阿尔茨海默病大鼠海马结构及PCI2细胞caspase-3的表达

２ ｌ ｌＬ ＡＢ — ） ｌｗ ｃ ｔｍｅｒ ａ ｓｄｔ ｓｅｓ ｈ ｐ ｐｏ ｉ ｒｔ ｆ Ｃ ２ｃｌ ．Ｉ ０／ ／ ２３ ．Ｆｏ ｙｏ ｔｙｗ ｓｕｅ ａｓｓ ｅａｏ ｔｓ ａｅ １ ｅｌ ｍｍｕ ｏ ｉ ｏｈ ｍｉ ｒ ａ ｓｄｔ ｍｏ ５５ Ｏ ｔ ｓ ｏＰ ｓ ｎ ｈｓ ｃｅ ｓ ｙｗ ｓｕｅ ｔ ｔ ｏ
Ｇａ ｈ ｎ ｏＸｕ ｏ ｇ，Ｌａ ｎ ，Ｚｈ ｏ Ｈ ａｈ ａ ｉＨｏ ａ ｉｕ ，Ｔａ ｇ Ｚ ｏ ｇ ａ ，Ｊａ ｇ Ｗ ｅ，Ｌｉ ｕ ｉｇ ｎ ｈ ｎ ｙ ｎ ｉｎ ｉ ｍ ｎ Ｘｉ
（ ｅ ａ ｔ ｎ ｆＡｎ ｔｍｙ， ａｉＭ ｅ ｉ ｌ ｏｌ ｅ ｈｎ ｅｉａ ｎｖｒｉ Ｓ ｅｙ ｎ １ ０ １ Ｃ ｉａ Ｄ ｐ ｒｍｅｔ ａｏ ｏ Ｂ ｓ ｄ ｃ ｌ ｇ ，Ｃ ｉ Ｍ ｄｃ ｌ ｉｅｓ ｙ， ｈ ｎ ａ ｇＩ ０ ０ ， ｈｎ ） ｃ ａＣ ｅ ａ Ｕ ｔ
辽 宁省 科 学 计 划 项 目 （０ ０ ２ ０ ４ ２ １２ ５ ３ ）
本）石蜡切片机 （ ｅ ｚ德 国）康 氏振荡器 （ Ⅱ Ｏ— ； Ｌｉ ， ｔ ； Ｋ Ｓ
ｃ ｌ ｏ ） Ｐ ２细 胞 株 （ ｉａ ｒ ； Ｃ１ ｌｔ 中科 院 上 海 药 物 所 ） Ｒ ＭＩ ；Ｐ 一 １４ ６ ０培 养基 、 血 清 （ ｃｏ ｅ公 司 ） 胎 牛 血 清 （ 津 马 Ｈｙｌｎ ； 天 灏洋 生物 制 品有 限公 司）Ｓ Ｃ试 剂 盒 和 ｃｓａｅ３抗 ；ＡＢ ａｐｓ一
阿尔 茨海 默 病 （ ｚｅ ｒｄｓａｅ Ａｌ ｉ ｉ ｓ，ＡＤ） 基 底 前 ｈ ｍｅ ｅ 为 脑 一 马结 构一 海 大脑 皮质 胆碱 能 系统 的慢 性退 行 性 病 变 ， 以认 知功 能损 害 、 日常 生 活 能 力 进 行 性 下 降 为 主 要 特
征 。其 主要 病 理 改 变 为 老 年 斑 （ ｅ ｉ ｌｑ ｅ Ｐ 形 ｓｎｌ ｐａ ｕ ，Ｓ ） ｅ
Ｋ ｙｗ ｒｓ Ａｌ ｅ ｒ ｉ ａｅ ｐ ａｏｈｏ ｃｔｍａｃｌ ；ｈｐ ｏ ａ ａ ｆｒ ｔ ｎ －ｍｙｏ ｒｔｉ； ａｐ ｓ－ ｅ ｏｄ ｚ ｉ ’ ｄｓ ｓ ； ｈ ｅｃ ｒｍｏｙｏ ｅ ｓ ｉｐ ｃｍｐ ｌｏｍａｉ ；￣ａ ｌｉ ｐｏｅ ｃｓａｅ３ ｈ ｍｅ Ｓ ｅ ｌ ｏ ｄ ｎ
第 １作者 Ｅｍａ ：ａｘ ｈ ｎ ｓｅ ｇ ａ ｏ ．ｏ ｃ － ｉ ｇ ｏ ｕ ｏ ｇ ｈ ｎ ＠ｙ ｈｏ ｃｍ．ａ ｌ △ 通讯作者 ， — ｉ ｌ ｈ ｎ ８ ＠１ ６ ｃｍ Ｅｍａ ： ｉｏ ｇ ８ ２ ．ｏ ｌａ
收稿 日 ： ０ １ ６ ５ 修 回日期 ： ０ １ ０２ 期 ２ １— — ； ００ ２ １— —２ １
１００） １ ０ １
（ 中国医科大学基础 医学 院人 体解 剖学教研室 ，沈阳
摘要 目的 ： 体内外探讨 ｃｓａｅ ａｐｓ－ ３在海 马结构神经元及 嗜铬瘤细胞（ Ｃ ２细胞 ） Ｐ１ 的表达及其分布规律 。方法 ： 选用 ２ ４只 ３月 龄雄性 Ｗｉ ａ 大鼠随机分为对照组 、 型组侧脑室 注射 １ ｓｒ ｔ 模 Ｏ 淀 粉样 蛋 白（ ＆ ） 用免疫组织 化学观察 ｃｓａｅ Ａ ， ａｐｓ－ ３在海 马 Ｃ 、Ｃ Ａ１ Ａ３区及 齿状 回的表达 。将 Ｐ ２细胞分 为对照组 、 Ｃ１ 实验组（０￣ｎｌＬ Ａ ５５ ， ２ ａ ｏ／ ＆ ．组）流式细胞术 观察两组 Ｐ １ 细胞凋亡 ３ Ｃ２ 率； 免疫细胞化学法观察 Ｐ １ Ｃ ２细胞凋亡基因 ｃｓａｅ３的表达 。结果 ： ａｐｓ－ 模型组海 马结构 ３个亚 区神经元 的 ｃｓａｅ３的平均光 ａｐ ｓ－ 密度值均较对照组增高。Ｐ １ Ｃ ２细胞实验组的凋亡率较对照组增加 ； 实验组 Ｐ １ 细胞 ｃｓａｅ Ｃ２ ａｐｓ－ ３的表达较对照组上调 。结论 ：
ＣＡ３ ａ ｄ ｄ ｎ ａ ｅ ｇ ｒ ｓ Ｉ ｉｒ ｎ ｅ ｔ ｔ ｙ ｕ ． ｎ ｖ ｔ ｏ，ｔ ｅ Ｐ ２ ｃ ｌ ｒ ｉｉ ｅ ｎ ｏ ａ ｃ ｎ ｒ ｌ ｒ ｕ ｎ ｎ ｅ ｐ ｒ ｎ ａ ｒ ｕ （ ｘ ｏ ｅ Ｏ ｈ Ｃ１ ｅｌ ｗｅ ｅ ｄ ｖｄ ｄ ｉ ｔ ｏ ｔｏ ｏ ｐ ａ ｄ ａ ｘ ｅ ｉ ｓ ｇ ｍｅ ｔ ｌｇ ｏ ｐ ｅ ｐ ｓ ｄ ｔ
一
】２ 一
体（ 武汉 博 士德公 司 ） 。
１ ２ 实验 动物及 分 组 ．
加 Ｐ Ｓ ５０ ， ＂避光 １ ， Ｂ 至 ０ ｌ ４ Ｃ 流式细胞仪检测 ， ｈ 波长
４ ８ｎ 。 ８ ｍ
选用 中 国医科 大 学 实验 动 物 中心 提 供 的 ３月 龄 雄 性 Ｗ ｉ ａ 大 鼠， 质量 ２０ ０ ， ｓｒ ｔ 体 ５￣３ ０ｇ 随机分 为对 照组 和 模型 组 （ 一 １） ２ 。模 型 组 大 鼠 经 １ 水 合 氯 醛 Ｏ
１ ７ 免 疫细胞化 学显 色 Ｉ
将盖玻 片置 于 ２ 板 ， 组 同上 ， 养 ２ ４孔 分 培 ４ｈ后 取
出盖 玻片 ， 多聚 甲醛 固定 ３ ｉ， Ｈ ｚ甲醇溶 ４ ０ｒ ｎ ３ ａ Ａ Ｏ ｏ 液封 闭 １ ｉ，０ ０ ｌＬ Ｐ Ｓ冲 洗 ， 兔 抗 大 鼠 ０ｒ ｎ ． １ｍｏ／ Ｂ ａ 加 ｃｓａｅ３ １： ０） ℃过夜 。次 日，．１ｍｏ／ Ｂ ａｐｓ一（ ２０４ ０ ０ ｌＬＰ Ｓ冲
嗜 铬瘤 细胞 （ ｈ ｅ ｃ ｒｍｏ ｙｏ ｅｌ Ｐ １ 胞 ） 体 ｐ ａｏ ｈ ｏ ｃｔｍａｃｌ， Ｃ ２细 ，
成 、 经原纤 维 缠结 （ ｅｒｆ ｒｌｒ ｎ ｌｓ ＮＦ ） 神 ｎ ｕｏｉ ｉａｙｔ ｇｅ ， Ｔｓ及 ｂ ｌ ａ 胆 碱 能神经 元 的丢 失 等 ， 量 研 究 表 明神 经 元 的 凋 亡 大 是 导致 神经 元 丢失 的 主要 原 因＿ 。 目前 因缺 少 理 想 的 １ ］ ＡＤ模 型 ， 其在 发 病机制 、 防 、 疗等 方 面 的研 究 受 使 预 治 到一定 的 限 制 。实 验 证 明［ Ｊ 粉 样 蛋 白 （－ｍｙｏｄ ２３淀 ￣ａ ｌｉ
海马 Ｃ 、 Ａ Ａ１ Ｃ ３区及齿状 回神经元 发生 了明显的凋亡 ， ８ Ａ 可通过激活促凋亡基 因 ｃｓａｅ３ ａｐｓ－ 诱导 Ｐ ２细胞凋亡。 Ｃ１
关键词 阿尔茨海默病 ； 嗜铬瘤细胞 ； 海马结构 ； － Ｈ淀粉样蛋 白；ｃｓａｅ ａｐｓ－ ３
Ｅ ｐｅｓ ｎｏ ａｐ ｓ－ ｉｐ ｃｍｐ ｌ ｏｍａｉｎａ ｄＰ １ ｅ ｓ ｆ ｒａ ｌｉ ｅｔ ｎ ｘ ｒｓｉ ｆ ｓａｅ ｉ ｈｐ ｏａ ａ ｒ ｔ ｎ Ｃ ２ｃｌ ｔ ｍｙｏｄｐｔ ａｍｅｔ ｏ ｅ ３ｎ ｆ ｏ ｌａ ｅ ｒ
ｐ ｏｅｎ ＡＪ 异常 沉 积 是 ＡＤ 的 重要 病 因 ， 是 ＡＤ 进 ｒ ｔｉ ， ３ ） 也
内大 鼠侧脑 室注 射 ＡＢ 探讨 ＡＤ 大 鼠海 马结 构 神 经 元 ，
及Ｐ Ｉ Ｃ ２细胞 凋 亡 基 因 ｃｓ ａ ｅ３的表 达 ， 一 步 研 究 ａｐｓ－ 进
Ａｌ的神 经毒 性 ， ＡＤ 的预 防 和 治 疗 提供 可靠 的理 论 ３ 为
ｓ ｏ ｔ ｅｅ ｐ ｅｓｏ ｆｃ ｓ ａ ｅ３ｉ ｈ ｗ ｈ ｘ ｒ ｓｉｎｏ ａ ｐ ｓ － ｎＰＣ１ ｅｌ．Ｒｅ ｕｔ ：Ｔｈ ｖ ｒｇ ｐ ｉａ ｅ ｓｔ ｆｃｓ ａ ｅ３ｉ ｕ —ｅ ｉｎ ｆｈｐ — ２ ｃｌ ｓ ｓ ｌｓ ｅａ ｅａ ｅｏ ｔ ｌｄ ｎ ｉ ｏ ａ ｐ ｓ－ ｎ ３ ｓ ｂ ｒｇｏ ｓｏ ｉｐ ｃ ｙ ｏ ａ ａ ｏｍ ａｉｎ ｗａ ｉｎｆｃ ｎｌ ｉｈ ｒｉ ｈ ｄ １ ｒ ｕ ｈ ｎｔ ａ ｈ ｏ ｔｏ．ＰＣ１ ｅｌ ｐ ｐｏ ｉ ｒｔ ｎｔ ｅｅ ｐ ｒ ｃ ｍｐ ｌ ｒ ｔ ｓｓｇ ｉ ａ ｔｙｈｇ ｅ ｎｔ ｅｍｏ ｅ ｇ ｏ ｐｔ ａ ｈ ｔｉ ｔ ｅｃ ｎ ｒ １ ｆ ｏ ｉ ｎ ２ｃ ｌ ａ ｏ ｔ ｓｓ ａｅｉ ｈ ｘ ｅ—
ｉ ｎ ａ Βιβλιοθήκη ｒ ｕ ｓ ｓｇ ｉ ｃ ｎ ｌ ｃ ｅ ｓ ｄ ｃ ｍｐ ｒ ｄ ｗｉｈ ｔ ｅ ｃ ｎ ｒ ｌ ｒ ｕ ． Ｔｈ ｘ ｒ ｓ ｉｎ ｏ ａ ｐ ｓ － ｎ ｔ ｅ ｅ ｐ ｒ ｅ ｔ ｌ ｍｅ ｔ ｌ ｏ ｐ ｗａ ｉ ｎ ｆ ａ ｔｙ ｉ ｒ ａ ｅ ｏ ａ ｅ ｔ ｈ ｏ ｔ ｏ ｏ ｐ ｇ ｉ ｎ ｇ ｅ ｅ ｐ ｅ ｓｏ ｆｃ ｓ ａ ｅ ３ ｉ ｈ ｘ ｅ ｉ ｎ ａ ｍ ｇ ｏ ｐ ｗａ ｌ ｏｍ ａ ｋ ｄ ｙ ｉ ｃ ｅ ｓ ｄ ｒ ｕ ｓａ ｓ ｒ ｅ ｌ ｒ ａ ｅ ．Ｃｏ ｃ ｕ ｉ ｎ：Ｔｈ ｅ ｒ ｎ ｎ ｎ ｌ ｓｏ ｅ ｎ ｕ ｏ ｓｉ ＣＡ１，Ｃ ｎ ｅ ｔ ｔ ｙ ｕ ｈ ｗｅ ｂ ｉ ｕ ｐ ｐ ｏ ｉ．ＡＪ ｎ Ａ３ ａ ｄ ｄ ｎ ａ ｅｇ ｒ ｓ ｓ ｏ ｄ ｏ ｖ ｏ ｓ ａ ｏ ｔ ｓｓ ３ ｃ ｕ ｄ ｉ ｄ ｃ ｈ Ｃ１ ｅ ｌ ａ ｏ ｔ ｓｓ ｂ ｃ ｉ ａ ｉ ｇ ｃ ｓ ａ ｅ ３ ｅ ｐ ｅ ｓ ｎ ｏ ｌ ｎ ｕ ｅｔ ｅ Ｐ ２ ｃ ｌ ｐ ｐ ｏ ｉ ｙ ａ ｔ ｔ ａ ｐ ｓ － ｘ ｒ ｓ ｉ ． ｓ ｖ ｎ ｏ
Ｐ ２ｃ ｌ ．Ｍ ｅｈ ｄ ：３ ｍｏ ｔ－ ｌ ｌ ｉｔｒｒ ｔ ｒ ａ ｄ ｍ ｌ ｉｉｅ ｔ ｏ ｔｏ ｒ ｕ ｎ ｄ ｌ ｒｕ （ｎ ｒ ｃ— Ｃ１ ｅｌ ｓ ｔｏ ｓ － ｎ ｈ ｏｄ ｍａｅＷ ｓａ ａｓｗｅ ｅｒ ｎ ｏ ｙｄｖｄ ｄ ｉ ｏａｃ ｎ ｒ ｌ ｏ ｐ ａ ｄ ａｍｏ ｅ ｏ ｐ ｉｔａｅ ｎ ｇ ｇ
Ａ ｓ ａｔ ｂ ｅｔ ｅ Ｔｏｉｖｓｉａｅｔｅｅ ｐｅｓ ｎａ ｄ ｄ ｔｉｕｉ ｆｃｓａｅ３ｉ ｅｒｎ ｆｈｐ ｏ ａ ａ ｆｒ ｔ ｎ ａ ｄ ｂｔ ｃ Ｏ ｊ ｃ ｖ ： ｅｔ ｔ ｈ ｘ ｒｓｉ ｎ ｉ ｒ ｔ ｎ ｏ ａｐｓ－ ｎ ｎｕｏ ｓｏ ｉｐ ｃｍｐ ｌｏｍａｉ ｎ ｒ ｉ ｎ ｇ ｏ ｓ ｂ ｏ ｏ
ＣＨＩ Ｓ ＯＵＲ ＮＥ ＥＪ ＮＡＬ ＯＦＡＮＡＴＯＭＹ １３ ． ０２ Ｖｏ． ５Ｎｏ １２ １
解剖学杂志
２１ ０ ２年第 ３ ５卷第 １期
阿尔 茨海 默 病 大 鼠海 马 结构 及 Ｐ ２细胞 ｃｓ ａｅ３的表 达 Ｃ１ ａｐ ｓ一
高旭 红 赖 红△ 赵 海花 唐 忠艳 姜 薇 李秀 明
蛋 白经 ｆ ｝ １ 分泌酶和 分泌酶裂解产生 。但是国 内外关
于 ＡＤ 大 鼠海马结 构 与 Ｐ ２细胞 ｃｓ ａ ｅ３表 达相 结 Ｃ１ ａ ｐ ｓ一
合 的体 内外 研 究 还 较 少 。因 此 ， 研 究 拟 采 用 体 内外 本 研 究相 结合 的方 法 ， 分别 进行 体 外 ＡＨ干 预大 鼠肾上 腺
依据。
１ 材 料和 方法
１ １ 主 要 试 剂 与 仪 器 ．
行 性发 展 的关键 因素 。Ａ８是 ＡＤ脑 内老年 斑 的主要 成
分 ， Ｊ由 ４ ￣４ 个氨基酸残基组成 ， 由淀粉样前体 Ａ３ ０ ２ 是
Ａ （ ｉ ａ 司） 鼠脑 立体定 位仪 （ Ｎ ２ 日 Ｈ Ｓｍ 公 ｇ ； Ｓ 一，
ｒｂｏ ｅ ｔ ｃｌｒ ｎｅｔ ｎｏ ０ ３一 ） ｍｍｕ ｏ ｉ ｏｈ ｍｉ ｒ ｓｕｅ ｂ ｅｖ ｅｅｐｅｓ ｎｏ ａｐ ｓ－ Ａ１ ｅ ｒｖｎｒ ｕａ ｊｃｉ ｆ１ ｇＡ１ ３ ．Ｉ ｉ ｉ ｏ ２５ ｓ ｎ ｈｓ ｃｅ ｓ ｙｗａ ｓｄｔ ｏ ｓｒｅｔ ｘ ｒｓｉ ｆ ｓ ａｅ３ｉ Ｃ ， ｔ ｔ ｏ ｈ ｏ ｃ ｎ