃ ｏ ｌ ｌ ｅ ｃ ｔ —
人脂肪间充质干细胞的原代培养及体外成骨成脂诱导分化
人 脂 肪 间充 质 干 细胞 的原 代 培 养 及 体 外 成 骨 成 脂 诱 导 分 化
闵敏 ， 张雪静 ， 马红 ， 许辉 ， 李遇梅
（ １ ． 江苏大学 附属 医院皮肤科 ， 江苏 镇江 ２ １ ２ ０ ０ １ ； ２ ． 镇 江市第 二人 民医院皮肤科 ， 江苏 镇江 ２ １ ２ ０ ０ ２ ）
ＭＩ Ｎ Ｍｉ ｎ ， Ｚ Ｈ Ａ Ｎ Ｇ Ｘ ｕ ｅ － ｉ ｆ ｎ ｇ ， ＭＡ Ｈ ｏ ｎ ｇ ， ＸＵ Ｈ ｕ ｉ ， Ｌ Ｉ Ｙ ｕ ． ｍ ｅ ｉ
（ １ ． Ｄ ｅ ｐ ａ ｒ ｔ ｍ ｅ ｎ ｔ ｏ ｆ Ｄ ｅ ｒ ｍａ ｔ ｏ ｌ ｏ ｇ ｙ ， Ａ ｉｌ ｆ ｉ ａ ｔ ｅ ｄ Ｈ ｏ ｓ ｐ ｉ ｔ ａ ｌ ｏ ｆ Ｊ ｉ ａ ｎ ｇ ｓ ｕ Ｕ ｎ ｉ ｖ ｅ ｒ ｓ ｉ ｔ ｙ ， Ｚ ｈ ｅ ｎ ｊ ｉ ａ ｎ ｇ Ｊ ｉ ａ ｎ ｇ ｓ ｕ ２ １ ２ ０ ０ １ ； ２ ．Ｄ ｅ ｐ ａ ｔ ｒ ｍｅ ｎ ｔ ｏ ｆ Ｄ ｅ ｒ ｍａ ｔ ｏ ｌ ｏ ｙ ，ｔ ｇ ｈ ｅ Ｓ ｅ ｃ ｏ ｎ ｄ Ｐ ｅ ｏ ｐ ｌ ｅ ｓ Ｈｏ ｓ ｐ ｉ ｔ ａ ｌ ｏ ｆ Ｚ ｈ ｅ ｎ ｊ ｉ ａ ｎ ｇ ， Ｚ ｈ ｅ ｎ ｊ ｉ ａ ｎ ｇ Ｊ ｉ ａ ｎ ｇ ｓ ｕ ２ １ ２ ０ ０ ２， Ｃ ｈ ｉ ｎ ａ ）
伴有成脂发生 。Ｒ Ｔ — Ｐ Ｃ Ｒ结 果显示 ， 与对 照组相 比， 成脂诱 导组 Ｐ Ｐ Ａ Ｒ ｙ 一 ２ ｍ Ｒ Ｎ Ａ有 时间依赖 性递增 表达 ， 差异具 有统 计 学意义（ Ｐ＜ ０ ． ０ １ ） 。与对照组相 比， 成骨诱导组骨 桥蛋 白 ， Ｐ Ｐ Ａ Ｒ ｙ 一 ２ ｍＲ Ｎ Ａ均有 时间依赖 性递增 表达 ， 差异具 有统 计 学意义 （ Ｐ＜ ０ ． ｏ １ ） 。结论 ： 建 立了一种 分离培 养 ｈ Ａ Ｄ Ｓ Ｃ ｓ 简 单可靠 的方法 。获得 的细胞 具有 贴壁 生长 、 增殖 活性
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中国组织工程研究与临床康复第14卷第36期 2010–09–03出版Journal of Clinical Rehabilitative Tissue Engineering Research September 3, 2010 Vol.14, No.36 ISSN 1673-8225 CN 21-1539/R CODEN: ZLKHAH6685 1Department ofPlastic Surgery, Sichuan Academy of Medical Sciences, Sichuan Provincial People’s Hospital, Chengdu 610072, Sichuan Province, China; 2Seventh Department of Plastic Surgery, Plastic Surgery Hospital, Peking Union Medical College, Chinese Academy of Medical Sciences, Beijing 100144, ChinaCai Zhen☆, Doctor, Attending physician, Department of Plastic Surgery, Sichuan Academy of Medical Sciences, Sichuan Provincial People’s Hospital, Chengdu 610072, Sichuan Province, China caizhen1976@126. comCorrespondence to: Jiang Hai-yue, Professor, Doctoral supervisor, Seventh Department of Plastic Surgery, Plastic Surgery Hospital, Peking Union Medical College, Chinese Academy of Medical Sciences, Beijing 100144, China jianghaiyue@sohu. comReceived:2010-05-28 Accepted:2010-06-24脂肪来源干细胞的生物学特性及细胞表型☆蔡震1，潘博2，林琳2，蒋海越2，庄洪兴2Biological characteristics and phenotypes of adipose tissue-derived stem cellsCai Zhen1, Pan Bo2, Lin Lin2, Jiang Hai-yue2, Zhuang Hong-xing2AbstractBACKGROUND: Adipose-derived stem cells (ADSCs) are capable of multi-directional differentiation and exist in human processed lipoaspirate. However, no in-depth studies have addressed biological characteristics of adipose tissue-derived stem cells (ADSCs) in vitro, and there are some disputes on the results from phenotype studies.OBJECTIVE: To investigate biological characteristics and phenotypes of human ADSCs.METHODS: Human adipose tissue was collected from persons undergoing fat extraction. The ADSCs were digested with collagenase, cultured and subcultured in vitro. Cell morphology was observed and growth curves were drawn. The phenotypes of ADSCs were identified by immunohistochemistry and flow cytometry.RESULTS AND CONCLUSION: ADSCs grew well, presented fibroblast-like growth. No significant change in cell morphology was detected within passage 15. The results from immunohistochemistry showed that cells were positive for CD29, CD44, CD105, but negative for CD34, CD45. Flow cytometry results have shown that cells were positive for CD29, CD44, CD105, MHC-Ⅰ, but negative for CD3, CD14, CD19, CD31, CD33, CD34, CD45, CD106, CD117, CD184. Results have suggested that ADSCs can be abundantly harvested and have stable proliferation in poorly differentiated status in vitro. Stem cell-related antigens were highly expressed in ADSCs.Cai Z, Pan B, Lin L, Jiang HY, Zhuang HX. Biological characteristics and phenotypes of adipose tissue-derived stem cells. Zhongguo Zuzhi Gongcheng Yanjiu yu Linchuang Kangfu. 2010;14(36): 6685-6688.[ ]摘要背景：研究证实脂肪组织提取物中存在脂肪来源的干细胞，并表现出多向分化的潜能，但是关于其体外的生物学特性研究不够深入，其细胞表型的研究结果存在一定争议。
目的：观察脂肪来源的干细胞的生物学特性与细胞免疫表型。
方法：取吸脂手术中废弃的人脂肪组织，胶原酶消化法获得脂肪来源的干细胞，体外传代培养，并进行细胞形态学观察，细胞生长曲线测定，免疫组织化学及流式细胞仪检测其细胞表型。
结果与结论：脂肪来源的干细胞生长旺盛，呈成纤维细胞样生长，15代以内细胞形态未见明显变化；免疫组织化学染色显示，细胞表面标记CD29，CD44，CD105表达阳性，CD34，CD45表达阴性；流式细胞仪检测显示，CD29，CD44，CD105，MHC-Ⅰ为阳性，CD3，CD14，CD19，CD31，CD33，CD34，CD45，CD106，CD117，CD184为阴性。
结果说明脂肪来源的干细胞体外生长能力旺盛，高表达干细胞相关抗原，可长期传代且保持低分化状态。
关键词：表型；脂肪来源的干细胞；流式细胞仪；生物学特性；干细胞doi:10.3969/j.issn.1673-8225.2010.36.008蔡震，潘博，林琳，蒋海越，庄洪兴.脂肪来源干细胞的生物学特性及细胞表型[J].中国组织工程研究与临床康复，2010，14(36):6685-6688. [ ]0 引言间充质干细胞是一群存在于身体各个组织内较原始的细胞，具有自我更新及多向分化潜能[1]，基于这些能力，间充质干细胞在其临床应用上有很大的潜力。
自2001年Zuk证实了经吸脂术获得的脂肪组织中存在具有多向分化潜能的细胞群后[2]，脂肪来源的干细胞(adipose tissue-derived stem cells, ADSCs)的概念得以明确，ADSCs因为其取材容易也被广泛研究。
有研究表明ADSCs在体外培养中能迅速增长，累积细胞倍增数在第13代时仍无明显的下降趋势；更为重要的是细胞传至第10代时，仅有5%的细胞进入了细胞衰老期。
因此ADSCs可以作为组织工程的种子细胞，成为具有广阔治疗应用前景。
关于ADSCs的细胞表型研究，目前的研究结果没有得到统一的认定。
本课题通过对ADSCs进行体外培养及对其体外生长的生物学性状及其细胞免疫表型做初步研究，为以后深入进行细胞组织工程的应用研究奠定了实验室基础。
1 材料和方法设计：细胞体外培养与鉴定。
时间及地点：于2008-01/2008-06在中国医学科学院整形外科医院中心实验室完成。
材料：实验标本：来自中国医学科学院整形外科医6686院吸脂手术中废弃的脂肪组织，与供者及家属签订知情同意书，供者均为20~45岁的患者。
主要实验试剂：试剂来源DMEM 高糖培养基、IMDM 培养基、M199培养基、 胎牛血清美国Hyclone 公司 间充质干细胞培养基 美国Invitrogen 公司胶原酶、胰蛋白酶 美国Sigma 公司 流式细胞检测的相关抗体 美国BD Bioscience 公司FITC 标记的荧光二抗与PE 标记的荧光二抗美国Santa Cruz 公司SP9000免疫组织化学试剂盒北京中杉金桥公司实验方法：ADSCs 的培养：收集吸脂术中废弃的脂肪组织，用含青链霉素的PBS 缓冲盐溶液冲洗3遍，测量脂肪的体积，加入0.5%Ⅰ型胶原酶，使其终浓度为0.075%，37 ℃消化30 min ，每5 min 振荡1次。
加入同体积的含体积分数10%FBS 的高糖DMEM 培养基终止消化，充分混匀后，1 500 r/min 离心5 min ，弃去上清液，加入含体积分数2%FBS 的间充质干细胞培养基5 mL ，重悬沉淀；200目滤网过滤，吹打均匀后用锥虫蓝排斥试验计数，细胞浓度为5×107 L -1，移入25 cm 2培养瓶内中，在37 ℃、体积分数5%CO 2饱和湿度的培养箱内培养。
倒置显微镜每日观察细胞生长状况，细胞贴壁后每两三天更换一次培养液。
待细胞融合达85%后传代。
ADSCs 生物学特性：取第3代生长良好的ADSCs ，用细胞表面标记物单克隆抗体进行免疫组化染色，流式细胞技术检测细胞表型，细胞生长曲线及倍增时间测定。