各种染色法

苏木精—伊红染色法（HE染色法）
石蜡切片技术里常用的染色法之一。

苏木精染液为碱性，主要使细胞核内的染色质与胞质内的核糖体着紫蓝色；伊红为酸性染料，主要使细胞质和细胞外基质中的成分着红色。

细胞核被苏木精染成鲜明的蓝色，软骨基质、钙盐颗粒呈深蓝色，粘液呈灰蓝色。

细胞浆被伊红染成深浅不同的粉红色至桃红色，胞浆内嗜酸性颗粒呈反光强的鲜红色。

胶原纤维呈淡粉红色，弹力纤维呈亮粉红色，红血球呈橘红色，蛋白性液体呈粉红色。

着色情况与组织或细胞的种类有关，也随其生活周期及病理变化而改变。

例如，很多细胞在新生时期胞浆对伊红着色较淡或轻度嗜碱，当其衰老时或发生退行性变则呈现嗜伊红浓染。

胶原纤维在老化和出现透明变性时，伊红着色由浅变深。

活体染色
活体染色是指一个获得动物或植物的细胞活组织被染色。

至于体外活体染色是指也获得动物或植物分离出来的一部分细胞活一部分组织被一种活体染色剂染色而不影响细胞活组织的生命。

活体染色与体外活体染色的主要区别：活体染色是在有机体内部，因此不在空气中而是在还原的环境中进行的，至于体外活体染色是在空气中，在氧化的环境中进行的。

所以一种真正的活体染色
剂就是在一种生物的活细胞的某种构造上面的染料，但对于细胞、对于组织和对于生命本身不发生任何有害的作用。

活体染料多为碱性染料，如中性红、健那绿、次甲基蓝、甲苯胺蓝、亮焦油紫等，它们解离后带正电，其中有的染料与胞内某些结构有专一性接合。

例如，中性红染液泡系，健那绿染线粒体。

DNA-Feulgen染色方法
是DNA定量测定的主要染色方法之一。

其具体反应原理是，标本经稀盐酸水解后，DNA分子中的嘌呤碱基被解离，从而在核糖的一端出现了醛基。

Schiff试剂中的无色品红可与醛基反应，形成含有醌基的化合物分子, 因醌基为发色团，故可呈现出紫红色。

也就是说, DNA经稀酸水解后产生的醛基，具有还原作用，可与无色品红结合形成紫红色化合物，从而显示出DNA的分布。

2HCl+Na2S2O5→2NaCl+SO2+H2SO3
DNA是主要的遗传物质，集中于染色体上。

孚尔根染色法的反应原理主要与席夫试剂的化学性质有关，此试剂的基本成分是碱性品红，偏亚硫酸氢钠(NaHSO3)和盐酸.碱性品红的主要成分是三氨基三苯甲烷氯化物。

碱性品红原为桃红色，当与亚硫酸作用时被氧化，使醌型变为苯型，由桃红色变为无色透明的N-亚磺酸亚硫酸副品红碱，当它与醛基作用时，其分子式又恢复为醌型结构，呈现紫红色
利用1N HCl 、60℃下水解时，可将DNA分子中嘌呤碱基与去氧核糖之间的糖苷键打断，使嘌呤脱下，并使去氧核糖C-1位置释放醛基与席夫试剂反应显紫红色。

细胞中只有DNA才具有这种专一的孚尔根反应，因此利用孚尔根反应，可以鉴定DNA的存在。

并广泛应用于核及染色体的研究中。

吖啶橙染色
它与细胞中DNA和RNA结合量存在差别，可发出不同颜色的荧光，与DNA结合量少发绿色荧光，与RNA结合量多发桔黄色或桔红色荧光。

该染料具有膜通透性，能透过细胞膜，使核DNA 和RNA染色。

因此，在荧光显微镜下观察，吖啶橙可透过正常细胞膜，使细胞核呈绿色或黄绿色均匀荧光；而在凋亡细胞中，因染色质固缩或断裂为大小不等的片断，形成凋亡小体。

吖啶橙使其染上致密浓染的黄绿色荧光，或黄绿色碎片颗粒；而坏死细胞黄荧光减弱甚至消失。

吖啶橙AO常与溴化乙啶EB合用双染，因EB只染死细胞使之产生桔黄色荧光，由此可区分出正常细胞、凋亡细胞及坏死细胞.它还可以用作移码突变的诱变剂,能镶嵌于两个相邻的碱基对之间，这样在DNA复制过程中，会使DNA链增加或缺失一个碱基，造成移码突变。

吖啶橙染液有毒，操作时要戴手套，需避光。

瑞氏染色法
瑞氏染料：由酸性染料伊红（E-）和碱性染料亚甲蓝（M+）组成。

伊红通常为钠盐，有色部分为阴离子。

亚甲蓝（又名美蓝）为四甲基硫堇染料，有对醌型和邻醌型两种结构。

通常为氯盐，即氯化美蓝，有色部分为阳离子。

美蓝容易氧化为一、二、三甲基硫堇等次级染料（即天青）。

将适量伊红、美蓝溶解在甲醇中，即为瑞氏染料。

甲醇的作用：一是溶解美蓝和伊红；二是固定细胞形态。

染色原理：既有物理的吸附作用，又有化学的亲和作用。

各种细胞成分化学性质不同，对各种染料的亲和力也不一样。

如血红蛋白、嗜酸性颗粒为碱性蛋白质，与酸性染料伊红结合，染粉红色，称为嗜酸性物质；细胞核蛋白、淋巴细胞、嗜碱性粒细胞胞质为酸性，与碱性染料美蓝或天青结合，染紫蓝色或蓝色，称为嗜碱性物质；中性颗粒呈等电状态与伊红和美蓝均可结合，染淡紫红色，称为嗜中性物质、原始红细胞、早幼红细胞胞质、核仁含较多酸性物质，染成较浓厚的蓝色；中幼红细胞既含酸性物质，又含碱性物质，染成红蓝色或灰红色；完全成熟红细胞，酸性物质彻底消失后，染成粉红色。

姬姆萨染色
染前用蛋白酶等进行处理，然后再用姬姆萨染液染色，在染色体上，可以出现不同浓淡的横纹样着色。

初染剂结晶紫进行初染，再用碘液媒染，然后用乙醇(或丙酮)脱色，最后用复染剂(如番红)复染。

经此方法染色后，细胞保留初染剂蓝紫色的细菌为革兰氏阳性菌；如果细胞中初染剂被脱色
剂洗脱而使细菌染上复染剂的颜色(红色)，该菌属于革兰氏阴性菌。

革兰氏染色法所以能将细菌分为革兰氏阳性和革兰氏阴性，是由这两类细菌细胞壁的结构和组成不同决定的。

实际上，当用结晶紫初染后，像简单染色法一样，所有细菌都被染成初染剂的蓝紫色。

碘作为媒染剂，它能与结晶紫结合成结晶紫一碘的复合物，从而增强了染料与细菌的结合力。

当用脱色剂处理时，两类细菌的脱色效果是不同的。

革兰氏阳性细菌的细胞壁主要由肽聚糖形成的网状结构组成，壁厚、类脂质含量低，用乙醇(或丙酮)脱色时细胞壁脱水、使肽聚糖层的网状结构孔径缩小，透性降低，从而使结晶紫-碘的复合物不易被洗脱而保留在细胞内，经脱色和复染后仍保留初染剂的蓝紫色。

革兰氏阴性菌则不同，由于其细胞壁肽聚糖层较薄、类脂含量高，所以当脱色处理时，类脂质被乙醇(或丙酮)溶解，细胞壁透性增大，使结晶紫-碘的复合物比较容易被洗脱出来，用复染剂复染后，细胞被染上复染剂的红色。

最适于血液涂抹标本，用以染血球、疟原虫、立克次体以及骨髓细胞、脊髓细胞等的染色。

芽孢染色法
芽孢染色法是利用细菌的芽孢和菌体对染料的亲合力不同的原理，用不同染料进行着色，使芽孢和菌体呈不同的颜色而便于区别。

芽孢壁厚、透性低，着色、脱色均较困难，因此，当先用一弱碱性染料，如
孔雀绿（malachite green）或碱性品红（basicfuchsin）在加热条件下进行染色时，此染料不仅可以进入菌体，而且也可以进入芽孢，进入菌体的染料可经水洗脱色，而进入芽孢的染料则难以透出，若再用复染液（如番红液）或衬托溶液（如黑色素溶液）处理，则菌体和芽孢易于区分。

革兰氏染色法
细菌先经碱性染料结晶染色，而经碘液媒染后，用酒精脱色，在一定条件下有的细菌此色不被脱去，有的可被脱去，因此可把细菌分为两大类，前者叫做革兰氏阳性菌（G+），后者为革兰氏阴性菌（G—）。

为观察方便，脱色后再用一种红色染料如碱性蕃红、稀释复红等进行复染。

阳性菌仍带紫色，阴性菌则被染上红色。

有芽胞的杆菌和绝大多数的球菌，以及所有的放线菌和真菌都呈革兰氏正反应；弧菌，螺旋体和大多数致病性的无芽胞杆菌都呈现负反应。

革兰氏阳性菌对青霉素敏感，革兰氏阴性菌对链霉素敏感。

可根据革兰氏染色法鉴别不同菌种并对症下药。

革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌在化学组成和生理性质上有很多差别，染色反应不一样。

现在一般认为革兰氏阳性菌体内含有特殊的核蛋白质镁盐与多糖的复合物，它与碘和结晶紫的复合物结合很牢，不易脱色，阴性菌复合物结合程度底，吸附染料差，易脱色，这是染色反应的主要依据。

另外，阳性菌菌体等电点较阴性菌为低，在相同PH条件下进行染色，阳性菌吸附碱性染料很
多，因此不易脱去，阴性菌则相反。

所以染色时的条件要严格控制。

例如，在强碱的条件下进行染色，两类菌吸附碱性染料都多，都可呈正反应；PH很低时，则可都呈负反应。

此外，两类菌的细胞壁等对结晶紫—碘复合物的通透性也不一致，阳性菌透性小，故不易被脱色，阴性菌透性大，易脱色。

所以脱色时间，脱色方法也应严格控制。

PAS染色法
PAS染色又称过碘酸雪夫染色，反应用来显示糖元和其它多糖物质
操作步骤
1. 固定液:用Carnoy液或75%酒精Carnoy固定液: 纯酒精60 ml 冰醋酸 10ml 氯仿 30ml
2. 染色液
1) 过碘酸酒清夜配法:
过碘酸(HIO .2H O) 0.4g 95% 酒精 35ml M/5醋酸钠(2.72g+蒸馏水100ml) 5ml蒸馏水10ml
保存于冰箱内,用棕色瓶,可用两周.
2) Schiff氏液:
0.5克碱性品红加入100毫升蒸馏水中,时时摇动三角瓶5分钟,使之充分溶解.冷却至50℃后过滤,加入10毫升1N盐酸.冷却
至25℃,加入0.5-1克偏重硫酸钠,在室温中至少静置24小时,然后密封冰箱保存.
3) Schiff氏酒精液配置 Schiff氏液 11.5ml 1N HCI 0.5ml 纯酒精 23ml
4) 亚硫酸水
1%偏重亚硫酸钠 10ml 1N HCI 10ml 蒸馏水 180ml的树胶溶解。

苏丹Ⅲ染色
苏丹Ⅲ(Sudan Ⅲ或Ⅳ) 能使木栓化,角质化的细胞壁及脂肪,挥发油,树脂等染成红色或橙红色.
Van Gieson苦味酸酸性复红法(VG法)
用途：VG法用于区分胶原纤维和肌纤维。

原理：酸性复红和苦味酸对这两种纤维都具有较强的亲合力，结果胶原纤维被酸性复红染成红色，肌肉被苦味酸染成黄色。

此方法是一种优良的传统方法。

固定：10%福尔马林
切片：4-6微米
试剂：
Weigert铁苏木精液：
A液：苏木精1g，无水酒精100 ml。

一般配制后需要数周或数月自然氧化，成熟后使用。

B液：29%三氯化铁水溶液4 ml，蒸馏水95 ml，盐酸1 ml。

两液分别配制，临用时A、B液等量混合，过滤后使用。

24h后失去染色能力。

Van Gieson液：
1%酸性复红水溶液10 ml
苦味酸饱和水溶液90 ml
临用时1:9混合过虑后使用。

Van Gieson苦味酸酸性复红法(VG法)步骤：
1．石蜡切片脱蜡至水。

2．Weigert苏木精液5-10 min。

3．充分水洗。

4．Van Gieson液1-5 min。

5．95%酒精迅速分化数秒。

6．无水酒精脱水、二甲苯透明、中性树胶封固。

结果：胶原纤维呈红色、肌肉、神经胶质、胞浆、红血球呈黄色、细胞核呈黑色或棕蓝色。

体会与说明：由于酸性复红退色较快，染色结果不能长期保存，一般只能保存3～6个月。

Masson三色法
试剂：
Regaud 氏苏木精：苏木精1g，95%酒精10ml，甘油10ml，蒸馏水80ml。

将苏木精加入蒸馏水内加温溶解,冷却后加入酒精和甘油,放数日后即可应用。

Masson丽春红酸性复红液：丽春红0.7g，酸性复红0.3g，蒸馏水99ml，冰醋酸1ml。

0.2%冰醋酸水溶液：冰醋酸0.2 ml，蒸馏水100 ml。

1%磷钼酸水溶液：磷钼酸1g，蒸馏水100 ml。

苯胺蓝水溶液：苯胺蓝2g，蒸馏水98 ml，冰醋酸2 ml。

1%光绿水溶液：光绿1g，蒸馏水100 ml。

Masson三色法步骤
1．石蜡切片脱蜡至水。

2．铬化处理或去汞盐沉淀（甲醛固定的组织此步可略）。

3．依次自来水和蒸馏水洗。

4．用Regaud苏木精染液或Weigert苏木精液染核5-10min。

5．充分水洗,如过染可盐酸酒精分化。

6．蒸馏水洗。

7．用Masson 丽春红酸性复红液5-10min。

8．以2%冰醋酸水溶液浸洗片刻。

9．1%磷钼酸水溶液分化3-5min。

10．不经水洗,直接用苯胺蓝或光绿液染5min。

11．以0.2%冰醋酸水溶液浸洗片刻。

12．95%酒精、无水酒精、二甲苯透明、中性树胶封固。

结果：胶原纤维、粘液、软骨呈蓝色(如光绿液染色为绿色)，胞浆、肌肉、纤维素、神经胶质呈红色，胞核黑蓝色。

体会与说明：
1．控制好染色步骤。

2．组织固定起着很重要的作用，根据不同的固定液可延长或缩短染色时间。

3．0.2%冰醋酸水溶液洗，可使色调清晰鲜艳。

4．磷钼酸水溶液对丽春红、酸性复红有分化作用，分化时镜下控制，肌纤维和纤维素呈红色，胶原纤维呈淡粉红色即可。

弹力纤维染色
Schmorl染色法
石炭酸-品红液：碱性品红2g，无水酒精50ml，熔化石炭酸25ml，在37℃温箱过夜，冷后过滤。

Weigert间苯二酚-品红液：碱性品红1g，间苯二酚（Resorcin）晶体2g，蒸馏水100ml。

在锥形烧瓶内煮沸，加29%三氯化铁水溶液12.5ml搅拌并继续煮沸2-5mine。

冷后过滤，烘干滤纸及沉淀，放入烧瓶并加95%酒精100ml在水浴加温至染料全溶解，待冷却后过滤，并补足因加热蒸发的酒精至100ml。

最后加浓盐酸2ml摇匀备用。

弹力纤维Schmorl染色法步骤
1．石蜡切片脱蜡至水。

2．石炭酸-品红液37℃染1h，或室温24h。

3．70%酒精漂洗。

4．Weigert间苯二酚-品红液染色20-30min。

5．无水酒精分色约1/2h，如染色过度也可改用0.5%盐酸的95%酒精分色。

6．流水冲洗后换蒸馏水漂洗。

7．常规苏木精染核5-10min。

8．水洗。

9．Van Gieson液复染3-5min。

10．蒸馏水洗。

11．酒精脱水，二甲苯透明，中性树胶封固。

结果：弹力纤维蓝黑色，胶原纤维红色，肌纤维黄色，细胞核蓝色
弹力和胶原纤维染色法
试剂：
维多利亚蓝染色液：维多利亚蓝（Victoria blue 上海）2.0g，糊精0.5g，间苯二酚4.0g，蒸馏水200ml。

混合后加热煮沸，边煮边搅拌，约5min。

再将30%三氯化铁水溶液25ml煮沸后加入上述混合液中，继续煮沸3min，要不断搅拌，搅拌棒上会出现胶样物质。

然后终止加热，冷却后过滤。

将滤纸上的物质连同滤纸放入60℃恒温箱中烤干。

再将烤干的蓝色粉末连同滤
纸溶于400ml 70%乙醇中。

最后加浓盐酸4ml，苯酚5g，苯酚不能溶解时可略加温溶解。

放置成熟后使用。

丽春红S染色液：0.5%丽春红（Ponceaus 上海试剂三厂）15ml，加饱和苦味酸水溶液（1.22%）85ml。

弹力和胶原纤维染色步骤
1．石蜡切片脱蜡至水。

2．70%乙醇洗2min。

3．维多利亚蓝染液中0.5-2h。

4．95%乙醇分色数秒钟。

5．蒸馏水洗2min。

6．丽春红S染液5min。

7．无水乙醇冲洗染液2次。

8．直接在空气中凉干。

9．二甲苯透明，中性树胶封固。

结果：弹力纤维呈蓝绿色，胶原纤维呈红色，背景呈淡黄色。

注意事项：
1．维多利亚蓝液可反复使用，溶液在室温中可保存数年。

2．维多利亚蓝液用乙醇分色后，要立即在水中浸洗。

浸洗后显微镜下观察分色程度，分色不够可再用乙醇分色。

3．丽春红S液染色后将切片倾斜用无水乙醇从一侧快速冲洗，稍干燥后立即透明封固，过于干燥会产生黑色颗粒。

Verhoeff铁苏木精弹力纤维染色法
试剂：
Verhoeff铁苏木精液：5%苏木精纯酒精贮存溶液20 ml，10%三氯化铁水溶液8ml，Verhoeff碘溶液8ml。

临用时按比例配制，混匀后使用。

Verhoeff碘液：碘2g，蒸馏水100ml。

2%三氯化铁水溶液：三氯化铁2g，蒸馏水100 ml。

5%硫代硫酸钠水溶液：硫代硫酸钠5g，蒸馏水100 ml。

Van Gieson液：略
Verhoeff铁苏木精弹力纤维染色法步骤
1．石蜡脱蜡至水。

2．蒸馏水洗。

3．Verhoeff液15-30min，至颜色呈黑色。

4．自来水洗。

5．2%三氯化铁水溶液分化10-20秒，至弹力纤维清晰为止。

6．自来水洗。

7．95%酒精处理2-5min,为了去碘液,使弹力纤维更清晰。

8．自来水冲洗2-3min。

9．5%硫代硫酸钠溶液处理5min。

10．充分水洗,再蒸馏水洗。

11．Van Gieson液衬染。

12．95%酒精迅速分化。

13．无水酒精脱水，二甲苯透明，中性树胶封固。

结果：弹力纤维呈蓝黑色，肌纤维、纤维素、神经胶质呈黄色,胶原纤维呈红色,胞核呈蓝色。

Gomori’s醛复红染色法
用途：显示血管壁、肺泡壁及皮肤组织中的弹力纤维为佳。

组织固定：用Bouin液，AF液或1%福尔马林固定，避免用含铬盐固定液。

试剂：
1．盐酸性复红0.5g，70%乙醇99ml，浓盐酸1ml，三聚乙醛（副醛）1ml。

将复红溶于乙醇内，然后加入盐酸和三聚乙醛，充分溶解后在室温中放置24-48小时，自然成熟当染液变为紫色即可应用。

成熟的液体在4度冰箱内可保存2-3个月。

2．橘黄G染液：橘黄G0.5g，磷钨酸2g，95%乙醇100ml。

3．Lugol’s碘液：碘1g，碘化钾2g，蒸馏水100ml。

先将碘化钾溶于20ml蒸馏水中，再加入碘，完全溶解后将剩余的蒸馏水加入即可使用。

4．5%硫代硫酸钠水溶液
染色步骤
1．石蜡切片3-5微米，常规脱蜡至水。

2．Lugol’s碘液5-10min。

3．水洗2-3min。

4．5%硫代硫酸钠水溶液脱碘5min。

5．流水冲洗3-5min。

6．70%乙醇梢洗。

7．Gomori’s醛复红染色液5-10min。

8．70%乙醇洗去多余染液至弹力纤维清晰为止。

9．水洗2-3min。

10．橘黄G染液10-20秒钟。

11．水洗1-2min。

12．常规脱水、透明、中性树胶封固。

结果：弹力纤维深紫色，黏液紫色（肥大细胞颗粒、胰腺B细胞颗粒、垂体B细胞均能同时着色），背景不同程度的黄色。

网状纤维染色法
用途：区别肿瘤的性质和来源
1．区别血管内皮瘤和血管外皮瘤。

2．淋巴肉瘤和网状细胞肉瘤。

3．尤文氏肉瘤与网状细胞肉瘤。

4．骨异质增生与骨化性纤维瘤。

5．软骨粘液纤维瘤和粘液肉瘤。

6．脑膜瘤和星形细胞瘤。

原理：氨银液被组织吸咐与组织中的蛋白结合，经甲醛还原成黑色的金属银沉积于组织内及表面。

用氯化金调色后，再用硫代硫酸钠液洗去未还原的银盐，从而将组织内的网状纤维清晰地显示出来。

固定：10%福尔马林
切片：4-6微米
用品：经酸清洁过的玻璃器皿。

要求用高纯度试剂，溶液要纯净。

配制好的氨银液可以短期内4℃保存，一般能保存1W。

超过时间会失去染色作用。

Gordon-Sweet染色法
1．Gordon-Sweet双氨氢氧化银液：
10%硝酸银水溶液5ml于锥形量杯内，逐滴加浓氨水并随时摇荡。

硝酸银遇到氨水后立即产生沉淀，当加到沉淀物被溶解时，再加入3%氢氧化钠水溶液5ml。

溶液重新产生沉淀，此时再滴加氨水。

当沉淀恰好溶解后加蒸馏水至50ml。

过虑,贮存于棕色瓶中备用。

2．核固红液：核固红0.5 g，5%硫酸铝液，100 ml，加热溶解，冷却后过虑。

Gordon-Sweet染色步骤
1．石蜡切片脱蜡至水。

2．酸化高锰酸钾液（0.5% in 3%sulphuric acid）5 min。

3．蒸馏水洗。

4．1%草酸漂白2min。

5．流水充分冲洗后蒸馏水洗。

6． 2.5%铁明矾液媒染10 min。

7．蒸馏水洗3次。

8．双氨氢氧化银液30秒-1 min。

9．蒸馏水洗3次。

10．10%甲醛(formalin in distilled water) 1 min。

11．流水充分冲洗后蒸馏水洗。

12．0.2%氯化金液调色2 min。

13．蒸馏水洗。

14．5%硫代硫酸钠液固定2 min。

15．流水充分冲洗。

16．核固红液染10-12 min或1%中性红染5min。

17．流水冲洗。

18．95%、无水酒精脱水、二甲苯透明、中性树胶封固。

结果：网状纤维呈黑色，胶原纤维灰红色，核呈红色。

Mallory磷钨酸苏木精染色法(PTAH或PTH法)
试剂:
0.25%高锰酸钾: 高锰酸钾0.25g，蒸馏水100ml。

5%草酸水溶液：草酸5g，蒸馏水100ml。

Mallory’s磷钨酸苏木精液: 苏木精5g，磷钨酸10g，蒸馏水500ml。

用部分蒸馏水加热溶解苏木精,用剩余的蒸馏水溶解磷钨酸。

两种液体完全溶解后,再将冷却后的苏木精液与磷钨酸液混合。

贮存棕色瓶内, 待自然氧化成熟后使用(数月)。

Mallory磷钨酸苏木精染色法(PTAH或PTH法)步骤
1．石蜡切片脱蜡至水。

2．用汞盐固定的组织切片，要用0.5%碘酒精液脱汞，充分水洗。

再用5%硫代硫酸钠脱碘，最后充分水洗。

3．蒸馏水洗1-2 min。

4．0.25高锰酸钾水溶液氧化2-3 min。

5．蒸馏水洗1-2 min。

6．5%草酸随溶液漂白2-3 min。

7．蒸馏水洗2-3 min。

8．Mallory磷钨酸苏木精溶液染4-12 h。

9．95%酒精迅速分化。

10．无水酒精脱水,二甲苯透明,中性树胶封固。

结果：正常心肌、骨骼肌的肌原纤维横纹呈清晰的蓝色,变性肌纤维的颗粒、团块和收缩带呈深蓝色,神经胶质纤维、纤维素、线粒体、粘液物质等呈深蓝色,，间质结缔组织呈浅红色或不着色，胶原纤维、网状纤维、骨及软骨基等呈粉红色或棕红色，细胞核、弹力纤维呈紫蓝色，有缺血缺氧早期病变的心肌呈紫蓝色或棕黄色。

第二节脂类物质染色
一与染色相关的问题
1. 在石蜡包埋组织处理过程中,要用一些有机溶剂，所以石蜡切片不能用于脂类染色，通常用冰冻切片或炭蜡包埋切片。

切片厚5～15微米。

2. 切片选用中性甲醛、钙甲醛或锇酸固定液固定。

单纯甲醛固定会丢失一些磷质。

脂类物质不溶于水，易溶于有机溶剂。

所以显示脂质时不能用含有有机溶剂的固定液固定。

二染色与封固
三脂类物质染色方法
1．锇酸组织块染色法：染色原理利用锇酸作用与脂质形成不溶于酒精二甲苯等的黑色复合物。

能显示微小的脂滴。

2．脂溶性色素染色法苏丹(Ⅲ、Ⅳ和黑B)、尼罗蓝、油红O等。

此类染料能被适量浓度的有机溶剂溶解,被溶解的染料又能在脂质内
溶解, 此类染料在脂质中的溶解度大,在有机溶剂中的溶解度小。

由于溶解度的不同,有利于脂类物质着色。

其染色作用是物理性脂溶作用和吸附作用。

封固：白明胶20g，蒸馏水50ml，甘油50ml，石炭酸1g。

明胶加入蒸馏水后加热37℃，明胶溶解后加入甘油和石炭酸，混均后备用。

苏丹-Ⅲ染色法
此法较常用,对各种脂类物质均适用。

配制：
苏丹-Ⅲ染液：苏丹-Ⅲ0.15g，60-70%酒精100ml，将染料溶于60-70%酒精中，临用前过滤。

密闭保存。

苏丹-Ⅲ染色步骤
1．冰冻切片5-10微米。

漂于水中或粘贴在载玻片上。

2．蒸馏水洗。

3．Harris苏木精液1 min。

4．水洗3-5min。

5．蒸馏水洗。

6．70%酒精迅速洗,约20-30秒。

7．苏丹-Ⅲ液置于56℃温箱内浸染30 min。

8．70%酒精分化数秒。

9．切片入蒸馏水。

10．用滤纸吸干切片上的水分，待干。

11．甘油明胶封固。

结果：脂类物质呈红色,细胞呈蓝色，粘液物质染色。

第三节糖类
过碘酸-Schiff反应(PAS)
试剂：
1．过碘酸氧化液过碘酸0.5 g 蒸馏水100 ml，冰箱内4℃保存。

2．Schiff液碱性复红1 g, 1 N 盐酸20 ml,偏重亚硫酸钠1g, 双蒸水（D.D.W）200 ml。

先将200 ml 双蒸水煮沸，加入1 g碱性复红，再煮1分钟。

冷却至50℃加入1N盐酸20 ml，待冷至35℃时加入2g偏重亚硫酸钠。

轻轻摇动溶解，于室温暗处放置24小时，溶液变成淡黄色。

加入活性炭1～1.5g，摇动至无色，过滤于棕色瓶内，封口后4℃冰箱保存。

Schiff PAS反应步骤
1．切片脱蜡至水。

2．蒸馏水洗。

3．过碘酸氧化液10-20 min。

4．充分蒸馏水洗。

5．Schiff液10 min。

6．流水冲洗10 min。

7．苏木精液染3-5 min。

8．0.5%盐酸酒精分化。

9．流水冲洗5 min。

10．酒精脱水,二甲苯透明,中性树胶封固。

结果：糖原及其他PAS反应物质呈红色,细胞核蓝色。

粘液染色
粘液胭脂红染色法（Southgate粘液）
用途：用于各种上皮细胞和结缔组织分泌产生的粘液染色，粘液胭脂红技术在判断原发肿瘤的位置也很有价值，在不含产生粘液细胞的区域发现粘液阳性的瘤细胞，表明肿瘤不起源于这个区域。

该方法还用于真菌和隐球菌染色。

原理：铝与胭脂红形成一种螯合物，这种分子变为正电荷允许它与低密度的酸基质像粘液这类物质结合。

对照：小肠
固定：10%缓冲福尔马林。

切片：石蜡切片4-5m。

用品：用蒸馏水漂洗玻璃器皿，搅拌电炉，磁力搅拌棒，立式染色缸，微波炉，500ml烧杯。

试剂：
Southgate液：胭脂红1g，氢氧化铝1g，50%乙醇100ml。

充分混合后加无水氯花铝0.5g，小火煮沸2分钟30秒。

放凉后，过滤，冰箱保存。

稳定性6个月。

注意：易燃，避免接触与吸收。

Mayer苏木精：见刚果红步骤。

马休黄（metanil yellow）液：马休黄0.25g，蒸馏水100ml，冰醋酸0.25ml。

混合后，标记日期，稳定性1年。

注意：避免接触与吸收。

安全措施：在通风柜内配制染液和微波液，带手套，穿工作衣。

氯化铝需要慢慢加温，避免粉尘。

马休黄：雄性鼠长期喂养研究表明，作用的靶器官生殖系统，避免接触与吸收。

粘液胭脂红染色法步骤
1．脱蜡至蒸馏水。