牙龈卟啉菌菌毛基因在转基因番茄果实中的特异表达及小鼠免疫实验

牙周 炎 是发 生在 牙齿 支持 组织 的炎 症 ， 在世 界 范 围 内均 有 较 高 的患 病 率 ， 我 国的 患病 率 达 到 ９ ％ 在 ０
以上。牙周炎是导致成年人牙齿丧失的主要原 因， 且牙周炎 的治疗仅在早期治疗效果较好 ， 但牙周 病治 疗效果的不显著性 以及治疗后 的复发等 问题一直困扰着临床 口腔 医生 ， 为此 ， 研究有效 、 可靠 的疫苗来防 治 牙周 炎 已成 了各 国学者 们追 逐 的热点 。尽 管 多数 学者 认 为牙 周 炎非 单 一 细菌 感 染 ， 但牙 龈 卟啉单 胞 菌
第 ２卷 第 ３期
２１ ０ １年 ９月
热 带 生 物 学 报
Ｊ ｏＵＲＮＡＬ ｏＦ ＴＲｏＰＩ ＣＡＬ ｏＲＧＡＮＩ Ｍ Ｓ Ｓ
Ｖ０ ． ． Ｉ２ Ｎｏ ３
Ｓ ｐ ２ １ ｅ． ０ １
文章编号 ：６４— ０ ４ ２ １ ）３— ２４— ５ １７ ７ ５ （０ １ ０ ０ ０ ０
（ ｏ ｈｒｍ ｎｓ ｉ ｉ ｌ Ｐ ｇ ｇｖｌ ） 目前 公认 的慢 性 牙 周 炎 的 主要致 病 菌 ， 龈 卟 啉 单 胞 菌 的存 在 Ｐ ｒ ｙｏ ｏａ ｎ ｖ ￣， ．ｉ ｉ ｉ 是 ｐ ｇｇａ ｎ ａｓ 牙 与 牙周 炎治 疗后 复发 或病 情继 续 加重 有关 』 。菌 毛 是牙 龈 卟 啉单 胞 菌 主要 毒 力 因子 ， 毛蛋 白 （ ｉｂｉ 菌 Ｆｍ ｒ． ｌ
实的免疫小 鼠的血清 中检测 到抗 ＦｍＡ抗体 ； ｉ 获得 了 以 Ｃ Ｂ为佐 剂 的在 番茄果 实 中特 异表 达牙龈 卟啉菌 菌 Ｔ
毛基 因的植物 口服疫苗候选植 株。 关键词 ：番茄 ； 牙周炎 ； ｉ ＦｍＡ； Ｔ Ｅ Ｃ Ｂ； ８启动子
中 图分 类 号 ：Ｑ ８９ １ 文 献 标 志 码 ：Ａ
动子控制下的基因转录水平会骤然提高 。从转录起始位点至 １ ８ ｐ处约 １１ｋ Ｊ ８ｂ ０ ． ｂ的片段为启动子的
核 心序 列 ， 这部 分对 于其 控 制下 的基 因 的特异 性转 录 已经 足 够 Ｊ 。因 此 ， 本研 究 采 用 番 茄果 实 特 异 启 动 子Ｅ ８的核 心序 列来 驱动 外 源基 因 ， 育 出在番 物 口服疫 苗 ， 培 Ｔ —ｉＡ 为寻 求 一 种 有效 防治 牙 周炎 的植 物疫苗 奠 定实 验基 础 。
第 ３期
戴 海燕 等 ： 牙龈卟啉菌 菌毛基 因在转基因番茄果实 中的特异表达及小 鼠免疫 实验
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１ 材 料 与 方 法
１ １ 植物材料 ．
１２ 农 杆 菌菌 种 ．
采用金丰一号番茄培养无菌苗 ， 取其子叶做为转化外植体。金丰一号番茄 （ｙ ｐｒｃｎ Ｌｃ ｅ ｉ ｏ ｓｏ
ｅ ｕｅｔｍ ｖ ｉｅｇ１ ｓ ｌ ｕ ｃｌＪ ｆｎ ）购 自广州 市蔬 菜科 学研 究所 。 ｃ ｎ ｎ 用本课 题 组 已成功 构建 的含 番茄 果 实特 异启 动子 Ｅ ８基 因和 Ｃ ＢＦｍＡ （ ２６— ３ Ｔ —ｉ 第 ６ ３７ Ａ） ａ 基因的载体重组质粒 ｐ Ｉ８Ｃ ＢＦ Ａ 第 ２ ６ ３７Ａ ） 转化根癌农杆菌。根癌农杆菌 （ｇｏａｔ ＢＥ 一Ｔ ．ｉ （ ６ — ３ ａ ｍ Ａｒ ｃ— ｂ ｅ
农杆菌侵染法转入番茄植株 ， 并利用番茄果实特异启 动子 Ｅ ８使其在果 实 中实现特 异表 达 ， 后用 特异表 达 然
的转基因番茄果实对实验小 鼠进行 口服免 疫实验 ， 研究转基 因番 茄果实的免疫原性 。实验结 果表 明 ： 获得 的 １ １株转化植株 中， 有 ９株重组了 Ｃ Ｂ Ｆｍ 共 Ｔ —ｉＡ基因的植株在番茄果实 中实现 了特异 表达 ； 口服转 基因番茄 果
收稿 日期 ： ０ Ｉ一 ６—２ ２１ ０ ４ 基金项 目：海南省 自然科学基金资助项 目（０ ０ ６ ８ ７９ ） 作者简介 ：戴海燕（ ９ ４一） 女 ， １７ ， 安徽宿州人 ， 海南医学院 口腔医学院副 主任 医师、 副教授 ， 士 硕 通 信 作 者 ： 海 燕 ， — ａ ：ａ ｙ６ ＠ １６ ｃｍ 戴 Ｅ ｍ ｉ ｄｉ ０ ８ ２ ． ｏ ｌ ｈ
备可食植物疫苗的方法是可行的。但 因马铃薯不是鲜食蔬菜 ， 高温煮熟会对 目的蛋 白有一定 的破坏 ， 进 而可能影响其免疫原性 ； 而番茄可以生吃， 以其作为转基因植物对象的研究也 比较成熟。Ｅ 启动子是 且 ８
１８ ９ ７年 Ｌｎｏｎ等 人发 现 的番茄果 实 特异 性启 动子 ， 番 茄果 实 自然 成 熟 或 由乙 烯催 熟 的过 程 中 ， ８启 ｉｃｉ 在 Ｅ
１ ，ｉ Ａ 是其主要的亚单位 ， ｉＦ ） ｎ ｍ 在其定植和侵入牙周组织过程 中起着重要作用 ， 因此 ， 牙周炎疫苗 的研究多 以牙龈卟啉单胞菌菌毛作为抗原 。 与常规疫苗相 比较 ， 转基因植物疫苗有其特有的优势 ， 如无需冷藏 、 注射 ， 可食用 ， 廉价 、 安全和使用 方便等 ， 因此世界卫生组织提倡开展植物 口服疫苗的研究 。转基因植物疫苗作用方式为投递 于胃肠道 Ｊ
牙 龈 卟 啉 菌 菌 毛 基 因在 转 基 因番 茄 果 实 中 的 特 异 表 达 及 小 鼠 免 疫 实 验
戴海燕 王 华２ 文少敏 解 娜 邓芳成 ， ， ， ，
（． １海南 医学 院 口腔医学院 ， 海南 海 口 ５ ０ ０ ；． ７ １２ ２ 海南 医学 院 海南 省热带病重点实验室 ， 海南 海 口 ５ １０ ） ７ １ １ 摘 要： 将编码牙龈 卟啉菌菌毛蛋 白（ ｉ ｒｌ ，ｉＡ） 第 ２ ６～３ ７Ａ ） Ｆｍｂｉｉ Ｆｍ （ ６ ｌｎ ３ ａ 与霍 乱毒素 Ｂ亚基 （ Ｔ 基 因 用 Ｃ Ｂ）
粘膜 表 面 ，进入粘 膜 淋 巴组 织 。霍乱 毒 素 Ｂ亚 基 （ Ｔ ）是 转基 因植 物疫 苗 的 良好 佐 剂 ， ＣＢ 文献 ［ ］ ３ 的研究 结 果 表 明 ， 用霍乱 毒 素 Ｂ亚基 为 载体蛋 白构建 的重组 Ｃ ＢＦｍＡ （ ２６— ３ ａ 质粒 转 化 马铃 薯制 使 Ｔ —ｉ 第 ６ ３７Ａ ）