新型阿尔茨海默病大鼠模型的建立及其行为学研究
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ຫໍສະໝຸດ Baidu
参照包新 民《 大 鼠脑立 体 定位 图谱 》 ， 以前 囟为基 点 ， 旁 开
２ ． ５ ｍｍ， 向后 ３ ． ６ ｍ ｍ 即为颅 骨表 面标 志点。用牙 科钻 在 左
右标志点各钻 一孔 ， 颅骨 表面下 ３ ． ０ ａ ｒ ｍ 即为 海马背侧部 注 射点。用微量 注 射器 在 ５分钟 内缓慢 注 入凝 聚态 Ａ Ｉ ３ 一 １ ｌ ， 左右相 同， 留针 １ Ｏ分钟 ， 缓慢退针 ， 用少 量骨蜡封 闭钻 孔， 分层缝合肌 肉和皮肤 ， 碘伏消毒 ， 缝合伤 口。术后 肌注青
内注射制造 Ａ Ｄ动物 模型 Ｊ 。为 了更 好地 模拟 老年性 痴呆 的体 内衰老环境 ， 本研究 以双 侧海 马内一次 性 注射 Ａ Ｉ ３ ∞ ． 联合长期颈部皮 下注射 Ｄ一半乳糖 制作大 鼠 Ａ Ｄ动 物模型 ， 并观察其行为学 变化特征。
１ 材 料
秒内不能找到平 台者视 为智力异常 ， 予 以剔除。余 下大 鼠供
实验用。 ２ ． ２ Ａ Ｄ动物模型 的制备 将 大 鼠按 ４ ５ ｍｇ ／ ｋ ｇ体重腹 腔 注 射３ ％戊 巴比妥 钠麻醉 ， 剪 去头 顶部 毛发 ， 硫化 钠酒精 溶 液 脱毛 ， 固定 于脑立体定位 仪上 ， 安多福消毒手术野 ， 切开头顶 正中皮肤 ， 钝 性分 离各 层至 颅骨 ， 双氧水 冲洗 后找 到前 囟。
霉素 ５万 Ｕ ／ 只， 连续 ３天 。假 手术组海 马内注射等 体积人
Ｆ ｌ ｕ ｉ ｄ ， Ａ Ｃ Ｓ Ｆ） ： 去 离子 水溶解 制成 溶 液 ｐ Ｈ值 ７ ． ４左 右 ， 终
浓 度 Ｎ ａ Ｃ ｌ ｌ ４ ７ ｍ ｍ ｏ ｌ ／ Ｌ，Ｋ Ｃ Ｉ ２ ． ７ ｍ ｍ ｏ ｌ ／ Ｌ ，Ｃ ａ Ｃ １ ２ １ ． ２ ｍ ｍｏ ｌ ／ Ｌ ，
主题词 阿尔茨海默病 模型 ， 动物 学习 记忆 大鼠
老年 性痴 呆 又 称 阿 尔茨 海 默病 （ Ａ ｌ ｚ ｈ ｅ ｉ ｍｅ ｒ ’ ｓ ｄ ｉ ｓ ｅ ａ ｓ ｅ ，
ｌ ５秒钟 ， 然后将 其头 朝下 ， 面 向水迷宫 池壁 ， 沿东 北 、 东南 、 西南 、 西北 （ Ｎ Ｅ 、 Ｓ Ｅ、 Ｓ Ｗ、 Ｎ Ｗ） 四象 限中点依 次放入 水池 ， 令 其游完 １ ２ ０秒 ， 然后 导引其 游 至平 台休 息 ３ ０秒 ， 平 台设 在 Ｓ Ｗ 象 限。依次游完 ４个 象限 为训练 １ 次 。每天上 午训 练 ， 每只大 鼠训练 ３次后 ， 同法 测试 １次 ， 超过 ２个象 限在 １ ２ ０
・
４ ８・
中国中医药科技 ２ ０ １ ３年 １ 月第 ２ ０卷第 １ 期 Ｊ ａ ｎ ． ２ ０ １ ３ Ｖ ｏ １ ． ２ ０ Ｎ ｏ ． １
・
专题报 道 ・
新 型 阿 尔茨 海 默病 大 鼠模 型 的建 立及 其行 为 学研 究 术
戎志斌 ， 榻 璇 刘 纯 胡 利 李映红 吴正治
５ ｍｍ ｏ ｌ ／ Ｌ的溶 液 ， ０ ． ２ ２ Ｉ ｚ ｍ滤 器过滤 除 菌 ， 密封 后置 于 ３ ７ ℃ 细胞 培养 箱中 ， ９ ６小时候 即成凝聚态 ， 分装后 ４ ℃保 存备用 。 Ｄ一半乳糖 ： Ａ ｍｒ ｅ ｓ ｃ ｏ公司 ， 溶于生理 盐水 中制成 ２ ５ ％ Ｄ一半
（ 深圳大学第一附属医院 ・ 深圳 ５ １ ８ ０ ３ ５ 湖北中医药大学博士研究生 ・ 武汉 ４ ３ ０ ０ ６ ０ ５ 深圳市老年医学研究所 ・ 深圳 ５ １ ８ ０ ２ ０ ）
摘 要 目的 ： 运用Ａ Ｉ ３ 联合 Ｄ一半 乳糖诱 导建 立大鼠新 型复合 Ａ Ｄ模 型并观 察其 行 为学 变化 。方
Ｍｇ Ｃ １ ： ０ ． ８ ５ ｍ ｍ ｏ ｌ ／ Ｌ ， ０ ． ２ ２ １ ． ｔ ， ｍ滤器 过滤 除菌 ， 密 封后 ４ ￣ Ｃ保存 备用 。Ａ Ｉ ３ － ３ ５ ： 美国 Ｓ ｉ ｇ ｍ ａ公司 ， 按Ｇ ｉ ｏ ｖ ａ ｎ ｎ ｅ ｌ ｌ ｉ 的方法并改
进， ｌ ｍ ｇ Ａ 母
， 联 合 长期 颈部 皮 下 注射 Ｄ一半 乳 糖 ５ Ｏ天 制 作 大 鼠 Ａ Ｄ 动物 模 型 。 以
法： 双 侧 海 马 内一 次 性 注 射 Ａ
Ｍｏ ｒ ｒ ｉ ｓ水迷 宫实验检测大 鼠空间 学习记 忆能力变化 。结果 ： ＡＩ ３ ２ ５ 联合 Ｄ一半乳糖诱 导的大鼠新型复合 Ａ Ｄ模型的 学习记忆和空 间识别能 力明显障碍 ， 与正常组 比较差异有 显著意义 （ Ｐ＜ ０ ． ０ ５～ ０ ． ０ １ ） 。结论 ： Ａ Ｉ ３ ， 联合 Ｄ一半乳糖建立的新型大鼠复合损伤 Ａ Ｄ模型具有明显的痴 呆行 为学特征 。
１ ． １ 动物
ｓ Ｄ大鼠（ Ｓ Ｐ Ｆ级 ） ， 雄性 ， 体重 （ ２ ６ ０±２ ０ ） ｇ ， 购自
广东省 医 学 实 验 动 物 中 心 ， 许可证号： Ｓ Ｃ Ｘ Ｋ（ 粤） ２ ０ ０ ３— ０ ０ ０ ２ ） ， 经 ３天的适应性饲养之后进行实验。
１ ． ２ 药 品 及 试 剂 人 工 脑 脊 液 （ Ａ ｒ ｔ ｉ ｉ ｆ ｃ ｉ ａ ｌ Ｃ ｅ ｒ ｅ ｂ ｍｓ ｐ ｉ ｎ ａ ｌ
Ａ Ｄ ） ， 是 一种病因未明 的中枢神 经系统 变性病 ， 该 病 以记忆 力减退 、 认知 功能 障碍为特征” 。研究表 明 ， 淀粉样 Ｂ蛋 白
是Ａ Ｄ主要病理 特征—— 老年斑的核心成分 ， Ａ Ｉ ３ 是淀粉 样 １ ３ 蛋 白（ １— ４ ０或 ２ ５—３ ５ ） 的 主要 活性 片段 ， 已被用 于脑
溶于 ２ ０ ０ １ ａ ． １人 工 脑 脊 液 中 ， 配 成 浓 度 为
工脑脊液 ； 造模大 鼠和假手术组大 鼠均每天颈背部皮下注射
２ ５ ％Ｄ一 半乳糖 溶液 １ ５ ０ ｍｇ ／ ｋ ｇ・ ｄ ～， 连续注 射 ５ Ｏ天 ； 空 白
对照组大 鼠皮下注射等量生理盐水 。
２ ． ３ 观 察 指 标 及 检 测 方 法
参照包新 民《 大 鼠脑立 体 定位 图谱 》 ， 以前 囟为基 点 ， 旁 开
２ ． ５ ｍｍ， 向后 ３ ． ６ ｍ ｍ 即为颅 骨表 面标 志点。用牙 科钻 在 左
右标志点各钻 一孔 ， 颅骨 表面下 ３ ． ０ ａ ｒ ｍ 即为 海马背侧部 注 射点。用微量 注 射器 在 ５分钟 内缓慢 注 入凝 聚态 Ａ Ｉ ３ 一 １ ｌ ， 左右相 同， 留针 １ Ｏ分钟 ， 缓慢退针 ， 用少 量骨蜡封 闭钻 孔， 分层缝合肌 肉和皮肤 ， 碘伏消毒 ， 缝合伤 口。术后 肌注青
内注射制造 Ａ Ｄ动物 模型 Ｊ 。为 了更 好地 模拟 老年性 痴呆 的体 内衰老环境 ， 本研究 以双 侧海 马内一次 性 注射 Ａ Ｉ ３ ∞ ． 联合长期颈部皮 下注射 Ｄ一半乳糖 制作大 鼠 Ａ Ｄ动 物模型 ， 并观察其行为学 变化特征。
１ 材 料
秒内不能找到平 台者视 为智力异常 ， 予 以剔除。余 下大 鼠供
实验用。 ２ ． ２ Ａ Ｄ动物模型 的制备 将 大 鼠按 ４ ５ ｍｇ ／ ｋ ｇ体重腹 腔 注 射３ ％戊 巴比妥 钠麻醉 ， 剪 去头 顶部 毛发 ， 硫化 钠酒精 溶 液 脱毛 ， 固定 于脑立体定位 仪上 ， 安多福消毒手术野 ， 切开头顶 正中皮肤 ， 钝 性分 离各 层至 颅骨 ， 双氧水 冲洗 后找 到前 囟。
霉素 ５万 Ｕ ／ 只， 连续 ３天 。假 手术组海 马内注射等 体积人
Ｆ ｌ ｕ ｉ ｄ ， Ａ Ｃ Ｓ Ｆ） ： 去 离子 水溶解 制成 溶 液 ｐ Ｈ值 ７ ． ４左 右 ， 终
浓 度 Ｎ ａ Ｃ ｌ ｌ ４ ７ ｍ ｍ ｏ ｌ ／ Ｌ，Ｋ Ｃ Ｉ ２ ． ７ ｍ ｍ ｏ ｌ ／ Ｌ ，Ｃ ａ Ｃ １ ２ １ ． ２ ｍ ｍｏ ｌ ／ Ｌ ，
主题词 阿尔茨海默病 模型 ， 动物 学习 记忆 大鼠
老年 性痴 呆 又 称 阿 尔茨 海 默病 （ Ａ ｌ ｚ ｈ ｅ ｉ ｍｅ ｒ ’ ｓ ｄ ｉ ｓ ｅ ａ ｓ ｅ ，
ｌ ５秒钟 ， 然后将 其头 朝下 ， 面 向水迷宫 池壁 ， 沿东 北 、 东南 、 西南 、 西北 （ Ｎ Ｅ 、 Ｓ Ｅ、 Ｓ Ｗ、 Ｎ Ｗ） 四象 限中点依 次放入 水池 ， 令 其游完 １ ２ ０秒 ， 然后 导引其 游 至平 台休 息 ３ ０秒 ， 平 台设 在 Ｓ Ｗ 象 限。依次游完 ４个 象限 为训练 １ 次 。每天上 午训 练 ， 每只大 鼠训练 ３次后 ， 同法 测试 １次 ， 超过 ２个象 限在 １ ２ ０
・
４ ８・
中国中医药科技 ２ ０ １ ３年 １ 月第 ２ ０卷第 １ 期 Ｊ ａ ｎ ． ２ ０ １ ３ Ｖ ｏ １ ． ２ ０ Ｎ ｏ ． １
・
专题报 道 ・
新 型 阿 尔茨 海 默病 大 鼠模 型 的建 立及 其行 为 学研 究 术
戎志斌 ， 榻 璇 刘 纯 胡 利 李映红 吴正治
５ ｍｍ ｏ ｌ ／ Ｌ的溶 液 ， ０ ． ２ ２ Ｉ ｚ ｍ滤 器过滤 除 菌 ， 密封 后置 于 ３ ７ ℃ 细胞 培养 箱中 ， ９ ６小时候 即成凝聚态 ， 分装后 ４ ℃保 存备用 。 Ｄ一半乳糖 ： Ａ ｍｒ ｅ ｓ ｃ ｏ公司 ， 溶于生理 盐水 中制成 ２ ５ ％ Ｄ一半
（ 深圳大学第一附属医院 ・ 深圳 ５ １ ８ ０ ３ ５ 湖北中医药大学博士研究生 ・ 武汉 ４ ３ ０ ０ ６ ０ ５ 深圳市老年医学研究所 ・ 深圳 ５ １ ８ ０ ２ ０ ）
摘 要 目的 ： 运用Ａ Ｉ ３ 联合 Ｄ一半 乳糖诱 导建 立大鼠新 型复合 Ａ Ｄ模 型并观 察其 行 为学 变化 。方
Ｍｇ Ｃ １ ： ０ ． ８ ５ ｍ ｍ ｏ ｌ ／ Ｌ ， ０ ． ２ ２ １ ． ｔ ， ｍ滤器 过滤 除菌 ， 密 封后 ４ ￣ Ｃ保存 备用 。Ａ Ｉ ３ － ３ ５ ： 美国 Ｓ ｉ ｇ ｍ ａ公司 ， 按Ｇ ｉ ｏ ｖ ａ ｎ ｎ ｅ ｌ ｌ ｉ 的方法并改
进， ｌ ｍ ｇ Ａ 母
， 联 合 长期 颈部 皮 下 注射 Ｄ一半 乳 糖 ５ Ｏ天 制 作 大 鼠 Ａ Ｄ 动物 模 型 。 以
法： 双 侧 海 马 内一 次 性 注 射 Ａ
Ｍｏ ｒ ｒ ｉ ｓ水迷 宫实验检测大 鼠空间 学习记 忆能力变化 。结果 ： ＡＩ ３ ２ ５ 联合 Ｄ一半乳糖诱 导的大鼠新型复合 Ａ Ｄ模型的 学习记忆和空 间识别能 力明显障碍 ， 与正常组 比较差异有 显著意义 （ Ｐ＜ ０ ． ０ ５～ ０ ． ０ １ ） 。结论 ： Ａ Ｉ ３ ， 联合 Ｄ一半乳糖建立的新型大鼠复合损伤 Ａ Ｄ模型具有明显的痴 呆行 为学特征 。
１ ． １ 动物
ｓ Ｄ大鼠（ Ｓ Ｐ Ｆ级 ） ， 雄性 ， 体重 （ ２ ６ ０±２ ０ ） ｇ ， 购自
广东省 医 学 实 验 动 物 中 心 ， 许可证号： Ｓ Ｃ Ｘ Ｋ（ 粤） ２ ０ ０ ３— ０ ０ ０ ２ ） ， 经 ３天的适应性饲养之后进行实验。
１ ． ２ 药 品 及 试 剂 人 工 脑 脊 液 （ Ａ ｒ ｔ ｉ ｉ ｆ ｃ ｉ ａ ｌ Ｃ ｅ ｒ ｅ ｂ ｍｓ ｐ ｉ ｎ ａ ｌ
Ａ Ｄ ） ， 是 一种病因未明 的中枢神 经系统 变性病 ， 该 病 以记忆 力减退 、 认知 功能 障碍为特征” 。研究表 明 ， 淀粉样 Ｂ蛋 白
是Ａ Ｄ主要病理 特征—— 老年斑的核心成分 ， Ａ Ｉ ３ 是淀粉 样 １ ３ 蛋 白（ １— ４ ０或 ２ ５—３ ５ ） 的 主要 活性 片段 ， 已被用 于脑
溶于 ２ ０ ０ １ ａ ． １人 工 脑 脊 液 中 ， 配 成 浓 度 为
工脑脊液 ； 造模大 鼠和假手术组大 鼠均每天颈背部皮下注射
２ ５ ％Ｄ一 半乳糖 溶液 １ ５ ０ ｍｇ ／ ｋ ｇ・ ｄ ～， 连续注 射 ５ Ｏ天 ； 空 白
对照组大 鼠皮下注射等量生理盐水 。
２ ． ３ 观 察 指 标 及 检 测 方 法