第十四章 维生素类药物的分析(VB)

三、含量测定

计算
Ab 5ml供试品溶液中维生素 B1的μg数 0 .2 5 Sd
A和S分别为供试品溶液和对照品溶液侧得的平均荧 光读数; b和d分别为其相应的空白读数; 0.2为对照品溶液的浓度ug/ml); 5为测定时对照品溶液的取样体积(ml)。
三、含量测定

2.方法
对照液 供试液
第十四章 维生素类药物的分析
第二节 维生素B1的分析
第二节 维生素B1的分析

维生素B1（vitaminB1）广泛存在于米糠、麦麸和酵 母中，此外来源于人工合成。本品具有维持糖代谢 及神经传导与消化的正常功能，主要用于治疗脚气 病、多发性神经炎和胃肠道疾病。 ChP2015收载有维生素B1及其片剂和注射液。

一、结构与性质

3.紫外吸收特性
本品的12.5ug/ml盐酸溶液（9 1000）在246nm波长处测定吸光度， 故本品的吸光系数（% ）为406~436。
1cm

4.与生物碱沉淀试剂反应
分子中具有两个杂环（嘧啶环和噻唑环），故可与某些生物碱沉淀试剂 （如碘化汞钾、三硝基酚、碘溶液、硅钨酸）反应生成组成恒定的沉淀， 可用于鉴别和含量测定。

ChP2015收载的维生素B1片剂和注射液均采用本 法测定。
三、含量测定
（三）硫色素荧光法（USP所采用的方法）

1.原理 维生素B1在碱性溶液中被铁氰化钾氧化成硫色素，用异 丁醇提取后，在紫外光(λex365m)照射下呈现蓝色荧光 (λem435m)。通过与对照品比较荧光强度，即可求得供 试品含量。
维生素B1与苦酮酸生成扇形白色结晶
二、鉴别实验

（三）氯化物反应 本品是盐酸盐,水溶液呈氯化物的鉴别反应 （四）硫元素反应 维生素B1与NaOH共热，分解产生硫化钠，可与硝 酸铅反应生成黑色沉淀，可供鉴别。

VitB NaS PbS
NaOH
Pb Ac
二、鉴别实验
（二）沉淀反应

维生素B1结构中有嘧啶环和氨基，显生物碱的特 征，可与多种生物碱沉淀或显色剂反应。
维生素B1与碘化汞钾生成淡黄色沉淀[B].H2HgI4
维生素B1与碘生成红色沉淀[B].HI.I2 维生素B1与硅钨酸反应生成白色沉淀 [B]2.SiO2(OH)2.12WO3.4H2O
B Cl

HCl HClO

B ClO HClO
Hg （Ac ）
喹那啶红－亚甲蓝 （紫红→天蓝）
V样 V空 T F 含量% 100%
W
三、含量测定
（二）紫外分光光度法

1.原理 维生素B1分子中含有共轭双键结构,在紫外区有吸 收,根据最大吸收波长处的吸光度即可以计算含量.
VitB1
铁氰化钾 NaOH
硫色素
异丁醇
λex-365nm 荧光 λem-435nm
三、含量测定
2.方法 1.氧化试剂的制备

取当天配制的1.0%铁氰化钾溶液4.0ml，加3.5mol/L的氢氧化钠 溶液制成100ml，于4h内使用。

2.对照品溶液的制备
精密称取维生素Bl对照品约25mg，溶于300ml的稀醇溶液(1→5)， 用3mol/L盐酸溶液调节至pH4.0，加稀醇稀释成1000ml，作为贮 备液。避光冷藏，每月配制一次。取贮备液适量，用0.2mol/L盐 酸溶液逐步定量稀释至0.2&ug/ml的溶液。
二、鉴别实验
（五）红外分光光度法
取本品适量，加水溶解，水浴蒸干，在105℃干燥2 小时测定。本品的红外光吸收谱图应与应与对照图 谱一致。
三、含量测定

非水溶液滴定法 硫色素荧光法
(Non-aqueous Titrimetry) (UV)
紫外分光光度法
(Thiochrone Fluoremetry)

一、结构与性质

（一）结构
H3C N
2 1
N
6
3 4 5
NH2 CH2
2 1
S
5
OH
N34
CH3
氨基嘧啶环 亚甲基
Cl , HCl
季铵
噻唑环
一、结构与性质

（二）性质

1.溶解性 维生素B1为白色结晶或结晶性粉末，干燥品在 空气中迅速吸收4%的水分。本品在水中易溶，在乙醇中 微溶，在乙醚中不溶，水溶液呈酸性。 2.硫色素反应 噻唑环在碱性介质中可开环，再与嘧啶 环上的氨基环合，经铁氰化钾等氧化剂氧化成具有荧光 的硫色素，后者溶于正丁醇中呈蓝色荧光。
三、含量测定
（一）非水滴定法

1.原理 维生素B1分子中含有两个碱性的已成盐的伯胺和季 铵基团,在非水溶液中均可与高氯酸作用,以电位指 示终点.根据消耗的高氯酸量即可算出维生素B1的 含量。
三、含量测定

2.方法 取本品约0.12g，精密称定，加冰醋酸20ml微热使 溶解，放冷，加醋酐30ml，照电位滴定法 ，用高 氯酸滴定液（0.1mol/L）滴定，并将滴定的结果用 空白实验校正。没1ml高氯酸滴定液（0.1mol/L） 相当于16.86mg的维生素B1。
-H2O
CH3 N N N N S Na CH2CH2OH CH3
CH3 N
N
N N
S Na
CH2CH2OH CH3
环合
CH3 N N H N N S CH2CH2OH CH3
[O] －2H
CH3 N N N N S CH2CH2OH CH3
硫色素
Thiochtome
二、鉴别实验

2.方法

取本品约5mg，加NaOH T.S. 2.5ml溶解后，加铁氰化 钾 T.S. 0.5ml与正丁醇5ml，强力振摇2min，放置使分 层，上层显强烈的蓝色荧光；加酸使呈酸性，荧光即消 失；再加碱使呈碱性，荧光又重现。

5.氯化物的特征
维生素B1为盐酸盐，故本品水溶液显氯化物的鉴别反应。
二、鉴别实验

（一）硫色素荧光反应

1.原理
维生素B1在碱性溶液中可被铁氰化钾氧化生成硫色素，硫色素溶 于正丁醇（或异丁醇）中显蓝Biblioteka Baidu荧光。
CH3 N
N
NH2 CH2 N Cl-
S
CH2CH2OH HCl CH3
NaOH
CH3 N N NH2 O CH2 C N H S Na CH2CH2OH CH3

3.供试品溶液的制备
取供试品适量，用0.2mol/L盐酸溶液溶解制成100&ug/ml的溶液 (若供试品难溶，可在水浴上加热使溶解)，精密量取5ml，逐步定 量稀释至0.2&ug/ml的溶液。
三、含量测定
4.测定方法
取40ml具塞试管(或其他合适容器)3支或3支以 上，各精密加入对照品溶液5ml，于其中2支(或2支 以上)试管中迅速(1~2s内)加入氧化剂各3.0ml，在 30s内再加入异丁醇20.0ml，密塞，剧烈振摇90s。 于另一文试管中加3.5mol/L 氢氧化钠溶液3.0ml以 代替氧化试剂，并照上述方法操作，作为空白。 另取3支或3支以上的相同试管，各精密加入供 试品溶液5ml，照上述对照品溶液管的方法，同法 处理。 于上述6支或6支以上试管中，各加入无水乙醇 2ml，旋摇数秒钟，待分层后，取上层澄清的异丁 醇液约10ml，置荧光计测定池内，测定其荧光强度 (荧光计的输入和输出的最大波长分别为365nm和 435nm)。
VitB+ NaOH + 铁氰化钾 + 异丁醇 S d VitB+ NaOH + 异丁醇
VitB+ NaOH + 铁氰化钾 + 异丁醇 VitB+ NaOH + 异丁醇
A b
Ab 5ml供试品溶液中维生素 B1的μg数 0.2 5 Sd
三、含量测定
讨论
(1)硫色素反应为维生素Bl的专属反应，虽非定量完成， 促在一定条件下形成的硫色素与维生素Bl浓度成正比，且 回收恒定。故可用于维生素Bl及其制剂的含量测定。 (2)本法为维生素B1所特有，故不受氧化破坏产物的干扰， 测定结果较为准确。但操作繁琐，且荧光测定受多种因素 干扰; (3)本法中使用的氧化剂，除铁氰化钾外、尚可用氯化汞 或溴化氰。其中，溴化氰能将维生素Bl完全定量地氧化为 硫色素，在较宽的浓度范围内与荧光强度成正比，且尿液 中某些代谢产物不干扰测定。故亦适用于临床体液分析。